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抗人球蛋白實(shí)驗(yàn)概述抗人球蛋白實(shí)驗(yàn)(AGT),又稱Coombs試驗(yàn),是不完全抗體的一種很好方法??谷饲虻鞍资怯萌搜迕庖呒彝?,產(chǎn)生的抗人球蛋白抗體,即抗人球蛋白血清??蓹z測(cè)體內(nèi)致敏的RBC(直接抗人球蛋白實(shí)驗(yàn))和體外致敏的RBC(間接抗人球蛋白試驗(yàn))。實(shí)驗(yàn)原理直接抗人球蛋白試驗(yàn)是用抗球蛋白試劑直接和待檢RBC進(jìn)行反應(yīng),目的是檢測(cè)RBC上是否存在免疫球蛋白,該試驗(yàn)是免疫血液學(xué)最長(zhǎng)用的試驗(yàn)之一。大多免疫抗體為IgG類,分子量小,與RBC相應(yīng)抗原結(jié)合后,在鹽水介質(zhì)中不出現(xiàn)肉眼可見的凝集反應(yīng),稱為不完全抗體。但在抗-IgG(抗人球蛋白抗體)參與下,通過(guò)抗人球蛋白的橋連作用,可使RBC與相應(yīng)抗體(IgG)反應(yīng)出現(xiàn)肉眼可見的凝集。試劑
(1)抗球蛋白試劑??骨虻鞍自噭┩ǔS腥N:多特異性抗球蛋白試劑(簡(jiǎn)稱:多抗,在直抗試驗(yàn)中常常作為初篩試劑使用)、單特異性抗-IgG試劑(簡(jiǎn)稱:抗-IgG)和單特異性抗-C3試劑(簡(jiǎn)稱:抗-C3)。多抗包括了抗-IgG和抗-C3兩種成分,在直抗試驗(yàn)中一旦出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果,通常需要單抗-IgG和抗-C3進(jìn)一步分析。(2)致敏對(duì)照RBC:取3人O型RBC混合用生理鹽水洗滌,上清液倒盡后取壓積RBC加等量抗-D血清,置37℃水浴箱致敏1h,取出后生理鹽水洗滌3次,末次洗滌后降上層鹽水倒盡,配成5%RBC鹽水懸液,供陽(yáng)性對(duì)照。(3)未致敏的對(duì)照RBC:除不用抗-D血清致敏外,其余按上述配制,供陰性對(duì)照。標(biāo)本取受檢者RBC以生理鹽水洗滌3次,末次洗滌后降上層鹽水倒盡,配成5%RBC鹽水懸液。(2)以1000rpm離心試管,輕輕混合,觀察結(jié)果。質(zhì)量控制
(1)未洗滌的RBC或懸浮血漿中細(xì)胞及用酶處理過(guò)的RBC不能用于檢測(cè)。(2)所有結(jié)果應(yīng)在檢測(cè)結(jié)束時(shí)立即判斷,并熟練掌握其判斷標(biāo)準(zhǔn),結(jié)果觀察過(guò)遲、重懸浮過(guò)度均可產(chǎn)生假陰性。(3
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