華中科技大學(xué)發(fā)酵工程 第二章 工業(yè)用微生物菌種

發(fā)酵工程FermentationEngineering精品課程華中科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院http：///jpkc第二章發(fā)酵工業(yè)菌種/jpkc本章內(nèi)容

一、常用的工業(yè)微生物二、發(fā)酵工業(yè)菌種篩選的原則與基本技術(shù)三、發(fā)酵工業(yè)菌種改良/jpkc/jpkc對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行菌種篩選時(shí)，有兩條經(jīng)驗(yàn)：進(jìn)化上向上兼容；次生代謝在進(jìn)化上后移，芽孢菌以上才有篩選意義。/jpkc/jpkc最常用的工業(yè)微生物細(xì)菌醋桿菌屬的醋化醋桿菌、弱氧化醋桿菌乳酸桿菌枯草桿菌丙酮丁醇梭菌大腸桿菌谷氨酸棒狀桿菌/jpkc最常用的工業(yè)微生物酵母菌釀酒酵母假絲酵母屬產(chǎn)朊假絲酵母解脂假絲酵母熱帶假絲酵母畢赤酵母屬、漢遜酵母屬/jpkc最常用的工業(yè)微生物霉菌曲霉屬米曲霉黑曲霉青霉屬青霉菌：點(diǎn)青霉、產(chǎn)黃青霉桔青霉根霉屬德氏根霉米根霉、小麥曲根霉紅曲霉屬紫紅曲霉/jpkc最常用的工業(yè)微生物放線菌鏈霉菌屬小單孢菌屬地中海諾卡氏菌米蘇里游動(dòng)放線菌/jpkc未培養(yǎng)微生物定義：指迄今所采用的微生物純培養(yǎng)分離及培養(yǎng)方法還未獲得純培養(yǎng)的微生物，其在自然環(huán)境微生物群落中占有非常高的比例，約為99％。研究方法模擬自然培養(yǎng)法:原位培養(yǎng)、培養(yǎng)條件優(yōu)化、單細(xì)胞操作宏基因組分析法/jpkc二、發(fā)酵工業(yè)菌種分離篩選原則與基本技術(shù)（一）發(fā)酵工業(yè)菌種篩選的總趨勢(shì)與要求（二）分離篩選原理與技術(shù)（三）應(yīng)用舉例/jpkc1.菌菌種選擇的的總趨勢(shì)野生菌→變變異菌自然選育→→代謝控制制育種誘發(fā)基因突突變→基因因重組的定定向育種/jpkc2.菌種種選擇的要要求能在廉價(jià)原原料制成的的培養(yǎng)基上上迅速生長(zhǎng)長(zhǎng)，且生成成的目的產(chǎn)產(chǎn)物產(chǎn)量高高、易于回回收；生長(zhǎng)速度和和反應(yīng)速度度較快，發(fā)發(fā)酵周期較較短；培養(yǎng)條件易易于控制；；抗噬菌體及及雜菌污染染的能力強(qiáng)強(qiáng)；/jpkc2.菌種種選擇的要要求（續(xù)））菌種不易變變異退化；；對(duì)放大設(shè)備備的適應(yīng)性性強(qiáng)；菌種不是病病原菌，不不產(chǎn)生任何何有害的生生物活性物物質(zhì)和毒素素。/jpkc（二）分離離篩選原理理與技術(shù)1.篩選的指導(dǎo)導(dǎo)思想2.分離篩選工工作在實(shí)際際中應(yīng)用的的幾個(gè)方面面3.新種分離篩篩選原理與與技術(shù)/jpkc1.篩選選的兩種指指導(dǎo)思想先分離純化化，再結(jié)合合工藝要求求進(jìn)行篩選選。分離純化同同時(shí)富于篩篩選條件，，一步得出出所需菌株株。結(jié)果有兩種種可能：獲得適于工工業(yè)發(fā)酵菌菌株只獲得選育育所需的出出發(fā)菌株/jpkc2.分離離篩選工作作在實(shí)際中中應(yīng)用的幾幾個(gè)方面從被污染的的生產(chǎn)及科科研用菌中中分離目的的菌；生產(chǎn)中長(zhǎng)期期使用的菌菌種的定期期分離篩選選；從各種育種種方法處理理的微生物物材料中分分離篩選適適于工業(yè)目目的的優(yōu)良良菌株；從已知菌種種和大自然然中分離新新菌株尋找新的發(fā)發(fā)酵產(chǎn)品的的產(chǎn)生菌；；尋找老產(chǎn)品品的新的優(yōu)優(yōu)良菌株。。從保藏機(jī)構(gòu)構(gòu)獲取菌種種進(jìn)行分離離篩選有兩兩個(gè)好處：：經(jīng)濟(jì)性指導(dǎo)性/jpkc設(shè)計(jì)篩選方方案時(shí)必須須考慮兩個(gè)個(gè)要點(diǎn)選擇性靈敏度/jpkc3.新種種分離與篩篩選的步驟驟調(diào)查研究（（包括資料料查閱）試驗(yàn)方案設(shè)設(shè)計(jì)含微生物物樣品的的采集（如何使使樣品中中含所需需微生物的可可能性大大？）樣品預(yù)處處理（如何在在后續(xù)的的操作中中使這種種可能性實(shí)現(xiàn)現(xiàn)）菌種分離離/jpkc根據(jù)目的的菌株及及其產(chǎn)物物特點(diǎn)分分選擇性分分離方法法隨隨機(jī)分離離方法(定向篩選選←選擇擇壓力)(用篩選方方案-檢檢測(cè)系系統(tǒng)進(jìn)行行間接分分離）富集液體體培養(yǎng)固固體體培養(yǎng)基基條件培培養(yǎng)(初篩)菌種純化化復(fù)篩/jpkc菌種純化化初步工藝藝條件摸摸索再再?gòu)?fù)篩生生產(chǎn)產(chǎn)性能測(cè)測(cè)試較優(yōu)菌株株1-3株保藏及進(jìn)進(jìn)一步做做生產(chǎn)試試驗(yàn)?zāi)衬承┬┍匾囋囼?yàn)和或作為育育種的出出發(fā)菌株株毒毒性性試驗(yàn)等等/jpkc含微生物物樣品的的采集采樣時(shí)應(yīng)應(yīng)注意的的問題:土壤微生生物的分分布采土深度度土壤植被被情況采樣季節(jié)節(jié)土壤的酸酸堿度對(duì)于分離離篩選新新菌種，，還存在在另兩個(gè)個(gè)選擇標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)：土壤來(lái)源源廣泛在已適應(yīng)應(yīng)相當(dāng)苛苛刻環(huán)境境壓力的的微生物物類群中中尋找新新菌種/jpkc樣品的預(yù)預(yù)處理目的：提提高分離離效率方法：物理方法法：熱處處理；膜膜過(guò)濾法法；離心心法化學(xué)方法法誘餌法/jpkc分離方法法的選擇擇根據(jù)目的的菌有無(wú)無(wú)選擇性性特征來(lái)來(lái)選擇分分離方法法菌種的營(yíng)營(yíng)養(yǎng)特征征獨(dú)特生長(zhǎng)特征征獨(dú)特?zé)o選擇性特特征根根據(jù)據(jù)產(chǎn)物的的特征進(jìn)進(jìn)行隨機(jī)分離離選擇性分分離的關(guān)關(guān)鍵：生生長(zhǎng)培養(yǎng)養(yǎng)條件的的選擇與與控制，，從而實(shí)實(shí)現(xiàn)定向向富集篩篩選。選擇性分分離/jpkc選擇性分分離原理理和技術(shù)術(shù)生長(zhǎng)條件件的選擇擇與控制制原理控制營(yíng)養(yǎng)養(yǎng)成分控制培養(yǎng)養(yǎng)基酸堿堿度添加抑制制劑控制培養(yǎng)養(yǎng)溫度控制通氣氣條件選擇性分分離技術(shù)術(shù)富集液體體培養(yǎng)技技術(shù)固體培養(yǎng)養(yǎng)技術(shù)施加選擇擇壓力，，進(jìn)行定定向篩選選/jpkcA.富集集液體培培養(yǎng)增加混合合菌群中中所需菌菌株數(shù)量量的一種種技術(shù)技術(shù)特點(diǎn)點(diǎn)：給混混合菌群群提供一一些有利利于目的的菌株生生長(zhǎng)或不不利于目目的菌以以外的其其他菌型型生長(zhǎng)的的條件培養(yǎng)方式式分批培養(yǎng)養(yǎng)方式：：以最大大比生長(zhǎng)長(zhǎng)速率（（μmax）篩選，，存在選選擇壓力力的控制制、移種種時(shí)間和和次數(shù)等等問題連續(xù)培養(yǎng)養(yǎng)方式：：以比生生長(zhǎng)速率率（μμ）篩選選/jpkcμABS0基質(zhì)濃度度對(duì)A、、B兩種種菌的比比生長(zhǎng)速速率（μμ）的影影響當(dāng)S<S0時(shí)，富集集什么菌菌株？當(dāng)S>S0時(shí)，富集集什么菌菌株？/jpkc連續(xù)富集集培養(yǎng)技技術(shù)分離離菌株的的優(yōu)點(diǎn)分離的菌菌株特別別適合連連續(xù)發(fā)酵酵生產(chǎn)過(guò)過(guò)程有利于分分離具有有某種工工業(yè)生產(chǎn)產(chǎn)特性的的菌株可以篩選選出能共共生的穩(wěn)穩(wěn)定混合合培養(yǎng)物物/jpkcB.固體培養(yǎng)養(yǎng)技術(shù)常用于分分離某些些酶產(chǎn)生生菌選擇壓力力：在選選擇培養(yǎng)養(yǎng)基中加加入所需需酶的基基質(zhì)/jpkc隨機(jī)分離離原理與與技術(shù)從產(chǎn)物入入手，通通過(guò)設(shè)計(jì)計(jì)高產(chǎn)培養(yǎng)養(yǎng)基和建立快快速靈敏敏專一的的篩選方方法，從從隨機(jī)分分離的菌菌落中篩篩選出所所需的目目的菌。。技術(shù)關(guān)鍵：產(chǎn)產(chǎn)物合成成條件的的選擇與與控制及及相應(yīng)篩篩選方法法的確定定。隨機(jī)分離離技術(shù)舉舉例抗生素產(chǎn)產(chǎn)生菌的的篩選藥理活性性化合物物產(chǎn)生菌菌的篩選選生長(zhǎng)因子子產(chǎn)生菌菌的篩選選多糖產(chǎn)生生菌的篩篩選/jpkc高產(chǎn)培養(yǎng)養(yǎng)基設(shè)計(jì)計(jì)的幾個(gè)個(gè)原則制備一系系列的培培養(yǎng)基，，其中有有各種類類型的養(yǎng)養(yǎng)分成為為生長(zhǎng)限限制因素素；使用一聚聚合或復(fù)復(fù)合形式式的生長(zhǎng)長(zhǎng)限制養(yǎng)養(yǎng)分；避免使用用容易同同化的碳碳源或氮氮源，防防止分解解代謝物物阻遏；；確定含有有所需的的輔因子子（Co2+,Mg2+,Mn2+,Fe2+）；使用pH緩沖劑以以減少pH變化；前體、促促進(jìn)劑及及抑制劑劑的采用用。/jpkc抗生素產(chǎn)產(chǎn)生菌的的篩選篩選模型型：試驗(yàn)菌篩選方法法：鋪菌法復(fù)印平板板法液體培養(yǎng)養(yǎng)篩選抗藥性篩選篩選模型型：氨芐青霉霉素和β-內(nèi)酰酰胺酶產(chǎn)生菌（（克雷白白氏菌））協(xié)同III無(wú)試樣時(shí)時(shí)（不含含棒酸時(shí)時(shí)），I對(duì)II菌作用用不大有試樣時(shí)時(shí)（含棒棒酸時(shí)）），I對(duì)對(duì)II菌菌恢復(fù)藥藥效，棒棒酸抑制制水解酶酶活性固體培養(yǎng)養(yǎng)篩選/jpkc試驗(yàn)菌代代表微生生物類型型金黃黃色色葡葡萄萄球球菌菌209p革革蘭蘭氏氏陽(yáng)陽(yáng)性性球球菌菌枯草草桿桿菌菌6633革革蘭蘭氏氏陽(yáng)陽(yáng)性性桿桿菌菌大腸腸桿桿菌菌革革蘭蘭氏氏陰陰性性腸腸道道細(xì)細(xì)菌菌恥垢垢分分枝枝桿桿菌菌607結(jié)核核桿桿菌菌白色色念念珠珠菌菌酵酵母母狀狀真真菌菌青霉霉菌菌絲狀狀真真菌菌/jpkc藥理理活活性性化化合合物物產(chǎn)產(chǎn)生生菌菌的的篩篩選選藥理理活活性性化化合合物物是是指指能能抑抑制制人人類類代代謝謝中中某某一一個(gè)個(gè)關(guān)關(guān)鍵鍵酶酶的的微微生生物物產(chǎn)產(chǎn)物物即即酶酶抑抑制制劑劑，，從從而而達(dá)達(dá)到到治治療療的的目目的的。。篩選選模模型型：：目目標(biāo)標(biāo)酶酶/jpkc生長(zhǎng)長(zhǎng)因因子子產(chǎn)產(chǎn)生生菌菌的的篩篩選選篩選選模模型型：：營(yíng)營(yíng)養(yǎng)養(yǎng)缺缺陷陷型型試試驗(yàn)驗(yàn)菌菌篩選選方方法法：：利利用用被被分分離離的的微微生生物物產(chǎn)產(chǎn)物物能能否否促促進(jìn)進(jìn)營(yíng)營(yíng)養(yǎng)養(yǎng)缺缺陷陷型型試試驗(yàn)驗(yàn)菌菌生生長(zhǎng)長(zhǎng)/jpkc氨基基酸酸產(chǎn)產(chǎn)生生菌菌的的篩篩選選樣品品預(yù)處處理理初篩篩（（除除真真菌菌））在分分離離平平板板上上生生長(zhǎng)長(zhǎng)獲獲得得多多個(gè)個(gè)單單菌菌落落復(fù)印印平平板板（（copy法法））平板板培培養(yǎng)養(yǎng)，，其其中中有有產(chǎn)產(chǎn)生生氨氨基基酸酸的菌菌落落分分泌泌氨氨基基酸酸對(duì)應(yīng)應(yīng)到到copy前前相相應(yīng)應(yīng)u.v線線殺殺死死長(zhǎng)長(zhǎng)好好的的菌菌落落位置置，，找找到到目目的的菌菌落落再鋪鋪上上一一層層含含營(yíng)營(yíng)養(yǎng)養(yǎng)缺缺陷陷型型試試驗(yàn)驗(yàn)菌菌的的瓊瓊脂脂培養(yǎng)養(yǎng)后后產(chǎn)氨氨基基酸酸菌菌落落周周圍圍有有生生長(zhǎng)長(zhǎng)圈圈目的的菌菌落落進(jìn)進(jìn)行行液液體體培培養(yǎng)養(yǎng)，，對(duì)產(chǎn)產(chǎn)物物進(jìn)進(jìn)行行定定量量測(cè)測(cè)定定篩選選產(chǎn)產(chǎn)物物含含量量高高的的菌菌株株多糖糖產(chǎn)產(chǎn)生生菌菌的的篩篩選選取樣特特點(diǎn)：：碳水水化合合物工工業(yè)的的廢棄棄物篩選方方案：：從菌菌落外外觀判判斷，，選擇擇外觀觀呈粘粘液狀狀的菌菌落，，然后后根據(jù)據(jù)液體體培養(yǎng)養(yǎng)測(cè)定定多糖糖含量量來(lái)篩篩選高高產(chǎn)菌菌。/jpkc細(xì)菌分分離：：以乳乳酸菌菌為例例取未成成熟的的醬醪醪樣品品1g至至無(wú)菌菌磨口口瓶中中加麥芽芽汁至至瓶口口處，，封塞塞，25℃℃培養(yǎng)養(yǎng)24-48h培養(yǎng)基基中長(zhǎng)長(zhǎng)出絹絹絲狀狀波動(dòng)動(dòng)物，，鏡檢檢桿桿狀，，陽(yáng)性性染色色初初步斷斷定乳乳酸菌菌用選擇擇性培培養(yǎng)基基分批批富集集培養(yǎng)養(yǎng)2-3代稀釋分分離法法分離離單菌菌落，，培養(yǎng)養(yǎng)基為為含麥麥芽汁汁、CaCO3的瓊脂脂培養(yǎng)養(yǎng)基根據(jù)透透明圈圈挑選選菌落落性能測(cè)測(cè)定（（鏡檢檢桿狀狀，染染色陽(yáng)陽(yáng)性；；乳酸酸紙層層析鑒鑒定））Rf值定性性（有機(jī)機(jī)酸呈呈黃斑斑點(diǎn)））乳酸生生成量量測(cè)定定（滴滴定法法）/jpkc放線菌菌的分分離：：以以產(chǎn)鏈鏈霉素素菌種種的分分離為為例（（從從退化化菌種種中篩篩選））取工業(yè)業(yè)發(fā)酵酵液（（含孢孢子））樣品品1環(huán)環(huán)放入帶帶玻璃璃珠的的裝有有10ml無(wú)菌水水的小小三角角瓶中中，搖搖勻采用稀稀釋法法制平平板，，獲取取單菌菌落斜面保保藏高高產(chǎn)產(chǎn)菌恢恢復(fù)根據(jù)高高產(chǎn)菌菌的特特點(diǎn)，，選擇擇目的的菌落落放大培培養(yǎng)，，發(fā)酵酵液性性能測(cè)測(cè)試/jpkc篩選模模型：：形態(tài)態(tài)依據(jù)據(jù)真菌的的分離離篩選選：以以啤酒酒酵母母的分分離為為例取發(fā)酵酵液少少許以以10倍稀稀釋成成10-1-10-7稀釋分分離法法取0.1ml加加入入固體體培養(yǎng)養(yǎng)基鋪鋪平皿皿（××2））在麥芽芽汁固固體培培養(yǎng)基基上，，25℃培培養(yǎng)48-72h形態(tài)篩篩選根根據(jù)正正常株株特點(diǎn)點(diǎn)進(jìn)行行挑選選，接接種斜斜面?zhèn)鋫溆眉兓?，采用用平板板分離離法進(jìn)進(jìn)一步步純化化，至至少反反復(fù)三三次①生成成子囊囊孢子子速度度測(cè)定定②②發(fā)酵酵力測(cè)測(cè)定性能測(cè)測(cè)定③③熱死死溫度度測(cè)定定④凝集集力測(cè)測(cè)定⑤雙乙乙酰含含量測(cè)測(cè)定/jpkc菌種選選育改改良的的具體體目標(biāo)標(biāo)提高目目標(biāo)產(chǎn)產(chǎn)物的的產(chǎn)量量提高目目標(biāo)產(chǎn)產(chǎn)物的的純度度，減減少副副產(chǎn)物物改良菌菌種性性狀，，改善善發(fā)酵酵過(guò)程程改變生生物合合成途途徑，，以獲獲得高高產(chǎn)的的新產(chǎn)產(chǎn)品/jpkc發(fā)酵工工業(yè)菌菌種改改良方方法常規(guī)育育種(誘變育育種)細(xì)胞工工程育育種基于代代謝調(diào)調(diào)節(jié)的的育種種技術(shù)術(shù)基因工工程育育種蛋白質(zhì)質(zhì)工程程育種種代謝工工程育育種/jpkc賴氨酸酸生產(chǎn)產(chǎn)菌種種的選選育改改良思思路出發(fā)菌菌株：黃色色短桿桿菌、、谷氨氨酸棒棒桿菌菌、乳乳糖發(fā)發(fā)酵短短桿菌菌育種思思路1.優(yōu)優(yōu)先合合成的的轉(zhuǎn)換換———滲漏漏缺陷陷型的的選育育2.切切斷支支路代代謝———營(yíng)營(yíng)養(yǎng)缺缺陷型型的選選育：：高絲絲氨酸酸缺陷陷型3.抗抗結(jié)構(gòu)構(gòu)類似似物突突變株株的選選育：：AEC4.解解除代代謝互互鎖：：Leu-、抗Leu結(jié)結(jié)構(gòu)類類似物物、喹喹啉s、苯苯醌s5.增增加前前體物物的合合成和和阻塞塞副產(chǎn)產(chǎn)物的的生成成：Ala-、抗Asp結(jié)構(gòu)構(gòu)類似似物選育適適宜的的CO2固定酶酶/TCA循環(huán)環(huán)酶活活性比比突變變株6.改改善細(xì)細(xì)胞膜膜的透透過(guò)機(jī)機(jī)能7.選選育育溫度度敏感感突變變株8.應(yīng)應(yīng)用用細(xì)胞胞工程程和基基因工工程育育種選育適適宜的的CO2固定酶酶/TCA循環(huán)環(huán)酶活活性比比突變變株賴氨酸酸合成成中間間代謝謝有以以下兩兩條途途徑：：①通過(guò)TCA循環(huán)葡萄糖糖丙丙酮酸酸草草酰酰乙酸酸天天冬氨氨酸賴氨酸酸②通過(guò)磷磷酸烯烯醇丙丙酮酸酸羧化化反應(yīng)應(yīng)葡萄糖糖磷磷酸酸烯醇醇草草酰酰乙酸酸天天冬氨氨酸式丙酮酮酸丙酮酸酸賴氨酸酸/jpkc代謝工工程的的定義義利用多多基因因重組組技術(shù)術(shù)有目目的地地對(duì)細(xì)細(xì)胞代代謝途途徑進(jìn)進(jìn)行修修飾、、改造造，改改變細(xì)細(xì)胞特特性，，并與與細(xì)胞胞基因因調(diào)控控、代代謝調(diào)調(diào)控及及生化化工程程相結(jié)結(jié)合，，為實(shí)實(shí)現(xiàn)構(gòu)構(gòu)建新新的代代謝途途徑，，生產(chǎn)產(chǎn)特定定目的的產(chǎn)物物而發(fā)發(fā)展起起來(lái)的的一個(gè)個(gè)新的的學(xué)科科領(lǐng)域域。又稱作作途徑徑工程程，是是多基基因的的基因因工程程。/jpkc代謝工工程發(fā)展基基礎(chǔ)代謝網(wǎng)網(wǎng)絡(luò)理理論：：是把把細(xì)胞胞的生生化反反應(yīng)以以網(wǎng)絡(luò)絡(luò)整體體，而而不是是孤立立地來(lái)來(lái)考慮慮。代謝網(wǎng)網(wǎng)絡(luò)分分流處處的代代謝產(chǎn)產(chǎn)物稱稱為節(jié)節(jié)點(diǎn)，，其中中對(duì)終終產(chǎn)物物合成成起決決定作作用的的少數(shù)數(shù)節(jié)點(diǎn)點(diǎn)稱為為主節(jié)節(jié)點(diǎn)。。根據(jù)節(jié)節(jié)點(diǎn)下下游分分支的的可變變程度度，節(jié)節(jié)點(diǎn)分分為：：柔性節(jié)節(jié)點(diǎn)：解解除一一個(gè)分分支的的反饋饋抑制制可提提高該該分支支下游游產(chǎn)物物的產(chǎn)產(chǎn)量。。半柔性性節(jié)點(diǎn)點(diǎn)：須降降低主主分支支的酶酶活并并同時(shí)時(shí)提高高次分分支的的酶活活或解解除其其反饋饋抑制制，才才可提提高次次分支支下游游產(chǎn)物物的產(chǎn)產(chǎn)量。。剛性節(jié)節(jié)點(diǎn)：其下下游各各分支支的比比例不不易改改變。。/jpkc代謝工工程發(fā)展基基礎(chǔ)相依網(wǎng)網(wǎng)絡(luò)：代謝謝網(wǎng)絡(luò)絡(luò)中各各主節(jié)節(jié)點(diǎn)集集中于于產(chǎn)物物，為為了避避免中中間物物的過(guò)過(guò)量積積累，，各分分支的的代謝謝流都都必須須保持持平衡衡，各各分支支的分分流相相等，，各節(jié)節(jié)點(diǎn)的的重要要性相相同。。獨(dú)立網(wǎng)網(wǎng)絡(luò)：代謝謝網(wǎng)絡(luò)絡(luò)的主主節(jié)點(diǎn)點(diǎn)不集集中，，可以以通過(guò)過(guò)對(duì)代代謝的的修飾飾來(lái)影影響產(chǎn)產(chǎn)物的的產(chǎn)量量,其其對(duì)代代謝修修飾的的應(yīng)答答能力力，取取決于于各節(jié)節(jié)點(diǎn)的的剛?cè)崛嵝约凹捌湮晃恢谩?。SIPSⅠⅠⅡⅡPⅡBB1B2相依網(wǎng)網(wǎng)路獨(dú)立網(wǎng)網(wǎng)路/jpkc（三））代謝謝工程程育種種思路路1.改變代代謝流流：改變分分支代代謝途途徑的的流向向，阻阻斷有有害代代謝產(chǎn)產(chǎn)物的的合成成。（1））加速速限速速反應(yīng)應(yīng)（2））改變變分支支代謝謝途徑徑流向向：提高代代謝分分支點(diǎn)點(diǎn)的某某一分分支代代謝途途徑酶酶系的的活