第二章天然藥化學(xué)成分的一般研究2課件

第二章

天然藥物化學(xué)成分

的提取、分離、鑒定方法

第二章

天然藥物化學(xué)成分

的提取、分離、鑒定方法1第一節(jié)

天然藥物化學(xué)成分的提取方法

提取——用適當(dāng)?shù)姆椒ê图夹g(shù)將天然藥物中的化學(xué)成分從組織細(xì)胞中抽提出來(lái)的過(guò)程。主要有：溶劑提取法、水蒸氣蒸餾法、超臨界流體萃取法、升華法等

第一節(jié)

天然藥物化學(xué)成分的2

一、溶劑提取法

根據(jù)被提取成分的溶解性質(zhì)，選用合適的溶劑和方法將天然藥物中的化學(xué)成分溶解出來(lái)。

3.擴(kuò)散（溶液）1.溶劑滲透細(xì)胞膜2.溶解內(nèi)容物、產(chǎn)生濃差溶劑法提取示意圖

一、溶劑提取法

根據(jù)被提取成分的溶解性質(zhì)，選用合適的溶劑3

（一）.溶劑的選擇

溶劑按極性可分為三類：親脂性有機(jī)溶劑：石油醚、氯仿、乙醚、乙酸乙酯正丁醇親水性有機(jī)溶劑：甲醇、乙醇、丙酮(與水混溶）

水常用于中藥成分提取的溶劑如下：

極性：小大

石油醚Pet<苯C6H6<氯仿CHCl3<乙醚Et2O<乙酸乙酯EtOAc<正丁醇n-BuOH<丙酮Me2CO<乙醇EtOH<甲醇MeOH<H2O（一）.溶劑的選擇石油醚Pet<苯C6H6<氯仿C4

選擇溶劑的原則相似相溶

相似相溶——極性大的化學(xué)成分易溶于親水性溶劑，極性小的化學(xué)成分易溶于親脂性有機(jī)溶劑。

極性判斷依據(jù)：

a、分子大?。夯鶊F(tuán)一樣，分子大，極性小b、基團(tuán)的性質(zhì)與數(shù)量：極性基團(tuán)多則極性大。極性基團(tuán)：-COOH、、—OH、—NH2……中等極性基團(tuán)：—O—R、—COOR……非極性基團(tuán)：烷基理想溶劑：對(duì)有效成分溶解度大，無(wú)效成分溶解度小，與植物成分不起化學(xué)反應(yīng)；安全、成本低；選擇溶劑的原則相似相溶5

一般情況下：

石油醚可提出油脂、蠟、揮發(fā)油、游離的甾體及萜類；

氯仿或乙酸乙酯可提出游離生物堿、有機(jī)酸、黃酮及香豆素等；

丙酮、乙醇、甲醇可提出苷類，生物堿或有機(jī)酸鹽類、鞣質(zhì)等；

水可提出糖類、氨基酸、蛋白質(zhì)、無(wú)機(jī)酸鹽等類水溶性成分。

第二章天然藥化學(xué)成分的一般研究2課件6（二）.提取方法（操作）

1、煎煮法：水作溶劑熱提優(yōu)點(diǎn)：溶劑易得，簡(jiǎn)便，大部分成分可被不同程度地提取出來(lái)（助溶作用）。

缺點(diǎn)：揮發(fā)性成分和受熱易破壞的成分不宜使用；

含多糖類化合物煎煮后藥液粘度較大，難以過(guò)濾。

（二）.提取方法（操作）72、浸漬法：

優(yōu)點(diǎn)：遇熱易破壞、揮發(fā)性成分和含淀粉或粘液質(zhì)多的成分適用。缺點(diǎn)：提取時(shí)間長(zhǎng)，效率不高；以水為溶劑時(shí)，應(yīng)防霉變質(zhì)。3、滲漉法：優(yōu)點(diǎn)：可保持濃度差，提取效率高，節(jié)約溶劑。

缺點(diǎn)：操作較麻煩。2、浸漬法：84、回流提取法

有機(jī)溶劑熱提取優(yōu)點(diǎn)：提取效率高，溶劑消耗較少。缺點(diǎn)：受熱易破壞的成分不宜使用。4、回流提取法95、連續(xù)回流提取法：

優(yōu)點(diǎn)：溶劑消耗量小，提取效率高。

缺點(diǎn)：對(duì)熱不穩(wěn)定化學(xué)成分不宜使用。索氏提取器5、連續(xù)回流提取法：索氏提取器10（三）影響提取效率因素

溶劑的選擇提取方法藥材粉碎度20~60目提取時(shí)間水加熱1~2小時(shí)（分2-3次），乙醇加熱每次1小時(shí)提取溫度不宜過(guò)高溶劑用量、提取次數(shù)等。（三）影響提取效率因素11提取方法

使用范圍及特點(diǎn)提取方法溶劑操作提取效率使用范圍備注浸漬法水或有機(jī)溶劑不加熱效率低各類成分，尤遇熱不穩(wěn)定成分易發(fā)霉，需加防腐劑滲漉法有機(jī)溶劑不加熱—脂溶性成分消耗溶劑量大，費(fèi)時(shí)長(zhǎng)煎煮法水直火加熱—水溶性成分易揮發(fā)、熱不穩(wěn)定不宜用回流提取法有機(jī)溶劑水浴加熱—脂溶性成分熱不穩(wěn)定不宜用，溶劑量大連續(xù)回流提取法有機(jī)溶劑水浴加熱節(jié)省溶劑、效率最高親脂性較強(qiáng)成分用索氏提取器，時(shí)間長(zhǎng)提取方法使用范圍及特點(diǎn)提取方法溶劑操12二、水蒸氣蒸餾法

本法適用于提取能隨水蒸氣蒸餾，而不被破壞的難溶于水的成分。

這類成分在100℃時(shí)有一定蒸汽壓,沸騰時(shí),該類成分隨水蒸氣一并帶出,再用油水分離器或有機(jī)溶劑萃取法,將這類成分自餾出液中分離.如中藥揮發(fā)油的提取常采用此法。根據(jù)原理：道爾頓分壓定律即：P=PA+PBP—總蒸氣壓；PA—A物分壓；PB—B物分壓當(dāng)P=大氣壓時(shí)則沸騰二、水蒸氣蒸餾法13總混合液體bp.<混合物中沸點(diǎn)最低物質(zhì)例：沸點(diǎn)混合后沸點(diǎn)℃

水

100760mmHg

69.25

苯80.1760mmHg（1）混合物的沸點(diǎn)比任一單一液體的沸點(diǎn)低；（2）沸點(diǎn)高的可較低溫度下被水蒸氣蒸餾出來(lái)。

水蒸氣蒸餾法操作、設(shè)備均教簡(jiǎn)單。

總混合液體bp.<混合物中沸點(diǎn)最低物質(zhì)14第二章天然藥化學(xué)成分的一般研究2課件15三、超臨界流體萃取法(SupercriticalFluidExtraction-SFE)

超臨界萃取法是一種集提取和分離于一體,又基本上不用有機(jī)溶劑的新技術(shù)。SF是在臨界溫度和臨界壓力以上介于氣體和液體之間的流體。SF同時(shí)具有液體和氣體的雙重特征，它的密度與液體相似，粘度與氣體相近，擴(kuò)散系數(shù)雖不及氣體大，但比液體大100倍。

第二章天然藥化學(xué)成分的一般研究2課件16超臨界流體萃取的主要原理

物質(zhì)的溶解過(guò)程包括分子間的相互作用和擴(kuò)散作用。物質(zhì)的溶解與溶劑的密度、擴(kuò)散系數(shù)成正比，與粘度成反比，因此，超臨界流體對(duì)許多物質(zhì)有很強(qiáng)的溶解能力。且在溫度或壓力變化時(shí)，流體的密度、粘度和擴(kuò)散系數(shù)隨著改變，與溶質(zhì)的親和力也跟著改變，從而使不同性質(zhì)的溶質(zhì)被分段萃取或分步析出，達(dá)到萃取、分離目的。

超臨界流體萃取的主要原理17

可以作為超臨界流體的物質(zhì)很多如CO2、NH3、C2H6、CCl2F2、C7H16等，實(shí)際應(yīng)用CO2較多。CO2的優(yōu)點(diǎn)：1.臨界溫度（Tc=31.4℃）接近室溫，臨界壓力（Pc=7.37MPa）也不太高；2.化學(xué)惰性；3.無(wú)毒、無(wú)味、無(wú)嗅，不易燃易爆；4.價(jià)格便宜CO2在高于臨界溫度與臨界壓力的條件下，溶出中藥原料中的成分，當(dāng)壓力與溫度恢復(fù)常壓或常溫時(shí)，溶解在CO2流體中的成分立刻與氣態(tài)CO2分開(kāi)，達(dá)到萃取成分的目的?？梢宰鳛槌R界流體的物質(zhì)很多18

CO2超臨界流體對(duì)物質(zhì)溶解作用有一定選擇性，主要和物質(zhì)的極性、沸點(diǎn)、分子量相關(guān)密切。1.極性較低的化合物如酯、醚、內(nèi)酯和環(huán)氧化合物易萃??；2.極性較大的化合物如羥基、羧基較多，萃取較難。3.高分子化合物如蛋白質(zhì)、樹膠等，則很難萃取。CO2超臨界流體對(duì)物質(zhì)溶解作用有一定選擇性，主要和物質(zhì)的19如何擴(kuò)大超臨界流體萃取的適用范圍？

加夾帶劑

夾帶劑是在被萃取物質(zhì)和超臨界流體組成的二元系統(tǒng)中加入的第三組分，它可以改善原來(lái)物質(zhì)的溶解度如何擴(kuò)大超臨界流體萃取的適用范圍？20

夾帶劑的研究與應(yīng)用，很大程度上擴(kuò)大了超臨界流體萃取法的萃取分離范圍。一般情況下，對(duì)溶質(zhì)具有很好溶解度的溶劑往往是很好的夾帶劑，常用甲醇、乙醇、丙酮等。夾帶劑的用量一般不超過(guò)15%。

其中，二氧化碳超臨界萃取法（SFE-CO2）已成功用于多種揮發(fā)油提取分離，如辣椒油和月見(jiàn)草油的萃取。通過(guò)加入夾帶劑成功地用于銀杏葉中總黃酮和總內(nèi)酯的萃取、穿心蓮中穿心蓮內(nèi)酯、丹參有效成分的萃取。

夾帶劑的研究與應(yīng)用，很大程度上擴(kuò)大了超臨界流體萃取法的萃取21CO2-SFE的優(yōu)點(diǎn)：

①低溫萃取，可防止熱不穩(wěn)定的成分被破壞或逸失；②幾乎不使用有機(jī)溶劑，無(wú)溶劑殘留，對(duì)環(huán)境無(wú)污染；③提取效率高，節(jié)約能耗。CO2-SFE的優(yōu)點(diǎn)：22四、其他方法1.升華法：

具升華性的化學(xué)成分，可用升華法直接從中藥原料中進(jìn)行提取，如從茶葉中提取咖啡因，從樟木中提取樟腦等。2.組織破碎提取法：

某些對(duì)熱不穩(wěn)定成分可溶于水時(shí)，可用此法。3.壓榨法：

某些成分在新鮮原料中含量較高或新鮮原料富含肉質(zhì)可用壓榨法四、其他方法234.超聲波提取

利用超聲波的空化作用和附加作用（如機(jī)械振動(dòng)、乳化、擴(kuò)散粉碎），使細(xì)胞壁破裂，加速植物有效成分溶出。

與常規(guī)方法比較：提取時(shí)間短、溫度低、收率高。目前廣泛應(yīng)用于中藥質(zhì)量分析和少量提取中。4.超聲波提取利用超聲波的空化作用和附加作用（如機(jī)械振動(dòng)、245.微波輔助萃取技術(shù)

微波+有機(jī)溶劑代替單一的萃取藥材組織受高頻電磁波輻射，分子運(yùn)動(dòng)加劇，細(xì)胞內(nèi)溫度迅速上升，細(xì)胞內(nèi)壓超過(guò)細(xì)胞壁的承受力，細(xì)胞破裂，有效成分自由流出。另外，微波產(chǎn)生的電磁場(chǎng)，可加速被萃取物向萃取劑界面擴(kuò)散，從而使萃取速度提高數(shù)倍，同時(shí)還降低了萃取溫度。優(yōu)點(diǎn)：萃取時(shí)間短、溶劑用量少、設(shè)備簡(jiǎn)單、成本低、提取效率高、產(chǎn)品質(zhì)量好。目前微波萃取已用于多項(xiàng)中藥浸取生產(chǎn)線中，如葛根、茶葉、銀杏等。5.微波輔助萃取技術(shù)微波+有機(jī)溶劑代替單一256.酶解提取法

酶解提取法是在傳統(tǒng)提取方法的基礎(chǔ)上，根據(jù)植物細(xì)胞壁的構(gòu)成，利用酶的極高催化活性和專一性等特點(diǎn)，選擇相應(yīng)的酶，將細(xì)胞壁破壞，從而使植物細(xì)胞內(nèi)有效成分更易溶解、擴(kuò)散出來(lái)。

常用于植物細(xì)胞破壁的酶：纖維素酶、半纖維素酶、果膠酶、復(fù)合酶等。優(yōu)點(diǎn)：條件溫和、節(jié)約能耗、效率高。6.酶解提取法酶解提取法是在傳統(tǒng)提取方法的基礎(chǔ)上，根26第二節(jié)、天然藥物有效成分的分離方法

利用共存成分結(jié)構(gòu)性質(zhì)差異（不同點(diǎn)）一、兩相萃取法（溶劑分配法）

1.簡(jiǎn)單萃取

是利用混合物中各成分在兩相溶劑中分配系數(shù)不同而達(dá)到分離的方法。兩相萃取法的兩相往往是互相飽和的水相和有機(jī)相。混合物中各成分在兩相中分配系數(shù)相差越大，則分離效率越高。

第二節(jié)、天然藥物有效成分的分離方法27分配系數(shù)：指在一定條件下某成分在兩相溶劑中溶解分配達(dá)到平衡時(shí)，該成分在兩種溶劑中濃度的比值。(1)、分配系數(shù)：K=C上/C下(2)、分離因子：β=KA/KB（KA>KB），表示分離難易一般β>100，簡(jiǎn)單萃取(2-3次)β<50，10次以上β=1，無(wú)法分離分配系數(shù)：指在一定條件下某成分在兩相溶劑中溶解分配達(dá)到平衡時(shí)28

一般地：極性較大的成分：選用正丁醇—水（如分離皂苷類）；極性中等的成分：選用乙酸乙酯—水（如分離黃酮類）；極性小的成分：選用氯仿（或乙醚）—水（如分離苷元及游離生物堿）

一般地：292.

酸堿溶劑萃取

P19

利用混合物中各組分酸堿性的不同而進(jìn)行分離。pH與存在狀態(tài)：對(duì)于酸、堿及兩性化合物，pH改變可使存在狀態(tài)改變,即控制溶液的pH值，可控制存在狀態(tài)。pKa=-log([A-][H+]/[AH])=-log[H+]-log([A-]/[AH])=pH-log([A-]/[AH])log([A-]/[AH])=pH-pKa>2即認(rèn)為完全解離。

2.

酸堿溶劑萃取P1930

對(duì)于難溶于水的有機(jī)堿性成分，可與無(wú)機(jī)酸成鹽溶于水，借此可與非堿性難溶于水的成分分離；對(duì)于具有羧基或酚羥基的酸性成分，可與堿成鹽而溶于水；對(duì)于具有內(nèi)酯或內(nèi)酰胺結(jié)構(gòu)的成分可被皂化（形成鹽）溶于水，借此與其他難溶于水的成分分離。對(duì)于難溶于水的有機(jī)堿性成分，可與無(wú)機(jī)酸成鹽溶于水，31

3.PH梯度萃取法：P19

根據(jù)在一定PH下某成分可成鹽或可游離，改變?cè)摮煞衷谌軇┫到y(tǒng)中的分配系數(shù)而與其他成分分離。

以PH成梯度的酸水液,依次萃取用親脂性溶劑溶解的堿性成梯度的混合堿性成分；或以PH成梯度的堿水液,依次萃取用親脂性溶劑溶解的酸性成梯度的混合酸性成分。3.PH梯度萃取法：P1932二、系統(tǒng)溶劑分離法P20

1.混合物溶于水，利用各組分極性差別，依次用極性由小到大的有機(jī)溶劑進(jìn)行萃取，將混合物中各化學(xué)成分按極性由小到大的順序萃取出來(lái)。

2.柱色譜法，將混合物與吸附劑拌樣裝柱，依次用極性由小到大的有機(jī)溶劑分別洗脫。

該法常用于中藥化學(xué)成分的初步分離。二、系統(tǒng)溶劑分離法P2033三、沉淀法

提取濃縮液中加入某種試劑或溶劑使有效成分生成沉淀，或雜質(zhì)沉淀

如果將需要分離獲得的成分生成沉淀，這種沉淀反應(yīng)必須是可逆的；如果是不需要的成分，則將生成的沉淀除去，此時(shí)所用的沉淀反應(yīng)可以是不可逆的。

三、沉淀法341.溶劑沉淀法水提醇沉法

中藥水提液中加入乙醇至60～80％，放置，蛋白質(zhì)、多糖、果膠、粘液質(zhì)可沉淀。2.酸堿沉淀法堿性成分，可與無(wú)機(jī)酸成鹽溶于水，加堿又游離沉淀;酸性成分在堿中成鹽溶解，在酸中游離沉淀。1.溶劑沉淀法35

3.專屬試劑沉淀法

某些試劑能選擇性地沉淀某些（類）成分，稱為專屬試劑沉淀法。如雷氏銨鹽能與生物堿類生成沉淀；膽甾醇能與甾體皂苷沉淀；明膠能沉淀鞣質(zhì)，可用于分離或除去鞣質(zhì)。

4.鹽析法

在混合物水溶液中加入易溶于水的無(wú)機(jī)鹽，至一定濃度或飽和狀態(tài)，使某些中藥成分在水中溶解度降低而析出，或用有機(jī)溶劑萃取出來(lái)。最常用的無(wú)機(jī)鹽為NaCL。第二章天然藥化學(xué)成分的一般研究2課件36

四

、結(jié)晶、重結(jié)晶法

利用混合物中各成分在溶劑中的溶解度不同達(dá)到的分離方法。

結(jié)晶法是純化物質(zhì)最后階段常采用的方法，其目的是進(jìn)一步分離純化。中藥中的一些親水性成分，如多糖、皂苷等雖往往無(wú)固定的晶形，常為無(wú)定形粉末，但也需通過(guò)結(jié)晶進(jìn)行純化，以利于結(jié)構(gòu)測(cè)定。問(wèn)題：

重結(jié)晶的操作？四

、結(jié)晶、重結(jié)晶法37

結(jié)晶和重結(jié)晶操作：

提取或分離物↓溶于選擇的溶劑，加熱成飽和溶液，趁熱過(guò)濾濾液↓放置（冷藏）析晶，過(guò)濾粗結(jié)晶↓重復(fù)上述操作（重結(jié)晶）結(jié)晶

38

影響結(jié)晶的因素：

1.結(jié)晶用溶劑的選擇是最重要因素之一。一般應(yīng)符合下列條件：

（1）對(duì)被結(jié)晶成分熱時(shí)溶解度大、冷時(shí)溶解度?。粚?duì)雜質(zhì)或冷熱時(shí)都溶解，或冷熱時(shí)都不溶解。（2）與被結(jié)晶成分不發(fā)生化學(xué)反應(yīng)。（3）沸點(diǎn)適中。

影響結(jié)晶的因素：39

2.純度：較純3.被結(jié)晶成分的類型：分子小易結(jié)晶；分子大、含糖多，不易結(jié)晶。4.溶液濃度：溶液濃結(jié)晶快，但結(jié)晶細(xì)碎，雜質(zhì)多；反之結(jié)晶慢，但晶形大、純度高。5.結(jié)晶溫度和時(shí)間：溫度低、時(shí)間長(zhǎng)，結(jié)晶好。2.純度：較純40

常用于結(jié)晶的溶劑有甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、乙酸、吡啶等。當(dāng)用單一溶劑不能達(dá)到結(jié)晶效果時(shí)，可用兩種或兩種以上溶劑組成混合溶劑進(jìn)行結(jié)晶操作。

41五、分餾法

P30

此法是利用混合物中各成分沸點(diǎn)的不同而進(jìn)行的分離方法。適用于液體混合物的分離。分餾法分為常壓分餾、減壓分餾、分子蒸餾等?？筛鶕?jù)混合物中各成分沸點(diǎn)情況及對(duì)熱穩(wěn)定性因素選用。五、分餾法P3042六、膜分離法

利用天然或人工合成的高分子膜，以外加壓力或化學(xué)位差為推動(dòng)力，對(duì)混合物溶液中分子大小不同的化學(xué)成分進(jìn)行分離、分級(jí)、提純和富集。微濾、超濾、納濾、反滲透為四大已開(kāi)發(fā)應(yīng)用的膜分離技術(shù)。溶劑、小分子能透過(guò)膜，而大分子被膜所截留。

六、膜分離法43膜分離的基本原理膜分離的基本原理44膜分離的特點(diǎn)常溫操作

操作簡(jiǎn)單、連續(xù)化無(wú)相變、能耗低特別適用于對(duì)熱、對(duì)化學(xué)試劑敏感的物質(zhì)膜分離的特點(diǎn)常溫操作45六、色譜分離法

色譜分離法是天然藥物化學(xué)成分分離中最常使用的方法。其最大的優(yōu)點(diǎn)是分離效能高、快速簡(jiǎn)便。分類：

按移動(dòng)相的狀態(tài)分：

氣相色譜（GC）液相色譜（LC)

按操作方式分：柱色譜（CC)薄層色譜（TLC)紙色譜（PC)

按分離原理分：吸附色譜分配色譜離子交換色譜凝膠色譜大孔樹脂色譜

六、色譜分離法46（一）.柱色譜法1.吸附色譜

吸附色譜是利用混合物中各成分對(duì)吸附劑的吸附能力的差異，而實(shí)現(xiàn)分離的一類色譜。

物理吸附：無(wú)選擇性，吸附與解吸可逆，如硅膠、氧化鋁、活性炭吸附化學(xué)吸附：有選擇性，吸附牢固半化學(xué)吸附：介于上述二者之間，如聚酰胺物理吸附：相似者易于吸附（一）.柱色譜法物理吸附：無(wú)選47

常用的吸附劑包括硅膠、氧化鋁、活性炭、聚酰胺等。硅膠應(yīng)用較廣泛，中藥各類化學(xué)成分大多均可用其進(jìn)行分離。氧化鋁堿性或中性親脂性成分的分離，如生物堿、甾、萜類等成分。不適于含酚羥基的化合物。

聚酰胺以氫鍵吸附作用為主，主要用于分離酚類、醌類，如黃酮類、蒽醌類及鞣質(zhì)類等成分。第二章天然藥化學(xué)成分的一般研究2課件48硅膠：

硅膠一般呈微酸性，其吸附活性中心為硅醇基，是一種極性吸附劑柱層：100-160目薄層：10-40μ，加壓可用于柱層

硅膠根據(jù)是否加入粘合劑可分為硅膠G（以煅石膏為粘合劑的硅膠）和硅膠H（不含任何粘合劑的硅膠）；根據(jù)加入的無(wú)機(jī)熒光劑的不同又分為硅膠GF254硅膠GF365等。硅膠：49

鍵合硅膠非極性鍵合硅膠

分類極性鍵合硅膠離子型鍵合硅膠

a.非極性鍵合硅膠（反相硅膠）：硅膠表面鍵合極性很小的烷基。如：十八烷基、辛烷基、苯基烷等極性大的成分：吸附能力弱，先下極性小的成分：吸附能力強(qiáng)，后下b.極性鍵合硅膠：鍵合CN、NH3、雙OH等一般作正相層析c、離子型鍵合硅膠：鍵合各種離子交換基團(tuán)鍵合硅膠50氧化鋁極性吸附劑

（1）組成堿性氧化鋁（pH9）中性氧化鋁（pH7.5）酸性氧化鋁（pH2~3）100——160目——柱層>200目——硬板TLC（2）活度：含水量越少，吸附力越強(qiáng)，活度越小含水量（%）0361015活度（級(jí)）IIIIIIIVV（3）、應(yīng)用堿性氧化鋁——分離生物堿和甾族化合物，不適于醛、酮、酯、有機(jī)酸中性氧化鋁——分離中性、堿性親脂性化合物，不適于酸性成分酸性氧化鋁——分離有機(jī)酸類，不適于堿性成分缺點(diǎn)：吸附力強(qiáng)，成分損失大氧化鋁極性吸附劑51

被分離成分極性

吸附力三要素移動(dòng)相極性吸附劑活性

硅膠、氧化鋁為極性吸附劑，被分離成分極性大，吸附力強(qiáng)；溶劑極性大，洗脫力強(qiáng)。活性炭為非極性吸附劑，與此相反。

極性強(qiáng)弱比較a.官能團(tuán)極性：RCOOH>Ar-OH>H2O>R-OH>R-NH2>RCONH2>RCHO>RCOOR’>R-OR’>R-X>R-Hb.官能團(tuán)相同，極性官能團(tuán)數(shù)目多，極性大。C.ε介電常數(shù)越大，極性越強(qiáng)。

52吸附劑和移動(dòng)相的選擇：

依據(jù)被測(cè)組分、吸附劑和移動(dòng)相的性質(zhì)1.被測(cè)組分性質(zhì)（極性大?。?/p>

烴＜--------＜醇、羧酸2.吸附劑的活性：

吸附劑的活性↑大，對(duì)被測(cè)組分的吸附能力↑強(qiáng)

強(qiáng)極性物質(zhì)——選擇弱吸附劑弱極性物質(zhì)——選擇強(qiáng)吸附劑3.移動(dòng)相的極性：

移動(dòng)相極性↑大，對(duì)被測(cè)組分的洗脫能力↑大

“相似相溶”原則：根據(jù)組分性質(zhì)、吸附劑的活性，選擇適當(dāng)極性的流動(dòng)相吸附劑和移動(dòng)相的選擇：

依據(jù)被測(cè)組分53

三者關(guān)系圖示：

組分吸附劑移動(dòng)相極性活性小極性非(弱)極性活性大非（或）弱極性三者關(guān)系圖示：54比移值Rf

當(dāng)色譜條件一定時(shí)，Rf只與組分性質(zhì)有關(guān)。組分極性大，Rf值小。薄層色譜p27比移值Rf當(dāng)色譜條件一定時(shí)，Rf只與組分性質(zhì)有關(guān)。55

聚酰胺

P171

種類：錦綸6—聚己內(nèi)酰胺錦綸66—己二酸和己二胺聚合而成適用范圍：黃酮、酚類、醌類、有機(jī)酸等不可用于鞣質(zhì)，吸附力特強(qiáng)，成為不可逆吸附，但可吸附除去半化學(xué)吸附：聚酰胺（氫鍵締合）聚酰胺P171半化學(xué)吸附：聚酰胺（氫鍵締合）56影響因素：

a、樣品的影響影響因素：

a、樣品的影響57b、溶劑的影響聚酰胺在水中成氫鍵的能力最強(qiáng)洗脫能力：水<甲醇<丙酮<氫氧化鈉水溶液<甲酰胺<二甲基酰胺<尿素水溶液b、溶劑的影響58

2.分配色譜

利用被分離成分在固定相和流動(dòng)相之間的分配系數(shù)不同而達(dá)到分離。

按固定相與流動(dòng)相的相對(duì)極性分：

在正相分配色譜法中，流動(dòng)相的極性小于固定相的極性。常用的固定相有氰基與氨基鍵合相。極性小的跑得快。

在反相分配色譜法中，流動(dòng)相的極性大于固定相的極性。常用的固定相有十八烷基硅烷（ODS）或C8鍵合相。流動(dòng)相常用甲醇—水或乙腈—水系統(tǒng)。極性大的跑得快。反相色譜法正相色譜法2.分配色譜反相色譜法正相色譜法59

紙色譜法

將固定相承載在紙上，以紙做載體進(jìn)行點(diǎn)樣、展開(kāi)、定性、和定量的液-液分配色譜法

固定相：紙纖維吸著的水流動(dòng)相：與水不互溶的有機(jī)溶劑（如：飽和正丁醇）討論：

Rf與組分性質(zhì)、流動(dòng)相極性及溶解度有關(guān)

正相：極性組分→易保留，Rf?。鲃?dòng)相極性↑，Rf↑）非極性組分→易流出，Rf大（流動(dòng)相極性↑，Rf↓）紙色譜法將固定相承載在紙上，以紙做載體進(jìn)行點(diǎn)樣、展開(kāi)603.離子交換色譜適用于可解離成分的分離

利用混合物中各成分解離度差異進(jìn)行分離

離子交換劑有：離子交換樹脂離子交換纖維素離子交換凝膠

陽(yáng)離子交換樹脂強(qiáng)酸型（—SO3H）弱酸型（—COOH）陰離子交換樹脂強(qiáng)堿型—N（CH3）3·X—N（CH3）2（C2H4OH）·X弱堿型—NR2—NHR

第二章天然藥化學(xué)成分的一般研究2課件61

離子交換樹脂對(duì)化合物的交換能力強(qiáng)弱，主要取決于化合物解離度的大小，帶電荷的多少等因素。

化合物解離度大（酸性、堿性強(qiáng)）易交換在樹脂上，相對(duì)來(lái)說(shuō)難以洗脫。當(dāng)二種不同解離度的化合物被交換在樹脂上，解離度小的化合物比解離度大的化合物先洗脫下來(lái)，由此達(dá)到分離的目的。

離子交換纖維素、凝膠陽(yáng)離子交換纖維素：酸性基團(tuán)接在纖維素或葡聚糖凝膠上。陰離子交換纖維素：堿性基團(tuán)接在纖維素或葡聚糖凝膠上。

離子交換樹脂對(duì)化合物的交換能力強(qiáng)弱，主要取決于化合物解離度624.大孔樹脂色譜

大孔樹脂是一類沒(méi)有可解離基團(tuán)，具有多孔結(jié)構(gòu)，不溶于水的固體高分子物質(zhì)。是繼離子交換樹脂之后發(fā)展起來(lái)的一類新型材料。

原理：吸附性（范德華力及氫鍵）、篩選性（多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)）結(jié)合。

依據(jù)分子體積大小及吸附力不同而分離水液中吸附力強(qiáng)。

4.大孔樹脂色譜63性狀：白色球形顆粒，粒度20~60目，不溶于酸、堿、有機(jī)溶劑

類型：非極性——苯乙烯型極性——2-甲基丙烯酸酯型性狀：64

影響因素：

樹脂型號(hào)、溶劑種類及化合物性質(zhì)等a.分子極性極性大的成分——中極性樹脂分離；極性小的成分——非極性樹脂分離。b.分子大?。悍肿哟螅搅?qiáng)，選擇大孔徑樹脂。c.pH值影響：酸性成分：酸性條件下易被吸附堿性成分：堿性條件下易被吸附中性成分：中性條件下易被吸附影響因素：65洗脫液的選擇：可選用不同濃度的MeOH、EtOH、Me2CO；流速0.5~5ml/min。

非極性大孔樹脂——洗脫劑極性越小，洗脫能力越強(qiáng)。

極性大孔樹脂——洗脫劑極性越大，洗脫能力越強(qiáng)。

洗脫液的選擇：66

實(shí)際工作中，常先將欲分離混合物的水溶液通過(guò)大孔吸附樹脂后，依次用水，濃度由低至高的含水甲（乙）醇溶液洗脫，可將混合物分離成若干組分。近年來(lái)，大孔吸附樹脂色譜被應(yīng)用于中藥有效成分或有效部位如皂苷、生物堿黃酮等的分離富集。

67

其優(yōu)點(diǎn)是：選擇性好，機(jī)械強(qiáng)度高，再生處理方便，吸附速度快等特點(diǎn)。

缺點(diǎn)：樹脂殘留物（甲苯、二甲苯等）

第二章天然藥化學(xué)成分的一般研究2課件685.凝膠過(guò)濾色譜（排阻色譜，分子篩色譜）根據(jù)凝膠的孔徑和被分離化合物分子的大小而達(dá)到分離目的。

當(dāng)混合物溶液通過(guò)凝膠柱時(shí)，比凝膠孔隙小的分子可以自由進(jìn)入凝膠內(nèi)部，而比凝膠孔隙大的分子不能進(jìn)入凝膠內(nèi)部，只能通過(guò)凝膠顆粒間隙，因此移動(dòng)速率有差異。

分子大的物質(zhì)不被排阻，保留時(shí)間較短，先流出柱體，分子小的物質(zhì)進(jìn)入孔隙內(nèi)被滯留，保留時(shí)間較長(zhǎng)，后流出柱體，由此而達(dá)到分離。5.凝膠過(guò)濾色譜（排阻色譜，分子篩色譜）69根據(jù)分子量大小差別：

按分子由大到小順序出柱。根據(jù)分子量大小差別：

按分子由大到小順序出柱。70

商品凝膠的種類很多，常用的是葡聚糖凝膠(SephadexG)、羥丙基葡聚糖凝膠(SephadexLH-20)。

SephadexG是由葡聚糖和甘油通過(guò)醚橋相互交聯(lián)而成。親水性，只適于水中應(yīng)用。不同規(guī)格適合分離不同分子量的物質(zhì)。

SephadexLH-20為羥丙基葡聚糖凝膠，既有親水性又有親脂性，因此不僅可在水中應(yīng)用，也可在極性有機(jī)溶劑中應(yīng)用。在由極性及非極性溶劑組成的混合溶劑中常起到反相色譜的作用。商品凝膠的種類很多，常用的是葡聚糖凝膠(Sephadex71

（二）、加壓液相色譜

根據(jù)所用壓力大小不同，可分為高效液相色譜（HPLC，>20個(gè)大氣壓），中壓液相色譜（MPLC5～20個(gè)大氣壓），低壓液相色譜（LPLC,<5個(gè)大氣壓），快速色譜（flashchromatography,約2個(gè)大氣壓）等。分配色譜已成為中藥化學(xué)成分分離的常規(guī)技術(shù)手段。

72高效液相色譜（HPLC）

高效液相色譜法（highperformanceliquidchromatographyHPLC),是以經(jīng)典柱色譜法為基礎(chǔ)，引入了氣相色譜法的理論和實(shí)驗(yàn)方法，流動(dòng)相改為高壓輸送，采用高效固定相及在線檢測(cè)手段發(fā)展而成的一種高效、快速、高靈敏的分離分析技術(shù)。

按分離原理有：液－固吸附、液－液分配、離子交換、離子對(duì)、離子色譜、空間排阻、親和色譜等。氣相色譜（GC)、高速逆流色譜、親和色譜高效液相色譜（HPLC）高效液相色譜法（highp73第三節(jié)、天然藥物化學(xué)成結(jié)構(gòu)研究方法

經(jīng)過(guò)提取、分離、精制得到的有效成分，必須鑒定或測(cè)定其化學(xué)結(jié)構(gòu)，才可能為深入探討有效成分的生物活性、構(gòu)效關(guān)系、體內(nèi)代謝以及進(jìn)行結(jié)構(gòu)改造、人工合成等研究提供必要的依據(jù)。有效成分的鑒定和結(jié)構(gòu)測(cè)定，是本學(xué)科的重要內(nèi)容之一。

在進(jìn)行有效成分的結(jié)構(gòu)研究之前，必須對(duì)該成分進(jìn)行純度檢驗(yàn)，以確定其為單體化學(xué)成分。

第三節(jié)、天然藥物化學(xué)成結(jié)構(gòu)研究方法

經(jīng)過(guò)提取、分離、精74一、純度鑒定1）物理常數(shù)：mp、[α]D2）TLC（PC）：三種展開(kāi)系統(tǒng)均為單一斑點(diǎn)。3）GC，HPLC一、純度鑒定75

一般樣品用兩種以上溶劑系統(tǒng)或色譜條件進(jìn)行檢驗(yàn)，均顯示單一的斑點(diǎn)或譜峰；結(jié)晶樣品的熔距為0.5～1.0℃;液體樣品的沸程在5℃以內(nèi)，即可認(rèn)為是比較純的單體化學(xué)成分，可用于化合物的鑒定和結(jié)構(gòu)測(cè)定。

在進(jìn)行有效成分的結(jié)構(gòu)鑒定時(shí)，應(yīng)進(jìn)行文獻(xiàn)調(diào)研，結(jié)合定性分析，判斷該化合物的基本骨架、結(jié)構(gòu)類型。

一般樣品用兩種以上溶劑系統(tǒng)或色譜條件進(jìn)行檢驗(yàn)，均顯示單一的76

如可能為已知化合物，在有對(duì)照品的情況下，最好用對(duì)照品進(jìn)行熔點(diǎn)、混合熔點(diǎn)、色譜和紅外光譜對(duì)照。如果樣品與對(duì)照品熔點(diǎn)相同，混合熔點(diǎn)不下降，色譜中的Rf值相同，IR光譜相同，則可判定樣品與對(duì)照品為同一化合物。

如可能為已知化合物，在有對(duì)照品的情況下，最好用對(duì)照品進(jìn)行熔77若無(wú)對(duì)照品，則多做些數(shù)據(jù)，或制備衍生物與文獻(xiàn)數(shù)據(jù)核對(duì)。如果所要鑒定的化合物為文獻(xiàn)未記載的物質(zhì)時(shí)，則要進(jìn)行結(jié)構(gòu)測(cè)定。近代各種波譜法，在鑒定或確定化學(xué)結(jié)構(gòu)中，發(fā)揮著極為重要的作用。而經(jīng)典的化學(xué)方法，退居次要的地位。但也并不意味著可以完全不需要經(jīng)典的化學(xué)方法。應(yīng)該是二種方法相互補(bǔ)充，相互印證。若無(wú)對(duì)照品，則多做些數(shù)據(jù)，或制備衍生物與文獻(xiàn)數(shù)據(jù)核對(duì)。如78二、結(jié)構(gòu)研究一般程序

物理常數(shù)測(cè)定推測(cè)母體結(jié)構(gòu)類型功能基情況分子量分子式的確定波譜、化學(xué)方法推測(cè)出結(jié)構(gòu)式人工合成進(jìn)行確認(rèn)二、結(jié)構(gòu)研究一般程序

物理常數(shù)測(cè)定推測(cè)母體結(jié)構(gòu)類型分子量分子791．物理常數(shù)的測(cè)定

物理常數(shù)的測(cè)定包括：

熔點(diǎn)沸點(diǎn)比旋度折光率密度等。

1．物理常數(shù)的測(cè)定80

2．分子式的測(cè)定

目前最常用的是質(zhì)譜法（MS）。高分辨質(zhì)譜法（HR-MS）不僅可給出化合物的精確分子量，還可以直接給出化合物的分子式。

如青蒿素的HR-MS中，分子離子峰為m/z282.1472,可計(jì)算出其分子式為C15H22O5（計(jì)算值282.1467）。也可通過(guò)質(zhì)譜中出現(xiàn)的同位素峰的強(qiáng)度推定化合物的分子式。有時(shí)化合物的分子離子峰不穩(wěn)定，難以用HR-MS測(cè)出,需進(jìn)行元素分析，確定元素種類，各元素在化合物中所占的百分含量，從而求出化合物的實(shí)驗(yàn)式，再用FD-MS，F(xiàn)AB-MS測(cè)其分子量，以求得化合物的分子式。2．分子式的測(cè)定81

3．化合物結(jié)構(gòu)骨架與官能團(tuán)的確定

一般首先確定化合物的不飽和度

Ω=1/2（2n4+n3-n1+2）問(wèn)題:C8H8O的不飽和度?

通過(guò)各類化學(xué)成分的顯色反應(yīng)，色譜行為、酸堿性、溶解性等，結(jié)合文獻(xiàn)調(diào)研及波譜等推定分子骨架和官能團(tuán)。

3．化合物結(jié)構(gòu)骨架與官能團(tuán)的確定824、化合物結(jié)構(gòu)的確定：

1）、光譜方法：測(cè)定并分析UV、IR、1H-NMR、13C-NMR、MS譜學(xué)數(shù)據(jù)2）、化學(xué)溝通：化學(xué)降解、衍生物制備等3）、立體結(jié)構(gòu)：CD（圓二色譜）、ORD（旋光譜）、2D-NMR、X-射線衍射、人工合成4、化合物結(jié)構(gòu)的確定：83

三、結(jié)構(gòu)測(cè)定中常用的波譜分析方法

目前，波譜分析已成為確定化學(xué)結(jié)構(gòu)的主要手段。尤其是超導(dǎo)核磁共振技術(shù)的普及和各種二維核磁共振譜（2D-NMR）及質(zhì)譜新技術(shù)的開(kāi)發(fā)利用，具備了靈敏度高、選擇性強(qiáng)，用量少、快速、簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)，大大地加快了確定化合物結(jié)構(gòu)的速度和準(zhǔn)確性。三、結(jié)構(gòu)測(cè)定中常用的波譜分析方法84（一）.紫外光譜(UV)

UV光譜在化學(xué)成分研究中的主要用途

a.與對(duì)照品或標(biāo)準(zhǔn)圖譜對(duì)照，可用于化合物的初步鑒定；b.根據(jù)Beer—Lamber定律可用于有效成分的含量測(cè)定；c.可提供分子中共軛體系的結(jié)構(gòu)信息，據(jù)此判斷共軛體系中取代基的位置、種類和數(shù)目。（一）.紫外光譜(UV)

UV光譜在化學(xué)成分研究中的主要用85

單獨(dú)靠UV光譜不能決定分子結(jié)構(gòu)，但對(duì)某些具有共軛體系的化學(xué)成分，如蒽醌類、黃酮類以及強(qiáng)心苷類等成分的結(jié)構(gòu)特征的確定有著重要的使用價(jià)值。

86（二）.IR光譜用IR測(cè)定結(jié)構(gòu)時(shí)，如果被測(cè)定的是已知物，只要和已知對(duì)照品做一張共IR圖譜，如二者IR譜圖完全一致，則基本可推測(cè)是同一物質(zhì)。如無(wú)對(duì)照品，也可檢索有關(guān)IR譜圖文獻(xiàn)。

IR對(duì)未知化合物的鑒定，主要用于功能基的確認(rèn),芳環(huán)取代類型的判斷等。（二）.IR光譜87

（三）.MS譜

化合物分子用一定方式裂解后，生成各種離子，按其質(zhì)量大小排列而成的圖譜。重要參數(shù)：分子離子（峰）分子失去一個(gè)電子后形成的正離子。其質(zhì)荷比在數(shù)值上就是該分子的分子量。近年來(lái)，隨著現(xiàn)代分析技術(shù)的飛速發(fā)展，新的離子源不斷出現(xiàn)，使質(zhì)譜在確定化合物分子量、元素組成及根據(jù)裂解碎片檢測(cè)官能團(tuán)、辨認(rèn)化合物類型、推導(dǎo)碳骨架等方面發(fā)揮著重要作用。（三）.MS譜88主要離子源的電離方式及特點(diǎn)1、電子轟擊質(zhì)譜（EI－MS）

在電子轟擊條件下，大多數(shù)分子電離后生成缺一個(gè)電子的分子離子，并繼續(xù)發(fā)生鍵的斷裂形成“碎片”離子。這對(duì)推化合物的結(jié)構(gòu)十分有用。

但當(dāng)樣品相對(duì)分子量較大或?qū)岱€(wěn)定性差時(shí)，常常得不到分子離子，因而不能測(cè)定這些樣品的分子量。EI－MS仍是用得最普遍的技術(shù)。主要離子源的電離方式及特點(diǎn)892、化學(xué)電離質(zhì)譜（CI－MS）

通過(guò)引入大量的試劑氣體產(chǎn)生的反應(yīng)離子與樣品分子之間的離子—分子反應(yīng)，使樣品分子實(shí)現(xiàn)電離。利用化學(xué)電離源，即使是不穩(wěn)定的化合物，也能得到較強(qiáng)的準(zhǔn)分子離子峰，即M±1峰，從而有利確定其分子量。但此法的缺點(diǎn)是碎片離子峰較少，可提供的有關(guān)結(jié)構(gòu)方面的信息少。第二章天然藥化學(xué)成分的一般研究2課件903、場(chǎng)解析質(zhì)譜（FD-MS）

FD-MS特別適用于難汽化和熱穩(wěn)定性差的固體樣品分析。如有機(jī)酸、甾體類、糖苷類、生物堿、氨基酸、肽和核苷酸等。此法的特點(diǎn)是形成的M+沒(méi)有過(guò)多的剩余內(nèi)能，減少了分子離子進(jìn)一步裂解的概率，增加了分子離子峰的豐度，碎片離子峰相對(duì)減少。因此用于極性物質(zhì)的測(cè)定，可得到明顯的分子離子峰或[M+1]+峰，但碎片離子峰較少，對(duì)提供結(jié)構(gòu)信息受到一些局限。第二章天然藥化學(xué)成分的一般研究2課件91

4、快原子轟擊質(zhì)譜（FAB-MS）這種技術(shù)采用液體基質(zhì)（如甘油）負(fù)載樣品，然后以高能量的惰性原子束轟擊表面試樣，再對(duì)由此產(chǎn)生的二次離子進(jìn)行質(zhì)譜分析。此方法常用于大分子極性化合物特別是用于糖苷類化合物的研究。除得到分子離子峰外，還可得到糖和苷元的結(jié)構(gòu)碎片峰，從而彌補(bǔ)了FD-MS的不足。4、快原子轟擊質(zhì)譜（FAB-MS）925、基質(zhì)輔助激光解吸電離質(zhì)譜（MALDI-MS）

此種質(zhì)譜技術(shù)適用于結(jié)構(gòu)較為復(fù)雜、不易氣化的大分子如多肽、蛋白質(zhì)等的研究，可得到分子離子、準(zhǔn)分子離子和具有結(jié)構(gòu)信息的碎片離子。5、基質(zhì)輔助激光解吸電離質(zhì)譜（MALDI-MS）93

6、電噴霧電離質(zhì)譜（ESI-MS）

是一種使用強(qiáng)靜電場(chǎng)的電離技術(shù)，既可分析大分子，也可分析小分子。對(duì)于分子量在1000Da（道爾頓）以下的小分子，會(huì)產(chǎn)生[M+H]+或[M-H]+離子，選擇相應(yīng)的正離子或負(fù)離子形式進(jìn)行檢測(cè)，就可得到物質(zhì)的分子量。而分子量高達(dá)20000Da的大分子會(huì)生成一系列多電荷離子，通過(guò)數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)能得到樣品的分子量。6、電噴霧電離質(zhì)譜（ESI-MS）94

7、串聯(lián)質(zhì)譜（MS-MS）

串聯(lián)質(zhì)譜可表示為MS－MS，隨著串聯(lián)級(jí)數(shù)的增加進(jìn)而表示為MSn，其中n表示串聯(lián)級(jí)數(shù)。

這是一種用質(zhì)譜作質(zhì)量分離的質(zhì)譜技術(shù)。它可以研究母離子和子離子的關(guān)系，獲得裂解過(guò)程的信息，用以確定前體離子和產(chǎn)物離子的結(jié)構(gòu)。近年，國(guó)內(nèi)亦有將此技術(shù)用于鑒定中藥有效部位中的各種成分的化學(xué)結(jié)構(gòu)的研究報(bào)道。7、串聯(lián)質(zhì)譜（MS-MS）95（四）.核磁共振譜（NMR）

NMR譜能提供分子中有關(guān)氫及碳原子的類型、數(shù)目、互相連接方式、周圍化學(xué)環(huán)境以及構(gòu)型、構(gòu)象的結(jié)構(gòu)信息。所以NMR譜在化合物結(jié)構(gòu)測(cè)定中顯得非常重要。（四）.核磁共振譜（NMR）NMR譜96

（1）1H-NMR：

提供信息：①化學(xué)位移δ；②積分曲線（氫數(shù)）；③偶合常數(shù)J化學(xué)位移δ:共振峰所在的位置（相對(duì)）δ：范圍0～20ppm偶合常數(shù)J:相鄰磁核之間自旋偶合或自旋干擾，導(dǎo)致吸收峰發(fā)生裂分，兩個(gè)小峰之間的距離。(HZ）

97如：如：98

除了正常的1H-NMR譜技術(shù)外，還有一些幫助結(jié)構(gòu)分析的輔助技術(shù)，如選擇性去偶、重氫交換，加入反應(yīng)試劑、各種雙照射等。

應(yīng)用較多的雙照射技術(shù)是NOE，也稱核的增益效應(yīng)。除了正常的1H-NMR譜技術(shù)外，還有一些幫助結(jié)構(gòu)分析的輔助99（2）13C-NMR譜

13C-NMR提供的結(jié)構(gòu)信息是分子中各種不同類型及化學(xué)環(huán)境的碳核的化學(xué)位移，異核偶合常數(shù)（JC-H）及弛豫時(shí)間（T1）。

其中利用度最高的是化學(xué)位移（δc）δ范圍0～250ppm不同類型碳化學(xué)位移大致范圍：

P37表2-3（2）13C-NMR譜100常見(jiàn)的13C-NMR測(cè)定技術(shù)如下：

A、全氫去偶譜：也稱質(zhì)子噪音去偶或質(zhì)子寬帶去偶。此時(shí)H的偶合影響全部消除，從而簡(jiǎn)化了圖譜。在分子中沒(méi)有對(duì)稱因素和不含F(xiàn)、P等元素時(shí)，每個(gè)碳原子都會(huì)給出一個(gè)單峰。雖無(wú)法區(qū)別碳上Ｈ的數(shù)目，但對(duì)判斷C信號(hào)的化學(xué)位移十分方便。常見(jiàn)的13C-NMR測(cè)定技術(shù)如下：101噪音去偶譜：又叫全氫去偶譜（COM）或?qū)拵ヅ甲V（BBD）：

所有碳信號(hào)作為單峰出現(xiàn)噪音去偶譜：又叫全氫去偶譜（COM）或?qū)拵ヅ甲V（BBD）：102

B、偏共振去偶（OFR）

在偏共振去偶譜中，每個(gè)連接H的C原子有殘余裂分，故在所得圖譜中－CH呈二重峰（d），－CH2呈三重峰（t），－CH3呈四重峰（q），季碳為單峰（s），且強(qiáng)度最低，由此可獲得碳所連接的質(zhì)子數(shù)、偶合情況等信息。但此法各信號(hào)的裂分峰相互重疊，難以全部識(shí)別和解析。

第二章天然藥化學(xué)成分的一般研究2課件103

C、DEPT（無(wú)畸變極化轉(zhuǎn)移增強(qiáng)法）在DEPT法中，通過(guò)改變照射1H的脈沖寬度（θ）使成為45°、90°和135°變化并測(cè)定13C-NMR譜。所得結(jié)果與INEPT譜類似。不同類型13C信號(hào)在譜圖上呈單峰形式分別朝上或朝下伸出，易識(shí)別。

當(dāng)θ=45°時(shí)，所有的CH、CH2、CH3為正信號(hào)；當(dāng)θ=90°時(shí)，僅顯示CH的正信號(hào)；當(dāng)θ=135°時(shí),CH、CH3為正信號(hào),CH2負(fù)信號(hào)。季碳同樣無(wú)信號(hào)出現(xiàn)。第二章天然藥化學(xué)成分的一般研究2課件104如：如：105D、NOE譜

NOE是在核磁共振中選擇性地照射一種質(zhì)子使之飽和，則與該質(zhì)子在立體空間位置上接近的另一個(gè)或數(shù)個(gè)質(zhì)子的信號(hào)強(qiáng)度增高的現(xiàn)象（增益）。它不但可以找出互相偶合的兩個(gè)核的關(guān)系，還可以反映出不互相偶合但空間距離較近的兩個(gè)核間關(guān)系。D、NOE譜NOE是在核磁共振中選擇性地照射一種質(zhì)子使之106

如五味子酯甲中聯(lián)苯雙酯部分有二個(gè)芳H，1H-NMR示有二個(gè)峰，δ值分別為6.76，6.43，這二個(gè)單峰的歸屬可用NOE技術(shù)予以確定。

照射δ3.64的甲基，發(fā)現(xiàn)位于δ6.76的芳H峰增益19%而照射其他三個(gè)甲基，均未見(jiàn)到NOE現(xiàn)象，故推測(cè)位于甲氧基鄰位芳Hδ值為6.76，而位于亞甲二氧基鄰位芳Hδ值為6.43。如五味子酯甲中聯(lián)苯雙酯部分有二個(gè)芳H，1H-N107(3)、二維核磁共振譜（2D－NMR）

二維化學(xué)位移相關(guān)譜（COSY）是2D－NMR譜中最主要，也是最常用的一種測(cè)試技術(shù)。2D－NMR譜又分為同核和異核相關(guān)譜兩種。

常用：HMQC異核多量子相關(guān)譜HMBC異核多鍵相關(guān)譜(3)、二維核磁共振譜（2D－NMR）108（五）.旋光光譜（ORD）和圓二色光譜（CD）

旋光光譜和圓二色光譜在測(cè)定手性化合物的構(gòu)型和構(gòu)象、確定某些官能團(tuán)（如羰基）在手性分子中的位置等有獨(dú)到之處，是其他波譜難以代替的。（五）.旋光光譜（ORD）和圓二色光譜（CD）109

（六）.x射線單晶衍射法（x-Ray）x射線單晶衍射法是通過(guò)測(cè)定化合物晶體對(duì)x射線的衍射譜，通過(guò)計(jì)算機(jī)用數(shù)學(xué)方法解析衍射譜，再還原為分子中各原子的排列關(guān)系，最后獲得每個(gè)原子在某一坐標(biāo)系中的分布，從而給出化合物化學(xué)結(jié)構(gòu)。

結(jié)晶x射線衍射法測(cè)定出的化學(xué)結(jié)構(gòu)可靠性大，能測(cè)定化學(xué)法和其他波譜法難以測(cè)定的化合物結(jié)構(gòu)。它不僅測(cè)出化合物的一般結(jié)構(gòu)，還能測(cè)出化合物結(jié)構(gòu)中的鍵長(zhǎng)、鍵角、構(gòu)象、絕對(duì)構(gòu)型等結(jié)構(gòu)細(xì)節(jié)。

（六）.x射線單晶衍射法（x-Ray）110[思考題]：1.天然藥物中化學(xué)成分的提取方法有哪些？2.常用于天然藥物有效成分提取的溶劑有哪些？排列其極性大小順序。3.解釋名詞或符號(hào)：正相色譜、反相色譜、一次代謝、二次代謝、2D-NMR、HPLC、SFE等。4.影響溶劑提取法提取效率的主要因素有哪些？5.簡(jiǎn)述水蒸汽蒸餾法的原理，在天然藥物中主要用于何類成分提取？6.天然藥物有效成分分離精制常用方法有哪些？最常用方法是什么？7.按原理分，天然藥物成分的分離常用的色譜方法有哪些？

[思考題]：1118.何謂超臨界流體萃取法？原理為何？CO2-SFE法有何優(yōu)點(diǎn)？9.若從中藥水提液中萃取親脂性成分，應(yīng)選用什么萃取劑？10.大孔吸附樹脂是什么類型的吸附劑？其色譜行為如何？11.如何判斷某未知樣品的純度？12.簡(jiǎn)述IR、UV、NMR、MS在測(cè)定天然藥物成分結(jié)構(gòu)中的應(yīng)用。8.何謂超臨界流體萃取法？原理為何？CO2-SFE法有何優(yōu)112在硅膠G板上，以含EtOAc的石油醚展開(kāi).ABCDERｆ值：

﹥

﹥

﹥

﹥

在硅膠G板上，以含EtOAc的石油醚展開(kāi).A113單選題：1.難溶于水而易溶于氯仿的是（）A.生物堿B.無(wú)機(jī)鹽C.氨基酸D.低級(jí)脂肪酸E.鞣質(zhì)2．下列溶劑中極性最大的是（）A．乙醇B.乙醚C．氯仿D.乙酸乙酯E.丙酮3.溶劑法提取有效成分時(shí)，效率高且最省溶劑的方法是（）A.浸漬法B.滲漉法C.煎煮法D.回流法E.連續(xù)回流法4.從中藥水煎液中萃取有效成分時(shí)不能用（）A.丙酮B.乙醚C.苯D.氯仿E.乙酸乙酯5．屬于二次代謝產(chǎn)物的是（）A.葉綠素B.蛋白質(zhì)C.黃酮類D.脂類E.核酸單選題：5．屬于二次代謝產(chǎn)物的是（）1146.由氨基酸途徑生成的化合物是（）A.生物堿B.糖類C.皂苷D.香豆素E.脂肪酸7.用石油醚做溶劑，主要提出的成分是（）A.糖類B.氨基酸C.苷類D.油脂E.蛋白質(zhì)8.煎煮法不宜使用的器皿是（）A.陶器B.鐵器C.砂器D.玻璃器皿E.瓷器9.利用分子篩作用進(jìn)行化合物分離的色譜是（）A.硅膠色譜B.離子交換色譜C.凝膠過(guò)濾色譜D.紙色譜E.大孔樹脂色譜10.用5%的NaHCO3處理中藥總提取物，可溶出（）A.弱堿性成分B.強(qiáng)堿性成分C.中性成分D.強(qiáng)酸性成分E.弱酸性成分6.由氨基酸途徑生成的化合物是（）115[參考文獻(xiàn)]1.天然產(chǎn)物化學(xué)徐任生科學(xué)出版社20032.天然產(chǎn)物化學(xué)吳立軍人民衛(wèi)生出版社20073.中藥化學(xué)肖崇厚上海科學(xué)技術(shù)出版社19974.現(xiàn)代色譜法及其在醫(yī)藥中的應(yīng)用孫毓慶人民衛(wèi)生出版社19985.有機(jī)化合物波譜解析姚新生中國(guó)醫(yī)藥科技出版社20056.有機(jī)化合物結(jié)構(gòu)鑒定與有機(jī)波譜學(xué)寧永成科學(xué)出版社2000[參考文獻(xiàn)]116

第二章

天然藥物化學(xué)成分

的提取、分離、鑒定方法

第二章

天然藥物化學(xué)成分

的提取、分離、鑒定方法117第一節(jié)

天然藥物化學(xué)成分的提取方法

提取——用適當(dāng)?shù)姆椒ê图夹g(shù)將天然藥物中的化學(xué)成分從組織細(xì)胞中抽提出來(lái)的過(guò)程。主要有：溶劑提取法、水蒸氣蒸餾法、超臨界流體萃取法、升華法等

第一節(jié)

天然藥物化學(xué)成分的118

一、溶劑提取法

根據(jù)被提取成分的溶解性質(zhì)，選用合適的溶劑和方法將天然藥物中的化學(xué)成分溶解出來(lái)。

3.擴(kuò)散（溶液）1.溶劑滲透細(xì)胞膜2.溶解內(nèi)容物、產(chǎn)生濃差溶劑法提取示意圖

一、溶劑提取法

根據(jù)被提取成分的溶解性質(zhì)，選用合適的溶劑119

（一）.溶劑的選擇

溶劑按極性可分為三類：親脂性有機(jī)溶劑：石油醚、氯仿、乙醚、乙酸乙酯正丁醇親水性有機(jī)溶劑：甲醇、乙醇、丙酮(與水混溶）

水常用于中藥成分提取的溶劑如下：

極性：小大

石油醚Pet<苯C6H6<氯仿CHCl3<乙醚Et2O<乙酸乙酯EtOAc<正丁醇n-BuOH<丙酮Me2CO<乙醇EtOH<甲醇MeOH<H2O（一）.溶劑的選擇石油醚Pet<苯C6H6<氯仿C120

選擇溶劑的原則相似相溶

相似相溶——極性大的化學(xué)成分易溶于親水性溶劑，極性小的化學(xué)成分易溶于親脂性有機(jī)溶劑。

極性判斷依據(jù)：

a、分子大小：基團(tuán)一樣，分子大，極性小b、基團(tuán)的性質(zhì)與數(shù)量：極性基團(tuán)多則極性大。極性基團(tuán)：-COOH、、—OH、—NH2……中等極性基團(tuán)：—O—R、—COOR……非極性基團(tuán)：烷基理想溶劑：對(duì)有效成分溶解度大，無(wú)效成分溶解度小，與植物成分不起化學(xué)反應(yīng)；安全、成本低；選擇溶劑的原則相似相溶121

一般情況下：

石油醚可提出油脂、蠟、揮發(fā)油、游離的甾體及萜類；

氯仿或乙酸乙酯可提出游離生物堿、有機(jī)酸、黃酮及香豆素等；

丙酮、乙醇、甲醇可提出苷類，生物堿或有機(jī)酸鹽類、鞣質(zhì)等；

水可提出糖類、氨基酸、蛋白質(zhì)、無(wú)機(jī)酸鹽等類水溶性成分。

第二章天然藥化學(xué)成分的一般研究2課件122（二）.提取方法（操作）

1、煎煮法：水作溶劑熱提優(yōu)點(diǎn)：溶劑易得，簡(jiǎn)便，大部分成分可被不同程度地提取出來(lái)（助溶作用）。

缺點(diǎn)：揮發(fā)性成分和受熱易破壞的成分不宜使用；

含多糖類化合物煎煮后藥液粘度較大，難以過(guò)濾。

（二）.提取方法（操作）1232、浸漬法：

優(yōu)點(diǎn)：遇熱易破壞、揮發(fā)性成分和含淀粉或粘液質(zhì)多的成分適用。缺點(diǎn)：提取時(shí)間長(zhǎng)，效率不高；以水為溶劑時(shí)，應(yīng)防霉變質(zhì)。3、滲漉法：優(yōu)點(diǎn)：可保持濃度差，提取效率高，節(jié)約溶劑。

缺點(diǎn)：操作較麻煩。2、浸漬法：1244、回流提取法

有機(jī)溶劑熱提取優(yōu)點(diǎn)：提取效率高，溶劑消耗較少。缺點(diǎn)：受熱易破壞的成分不宜使用。4、回流提取法1255、連續(xù)回流提取法：

優(yōu)點(diǎn)：溶劑消耗量小，提取效率高。

缺點(diǎn)：對(duì)熱不穩(wěn)定化學(xué)成分不宜使用。索氏提取器5、連續(xù)回流提取法：索氏提取器126（三）影響提取效率因素

溶劑的選擇提取方法藥材粉碎度20~60目提取時(shí)間水加熱1~2小時(shí)（分2-3次），乙醇加熱每次1小時(shí)提取溫度不宜過(guò)高溶劑用量、提取次數(shù)等。（三）影響提取效率因素127提取方法

使用范圍及特點(diǎn)提取方法溶劑操作提取效率使用范圍備注浸漬法水或有機(jī)溶劑不加熱效率低各類成分，尤遇熱不穩(wěn)定成分易發(fā)霉，需加防腐劑滲漉法有機(jī)溶劑不加熱—脂溶性成分消耗溶劑量大，費(fèi)時(shí)長(zhǎng)煎煮法水直火加熱—水溶性成分易揮發(fā)、熱不穩(wěn)定不宜用回流提取法有機(jī)溶劑水浴加熱—脂溶性成分熱不穩(wěn)定不宜用，溶劑量大連續(xù)回流提取法有機(jī)溶劑水浴加熱節(jié)省溶劑、效率最高親脂性較強(qiáng)成分用索氏提取器，時(shí)間長(zhǎng)提取方法使用范圍及特點(diǎn)提取方法溶劑操128二、水蒸氣蒸餾法

本法適用于提取能隨水蒸氣蒸餾，而不被破壞的難溶于水的成分。

這類成分在100℃時(shí)有一定蒸汽壓,沸騰時(shí),該類成分隨水蒸氣一并帶出,再用油水分離器或有機(jī)溶劑萃取法,將這類成分自餾出液中分離.如中藥揮發(fā)油的提取常采用此法。根據(jù)原理：道爾頓分壓定律即：P=PA+PBP—總蒸氣壓；PA—A物分壓；PB—B物分壓當(dāng)P=大氣壓時(shí)則沸騰二、水蒸氣蒸餾法129總混合液體bp.<混合物中沸點(diǎn)最低物質(zhì)例：沸點(diǎn)混合后沸點(diǎn)℃

水

100760mmHg

69.25

苯80.1760mmHg（1）混合物的沸點(diǎn)比任一單一液體的沸點(diǎn)低；（2）沸點(diǎn)高的可較低溫度下被水蒸氣蒸餾出來(lái)。

水蒸氣蒸餾法操作、設(shè)備均教簡(jiǎn)單。

總混合液體bp.<混合物中沸點(diǎn)最低物質(zhì)130第二章天然藥化學(xué)成分的一般研究2課件131三、超臨界流體萃取法(SupercriticalFluidExtraction-SFE)

超臨界萃取法是一種集提取和分離于一體,又基本上不用有機(jī)溶劑的新技術(shù)。SF是在臨界溫度和臨界壓力以上介于氣體和液體之間的流體。SF同時(shí)具有液體和氣體的雙重特征，它的密度與液體相似，粘度與氣體相近，擴(kuò)散系數(shù)雖不及氣體大，但比液體大100倍。

第二章天然藥化學(xué)成分的一般研究2課件132超臨界流體萃取的主要原理

物質(zhì)的溶解過(guò)程包括分子間的相互作用和擴(kuò)散作用。物質(zhì)的溶解與溶劑的密度、擴(kuò)散系數(shù)成正比，與粘度成反比，因此，超臨界流體對(duì)許多物質(zhì)有很強(qiáng)的溶解能力。且在溫度或壓力變化時(shí)，流體的密度、粘度和擴(kuò)散系數(shù)隨著改變，與溶質(zhì)的親和力也跟著改變，從而使不同性質(zhì)的溶質(zhì)被分段萃取或分步析出，達(dá)到萃取、分離目的。

超臨界流體萃取的主要原理133

可以作為超臨界流體的物質(zhì)很多如CO2、NH3、C2H6、CCl2F2、C7H16等，實(shí)際應(yīng)用CO2較多。CO2的優(yōu)點(diǎn)：1.臨界溫度（Tc=31.4℃）接近室溫，臨界壓力（Pc=7.37MPa）也不太高；2.化學(xué)惰性；3.無(wú)毒、無(wú)味、無(wú)嗅，不易燃易爆；4.價(jià)格便宜CO2在高于臨界溫度與臨界壓力的條件下，溶出中藥原料中的成分，當(dāng)壓力與溫度恢復(fù)常壓或常溫時(shí)，溶解在CO2流體中的成分立刻與氣態(tài)CO2分開(kāi)，達(dá)到萃取成分的目的。可以作為超臨界流體的物質(zhì)很多134

CO2超臨界流體對(duì)物質(zhì)溶解作用有一定選擇性，主要和物質(zhì)的極性、沸點(diǎn)、分子量相關(guān)密切。1.極性較低的化合物如酯、醚、內(nèi)酯和環(huán)氧化合物易萃?。?.極性較大的化合物如羥基、羧基較多，萃取較難。3.高分子化合物如蛋白質(zhì)、樹膠等，則很難萃取。CO2超臨界流體對(duì)物質(zhì)溶解作用有一定選擇性，主要和物質(zhì)的135如何擴(kuò)大超臨界流體萃取的適用范圍？

加夾帶劑

夾帶劑是在被萃取物質(zhì)和超臨界流體組成的二元系統(tǒng)中加入的第三組分，它可以改善原來(lái)物質(zhì)的溶解度如何擴(kuò)大超臨界流體萃取的適用范圍？136

夾帶劑的研究與應(yīng)用，很大程度上擴(kuò)大了超臨界流體萃取法的萃取分離范圍。一般情況下，對(duì)溶質(zhì)具有很好溶解度的溶劑往往是很好的夾帶劑，常用甲醇、乙醇、丙酮等。夾帶劑的用量一般不超過(guò)15%。

其中，二氧化碳超臨界萃取法（SFE-CO2）已成功用于多種揮發(fā)油提取分離，如辣椒油和月見(jiàn)草油的萃取。通過(guò)加入夾帶劑成功地用于銀杏葉中總黃酮和總內(nèi)酯的萃取、穿心蓮中穿心蓮內(nèi)酯、丹參有效成分的萃取。

夾帶劑的研究與應(yīng)用，很大程度上擴(kuò)大了超臨界流體萃取法的萃取137CO2-SFE的優(yōu)點(diǎn)：

①低溫萃取，可防止熱不穩(wěn)定的成分被破壞或逸失；②幾乎不使用有機(jī)溶劑，無(wú)溶劑殘留，對(duì)環(huán)境無(wú)污染；③提取效率高，節(jié)約能耗。CO2-SFE的優(yōu)點(diǎn)：138四、其他方法1.升華法：

具升華性的化學(xué)成分，可用升華法直接從中藥原料中進(jìn)行提取，如從茶葉中提取咖啡因，從樟木中提取樟腦等。2.組織破碎提取法：

某些對(duì)熱不穩(wěn)定成分可溶于水時(shí)，可用此法。3.壓榨法：

某些成分在新鮮原料中含量較高或新鮮原料富含肉質(zhì)可用壓榨法四、其他方法1394.超聲波提取

利用超聲波的空化作用和附加作用（如機(jī)械振動(dòng)、乳化、擴(kuò)散粉碎），使細(xì)胞壁破裂，加速植物有效成分溶出。

與常規(guī)方法比較：提取時(shí)間短、溫度低、收率高。目前廣泛應(yīng)用于中藥質(zhì)量分析和少量提取中。4.超聲波提取利用超聲波的空化作用和附加作用（如機(jī)械振動(dòng)、1405.微波輔助萃取技術(shù)

微波+有機(jī)溶劑代替單一的萃取藥材組織受高頻電磁波輻射，分子運(yùn)動(dòng)加劇，細(xì)胞內(nèi)溫度迅速上升，細(xì)胞內(nèi)壓超過(guò)細(xì)胞壁的承受力，細(xì)胞破裂，有效成分自由流出。另外，微波產(chǎn)生的電磁場(chǎng)，可加速被萃取物向萃取劑界面擴(kuò)散，從而使萃取速度提高數(shù)倍，同時(shí)還降低了萃取溫度。優(yōu)點(diǎn)：萃取時(shí)間短、溶劑用量少、設(shè)備簡(jiǎn)單、成本低、提取效率高、產(chǎn)品質(zhì)量好。目前微波萃取已用于多項(xiàng)中藥浸取生產(chǎn)線中，如葛根、茶葉、銀杏等。5.微波輔助萃取技術(shù)微波+有機(jī)溶劑代替單一1416.酶解提取法

酶解提取法是在傳統(tǒng)提取方法的基礎(chǔ)上，根據(jù)植物細(xì)胞壁的構(gòu)成，利用酶的極高催化活性和專一性等特點(diǎn)，選擇相應(yīng)的酶，將細(xì)胞壁破壞，從而使植物細(xì)胞內(nèi)有效成分更易溶解、擴(kuò)散出來(lái)。

常用于植物細(xì)胞破壁的酶：纖維素酶、半纖維素酶、果膠酶、復(fù)合酶等。優(yōu)點(diǎn)：條件溫和、節(jié)約能耗、效率高。6.酶解提取法酶解提取法是在傳統(tǒng)提取方法的基礎(chǔ)上，根142第二節(jié)、天然藥物有效成分的分離方法

利用共存成分結(jié)構(gòu)性質(zhì)差異（不同點(diǎn)）一、兩相萃取法（溶劑分配法）

1.簡(jiǎn)單萃取

是利用混合物中各成分在兩相溶劑中分配系數(shù)不同而達(dá)到分離的方法。兩相萃取法的兩相往往是互相飽和的水相和有機(jī)相?；旌衔镏懈鞒煞衷趦上嘀蟹峙湎禂?shù)相差越大，則分離效率越高。

第二節(jié)、天然藥物有效成分的分離方法143分配系數(shù)：指在一定條件下某成分在兩相溶劑中溶解分配達(dá)到平衡時(shí)，該成分在兩種溶劑中濃度的比值。(1)、分配系數(shù)：K=C上/C下(2)、分離因子：β=KA/KB（KA>KB），表示分離難易一般β>100，簡(jiǎn)單萃取(2-3次)β<50，10次以上β=1，無(wú)法分離分配系數(shù)：指在一定條件下某成分在兩相溶劑中溶解分配達(dá)到平衡時(shí)144

一般地：極性較大的成分：選用正丁醇—水（如分離皂苷類）；極性中等的成分：選用乙酸乙酯—水（如分離黃酮類）；極性小的成分：選用氯仿（或乙醚）—水（如分離苷元及游離生物堿）

一般地：1452.

酸堿溶劑萃取

P19

利用混合物中各組分酸堿性的不同而進(jìn)行分離。pH與存在狀態(tài)：對(duì)于酸、堿及兩性化合物，pH改變可使存在狀態(tài)改變,即控制溶液的pH值，可控制存在狀態(tài)。pKa=-log([A-][H+]/[AH])=-log[H+]-log([A-]/[AH])=pH-log([A-]/[AH])log([A-]/[AH])=pH-pKa>2即認(rèn)為完全解離。

2.

酸堿溶劑萃取P19146

對(duì)于難溶于水的有機(jī)堿性成分，可與無(wú)機(jī)酸成鹽溶于水，借此可與非堿性難溶于水的成分分離；對(duì)于具有羧基或酚羥基的酸性成分，可與堿成鹽而溶于水；對(duì)于具有內(nèi)酯或內(nèi)酰胺結(jié)構(gòu)的成分可被皂化（形成鹽）溶于水，借此與其他難溶于水的成分分離。對(duì)于難溶于水的有機(jī)堿性成分，可與無(wú)機(jī)酸成鹽溶于水，147

3.PH梯度萃取法：P19

根據(jù)在一定PH下某成分可成鹽或可游離，改變?cè)摮煞衷谌軇┫到y(tǒng)中的分配系數(shù)而與其他成分分離。

以PH成梯度的酸水液,依次萃取用親脂性溶劑溶解的堿性成梯度的混合堿性成分；或以PH成梯度的堿水液,依次萃取用親脂性溶劑溶解的酸性成梯度的混合酸性成分。3.PH梯度萃取法：P19148二、系統(tǒng)溶劑分離法P20

1.混合物溶于水，利用各組分極性差別，依次用極性由小到大的有機(jī)溶劑進(jìn)行萃取，將混合物中各化學(xué)成分按極性由小到大的順序萃取出來(lái)。

2.柱色譜法，將混合物與吸附劑拌樣裝柱，依次用極性由小到大的有機(jī)溶劑分別洗脫。

該法常用于中藥化學(xué)成分的初步分離。二、系統(tǒng)溶劑分離法P20149三、沉淀法

提取濃縮液中加入某種試劑或溶劑使有效成分生成沉淀，或雜質(zhì)沉淀

如果將需要分離獲得的成分生成沉淀，這種沉淀反應(yīng)必須是可逆的；如果是不需要的成分，則將生成的沉淀除去，此時(shí)所用的沉淀反應(yīng)可以是不可逆的。

三、沉淀法1501.溶劑沉淀法水提醇沉法

中藥水提液中加入乙醇至60～80％，放置，蛋白質(zhì)、多糖、果膠、粘液質(zhì)可沉淀。2.酸堿沉淀法堿性成分，可與無(wú)機(jī)酸成鹽溶于水，加堿又游離沉淀;酸性成分在堿中成鹽溶解，在酸中游離沉淀。1.溶劑沉淀法151

3.專屬試劑沉淀法

某些試劑能選擇性地沉淀某些（類）成分，稱為專屬試劑沉淀法。如雷氏銨鹽能與生物堿類生成沉淀；膽甾醇能與甾體皂苷沉淀；明膠能沉淀鞣質(zhì)，可用于分離或除去鞣質(zhì)。

4.鹽析法

在混合物水溶液中加入易溶于水的無(wú)機(jī)鹽，至一定濃度或飽和狀態(tài)，使某些中藥成分在水中溶解度降低而析出，或用有機(jī)溶劑萃取出來(lái)。最常用的無(wú)機(jī)鹽為NaCL。第二章天然藥化學(xué)成分的一般研究2課件152

四

、結(jié)晶、重結(jié)晶法

利用混合物中各成分在溶劑中的溶解度不同達(dá)到的分離方法。

結(jié)晶法是純化物質(zhì)最后階段常采用的方法，其目的是進(jìn)一步分離純化。中藥中的一些親水性成分，如多糖、皂苷等雖往往無(wú)固定的晶形，常為無(wú)定形粉末，但也需通過(guò)結(jié)晶進(jìn)行純化，以利于結(jié)構(gòu)測(cè)定。問(wèn)題：

重結(jié)晶的操作？四

、結(jié)晶、重結(jié)晶法153

結(jié)晶和重結(jié)晶操作：

提取或分離物↓溶于選擇的溶劑，加熱成飽和溶液，趁熱過(guò)濾濾液