丙二醛檢測試劑盒

丙二醛(MDA)檢測試m(TBA熒光法)簡介：動物或植物細胞發(fā)生氧化應激(oxidativestress)時，會發(fā)生脂質(zhì)氧化。丙二醛(Malondialdehyde,MDA)是一種生物體脂質(zhì)氧化的天然產(chǎn)物，一些脂肪酸氧化后逐漸分解為一系列包括MDA在內(nèi)的復雜化合物此時通過檢測MDA的水平即可檢測脂質(zhì)氧化的水平，因此MDA的測定被廣泛用作脂質(zhì)氧化的指標。生物體內(nèi)的一些其它生化反應也會產(chǎn)生MDA，例如thromboxanesynthase也可以催化產(chǎn)生，但只要在測定時設(shè)置適當對照即可觀察到脂質(zhì)氧化水平的變化。丙二醛(MDA)檢測試劑盒(TBA熒光法，MDAAssayKit)又稱脂質(zhì)氧化(MDA)檢測試劑盒，是采用一種基于MDA和硫代巴比妥酸(thiobarbituricacid,TBA反應產(chǎn)生紅色產(chǎn)物的顯色反應，隨后通過熒光比色法用于對血漿、血清、尿液、動植物組織或細胞裂解液中MDA進行定量檢測，廣泛用于脂質(zhì)氧化(lipidperoxidation冰平檢測。丙二醛在較高溫度及酸性環(huán)境中可與TBA發(fā)生反應，形成紅色的MDA-TBA加合物，MDA-TBA加合物在處有最大吸收，以為激發(fā)光，據(jù)此可以通過熒光比色法進行檢測。本試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不宜用于臨床診斷或其他用途。組成：~編號名稱一一TO101550TTO1015100TStorage試劑(A):TBA0.4g0.8gRT避光試劑(B):TBA稀釋液50ml100mlRT避光試劑(C):抗氧化劑2.5ml5ml4°C試劑(D):MDA標準品(1mmol/L)0.2ml0.4ml-20°C避光使用說明書說明書自備材料：1、蒸餾水2、離心管、小試管或96孔板3、熒光分光光度計或熒光酶標儀4、水浴鍋或恒溫箱5、離心機操作步驟(僅供參考):1、樣本處理：血清、血漿、尿液、腦脊液樣本：從待測樣本中分理出的血清或血漿不應有溶血。取待

測液體樣本1,加入MDA沉淀液1,混勻，室溫靜置，離心，棄上清。加入蒸餾水，振蕩混勻，以便充分溶解沉淀（MDA樣品），即獲得MDA待測液。組織、細胞等樣本：組織或細胞可以使用PBS或LeageneWestern及IP細胞裂解液等進行勻漿或裂解。勻漿或裂解組織時，組織重量占勻漿液或裂解液的比例應適當；對于細胞，每106個細胞使用l裂解液或勻漿液。勻漿或裂解后，離心，取上清用于后續(xù)測定。勻漿或裂解等樣品制備步驟宜在冰浴或4C進行操作。樣品準備完畢后可以用BCA蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度，以便于后續(xù)計算單位蛋白重量組織或細胞內(nèi)的MDA含量。取待測勻漿后提取的上清，加入MDA沉淀液，混勻，室溫靜置，離心，棄上清。加入蒸餾水，振蕩混勻，以便充分溶解沉淀（MDA樣品），即獲得MDA待測液。?本試^盒對于樣品中的常見化學成分的兼容性參考下表：試劑類別化學成分是否干擾緩沖液HEPES(100mM)否Borate(50mM)否Phosphate(100mM)否Tris(25mM)否去垢劑CHAPS(<1%)否TritonX-100(<1%)否Tween20(<1%)否抑制劑/螯合劑PMSF(<200pM)否EDTA(<1mM)否EGTA(<1mM)否Antipain(<100pg/m1)否Chymostatin(<10pg/m1)否Leupeptin(<10pg/m1)否Trypsin(<10pg/m1)否其他G1ycero1(<10%)否Sucrose(250mM)是2、TBA工作液的配制：稱取適量TBA,用TBA稀釋液配制成濃度為TBA工作液。例如取0.068gTBA用TBA稀釋液配制，最終濃度即為TBA工作液。TBA工作液需完全溶解后再使用，可以加熱到60-70C促溶，并可通過反復劇烈Vortex促溶。配制好的TBA工作液4C避光保存，至少3-4個月內(nèi)有效。3、稀釋標準品：取適量MDA標準品（1mmo1/L）用蒸餾水稀釋至0.5、1、2S5S10pM（如果進行簡易快速檢測，標準品直接稀釋）。配制好的MDA標準品4C保存，至少3-4個月內(nèi)有效。4、樣品測定：

①在離心管或其它適當容器內(nèi)加入蒸餾水作為空白對照。加入上述不同濃度標準品用于制作標準曲線（如果進行簡易快速檢測，直接加入濃度為0.5pM的標準品）；加入1ml樣品用于測定；隨后加入1mlMDA檢測工作液?？蓞⒖枷卤碓O(shè)置檢測反應體系，依次加入試劑：加入物質(zhì)空白管標準管測定管蒸餾水1ml..MDA標準品.1ml.MDA待測液1mlTBA工作液1ml1ml1ml抗氧化劑30pl30pl30pl混勻，加蓋，水浴煮沸（勿動），加熱時務(wù)必注意避免液體暴沸濺出。如果使用加熱塊（Heatblock）進行加熱注意用重物壓緊離心管蓋；如果使用沸水浴，則需使用可把蓋子鎖死的離心管或螺旋蓋離心管，或用Parafilm封住離心管口，用針頭刺一小孔。最方便和準確的加熱方法是使用帶有熱蓋并可以加熱的金屬浴儀器。水浴或流水冷卻至室溫，加入MDA分離液，離心。取上清，蒸餾水調(diào)零，用熒光光度計或熒光酶標儀檢測熒光強度，激發(fā)光，發(fā)射光。加入的上清量因根據(jù)比色杯或容器的最小量程而定。計算：對于血漿、血清或尿液等樣品可以直接根據(jù)標準曲線）計算；如果進行簡易快速檢測，直接以0.5pM標準品進行計算）獲得MDA的摩爾濃度，對于細胞、或組織樣品，計算出樣品溶液中的MDA含量后，可以通過單位重量的蛋白含量或組織重量等來表示最初樣品中的MDA含量，例如pmol/mg蛋白或pmol/mg組織。簡易快速血清、血漿、尿液等液體樣品中MDA含量計算公式：MDA濃度（pmol/L）=（OD測定-OD空白）/（OD標準-OD空白）x21/蛋白質(zhì)質(zhì)量濃度（mg/ml）簡易快速細胞、組織樣品中MDA含量計算公式：MDA濃度（pmol//mg）=（OD測定-OD空白）/（OD標準-OD空白）x21/蛋白質(zhì)質(zhì)量濃度（mg/ml）式中：OD迎廣二待測樣品的熒光強度測定OD標準二標準品的熒光強度OD空白二空白對照的熒光強度參考區(qū)間：健康成年人血漿MDA:1.63±0.38pmol/L60歲以上的健康成年人血漿MDA:2.14±0.56pmol/L

注意*項：1、上述低溫試劑避免反復凍融，以免失效或效率下降。2、參考取樣量：血清、血漿、尿液取205；低密度脂蛋白懸液取20~40pl；食用油取30|jl；肝臟、心肌、肌肉等，取5%或10%勻漿20~40|jl。3、待測樣本如不能及時測定，應置于-