胃泌素及其與MNNG合用時對大鼠胃黏膜的影響

胃泌素及其與MNNG合用(héyòng)時對大鼠胃黏膜的影響第一頁，共三十九頁。編輯課件簡介(jiǎnjiè)北京大學第三醫(yī)院消化科分別單獨使用胃泌素及胃泌素與MNNG合用刺激Wistar大鼠,分別觀察其胃粘膜層的厚度，檢測胃泌素抗體和組胺酸脫羧酶(HDC)抗體表達(biǎodá)情況以及ki-67及bcl-2的表達(biǎodá)量。本PPT將對此進行概述。第二頁，共三十九頁。編輯課件胃泌素對大鼠胃黏膜的影響(yǐngxiǎng)研究(yánjiū)一第三頁，共三十九頁。編輯課件研究(yánjiū)背景在胃腸道激素(jīsù)參與消化系統(tǒng)疾病發(fā)生與發(fā)展的研究中,胃泌素(gastrin,GAS)尤為引人注目,隨著對腫瘤分子生物學的不斷研究,在胃癌、大腸癌、胰腺癌以及小細胞肺癌等腫瘤組織中均觀察到有胃泌素基因的表達,在癌組織和癌旁組織中胃泌素受體陽性表達率也明顯高于正常組織,提示胃泌素可作為腫瘤臨床診斷與預后的一項參考指標。MortonM,PrenderqastC,BarrettTD.TargetinggastrinfortheTreatmentofgastricacidrelateddisordersandpancreaticcancer.TrendsPharmacolSci,2011,32(4):201-205.第四頁，共三十九頁。編輯課件研究(yánjiū)目的探討(tàntǎo)胃泌素對大鼠胃黏膜的影響。第五頁，共三十九頁。編輯課件研究(yánjiū)方法使用胃泌素刺激Wistar大鼠,空白對照組:自由飲用純凈水;胃泌素組:連續(xù)每天每只皮下注射(píxiàzhùshè)胃泌素300μg/kg,共30天。第12周開始取材,每隔4周取材一次,共觀察56周,空白對照組每次處死2只,胃泌素組每次3只,比較2組胃組織的變化,并測量胃泌酸區(qū)黏膜層的厚度,同時采用免疫組化方法檢測胃泌素抗體和作為腸嗜鉻樣細胞標記的組胺酸脫羧酶(HDC)抗體在2組中的表達。第六頁，共三十九頁。編輯課件研究(yánjiū)結果胃泌素組動物與空白對照組相比,胃黏膜層厚度增加(zēngjiā),且胃泌素抗體和HDC抗體在胃泌素組中的表達升高。第七頁，共三十九頁。編輯課件第八頁，共三十九頁。編輯課件第九頁，共三十九頁。編輯課件討論(tǎolùn)胃泌素由分布于胃竇和十二指腸近端的G細胞分泌,與腸嗜鉻樣細胞上特異受體即膽囊收縮(shōusuō)素B(CCK-B)結合后,作用于組胺酸脫羧酶(HDC),刺激ECL細胞合成和釋放組胺,介導對壁細胞胃酸分泌的調節(jié)。LindstromE,ChenD,NorlenP,etal.Controlofgastricacidsecretion:thegastrin-ECLcell-parietalcellaxis.CompBiochemPhysiolA2001.128(2):505-514.第十頁，共三十九頁。編輯課件討論(tǎolùn)同時胃泌素亦作為一種營養(yǎng)性胃腸道激素,不僅刺激正常胃腸道黏膜組織(zǔzhī)的生長,還能通過與其受體介導的細胞內信號傳導途徑刺激ECL細胞過度增殖,刺激胃癌、大腸癌等腫瘤細胞的生長。ItoM,TanakaS,MaedaM,etal.Roleofthegastrin-gastrinreceptorsystemintheexpansivegrowthofhumangastricneoplasms.

Digestion2008.784(2-3):163-170.第十一頁，共三十九頁。編輯課件討論(tǎolùn)Michael等指出胃癌患者血清胃泌素水平明顯升高,腫瘤經(jīng)手術切除后,血清胃泌素明顯下降,術后當腫瘤復發(fā)時胃泌素水平又再次升高,提示胃泌素的升高可能是胃癌癌前病變(bìngbiàn)的一種征象,可作為鑒別胃良惡性疾病的一個較好的生物學標志物。MichaelDB,

AndreaV.

Importanceofgastrininthepathogenesisandtreatmentofgastrictumors[J].

WorldJournalofGastroenterol2009.

15:1-16.第十二頁，共三十九頁。編輯課件討論(tǎolùn)長期使用質子泵抑制劑(PPIs)的患者,高胃泌素血癥導致胃黏膜ECL細胞增生的現(xiàn)象也比較常見,甚至可以出現(xiàn)ECL細胞微小結節(jié)樣增生,連續(xù)的組織學觀察顯示,高胃泌素血癥刺激ECL細胞發(fā)生增生以后,即使(jíshǐ)停用PPIs,不但高胃泌素血癥難以恢復,ECL細胞增生也不會恢復,這兩者可以互相促進,互為因果。GeboesK,DekkerW,MulderCJ,etal.Long-termlansoprazoletreatmentforgastrooesophagealrefluxdisease:clinicalefficacyandinfluenceongastricmucosa.AlimentPharmacolTher,2001,15(11):1189-1826.第十三頁，共三十九頁。編輯課件結論(jiélùn)胃泌素通過與其特異性受體結合,引起胃黏膜的增生,尤其引起腸嗜鉻樣細胞過度增殖,提示腸嗜鉻樣細胞的異常增殖是胃泌素促進(cùjìn)胃黏膜增厚的可能機制之一。第十四頁，共三十九頁。編輯課件意義(yìyì)目前臨床上常用的H2受體拮抗劑和PPIs類藥物均可能在抑酸的同時導致胃泌素水平升高,GERD發(fā)生率的升高也會使這兩類藥物的使用有所增加，Hp的感染(gǎnrǎn)又會進一步使胃泌素升高。因此,在使用這些藥物之前是否需要根除Hp,而且在使用這些藥物期間是否需要進行隨訪及藥物的使用期限等,均是需要我們解決的問題。第十五頁，共三十九頁。編輯課件展望(zhǎnwàng)分子生物學技術的發(fā)展(fāzhǎn),將會加快對胃泌素及其受體研究的深入,將有助于揭示消化道腫瘤的發(fā)病機制,為臨床設計受體激動劑和拮抗劑奠定基礎。胃泌素及其受體拮抗劑的研究將為消化道腫瘤的內分泌治療開辟新的途徑。第十六頁，共三十九頁。編輯課件陶琴琴,周麗雅,鄧凱,李淵,林三仁(sānrén),楊燕琳,黃琛,陳櫟.胃泌素對大鼠胃黏膜的影響[J].中國微創(chuàng)外科雜志,2011,07:640-643.第十七頁，共三十九頁。編輯課件單獨(dāndú)高胃泌素血癥及其與MNNG合用時對大鼠胃黏膜的影響研究(yánjiū)二第十八頁，共三十九頁。編輯課件研究(yánjiū)背景隨著腫瘤分子生物學的不斷研究，人們相繼發(fā)現(xiàn)在胃癌、大腸癌、胰腺癌和小細胞肺癌等腫瘤中均有胃泌素基因的表達，并在相應的細胞膜表面也發(fā)現(xiàn)有胃泌素的受體。在癌組織及癌旁組織中胃泌素受體陽性表達率也明顯高于正常組織，提示(tíshì)胃泌素可作為腫瘤臨床診斷與預后的一項參考指標。JensenRT．Consequencesoflong-termprotonpumpblockade:insightsfromstudiesofpatientswithgastrinomas［J］．BasicClinPharmacolToxicol，2006，98(6):4-9．第十九頁，共三十九頁。編輯課件研究(yánjiū)目的探討胃泌素及其與N-甲基-N’-硝基(xiāojī)-N-亞硝基(xiāojī)胍(MNNG)合用時對大鼠胃黏膜的影響。第二十頁，共三十九頁。編輯課件研究(yánjiū)方法Wistar大鼠共24只,分為4組:空白對照組(A組,6只):自由飲用純凈水;胃泌素組(G組,6只):連續(xù)每天皮下注射(píxiàzhùshè)胃泌素300μg/kg共90d;MNNG組(M組,6只):飲用含MNNG100μg/ml的自來水;胃泌素與MNNG合用組(M+G組,6只):飲用含MNNG100μg/ml的自來水,同時連續(xù)注射胃泌素每天300μg/kg共90d。第二十一頁，共三十九頁。編輯課件研究(yánjiū)方法第90天取材,比較各組胃的組織學變化,并采用免疫組化的方法檢測bcl-2(即B細胞淋巴瘤/白血病-2基因)和ki-67(增殖細胞核抗原)抗體(kàngtǐ)在不同胃組織中的表達。第二十二頁，共三十九頁。編輯課件研究(yánjiū)結果4個組動物胃黏膜層厚度差異有統(tǒng)計學意義,G組及M+G組與A組和M組相比,胃黏膜層厚度增加(zēngjiā)；G組、M組及M+G組ki-67及bcl-2的表達量均增加,且與A組比較,差異均有統(tǒng)計學意義。第二十三頁，共三十九頁。編輯課件圖14組大鼠胃體HE染色(rǎnsè)圖(50×)A:A組;B:G組;C:M組;D:M+G組ABCD第二十四頁，共三十九頁。編輯課件第二十五頁，共三十九頁。編輯課件圖24組大鼠胃竇bcl-2免疫組化染色(rǎnsè)圖(200×)第二十六頁，共三十九頁。編輯課件圖34組大鼠胃竇ki-67免疫組化染色(rǎnsè)圖(200×)A:A組;B:G組;C:M組;D:M+G組第二十七頁，共三十九頁。編輯課件討論(tǎolùn)胃泌素由分布于胃竇和十二指腸近端的G細胞分泌，釋放貯存于血液、組織和胃腸液當中，起著循環(huán)(xúnhuán)激素和神經(jīng)遞質的雙重作用。KlevelandPM，BrennaE，BakkeI，etal．Interactionsbetweengastricacidsecretagoguesandthelocalizationofthegastrinreceptor[J]．ScandJGastroenterol，2009，44(4):390-393．第二十八頁，共三十九頁。編輯課件討論(tǎolùn)胃泌素除了可以刺激壁細胞(xìbāo)和主細胞(xìbāo)而促進胃酸、胃蛋白酶分泌外，還可以促進胃腸黏膜細胞的分裂增殖，增加DNA、RNA的合成和蛋白質的含量，并且可以營養(yǎng)胃腸道黏膜及壁細胞群，促進胃腸道黏膜的生長和加快黏膜更新速度等;還能增加胃黏膜血流量，有利于損傷組織的修復;還能促進胃竇運動，加速胃排空等。第二十九頁，共三十九頁。編輯課件討論(tǎolùn)MNNG是一種較為常見的引起癌變的活性致癌劑，它不依賴酶的代謝而直接作用于胃腸道黏膜(niánmó)上皮，使DNA鏈上已有的堿基發(fā)生烷化產(chǎn)生突變，發(fā)揮其致癌作用，它可誘發(fā)大鼠實驗性胃癌，現(xiàn)已得到公認。NaresseLE，KobayasiS．CarcinogenesisoftheuppergastrointestinaltractinducedbyN-methyl-N'-nitro-nitrosoguanidineandrefluxofduodenalcontentsintherat[J]．ActaCirBras，2009，24(2):112-117．第三十頁，共三十九頁。編輯課件討論(tǎolùn)bcl-2是一種凋亡抑制基因，在腫瘤細胞的增殖中起重要作用，它是由Tsujimoto等在人類濾泡型淋巴瘤研究中首先發(fā)現(xiàn)而命名，定位于人染色體18q21，長約230000bp。bcl-2蛋白是通過染色體內的轉位活化而致其編碼的蛋白產(chǎn)物過度表達，位于線粒體外膜、核膜和內質網(wǎng)膜上，主要通過抑制細胞色素C從線粒體向胞質釋放，延長細胞壽命(shòumìng)，從而阻斷細胞凋亡的發(fā)生。TsujimotoY，CoxxmanJ，TaffeE，etal．Involvementofthebcl-2geneinhumanfollicularlymphoma［J］．Science，1985，228(4706):1440-1443.第三十一頁，共三十九頁。編輯課件討論(tǎolùn)ki-67是一種人類增殖細胞核抗原，通過測定細胞ki-67的表達，可以了解細胞的增殖情況(qíngkuàng)。一般認為細胞呈現(xiàn)高增殖狀態(tài)時，更容易形成腫瘤。ShinoharaT，OhshimaK，MurayamaH，etal．Apoptosisandproliferationingastriccarcinoma:theassociationwithhistologicaltype［J］．Histopathology1966.29(2):123-129．第三十二頁，共三十九頁。編輯課件討論(tǎolùn)胃泌素與其受體結合后通過細胞內信號傳導可以促進某些原癌基因如c-myc、c-fos以及細胞周期蛋白cyclinD1等的轉錄與表達，以促進胃腸道腫瘤(zhǒngliú)細胞增殖。Gerdes的研究也表明ki-67抗原表達可反映腫瘤細胞的增生活性，與惡性腫瘤的發(fā)展、轉移與預后高度相關。GerdesJ．Ki-67andotherproliferationmarkersusefulforimmunohistologicaldiagnosisandprognosticevaluationsinhumanmalignances［J］．SeminCancerBiol，1990，1(3):199-206．第三十三頁，共三十九頁。編輯課件結論(jiélùn)胃泌素能促進胃黏膜生長增厚且增加ki-67及bcl-2的表達量,提示單獨高胃泌素血癥有可能通過促進細胞增殖及抑制細胞凋亡而最終(zuìzhōnɡ)導致腫瘤的形成。第三十四頁，共三十九頁。編輯課件意義(yìyì)目前，臨床上常用的PPIs類藥物和H2-受體拮抗劑均可能在抑酸的同時(tóngshí)導致胃泌素水平升高，GERD發(fā)病率的升高也會使這兩類藥物的使用增加。而且中國又是Hp感染高發(fā)的國家，Hp的感染會