GB《實驗室生物安全通用要求》培訓班

GB-19489–2004-《實驗室生物安全通用要求》培訓班

中國CDC傳染病所

什么是生物危險生物危險是指由生物因子形成潛在的危險，當在實驗室中處理致病微生物時，或處理基因重組過程中產生的可能具有潛在生物危害的新未知基因時，或在處理致病因子的產物時，這些病原體有可能對實驗室的工作人員造成危害。當實驗室硬件條件缺失、管理制度不完善以及不規(guī)范的操作程序，導致實驗室致病因子泄漏和逃逸。則可能造成災難性的后果。什么是生物安全生物安全是指避免危險生物因子造成實驗室人員暴露、向實驗室外擴散并導致危害的綜合措施。什么是生物安全實驗室生物安全實驗室是指在研究傳染性疾病或微生物時能夠避免病原體意外傷害的實驗室氣溶膠感染主要途徑

吸球（即吸管）操作。吸球是微生物學方面最基本的器具，用吸球操作時，能導致氣溶膠發(fā)生，例如由吸管中向外排液，用力過猛則會使液滴飛濺，彈離液體或固體培養(yǎng)基表面，釋放出大量微粒；或者，當吸管末端含有物快排盡時，可能產生氣泡，尤其是富于蛋白性懸液更易形成氣泡，而氣泡破裂就成為氣溶膠。離心沉淀時，沉淀管裝量太滿，管蓋未蓋或不嚴，以及離心操作過操作過程中離心管破裂，都可導致氣溶膠散播。

氣溶膠感染主要途徑注射器操作時，當抽吸后或者撥出時，注射器針頭由于顫動而散發(fā)出液體微粒。用接種針去粘沾液體時，液柱斷裂。鏡檢涂片時，液絲斷裂。傳染性材料傾注出來。打開培養(yǎng)皿蓋時，蓋內壁往往有傳染性的凝結水薄膜，因破裂而散播氣溶膠。氣溶膠感染主要途徑開安瓿時，如瓿內為液體，則當銼刀銼斷瓿頸后，即可能發(fā)生氣溶膠；如瓿內為干燥的活菌或菌種，特別是用真空熔封的，更易產生溶膠。機械振蕩和超聲振蕩，或者研磨、浸解，撥出研磨柱時，都可形成氣溶膠。裝有液體容器的破損或液體益出。用超聲波清洗機清洗污染器具時，也可能發(fā)生大量氣溶膠。在粗糙的培養(yǎng)基表面涂布菌液時。高壓滅菌器在滅菌前的排氣。從玻璃或離心管上撥出棉塞時。處理關過受感染動物的籠子。各種操作的氣溶膠飛散系數(shù)操作飛散系數(shù)超聲波處理5×10-7~9-10-5混合器（開口）1×10-6（開始1min關閉，然后打開）~2×10-3（從開始即打開）混合器（閉鎖）9×10-9（螺口罩）~2×10-8*（塑料罩）液體下滴2×10-6（90cm高）由吸管混合2×10-6（無吹出）~1×104（有吹出）離心作用產生的飛沫2×10-6瓶子的振蕩7×10-9~2×10-3各種操作的氣溶膠飛散系數(shù)操作飛散系數(shù)干燥后安瓿的開封肉湯2×10-9半血清4×10-9-9從試管上取下棉塞6×10-9~2×10-7白金耳放在火焰上加熱3×10-9~3×10-7把凍結干燥的粉末狀物倒入別的試管2×10-11各種操作的氣溶膠飛散系數(shù)操作飛散系數(shù)把凍結干燥的安瓿的斷1、以牛奶肉汁懸浮液作原料時3×10-92、以加營養(yǎng)的肉汁作原料時3×10-93、以羊的血清作原料時4×10–104、用浸酒精紗布覆蓋時05、用干燥滅菌紗布覆蓋時6×10-11各種操作的的氣溶膠飛飛散系數(shù)操作飛散系數(shù)搗碎器1、開放式2×10-32、運動中擰緊蓋，停轉后1min打開1×10-6

3、用塑料罩罩著進行2×10-84、擰緊蓋進行9×10-9可能產生危危險的設備備和操作方方法設備危險如何防止和減少危險皮下注射針頭意外的注射．不要修剪針頭·使用針頭可鎖定式注射器以防止針頭和針管的脫肉，或使用針頭或針管為一體的一次性注射器．．運用良好的實驗技術，如：一小心地將液體注入針管以盡可能地減少氣泡或使培養(yǎng)液起泡可能產生危危險的設備備和操作方方法設備危險如何防止和減少危險皮下注射針頭意外的注射一避免用注射罪攪拌傳染性液體；否則，應保證針尖在藥管內液體表層下，避免用力過度。一當從有橡皮塞的瓶子上取下針頭時，應用經適當?shù)南緞┙萘说拿迗F包住針頭和瓶塞．一垂直地將注射器內的多余的液體和氣泡排人浸有適當?shù)南緞┑拿迗F或裝有棉花的小瓶中.可能產生危危險的設備備和操作方方法設備危險如何防止和減少危險皮下注射針頭。處理傳染性物質時，所有的操作應在生物安全操作箱內進行。。給動物注射時應對動物加以控制。進行鼻口注射時，使用鈍頭針頭或套管。使用生物安全操作箱。用后進行高壓滅菌處理并保證使用正確的廢物處理方法。離心機會產生煙霧，噴濺和試管破裂使用封閉式甩桶（安全杯）可能能產產生生危危險險的的設設備備和和操操作作方方法法設備危險如何防止和減少危險離心機會產生煙霧，噴濺和試管破裂使用封閉式甩桶（安全杯）超速離心機會產生霧，噴濺和試管破裂在離心機和真空泵之間安HEPA過濾器。對每臺馬達的盍時間進行措施以減少機械故障在生物安全操作箱內拆卸甩干桶?？赡苣墚a產生生危危險險的的設設備備和和操操作作方方法法設備危險如何防止和減少危險厭氧罐爆傳染性物質的噴濺確保催化劑周圍的金屬線外殼的完完整烘干箱內爆、玻璃碎渣和傳染性物質的噴濺放在堅固的線圈內均化呂，組織碾磨機產生煙霧和泄漏在生物安全操作箱內操作。使用特制的型號以防止馬達軸承和0形墊圈的泄漏或使用stomacher.可能能產產生生危危險險的的設設備備和和操操作作方方法法設備危險如何防止和減少危險近距離聲波定位器，超聲波清洗器聽力損害和皮膚發(fā)炎確保操作時保持距離以避免次諧波的危害。戴上保護手套，防止高頻以及洗滌劑的危害。培養(yǎng)基攪拌器，搖動器，產生煙霧溢出和泄漏在生物安全操作箱內或特制的嚴格密封的容器內操作。攪拌器用強力帶螺旋塞的培養(yǎng)基玻璃瓶，如果需要，安裝有過濾保護咀的出口并蓋嚴?？赡苣墚a產生生危危險險的的設設備備和和操操作作方方法法設備危險如何防止和減少危險冷凍箱產生煙霧和直接接觸污染源使用0型連接器，封閉整個冷凍箱。使用空氣過濾器以保護真空管。使用有效的消毒方法，如化學藥劑家用冰箱有易燃物品（如自動溫度調整器，電燈開關，加熱管等），這些可導致箱內儲存的易燃溶劑發(fā)出的蒸汽的燃燒在家用冰箱上放上警告標志：“在此冰箱內嚴禁存放易燃溶劑”。在冰箱的外部安裝人工溫度控制器并在冰箱箱體上電線經過的位置加以封閉。注意：自動除霜不能這樣改造?？赡苣墚a產生生危危險險的的設設備備和和操操作作方方法法設備危險如何防止和減少危險水浴器具微生物的滋生，某些金屬接觸疊氮化鈉后可產生易爆炸的混合物進行定期的洗滌和消毒。不能用疊氮化鈉防止微生物的滋生生物物安安全全實實驗驗室室微微生生物物操操作作技技術術規(guī)規(guī)范范實驗驗室室事事故故、、傷傷害害以以及及與與工工作作有有關關的的感感染染主主要要是是由由于于人人為為失失誤誤、、不不良良實實驗驗技技術術以以及及儀儀器器使使用用不不當當造造成成的的，，實實驗驗室室樣樣品品的的收收集集以以及及內內部部傳傳遞遞和和接接收收不不當當時時，，都都能能夠夠帶帶來來使使相相關關人人員員感感染染的的危危險險。。應應建建立立完完善善的的管管理理制制度度與與操操作作細細則則，，避避免免或或盡盡量量減減少少這這類類問問題題的的發(fā)發(fā)生生。生物物安安全全實實驗驗室室微微生生物物操操作作技技術術規(guī)規(guī)范范樣品品容容器器樣品品容容器器可可以以是是玻玻璃璃的的，，但但最最好好使使用用塑塑料料制制品品。。樣樣品品容容器器應應當當堅堅固固，，正正確確地地用用蓋蓋子子或或塞塞子子蓋蓋好好后后應應無無泄泄漏漏。。在在容容器器外外部部不不能能有有殘殘留留物物。。容容器器上上應應當當正正確確地地張張貼貼標標簽簽以以便便于于識識別別。。樣樣品品的的要要求求或或說說明明書書不不能能夠夠卷卷在在容容器器外外面面，，而而是是要要分分開開放放置置，，最最好好放放置置在在防防水水的的袋袋子子里里。。樣樣品品在在設設施施內內的的傳傳遞遞為為了了避避免免意意外外泄泄漏漏或或溢溢出出，，應應當當使使用用盒盒子子等等二二級級容容器器，，并并將將其其固固定定在在架架子子上上使使裝裝有有樣樣品品的的容容器器保保持持直直立立。。二二級級容容器器可可以以是是金金屬屬或或塑塑料料制制品品，，應應該該可可以以耐耐高高壓壓滅滅菌菌或或耐耐受受化化學學消消毒毒劑劑的的作作用用。。密密封封口口最最好好有有一一個個墊墊圈圈，，要要定定期期清清除除污污染染。。樣品接接收需要接接收大大量樣樣品的的實驗驗室應應當指指定專專門的的房間間或空空間。。生物安安全實實驗室室微生生物操操作技技術規(guī)規(guī)范包裝開開啟接收和和打開開樣品品的人人員應應當了了解樣樣品對對身體體健康康的潛潛在危危害，，并接接受過過如何何采用用常規(guī)規(guī)預防防措施施的培培訓，，尤其其是處處理破破碎或或泄漏漏的容容器時時更應應如此此。樣樣品要要在生生物安安全柜柜內打打開，，并準準備好好消毒毒劑。。生物安全實實驗室微生生物操作技技術規(guī)范移液管和移移液輔助器器的使用1．應使用用移液輔助助器，嚴禁禁用口吸取取。2．所有移液管管應帶有棉棉塞以減少少移液器具具的污染。。3．不能向向含有感染染性物質的的溶液中吹吹人氣體。。4．感染性物質質不能夠用用移液管反反復吹吸混混合。5．不能將將液體從移移液管內用用力吹出。。6．刻度對對應(Mark——to—mark)移液管不需需要吹出最最后一滴液液體，因此此最好使用用這種移液液管。生物安全實實驗室微生生物操作技技術規(guī)范移液管和移移液輔助器器的使用7．污染的的移液管應應該完全浸浸泡在盛有有適當消毒毒液的防碎碎容器中。。移液管應應當在消毒毒劑中浸泡泡18／，，24小時時后再進行行處理。8．盛放廢廢棄移液管管的容器應應當放在生生物安全柜柜內，而不不能放在外外面。9．固定有有皮下注射射針頭的注注射器不能能夠用于移移液。應當當用鈍頭導導管替代針針頭?？梢砸杂霉ぞ叽虼蜷_瓶塞后后再用移液液管取樣，，從而避免免使用注射射器和針頭頭。10．為了了避免感染染性物質從從移液管中中意外滴出出而擴散，，在工作臺臺面應當放放置一塊浸浸有消毒液液的布或吸吸有消毒液液的紙，使使用后將其其高壓滅菌菌或按感染染性廢物處處理。生物安全實實驗室微生生物操作技技術規(guī)范避免感染性性物質的擴擴散1．為了避避免轉移物物質灑落，，微生物接接種環(huán)的直直徑應為2—3mm并完全封閉閉，手柄(shanks)的長度應小小于6cm以減小振動動?；蛘卟刹捎靡淮涡孕詼缇藓灪?。2．使用封封閉式微型型電加熱器器消毒接種種環(huán)能夠避避免在本生生燈的明火火上加熱所所引起的感感染性物質質爆濺。最最好使用不不需要再進進行消毒的的一次性接接種環(huán)。3．為了避避免產生氣氣泡和氣溶溶膠的擴散散，不要在在玻片上進進行觸酶試試驗，而應應當采用試試管、毛細細管或蓋玻玻片法。4．準備高高壓滅菌和和／或處理理的廢棄樣樣品和培養(yǎng)養(yǎng)物應當放放置在防漏漏的容器內內，如實驗驗室廢物袋袋。5．在每一一階段工作作結束后，，必須采用用適當?shù)南緞┣宄ぷ鲄^(qū)的的污染。生物安全實實驗室微生生物操作技技術規(guī)范生物安全柜柜的使用1．應參考考國家標準準和相關文文獻，介紹紹生物安全全柜的使用用方法和局局限性。并并發(fā)給工作作人員書面面的操作步步驟、安全全或操作手手冊。應明明確注明當當出現(xiàn)溢出出、破損或或不良操作作時，安全全柜就不再再能保護操操作者。2．生物安安全柜必須須運行正常常時才能使使用。3．生物安安全柜在使使用中不能能打開玻璃璃觀察擋板板。4．安全柜柜內應盡量量少放置器器材或樣品品，不能阻阻礙后部的的氣流循環(huán)環(huán)。樣品在在放人安全全柜內的工工作區(qū)前需需要清除表表面污染。。5．安全柜柜內不能使使用酒精燈燈，否則燃燃燒產生的的熱量會干干擾氣流并并可能損壞壞過濾器。。允許使用用微型電加加熱器，但但最好使用用一次性無無菌接種環(huán)環(huán)。生物安全實實驗室微生生物操作技技術規(guī)范生物安全柜柜的使用6．所有工工作必須在在工作臺面面的中后部部進行，并并能夠通過過觀察擋板板看到。7．盡量減減少操作者者身后的人人員流動。。8．操作者者不應反復復移出和伸伸進手臂以以免干擾氣氣流。9．實驗記記錄、移液液管以及其其他物品不不能夠阻礙礙前面的空空氣格柵，，因為這將將干擾氣體體流動，引引起物品的的潛在污染染和操作者者的暴露。。10．工作作完成后以以及每天下下班前，應應使用適當當?shù)南緞﹦ι锇舶踩竦谋肀砻孢M行擦擦拭。11．工作作開始前和和結束后，，安全柜的的風機應至至少運行5分鐘。生物安全實實驗室微生生物操作技技術規(guī)范避免感染性性物質的注注入1．通過認認真練習和和仔細操作作，可以避避免破碎玻玻璃器皿的的意外刺傷傷。盡可能能用塑料制制品代替玻玻璃制品。。2．皮下注注射針頭、、玻璃吸管管以及破碎碎的玻璃均均可能將感感染性物質質注入體內內。3．以下兩兩點可以減減少針刺事事故：(a)注射時特別別小心(b)減少使用注射射器和針頭；；許多操作可可用帶有鈍頭導管的的注射器替代代?？捎靡恍┬┖唵蔚难b置置來打開瓶塞塞，然后使用用吸管取樣。。4．不要重新新給用過的針針頭戴護套。。一次性注射器器用完后，不不必將針頭從從注射器上取取下，應丟棄棄在防穿透的的帶蓋容器中中。5．應當用塑塑料吸管代替替玻璃吸管。。生物安全實驗驗室微生物操操作技術規(guī)范范血清的分離1．只有經過過嚴格培訓的的人員才能進進行這項工作作。2．操作時應應戴手套以及及眼睛和黏膜膜的保護裝置置。3．規(guī)范的實實驗操作技術術可以避免或或盡量減少噴噴濺和氣溶膠膠的產生。血血液和血清應應當小心吸取取，而不能傾傾倒。嚴禁用用口吸液。4．移液管使使用后應完全全浸入次氯酸酸鹽或其他適適當?shù)南疽阂褐?。移液管管應在消毒液液中浸泡至少?8小時，，然后再丟棄棄或滅菌清洗洗后重復使用用。5．帶有血凝凝塊等的廢棄棄樣品管，在在加蓋后應當當放在適當?shù)牡姆缆┤萜鲀葍雀邏簻缇秃停蚍贌！?．為了清清洗噴濺和溢溢出的血樣，，應當備有每每天新鮮配制制的次氯酸鹽鹽溶液。生物安全實驗驗室微生物操操作技術規(guī)范范離心機的使用用1．在使用實實驗室離心機機時，儀器良良好的機械性性能是保障微微生物安全的的前提條件。。2．應按照操操作手冊來操操作離心機。。3．離心機放放置的高度應應當使低于平平均身高的工工作人員也能能夠看到離心心機腔體內部部，以正確放放置十字軸和和離心管套。。4．離心管和和盛放離心樣樣品的容器應應當由厚壁玻玻璃制成，或或最好為塑料料制品，并且且在使用前應應檢查是否破破損。5．用于離心心的試管和樣樣品容器應當當始終牢固蓋蓋緊(最好使使用螺旋蓋)。6．離心管套套的裝載、平平衡、密封和和打開必須在在生物安全柜柜內進行。生物安全實驗驗室微生物操操作技術規(guī)范范離心機的使用用7．離心管套套和十字軸應應按重量配對對，并在裝載載離心管后正正確平衡。8．操作指南南中應給出液液面距離心管管邊緣需要留留出的空間大大小。9．空離心管管套應當用蒸蒸餾水或乙醇醇(異丙醇，，70％)平平衡。鹽溶液液或次氯酸鹽鹽溶液對金屬屬具有腐蝕作作用，因此不不能使用。10．對于危危險度3級和和4級的微生生物，必須使使用可封口的的離心離心管管套(安全杯杯)。11．當使用用固定角離心心轉子時，必必須小心不能能將離心管裝裝得過滿，否否則會導致漏漏液。12．應當每每天檢查離心心機內轉子部部位的腔壁是是否被沾染或或弄臟。如污污染明顯，應應重新評估離離心操作規(guī)程程。生物安全實驗驗室微生物操操作技術規(guī)范范離心心機機的的使使用用13．．應應當當每每天天檢檢查查離離心心轉轉子子和和離離心心管管套套是是否否有有腐腐蝕蝕或或細細微微裂裂痕痕。。14．．每每次次使使用用后后，，要要清清除除離離心心管管套套、、轉轉子子和和離離心心機機腔腔的的污污染染。。15．．使使用用后后離離心心管管套套應應當當?shù)沟怪弥么娲娣欧攀故蛊狡胶夂庖阂毫髁鞲筛??！?6．．當當使使用用離離心心機機時時，，可可能能噴噴射射出出可可在在空空氣氣中中傳傳播播的的感感染染性性顆顆粒粒。。如如果果將將離離心心機機放放置置在在傳傳統(tǒng)統(tǒng)的的前前開開式式的的I級或或ⅡⅡ級級生生物物安安全全柜柜內內，，這這些些粒粒子子由由于于運運動動過過快快而而不不能能被被安安全全柜柜內內的的氣氣流流截截留留。。而而在在ⅢⅢ級級生生物物安安全全柜柜內內封封閉閉離離心心時時，，可可以以防防止止生生成成的的氣氣溶溶膠膠廣廣泛泛擴擴散散。。但但是是，，良良好好的的離離心心操操作作技技術術和和牢牢固固加加蓋蓋的的離離心心管管可可以以提提供供足足夠夠的的保保護護，，以以防防止止感感染染性性氣氣溶溶膠膠和和可可擴擴散散粒粒子子的的產產生生。。生物安安全實實驗室室微生生物操操作技技術規(guī)規(guī)范勻漿器器＼搖搖床＼＼攪拌拌器和和超聲聲處理理器的的使用用1．實實驗室室不能能使用用家用用(廚廚房)勻漿漿器，，因為為它們們可能能泄漏漏或釋釋放氣氣溶膠膠。使使用實實驗室室專用用攪拌拌器和和消化化器(stomacher)更為安安全。。2.蓋子、、杯子子或瓶瓶子應應當保保持正正常狀狀態(tài)，，沒有有裂縫縫或變變形。。蓋子子應能能封蓋蓋嚴密密，襯襯墊也也應處處于正正常狀狀態(tài)。。生物安安全實實驗室室微生生物操操作技技術規(guī)規(guī)范3．在在使用用勻漿漿器、、搖床床和超超聲處處理器器時，，容器器內會會產生生壓力力，含含有感感染性性物質質的氣氣溶膠膠就可可能從從蓋子子和容容器間間隙逸逸出。。由于于玻璃璃可能能破碎碎而釋釋放感感染性性物質質并傷傷害操操作者者，建建議使使用塑塑料容容器，，尤其其是聚聚四氟氟乙烯烯(po1ytetranuoroe-thylene，，PTFE)容器。。4．使使用勻勻漿器器、搖搖床和和超聲聲處理理器時時，應應該用用一個個結實實透明明的塑塑料箱箱覆蓋蓋設備備，并并在用用完后后消毒毒?？煽赡艿牡脑挘?，這些些儀器器可在在生物物安全全柜內內覆蓋蓋塑料料罩進進行操操作。。5．操操作結結束后后，應應在生生物安安全柜柜內打打開容容器。。6．應應對使使用超超聲處處理器器的人人員提提供聽聽力保保護。。生物安安全實實驗室室微生生物操操作技技術規(guī)規(guī)范組織研研磨器器的使使用1．使使用玻玻璃研研磨器器時應應戴手手套，，并用用一塊塊具有有吸收收性的的軟物物包住住研磨磨器。。塑料料(聚聚四氟氟乙烯烯)研研磨器器更加加安全全。2．操作和和打開組織織研磨器時時應當在生生物安全柜柜內進行。。生物安全實實驗室微生生物操作技技術規(guī)范冰箱與冷柜柜的維護和和使用1．冰箱、、低溫冷柜柜和干冰柜柜應當定期期除霜和清清潔，應清清理出所有有在儲存過過程中破碎碎的安瓿和和試管等物物品。清理理時應戴厚厚橡膠手套套并進行面面部防護，，清理后要要對內表面面進行消毒毒。2．儲存在在冰箱內的的所有容器器應當清楚楚地標明內內裝物品的的學名、儲儲存日期和和儲存者的的姓名。未未標明的或或廢舊物品品應當高壓壓滅菌并丟丟棄。3．應當保保存一份凍凍存物品的的清單。4．除非采采用有效防防爆措施，，否則冰箱箱內不能放放置易燃溶溶液并冰箱箱門上應明明確標示。。生物安全實實驗室微生生物操作技技術規(guī)范裝有凍干感感染性物質質安瓿的開開啟當打開裝有有凍干物的的安瓿時必必須小心，，因為其內內部可能處處于負壓，，瞬間進入入的空氣可可能使一些些物質擴散散進入空氣氣。安瓿應應該在生物物安全柜內內打開，建建議按下列列步驟打開開安瓿：1．首先清清除安瓿外外表面的污污染。2．如果管管內有棉花花或纖維塞塞，可以在在管上靠近近棉花或纖纖維塞的中中部銼一痕痕跡。3．用一團團酒精浸泡泡的棉花將將安瓿包起起來以保護護雙手，然然后手持安安瓿從標記記的銼痕處處打開。4．將頂部部小心移去去并按污染染物處理。。5．如果塞塞子仍然在在安瓿上，，用消毒鑷鑷子除去。。6．緩慢向向安瓿中加加入液體來來重懸凍干干物，避免免出現(xiàn)泡沫沫。生物安全實實驗室微生生物操作技技術規(guī)范裝有感染性性物質安瓿瓿的儲存裝有感染性性物質的安安瓿不能浸浸入液氮中中，因為這這樣會造成成有裂痕或或密封不嚴嚴的安瓿在在取出時破破碎或爆炸炸。如果需需要低溫保保存，安瓿瓿應當儲存存在液氮上上面的氣相相中。此外外，感染性性物質應儲儲存在低溫溫冰柜或干干冰中。當當從冷凍儲儲存器中取取出安瓿時時，實驗室室工作人員員應當進行行眼睛和手手的防護。。以這種方方式儲存的的安瓿在取取出時應對對外表面進進行消毒。。生物安全實實驗室微生生物操作技技術規(guī)范樣品的收集集、標記和和運輸1．始終遵遵循常規(guī)預預防措施；；所有操作作均要戴手手套2．應當由由受過培訓訓的人員來來采集病人人或動物的的血樣。3．在靜脈脈抽血時，，應當使用用一次性的的安全的抽抽真空設備備取代傳統(tǒng)統(tǒng)的針頭和和注射器，，因為這樣樣可以使血血液直接采采集到帶塞塞的運輸管管和／或培培養(yǎng)管中。。用完后自自動廢棄針針頭。4．裝有樣樣品的試管管應置于適適當容器中中運至實驗驗室，在實實驗室內部部轉運也應應這樣說明明書應當分分開放置在在防水袋或或信封內。。生物安全實實驗室微生生物操作技技術規(guī)范玻璃器皿和和“銳器””1．盡可能能用塑料制制品代替玻玻璃制品。。只能用實實驗室級別別(硼硅酸酸鹽)的玻玻璃，任何何破碎或有有裂痕的玻玻璃制品均均應丟棄。。2．不能將將皮下注射射針作為移移液管使用用。可以使使用鈍頭導導管。生物安全實實驗室微生生物操作技技術規(guī)范用于于顯顯微微觀觀察察的的薄薄膜膜和和涂涂片片用于于顯顯微微觀觀察察的的血血液液、、唾唾液液和和糞糞便便樣樣品品在在固固定定和和染染色色時時，，并并不不必必殺殺死死涂涂片片上上的的所所有有微微生生物物和和病病毒毒。。應應當當用用鑷鑷子子拿拿取取這這些些東東西西，，恰恰當當儲儲存存，，并并經經清清除除污污染染和和／／或或高高壓壓滅滅菌菌后后再再丟丟棄棄。。自動動化化儀儀器器(超超聲聲處處理理器器、、渦渦旋旋混混合合器器)1．．為為了了避避免免液液滴滴和和氣氣溶溶膠膠的的擴擴散散，，這這些些儀儀器器應應采采用用封封閉閉型型的的。。2．．排排出出物物應應當當收收集集在在封封閉閉的的容容器器內內進進一一步步高高壓壓滅滅菌菌和和／／或或廢廢棄棄。。3，，在在每每一一步步完完成成后后應應根根據據操操作作指指南南對對儀儀器器進進行行消消毒毒。。生物物安安全全實實驗驗室室微微生生物物操操作作技技術術規(guī)規(guī)范范組織織1．．組組織織樣樣品品應應當當采采用用福福爾爾馬馬林林固固定定。。小小塊塊樣樣品品，，如如針針頭頭活活檢檢樣樣品品，，能能夠夠在在幾幾個個小小時時內內固固定定和和消消毒毒，，但但是是較較大大樣樣品品則則可可能能需需要要幾幾天天時時間間。。2．．應應當當避避免免冰冰凍凍切切片片。。如如果果必必須須進進行行冰冰凍凍切切片片，，應應當當罩罩住住冰冰凍凍機機，，操操作作者者要要戴戴安安全全防防護護罩罩(面面具具)。。清清除除污污染染時時，，儀儀器器的的溫溫度度要要升升至至20~C。。生物物安安全全實實驗驗室室微微生生物物操操作作技技術術規(guī)規(guī)范范生物物安安全全實實驗驗室室消消毒毒與與滅滅活活消毒毒和和滅滅菌菌的的基基本本常常識識對對于于實實驗驗室室生生物物安安全全是是至至關關重重要要的的。。生生物物安安全全中中關關于于清清除除污污染染的的特特殊殊要要求求要要根根據據實實驗驗工工作作的的類類型型和和所所操操作作感感染染性性物物質質的的特特性性來來決決定定。。因因此此，，有有必必要要利利用用已已知知的的普普通通信信息息來來確確立立更更具具體體的的和和標標準準化化的的程程序序，，以以滿滿足足某某些些特特殊殊實實驗驗室室中中各各種種不不同同生生物物危危害害水水平平的的需需求求。。生物物安安全全實實驗驗室室微微生生物物操操作作技技術術規(guī)規(guī)范范清除除局局部部環(huán)環(huán)境境的的污污染染需要要聯(lián)聯(lián)合合應應用用液液體體和和氣氣體體消消毒毒劑劑來來清清除除實實驗驗室室空空間間、、用用具具和和設設備備的的污污染染。。清清除除表表面面污污染染時時可可以以使使用用次次氯氯酸酸鈉鈉(Na0C1)溶液；含含有1％％有效氯氯的溶液液適于普普通的環(huán)環(huán)境衛(wèi)生生設備，，但是當當處理高高危環(huán)境境時，建建議使用用高濃度度(5g／L)溶液。用用于清除除環(huán)境污污染時，，含有3％過氧氧化氫的的溶液也也可以作作為漂白白劑的代代用品。?？梢酝ㄍㄟ^加熱熱多聚甲甲醛或煮煮沸福爾爾馬林所所產生的的甲醛蒸蒸氣熏蒸蒸來清除除房間和和儀器的的污染。。產生甲甲醛蒸氣氣。前，，房間的的所有開開口(如如門窗等等)都應應用密封封帶或類類似物加加以密封封。熏蒸蒸應當在在室溫不不低于21℃且且相對濕濕度70％的的條件下下進行清清除污染染時氣體體需要與與物體表表面至少少接觸8小時。。熏蒸后后，該區(qū)區(qū)域必須須徹底通通風后才才能允許許人員進進入。在在通風之之前需要要進入房房間時，，必須戴戴適當?shù)牡姆蓝久婷婢摺？煽梢圆刹捎脷鈶B(tài)態(tài)的碳酸酸氫銨來來中和甲甲醛。已已有報道道，可采采用過氧氧化氫溶溶液的氣氣霧熏蒸蒸污染的的空間，，但對此此還需要要進一步步的研究究。注：甲醛醛是一種種危險和和有刺激激性的氣氣體，并并懷疑有有致癌性性。應使使用具有有供氣系系統(tǒng)的全全面罩式式防毒面面具。操操作時應應當采用用“雙人人”制。。生物安全全實驗室室微生物物操作技技術規(guī)范范生物安全全柜污染染的清除除清除I級和Ⅱ級級生物安安全柜的的污染時時，應當當將適量量的多聚聚甲醛(空氣中中的終濃濃度達到到0．8％)放放在電熱熱板或電電熱盤上上(在生生物安全全柜外進進行控制制)。然然后在生生物安全全柜內放放置第二二個放有有比多聚聚甲醛多多10％％的碳碳酸氫銨銨的加熱熱板或盤盤。第二二個盤上上覆蓋一一個能夠夠從遠處處將其移移走的蓋蓋子(如如連接一一個能夠夠從生物物安全柜柜外拉動動的繩子子)，從從而盡量量減少對對甲醛氣氣體的提提前中和和。如果果相對濕濕度低于于70％％，在在使用強強力膠帶帶[如““管道密密封膠帶帶”(ducttape)]密封前部部封閉板板前，還還要在安安全柜內內部放置置一個開開口的盛盛有熱水水的容器器。如果果前部沒沒有封閉閉板，則則可以用用重型塑塑料布(heavygaugeplastic，，heeting)粘貼覆蓋蓋在前部部以保證證氣體不不會泄漏漏進入房房間。生物安全全實驗室室微生物物操作技技術規(guī)范范打開多聚聚甲醛盤盤的加熱熱開關，，1小時時后或多多聚甲醛醛完全蒸蒸發(fā)后關關閉。讓讓生物安安全柜靜靜置過夜夜。移去去第二個個盤子的的蓋后打打開加熱熱開關，，讓碳酸酸氫銨揮揮發(fā)。然然后，關關閉開關關并啟動動安全柜柜讓碳酸酸氫銨氣氣體循環(huán)環(huán)1小時時。移去去前封閉閉板(或或塑料布布)后就就可以使使用生物物安全柜柜了。生物安全全實驗室室微生物物操作技技術規(guī)范范洗手／清清除手部部污染接觸生物物危害性性材料時時，必須須戴合適適的手套套。但是是這并不不能代替替實驗室室人員需需要經常常地、徹徹底地洗洗手。接接觸過生生物危害害性材料料和動物物后、使使用過衛(wèi)衛(wèi)生間后后、離開開實驗室室前以及及吃東西西前都必必須洗手手。生物安全全實驗室室微生物物操作技技術規(guī)范范大多數(shù)情情況下，，用普通通的肥皂皂和水徹徹底沖洗洗對于清清除手部部污染就就足夠了了。但在在高度危危險的情情況下，，建議使使用殺菌菌肥皂。。手要完完全抹上上肥皂，，搓洗至至少10秒鐘，，用干凈凈水沖洗洗后再用用干凈的的紙巾或或毛巾擦擦干(如如果有條條件，也也推薦使使用暖風風干手器器)。推薦使用用腳控或或肘控的的水龍頭頭。如果果沒有安安裝，應應使用紙紙巾或毛毛巾關上上水龍頭頭以防止止再度污污染洗凈凈的手。。如上所所述，如如果沒有有條件徹徹底洗手手或洗手手不方便便，應該用酒酒精擦手手來清除除雙手的的輕度污污染生物安全全實驗室室微生物物操作技技術規(guī)范范加熱滅菌菌和消毒毒加熱是最最常用的的清除病病原體污污染的物物理手段段?！案筛伞睙釠]沒有腐蝕蝕性，可可用來處處理實驗驗器材中中許多可可耐受160~C或更高溫溫度2～～4小時時的物品品。燃燒燒或焚化化也是一一種干熱熱方式。。高壓滅滅菌的濕濕熱法則則最為有有效。煮沸并不不一定能能殺死所所有的微微生物或或病原體體，但如如果其他他方法(化學殺殺菌、清清除污染染、高壓壓滅菌)不可行行或沒有有條件時時，也可可以作為為一種最最起碼的的消毒措措施。滅菌后的的物品必必須小心心操作并并保存，，以保證證在使用用之前不不再被污污染。生物安全全實驗室室微生物物操作技技術規(guī)范范高壓滅菌菌壓力飽和和蒸汽滅滅菌(高高壓滅菌菌)是對對實驗材材料進行行滅菌時時最有效效和最可可靠的方方法。對對于大多多數(shù)目的的，下列列組合可可以確保保正確裝裝載的高高壓滅菌菌器的滅滅菌效果果：——134℃、、2、、3分分鐘————126℃℃、10分分鐘——121℃、、15分鐘鐘———115℃、、25分鐘鐘生物安安全實實驗室室微生生物操操作技技術規(guī)規(guī)范高壓滅滅菌器器的裝裝載為了利利于蒸蒸汽的的滲透透和空空氣排排出，，高壓壓滅菌菌物品品應松松散包包裝放放置在在滅菌菌器內內。要要使蒸蒸汽能能夠作作用到到其內內容物物。通通過高高壓滅滅菌器器內的的蒸汽汽，由由下而而上置置換空空氣并并經排排氣孔孔排出出。當當所有有的空空氣排排出后后，關關閉排排氣孔孔的閥閥門，，緩慢慢加熱熱使壓壓力和和溫度度上升升到安安全閥閥預置置的水水平。。此時時記為為滅菌菌開始始時間間。滅滅菌結結束后后停止止加熱熱，讓讓溫度度下降降到80℃℃以下下再打打開蓋蓋子。。生物安安全實實驗室室微生生物操操作技技術規(guī)規(guī)范高壓滅滅菌器器使用用注意意事項項下列列規(guī)定定能夠夠減小小操作作壓力力容器器時會會發(fā)生生的危危害：：1．高壓滅滅菌器的操操作和日常常維護應由由受過良好好培訓的人人員負責。。預防性的的維護程序序應包括：：由有資質質人員定期期檢查滅菌菌器內部、、門的密封封性以及所所有的儀表表和控制器器。2．應使用用飽和蒸汽汽，并且其其中不含腐腐蝕性抑制制劑或其他他化學試劑劑，這些物物質可能污污染正在滅滅菌的物品品。3．所有要要高壓的物物品都應放放在空氣能能夠排出并并具有良好好熱滲透性性的容器中中；滅菌器器內不能塞塞得過緊，，否則蒸汽汽不能均勻勻作用于裝裝載物。生物安全實實驗室微生生物操作技技術規(guī)范4．當滅菌菌器內部加加壓時，互互鎖安全裝裝置可以防防止門被打打開，而沒沒有互鎖裝裝置的高壓壓滅菌器，，應當關閉閉主蒸汽閥閥并待溫度度下降到80℃以下下時再打開開門。5．即使溫溫度下降到到80℃以以下，操作作者打開門門時也應當當戴適當?shù)牡氖痔缀兔婷嬲謥磉M行行防護。6．在進行行高壓滅菌菌效果的常常規(guī)監(jiān)測中中，生物指指示劑或或熱電偶計計應置于每每件高壓滅滅菌物品的的中心。最最好在“最最大”裝載載時用熱偶偶計和記錄錄儀進行定定時監(jiān)測，，以確定滅滅菌程序是是否恰當。。7．滅菌器器的過濾器器(如果有有)應當每每天拆下清清洗。8．應當注注意保證高高壓滅菌器器的安全閥閥沒有被高高壓滅菌物物品中的紙紙等堵塞。。生物安全實實驗室微生生物操作技技術規(guī)范焚燒在處理那些些經過或事事先未經清清除污染的的動物尸體體以及解剖剖組織或其其他實驗室室廢物時，，焚燒是一一種有效的的方法。只只有在實驗驗室可以控控制焚燒爐爐，并且能能夠有效地地控制溫度度和配備了了二級焚燒燒室時，才才能用焚燒燒代替高壓壓滅菌來處處理感染性性物質。焚焚燒也是一一種處理被被朊蛋白污污染物品的的有效方法法生物安全實實驗室微生生物操作技技術規(guī)范需要焚燒的的材料(即即使事先已已清除污染染)應當用用袋子運送送到焚燒室室，最好使使用塑料袋袋。負責焚焚燒的工作作人員應當當接受關于于如何裝載載和控制溫溫度等的正正確指導。。還需要注注明的是，，焚燒爐的的操作是否否有效主要要取決于對對需要處理理的廢物中中物品的正正確混合。。危險度評估估危險評價首首先集中在在實驗室相相關感染的的防御上。。當實驗室室活動涉及及傳染或潛潛在傳染因因子時，對對某一個特特定的操作作程序或實實驗進行危危險度評估估，危險評評價幫助正正確選擇生生物安全水水平(設施施、設備和和操作)，，評估職業(yè)業(yè)性疾病風風險、采取取相應安全全防護措施施、減少危危險性事件件發(fā)生。危險度評估估在進行危險險性的評估估和選擇安安全防護措措施時，應應充分考慮慮有關實驗驗以及實驗驗動物的特特點、可能能直接或間間接參與風風險的傳染染性病原，，工作人員員的專業(yè)素素養(yǎng)及經驗驗，實施項項目的具體體活動和程程序等因素素，做出決決策。根據據傳染過程程的基本因因素，減少少工作人員員暴露的危危險和使環(huán)環(huán)境污染降降到最低限限度。危險度評估估危險度評估估應當由那那些對微生生物特性、、設備和操操作程序、、動物模型型、屏障設設備和設施施最為熟悉悉的人員來來進行。授授權的專業(yè)業(yè)人員進行行。危險度度評估一旦旦進行，在在必要時就就應當對它它進行常規(guī)規(guī)性的評估估和修訂，，同時要考考慮收集與與危險程度度相關的新新資料以及及來自科學學文獻的其其他相關的的新信息。。微生物的危危險評價涉涉及范疇1．已知的的傳染微生生物經過鑒定的的病原體，，有實驗室室研究、疾疾病監(jiān)測和和流行病學學研究危險險評價資料料。2．未知傳傳染微生物物對未知傳染染微生物危危險評價的的需要考慮慮以下方面面：傳染性性、傳播途途經、發(fā)病病率和死亡亡率等流行行病學和病病原血清型型等生物學學特性資料料。微生物的危危險評價涉涉及范疇3．基因修修飾微生物物通過基因修修飾技術獲獲得的具有有新特性的的微生物。。通常通過過受體和供供體的生物物特性和用用量，進行行危險性評評價。修飾飾后是否改改變其毒性性、繁殖能能力、宿主主范圍，與與宿主染色色體整合性性和對細胞胞生長周期期的影響等等。4．未知傳傳染性的生生物材料在缺少資料料證明有或或沒有未知知傳染性微微生物材料料時應該擴擴展防護范范圍和提高高防護級別別。危險度評估估內容進行微生物物危險度評評估最有用用的工具之之一就是列列出微生物物的危險度度等級。然然而對于一一個特定的的微生物來來講，在進進行危險度度評估時僅僅僅參考危危險度等級級的分類是是遠遠不夠夠的，適當當時還應考考慮其他一一些因素，，包括：1——微生生物的致病病性和感染染劑量越是發(fā)病率率高、后果果嚴重的病病原越是危危險。病原原體的來源源在危險評評價時必須須考慮在內內?！皝碓丛础鄙婕暗降轿⑸飦韥碓吹牡赜蛴颉⑺拗骱秃吞攸c。危險度評估估內容2——暴露露的后果發(fā)生暴露后后對人員或或環(huán)境可能能的危害后后果3——自然然感染途徑徑傳染性病原原能通過四四種主要的的感染途徑徑而致病。。即攝人、、吸人、黏黏膜接觸以以及腸道外外直接接種種。感染途途徑，可能能與自然患患病的感染染途徑相類類似，也可可能截然不不同。危險度評估估內容4——實驗驗室操作所所造成的其其他感染途途徑(非消消化道途徑徑、空氣傳傳播、食入入)傳染性病原原可通過天天然的或人人為的方式式從實驗動動物體內逸逸散。經尿尿液、唾液液和糞便排排出或從皮皮膚損害部部位釋出是是天然逸散散方式的例例子。促使使傳染性病病原從實驗驗動物體內內逸散的人人為方式有有很多，用用針頭和注注射器從病病毒血癥動動物身上抽抽取血樣、、活組織檢檢查或尸體體剖檢操作作者時被帶帶有污染物物的針頭、、刀刃刺傷傷、割破或或擦傷，以以及被動物物咬傷而直直接接種；；照料動物物、實驗操操作時吸人人帶污染物物的氣溶膠膠被濺出的的污染物，，污染的手手和污染的的表面接觸觸操作人員員的眼睛、、鼻腔或口口腔黏膜。。氣溶膠傳傳播的可能能性越大，，危險性越越高。通過過氣溶膠傳傳播的疾病病最容易發(fā)發(fā)生實驗室室感染。危險險度度評評估估內內容容進行行微微生生物物危危險險度度評評估估最最有有用用的的工工具具之之一一就就是是列列出出微微生生物物的的危危險險度度等等級級。。然然而而對對于于一一個個特特定定的的微微生生物物來來講講，，在在進進行行危危險險度度評評估估時時僅僅僅僅參參考考危危險險度度等等級級的的分分類類是是遠遠遠遠不不夠夠的的，，適適當當時時還還應應考考慮慮其其他他一一些些因因素素，，包包括括：：1——微生物物在環(huán)境中的的穩(wěn)定性不僅考慮微生生物的傳染性性(細菌芽胞胞)，而且要要考慮其在環(huán)環(huán)境中的存活活力，抗性越越強越危險。。危險度評估內內容2——所操作作微生物的濃濃度和濃縮樣樣品的體積根據研究內容容，病原體濃濃度決定危險險的程度。濃濃度越高越危危險。3——適宜宿宿主(人或動動物)的存在在常見的人畜共共患疾病文文獻記載的職職業(yè)性疾病來來源人體患患病的嚴重程程度，對疾病病的抵抗力危險度評估內內容4——從動物物研究和實驗驗室感染報告告或臨床報告告中得到的信信息在人體數(shù)據缺缺乏時，動物物研究數(shù)據可可對危險評價價提供有用的的資料。動物物體致病性、、傳染性和傳傳播途徑的信信息可提供有有價值的提示示。但推論從從一種動物到到另一種動物物傳染性時，，必須小心驗驗證。危險度評估內內容5——計劃進進行的實驗室室操作(如濃濃縮、超聲處處理、氣溶膠膠化、離心等等)實驗室操作內內容與其設備備相關操作細細則是否可保保證其不泄露露，實驗程序序和操作方法法，操作的性性質和作用避避免操作者攝攝人吸人，，直接接種，，割破或擦傷傷，針刺，咬咬傷直接接觸觸可能性。危險度評估內內容6——可能會會擴大微生物物的宿主范圍圍或改變微生生物對于已知知有效治療方方案敏感性的的所有基因技技術對開展遺傳修修飾微生物方方面的工作進進行危險度評評估時，必須須要包括對其其潛在的危害害程度、后果果的嚴重性以以及發(fā)生這種種危害的可能能性或頻率大大小，宿主的的易感性，宿宿主菌的致病病性，包括毒毒力、傳染性性、毒素生成成、宿主范范圍的變化；；受體的免疫疫程度以及免免疫系統(tǒng)的狀狀態(tài)；暴露后后果的嚴重性性；直接由插插入的外源性性基因片段所所產生的危害害當插人外源源性基因后的的產物具有有有害生物學活活性危害性等等方面的評估估。危險度評估內內容——當?shù)厥欠穹窨梢赃M行有有效的預防或或治療干預預防和治療的的有效性是應應該考慮的重重要因素。有有效性越低，，危險性越大大，反之亦然然。試驗室工工作人員，有有無免疫預防防措施，文獻獻記載的職職業(yè)性疾病，，工作人員的的素養(yǎng)及經驗驗。危險度評估內內容危險度評估時時，只有在明明確了上述信信息的基礎上上，才能明確確所計劃開展展的研究工作作的生物安全全水平級別，，并選擇合適適的個體防護護裝備。對于于那些所知甚甚少的樣品當當了解了足夠夠的信息時，，才能很好地地進行上述危危險度評估。。菌（毒）種管管理與監(jiān)督系系統(tǒng)的文件制制定為保證菌（毒毒）種管理體體系能規(guī)范化化制度化正常常運作，制定定符合本單位位實際情況的的菌（毒）種種管理及監(jiān)督督標準操作細細則（SOP），是非常必要的的，該（SOP）主要內容包括括，菌（毒））種管理與監(jiān)監(jiān)督標準操作作細總則，其其內容包括菌菌（毒）種接接收（分離））標準操作細細則（SOP）；種子批制備與與質控準操作作細則（SOP）；菌（毒）種使使用、保藏、、分發(fā)標準操操作細則（SOP）；菌（毒）種銷銷毀標準操作作細則（SOP）；菌（毒）種事事故應急處理理標準操作細細則（SOP）：菌（毒）種管管理監(jiān)督標準準操作細則（（SOP）。在各細則中根根據其實際內內容或實驗，，制定更詳細細的各實驗獨獨立的操作細細則，并制作作對應的規(guī)范范化表格化的的原始記錄。。菌（毒）種管管理與監(jiān)督系系統(tǒng)的文件制制定1.菌（毒））種管理與監(jiān)監(jiān)督標準操作作細總則總則的內容主主要為菌（毒毒）種管理與與監(jiān)督的制定定SOP指導思想、各各SOP形成與批準程程序、主要內內容提要、以以及各SOP目錄、實施與與監(jiān)督部門。。2.菌（毒））種接收（分分離）標準操操作細則（SOP）菌（毒）種接接收標準操作作細則（SOP）要求內容:接接收(外購、、贈送)審批批與接收程序序;對菌種來來源,背景資資料的要求、、接收樣品的的檢驗。菌（毒）種管管理與監(jiān)督系系統(tǒng)的文件制制定要求配套原始始記錄:（1）菌（毒毒）種外購(接受贈送)申請表（2）菌種來來源,背景資資料登記記錄錄（3）菌（毒毒）種入庫登登記表（4）外來菌菌種傳代與檢檢驗記錄菌（毒）種管管理與監(jiān)督系系統(tǒng)的文件制制定菌（毒）種分分離標準操作作細則（SOP）取樣程序;對對菌種來源,背景資料的的要求、樣品品的分離操作作(如分離過過程較復雜可可分寫各自獨獨立SOP)（1）樣品來源,背背景資料登記記記錄（2）菌(毒毒)種分離記記錄（3）外來菌菌種傳代與檢檢驗記錄（4）菌（毒毒）種入庫或或處理登記表表菌（毒）種管管理與監(jiān)督系系統(tǒng)的文件制制定3.菌（毒））種種子批制制備與質控標標準操作細則則（SOP）菌（毒）種種種子批制備標標準操作細則則（SOP）內容包括原代代主代及工作作種子批制品品過程各工藝藝要求細則;批準種子批批發(fā)行使用程程序,各過程程應制定相對對應實驗原始始記錄.菌（毒）種管管理與監(jiān)督系系統(tǒng)的文件制制定菌（毒）種種種子批質控標標準操作細則則（SOP）根據各菌（毒毒）種不同特特性,制定