血液系統(tǒng)疾病常見動(dòng)物模型

血液系統(tǒng)疾病常見動(dòng)物模型造血系統(tǒng)疾病〔Diseaseofhematopoieticsystem〕，除了地中海貧血等少數(shù)疾病具有明型，就成為爭辯造血系統(tǒng)疾病的發(fā)病機(jī)理、探究型治療技術(shù)和藥爭辯的根本工具。一、缺鐵性貧血?jiǎng)游锬Ｐ腿辫F性貧血〔irondeficiencyanemia，IDA〕是體內(nèi)用來合成血紅蛋白〔HGB〕的貯存鐵缺乏，HGB合成削減而導(dǎo)致的小細(xì)胞低色素性貧血，主要發(fā)生于以下狀況：〔1〕鐵需求增加而攝入缺乏，見于飲食中缺鐵的嬰幼兒、青少年、孕婦和哺乳期婦女〔2〕鐵吸取不良，見于胃酸缺乏、小腸粘膜病變、腸道功能紊亂、胃空腸吻合術(shù)后以及服用抗酸和H2受體及抗劑等〔3〕鐵喪失過多，見于反復(fù)屢次小量失血，如鉤蟲病、月經(jīng)量過多等。IDA是一種多發(fā)性疾病，據(jù)報(bào)道，在多數(shù)進(jìn)展中國家，約2/3的兒童和育齡婦女缺鐵，1/3IDAIDA的預(yù)防和治療具有重要的意義。在這些爭辯中，缺鐵性貧血的動(dòng)物模型〔AnimalmodelofIDA〕，又是實(shí)施爭辯的根底工具。常見的IDA動(dòng)物模型的構(gòu)建技術(shù)如下：試驗(yàn)動(dòng)物：一般選用SD大鼠，465g左右，HGB≥130g/L。AOACEDTA浸泡處理以去除飼料中的鐵，飼料中的含鐵量是誘導(dǎo)SD大鼠形成缺鐵性貧血模型的關(guān)鍵，現(xiàn)有爭辯說明，飼喂含鐵量<15.63mg/Kg35天，SDIDA表現(xiàn)，而飼喂含鐵40.30mg/Kg的飼料SD大鼠消滅缺鐵，但并不表現(xiàn)貧血病癥。建模時(shí)一般承受去離2靜脈放血法，1～1.5ml/次，2次/周。模型指標(biāo)：〔1〕HGB≤100g/L；〔2〕中心淡染區(qū)擴(kuò)大，MCV減小、MCHC降低；〔3〕血清鐵〔SI〕降低，常小于10μmol/L，血清總鐵結(jié)合力〔TIBC〕60μmol/L。需要指出的是，以上模型不能用于鐵吸取不良相關(guān)IDA的防治爭辯。依據(jù)具體的爭辯需要，也可以適當(dāng)調(diào)整建模方法。二、再生障礙性貧血?jiǎng)游锬Ｐ驮偕系K性貧血〔aplasticanemia〕，簡稱再障，系多種病因引起的造血系統(tǒng)退行性變，合征。再障的發(fā)病機(jī)制尚未完全說明，目前存在四種假說：〔1〕“種子”學(xué)說，有證據(jù)表明，再障與患者造血干細(xì)胞存在某種內(nèi)在缺陷有關(guān)。〔2〕“土壤”學(xué)說，有證據(jù)說明，再障與患者的造血微環(huán)境存在某種缺陷，對(duì)造血支持不良有關(guān)?！?〕“蟲子”學(xué)說，有證據(jù)說明，免疫反響、藥物、病毒損傷造血干細(xì)胞可致再障發(fā)生。〔4〕“遺傳”學(xué)說，有證據(jù)說明再障具有遺傳易感性。動(dòng)物模型。目前已報(bào)道的再障動(dòng)物模型構(gòu)建技術(shù)有：〔一〕化學(xué)方法建模腺嘌呤致大鼠腎性貧血模型試驗(yàn)動(dòng)物：SD大鼠，雌雄不拘。建模方法：腺嘌呤腎毒性建模法，由腎臟分泌的粗紅細(xì)胞生成素〔EPO〕是紅系、巨核系分化、成熟所必需的細(xì)胞因子，腺嘌呤可導(dǎo)致腎臟病變，使EPO分泌缺乏，進(jìn)而導(dǎo)致紅系和巨核系造血障礙。王威等于 1999年報(bào)道，利用飼喂含腺嘌呤 0.75%，投飼量300mg/(kg.d)，連續(xù)喂養(yǎng)7周，獲得腎衰竭貧血模型，試驗(yàn)動(dòng)物紅細(xì)胞、血紅蛋白及紅細(xì)胞壓積等主要紅系指標(biāo)均、血小板均顯著下降。用途：可作為腎性貧血的發(fā)病機(jī)制爭辯、疾病進(jìn)展?fàn)庌q和治療藥物篩選的動(dòng)物模型。馬利蘭致骨髓抑制的再障模型試驗(yàn)動(dòng)物：小鼠、SD大鼠、家兔，雌雄不拘。給藥，均可導(dǎo)致造血干細(xì)胞、骨髓微環(huán)境的抑制，形成再障?！?〕口服給藥，15mg/kg/周或30mg/kg/118-153mg/kg時(shí)，可致家兔的再障，消滅全血細(xì)胞削減、淋巴細(xì)胞比值增加、骨髓黃化和骨髓纖維化。〔2〕一次性給藥，35mg/kg腹腔注射，可致大鼠再障?！?〕口服給藥，18mg/kg/天，連續(xù)給藥10天，可致NIH小鼠再障，消滅血細(xì)胞削減和骨髓有核細(xì)胞降低，建模穩(wěn)定、試驗(yàn)動(dòng)物存活率高。苯致骨髓抑制的再障模型試驗(yàn)動(dòng)物：CD1小鼠、家兔。建模方法：苯類化學(xué)物質(zhì)進(jìn)入動(dòng)物體內(nèi)后，在骨髓富集〔可達(dá)血清濃度的20倍〕，對(duì)骨〔1〕1:1混合物，4.0ml/kg3次/周，共給藥25次，可致CD1小鼠再障，表現(xiàn)為全血細(xì)胞削減、骨髓黃化、脂肪細(xì)胞等非〔0.5-1.0ml/kg/天，3次/2周以上，可致全血細(xì)胞削減、造血細(xì)胞削減?！捕澄锢矸椒ńＭ獠空找７ㄔ囼?yàn)動(dòng)物：小鼠，雌雄不拘。建模方法：γ射線等高能射線可穿透機(jī)體，起DNA損傷，干擾DNA復(fù)制，阻斷有絲分裂，對(duì)造血干細(xì)胞等分裂增值活潑的細(xì)胞有強(qiáng)抑制作用。使用鈷60等放射性同位素，亞致死劑量〔6.0Gy〕輻照以后，可致小鼠全血再障，維持時(shí)間較長，但輻照的劑量不好把握，稍大易致小鼠死亡，稍低則個(gè)別小鼠不易到達(dá)造血抑制效果。內(nèi)部照耀建模法試驗(yàn)動(dòng)物：小鼠，雌雄不拘。153Sm〔釤〕、89Sr〔鍶〕、32P〔32磷〕、186Re(186錸)、188Re(188錸)、105Rh〔105銠〕、177LU〔177镥〕60Co〔60鈷〕，能產(chǎn)生β射線及親6.4或2μCi腹腔11~12周齡的小鼠，6μCi35d后全部死亡．2μCi組動(dòng)物全部存活。6μCi21d后股骨骨髓顯示為脂肪髓。全血細(xì)胞削減，骨髓有核細(xì)胞數(shù)和CFU-S32P1.4mCi/kg體重也可導(dǎo)致再障。三、溶血性貧血?jiǎng)游锬Ｐ腿苎载氀?hemolyticanemia,HA)是一種常見的貧血類型，是指由于某種緣由使紅細(xì)胞存活期縮短，破壞增加，超過了骨髓代償力量所引起的一類貧血，是常見的造血系統(tǒng)疾病?！驹炷C(jī)制】動(dòng)物注射肯定量的乙酰苯肼(acetylphenylhydrazine,APH)，APH是一種強(qiáng)糖-6-磷酸脫氫酶，促進(jìn)血紅蛋白變性而形成海氏小體，也可直接破壞紅細(xì)胞的膜蛋白和脂類，使膜溶解裂開，紅細(xì)胞崩解，造成溶血性貧血?！驹炷７椒ā?、4、7APH0.2g/kg、0.1g/kg、0.2g/kg9天造模成功，其他給藥方法也可以造成此模型。大鼠第1、4天皮下注射APH0.16g/kg、0.08g/kg8天造模成功；0.2g/kg10天造模成功。家兔以2％APH生理鹽水溶液給試驗(yàn)動(dòng)物皮下或肌內(nèi)注射2～30.1g/kg，即可建立溶血性貧血模型。觀看指標(biāo)：一般生長狀態(tài)觀測，包括一般行為、毛發(fā)、出血點(diǎn)及死亡狀況；外周血常規(guī)參數(shù)測定，如血紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、白細(xì)胞計(jì)數(shù)、血小板計(jì)數(shù)和血紅蛋白含量；血細(xì)胞化學(xué)指標(biāo)變化，如中性粒細(xì)胞的堿性磷酸酶、酸性磷酸酶、三磷腺苷酸酶、琥珀酸脫氫酶、葡萄糖-6-磷酸酶和網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)，海氏小體，骨髓象檢查等指標(biāo)?！灸Ｐ吞攸c(diǎn)】注射APH后，試驗(yàn)組動(dòng)物間續(xù)消滅活動(dòng)削減、毛發(fā)暗淡無光澤、攝食削減、體重下降、疲乏無力、嗜睡、皮膚蒼白等現(xiàn)象。外周血血紅蛋白和紅細(xì)胞進(jìn)展性下降；網(wǎng)織紅細(xì)胞、海氏小體和白細(xì)胞總數(shù)則顯著增多。中性粒細(xì)胞的堿性磷酸酶、酸性磷酸酶、三磷腺苷酸酶、琥珀酸脫氫酶、葡萄糖-6-磷酸酶，骨髓均有不同程度特別變化。【模型評(píng)估和應(yīng)用】用注射強(qiáng)氧化劑APH的方法可制作出符合臨床特征的溶血性貧血?jiǎng)游锬Ｐ停珹PH用量可通過預(yù)試驗(yàn)摸索，上述劑量可供參考。本方法建模周期短，操作簡性溶血性貧血供給了一種簡易模型。四、白細(xì)胞削減癥動(dòng)物模型人類白細(xì)胞削減癥是臨床上常見的病癥白細(xì)胞的藥物，可用環(huán)磷酰胺、馬利蘭等化學(xué)物質(zhì)，過量x射線、γ射線輻射損傷，細(xì)菌、真菌感染和遺傳因素來建立白細(xì)胞削減癥動(dòng)物模型。環(huán)磷酸胺誘發(fā)的白細(xì)胞削減癥動(dòng)物模型(animalnmodelofcyclophosphamideinducedlenkocytopenia)【造模機(jī)理】白細(xì)胞生成削減。【造模方法】以小鼠作為試驗(yàn)動(dòng)物模型，按每公斤體重腹腔注射或皮下注射環(huán)磷酰胺50~70mg。用2mg/m10.5mL，即可成功地復(fù)制白細(xì)胞削減癥動(dòng)物模型，按同樣方法亦可復(fù)制白細(xì)胞削減癥的大鼠模型。食物中毒性白細(xì)胞缺乏癥貓模型(catmodelofalimentarytoxicaleucia)【造模機(jī)理】ATA是由于人食用真菌污染的食物引起致死的真菌中毒。人的ATA表現(xiàn)為白細(xì)胞進(jìn)展性削減、貧血、壞死性咽峽炎、發(fā)熱、出血及膿毒血癥?！驹炷７椒ā?981年，Lutsky等用倍半萜(Sesquiterpene)T-2毒素(從鐮刀菌屬的類分支孢菌中分別出來的單端孢菌素)48h0.08mg/kg體重，直至發(fā)?。⒘耸澄镏卸居腥泶嗳鯚o力，便血、后腿共濟(jì)失調(diào)、嘔吐、厭食、脫水、體重減輕?！灸Ｐ蛻?yīng)用】血液學(xué)、生物化學(xué)、免疫學(xué)及臨床方面的問題。但是，小鼠、大鼠、脈鼠、免、犬、豬、綿ATA的動(dòng)物模型。周期性粒細(xì)胞削減癥犬模型(dogmodelofcyclicneutropenia)【造模機(jī)理】21d(14~25d)發(fā)作一次，每次持續(xù)約1周。發(fā)作時(shí)有全身不適、頭痛、感染、發(fā)熱。嬰兒患者病死率高?！驹炷７椒ā?0h[(0~100)×105／L]9~13d發(fā)作一次，2~5d。伴嚴(yán)峻感染，待粒細(xì)胞恢復(fù)后1~3d1~2歲，嚴(yán)峻，死亡更早。60Co-γ射線輻射建立小鼠白細(xì)胞削減癥模型【造模機(jī)理】人類在自然條件下受到自然和輻射的影響常引發(fā)白細(xì)胞削減等病理現(xiàn)象,在臨床上放療也是治療腫瘤的主要方法之一,但放療的主要副反響為骨髓抑制，從而導(dǎo)致外周血白細(xì)胞下降?！驹炷７椒ā啃∈?2只，雌雄各半，分為4組：ICR小鼠雌性組、ICR小鼠雄性組、C57BLP6J小鼠雌性組和C57BLP6J小鼠雄性組,每組8只。自眼眶靜脈叢取全血20μL，測定正常小鼠外周血白細(xì)胞總數(shù)后,承受60Co-γ射線一次性全身照耀小鼠,源皮距為1.5m，照耀劑量為5Gy，照耀后第3d測定外周血白細(xì)胞總數(shù)。結(jié)果顯示無論雄性還是雌性ICR小鼠的正常白細(xì)胞數(shù)量均極顯著低于C57BLP6J說明雄性C57BLP6J在照耀后第3d白細(xì)胞數(shù)量顯著高于其雌性小鼠,提示雄性C57BLP6J5Gy的照耀劑量下,小鼠的白細(xì)胞數(shù)量隨時(shí)間持續(xù)降低,而且隨時(shí)間推移小鼠消滅被毛蓬松,活動(dòng)減5dICR小鼠有死亡現(xiàn)象發(fā)生。由此提示在造模后應(yīng)馬上開頭進(jìn)展藥物干預(yù),可以到達(dá)較佳的治療效果，藥物干預(yù)最遲不行超過照耀后第3d。五、白血病動(dòng)物模型類白血病可以用化學(xué)(如烷化刑)、物理(如電離輻射)、生物(如逆轉(zhuǎn)錄病毒)以及轉(zhuǎn)基因方法，在不同動(dòng)物〔小鼠、豚鼠、大鼠、貓、牛、長臂猿等〕誘發(fā)白血病，建立動(dòng)物模型。T淋巴細(xì)胞白血病小鼠(L615)動(dòng)物模型(animalmodelofT1ymPhocytic1eukemia)【造模方法】1965年，由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院血液爭辯所用津638病毒誘發(fā)的昆明小鼠白血病組織的無61581d埋伏期，取一只患白血病小鼠，用生理鹽水制備脾細(xì)胞懸液(25％)4615小鼠，均發(fā)生白血病，平均存活時(shí)間為29.7d，以患病小鼠的脾臟為瘤源，在615小鼠連續(xù)移植傳代，能百分之百發(fā)病，且存活時(shí)30代后建成穩(wěn)定的白血病模型．稱L615白血病。L615小鼠存活時(shí)間為(6.7±1.2)d，除皮下接種外，腹腔接種亦可百分之百發(fā)病，存活時(shí)間稍短，但無腹水形成。L615小鼠白血病對(duì)各類抗腫瘤藥物有不同程度的敏感性。在7665氟尿嘧啶和5氟尿嘧啶核苷可使4％1個(gè)月以上；16種烷化劑中，149種藥物可使局部動(dòng)物存活1個(gè)月以上。L615T細(xì)胞白血病小鼠的脾細(xì)胞懸浮體外培育還建立了L615T細(xì)胞白血病細(xì)胞系，可在體外長期傳代培育，亦可長期冷凍保存?zhèn)溆谩615T細(xì)胞TT細(xì)胞白血病發(fā)鼠白血病模型系統(tǒng)，如L7212、L7710、L7711、L759、L7811等均為T淋巴系統(tǒng)白血病。粒單核細(xì)胞白血病〔WEHI-3〕小鼠模型(animalmodelofmyelomonocyticleukemia)【造模方法】用礦物油注入小鼠體內(nèi)造成產(chǎn)生白血病的體內(nèi)環(huán)境。1966年．Qsserman等建立?！獑?BALB/c18只，每只小鼠腹腔注射醫(yī)用石0.4mL1115周齡時(shí)各重復(fù)注射一次。在714周齡之間，皮下注射0.01mg(0.05m1橄欖油中)5次，170.25mg一次。其個(gè)11只小鼠發(fā)生腫瘤，第一批是在6月齡時(shí)〔即停頓注射石蠟油2個(gè)月后)發(fā)生腫9~15月齡間發(fā)生。這種腫瘤稱為wEHI-3。從原代?！獑魏思?xì)胞白血病小鼠取數(shù)個(gè)實(shí)體瘤制備單細(xì)胞懸液8只受體小17~21d4只小鼠脾細(xì)胞懸液再移植傳代，每種懸液注4320d，以后的傳代時(shí)間14d4個(gè)亞系即為WEHI-3A、B、C、D。A50%40條染色體，B39C亞系：非綠色白血?。?0條染色體。D亞系：綠色白血病，為四倍體核型。其核型在移植傳代過程中可發(fā)生變化，如B亞系，第2、第3次移植傳代時(shí)，391條具有近端著絲粒的標(biāo)記染色體，而在14~15次移植傳代之間就變成中間著絲粒的標(biāo)記染色體，在移植過程中患粒一單核細(xì)胞白血病的BALB/c小鼠血象與骨髓象均有變化。人類白血病的小鼠模型(micemodelofhumanmyeloidleukemia)【造模機(jī)理】用免疫耐受性強(qiáng)的人類胎兒骨片植入重癥聯(lián)合免疫缺陷病(SCID)血細(xì)胞與造血微環(huán)境均植入小鼠，建立具有人類造血功能的SCID小鼠模型稱為SCID－h(huán)u小鼠。再將髓系白血病患者的骨髓細(xì)胞植入SCID－h(huán)u小鼠皮下的人類胎兒骨片內(nèi)，植入的髓系白血病細(xì)胞選擇性生長在SCID－h(huán)u小鼠體內(nèi)的人類造血微環(huán)境中，即為人類髓系白血病SCID小鼠是由于其scid所致。T、B淋巴細(xì)胞功能聯(lián)合缺陷，這種小鼠能承受人類器官移植物。【造模方法】SCID-hu小鼠：CB-17scid/scid生殖的近交小鼠(SCID)，6~8周齡時(shí)用抗生素處理。在無菌條件下，從19~23妊娠周齡的胎兒取出股骨和脛骨，剪成5mm×５mm×l０mm的骨片，植入SCID小鼠皮下，并從每個(gè)胎兒供體制備胸腺細(xì)胞用于檢測同種異體HLA。白血病細(xì)胞注射：急性髓性白血病患者骨髓細(xì)胞(0.4～2)×104個(gè)活細(xì)胞(常用凍存解凍后的細(xì)胞)10％胎牛血清的ＲPMＩ164020d,用微注射器將細(xì)胞懸液直接注射人6~8周前植入SCID-hu小鼠的人胎骨片內(nèi)HLA病細(xì)胞的骨移植片再制備細(xì)胞懸液，取(0.5~2)×1062SCID-hu受體小鼠的移植骨片內(nèi)。處理小鼠MHC-I(主要組織相容性復(fù)合體I類)抗原的單抗，直接與染料熒光素異硫氰化物或藻紅蛋白結(jié)合，用流式細(xì)胞儀將細(xì)胞分類并分析細(xì)胞來源。2～3周時(shí)，骨片內(nèi)有壞死與纖維化，CFU－GMBFU－E削減，未見造血中心；移植4～5周時(shí)，骨片內(nèi)消滅由淋巴系與未成熟的髓系細(xì)胞組成的造血中心；6～820周。用MEＭ－43(人類細(xì)胞抗原的特異抗體)與Ly5.1(小鼠血細(xì)胞的特異抗體)類細(xì)胞占705％~20％。胎兒骨片內(nèi)的人類基質(zhì)細(xì)胞可刺激人的造血干細(xì)胞的增殖與分化，以維持正常造血。將人的急性髓性白血病細(xì)胞注入SCID-hu小鼠的一塊胎骨片內(nèi)，4~6周后，胎兒骨片內(nèi)的正常造血細(xì)胞被急性白血病細(xì)胞的增殖所取代，而且還選擇性地轉(zhuǎn)移到植入的其他胎骨片內(nèi)?！灸Ｐ蛻?yīng)用】該模型是人類白血病細(xì)胞生長在小鼠體內(nèi)的人類造血微環(huán)境中立原理與方法也適用于其他白血病與惡性腫瘤動(dòng)物模型的建立片與成人骨艙造血釘些不同。急性B淋巴細(xì)胞白血病動(dòng)物模型的建立【造模機(jī)理】急性白血病是兒童常見的血液系統(tǒng)腫瘤,急性淋巴細(xì)胞白血病(ALL)約占70%,其中80%來自B細(xì)胞系,Nalm-6是急性人B淋巴細(xì)胞系白血病細(xì)胞株,在一般的RMPI-1640培育基中簡潔生長，生殖快，惡性度高,能引起彌散性疾病,可移植入裸鼠或SCID小鼠。裸鼠T淋巴細(xì)胞缺陷，而SCID小鼠T、B淋巴細(xì)胞聯(lián)合缺陷,更簡潔移植成功,但是價(jià)格昂貴。為此，本試驗(yàn)承受裸鼠建立白血病動(dòng)物模型?！驹炷７椒ā竣儆脽o菌PBS液將環(huán)磷酰胺濃度調(diào)整到10mg/mL,腹腔注射環(huán)磷酰胺2mg/只,連續(xù)注射2d;24h后,收集處于對(duì)數(shù)生長期的Nalm-6細(xì)胞,1000r/min離心5min后,懸浮于無菌PBS中,調(diào)整細(xì)胞密度至2.5×107個(gè)/mL,尾靜脈注射5×106個(gè)/只(200μL)②每隔1～2d觀看小鼠病癥,以后肢消滅癱瘓為發(fā)病標(biāo)準(zhǔn),記錄小鼠發(fā)病和死亡日期。③待小鼠瀕死時(shí),頸椎脫臼法將其處死,馬上取小鼠的肝、脾、肺、心臟、腎、腸、腦組織、骨髓、胰腺、睪丸、卵巢等,經(jīng)10%中性福爾馬林固定脫水、透亮、浸蠟、包埋,制成石蠟切片,H-E染色后在光鏡下觀看各個(gè)組織腫瘤細(xì)胞浸潤狀況。圖1裸鼠B系A(chǔ)LL白血病動(dòng)物模型Fig.1ThenudemicemodelofB-ALL腫瘤模型小鼠組織內(nèi)有大量腫瘤細(xì)胞浸潤(見箭頭所示)圖3小鼠組織病理檢查結(jié)果(×100倍)Fig.3 Thehistopathologicalexaminationofeachorgan(×100)【模型特點(diǎn)】白血病小鼠的發(fā)病時(shí)間不僅與小鼠周齡有關(guān),也與注射的腫瘤細(xì)胞數(shù)目有親熱關(guān)系,但Gunther用6周齡的SCID小鼠,每只注射1×106個(gè)Nalm-6細(xì)胞,平均32d后肢行動(dòng)緩慢,39d癱瘓;Uckun用6～7周齡的雌性SCID小鼠[5],每只注射1×106個(gè)Nalm-6細(xì)胞,有56%的小鼠平均33d發(fā)生癱瘓,39d全部死亡,兩爭辯小鼠發(fā)病時(shí)間相像;Herrera用10～13周齡的SCID小鼠[6],注射5×106個(gè)Nalm-6細(xì)胞后平均36d承受5～6周的裸鼠,每只注射5×106個(gè)Nalm-6細(xì)胞,平均20d發(fā)病,模型建立成功率100%,但是發(fā)病時(shí)間比上述報(bào)道早,可能是由于使用的小鼠周齡小,注射腫瘤細(xì)胞數(shù)目多,進(jìn)入小鼠體內(nèi)后生長生殖較快,導(dǎo)致小鼠發(fā)病較早。2.人慢性粒細(xì)胞白血病動(dòng)物模型的建立【造模機(jī)理】目前建立人慢性粒細(xì)胞白血病動(dòng)物模型的方法主要有3種,包括用慢性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞種植免疫缺陷鼠(SCID或NOD/SCID)、用表達(dá)P210bcr/abl逆轉(zhuǎn)錄病毒載體轉(zhuǎn)染小鼠骨髓細(xì)胞并移植入正常鼠體內(nèi)和構(gòu)建bcr/abl轉(zhuǎn)基因鼠?！驹炷７椒ā棵庖呷毕菪∈螅寺０籽∧Ｐ停?023年Ramshaw等覺察在體外半固體培育基上用人GM－CSF拮抗劑E21R可抑制全部7個(gè)CML患者CML細(xì)胞的克隆形成，繼而他們承受人CML細(xì)胞(1×108細(xì)胞／只)分別輸入SCID鼠和人GM－CSF轉(zhuǎn)基因SCIDCML細(xì)胞在SCID小鼠體內(nèi)難以定植，而在轉(zhuǎn)人GM－CSF基因的SCID小鼠體內(nèi)6周后CML明人CML細(xì)胞在體內(nèi)、體外生長均依靠人GM－CSF[7]。Nicolini等用表達(dá)人特異性的造血生長因子IL23GM－CSFSF的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體轉(zhuǎn)染的小鼠骨髓細(xì)胞接種NOD／SCID小鼠，324周后小鼠血清IL23、GM－CSF、SF可達(dá)ng／ml水平,將人造血干細(xì)胞或胎肝細(xì)胞移植到這些NOD／SCIDNOD／SCID,而紅系細(xì)胞和淋巴系細(xì)胞明顯削減[8]。由此可見，轉(zhuǎn)人GM－CSF基因的SCID鼠或NOD／SCID小鼠可用于制備較為抱負(fù)的人CML動(dòng)物模型。用表達(dá)P210bcrPabl逆轉(zhuǎn)錄病毒載體轉(zhuǎn)染小鼠骨髓細(xì)胞并移植正常鼠：Daley等分別雌性BALB／c小鼠的骨髓細(xì)胞，用表達(dá)bcr／abl融合基因的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體轉(zhuǎn)染，篩選后56～12周齡經(jīng)致死劑量(900cGy)照耀的同源雄性BALB／cCML相關(guān)病癥以及急性淋巴細(xì)胞性白血病[9]。bcrPabl轉(zhuǎn)基因小鼠模型：Honda等[18]P210bcr／abl轉(zhuǎn)基因小鼠進(jìn)展深入爭辯。TecTec啟動(dòng)子調(diào)控的基因僅特異性地表達(dá)在造血干細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中。他們用小鼠的Tec基因的啟動(dòng)子序列(-1948至+22)代替以前所使用的MT87只轉(zhuǎn)基因鼠中,84只轉(zhuǎn)基因小鼠首先消滅粒細(xì)胞特別增生、高血小板血癥，經(jīng)肯定時(shí)間后發(fā)生骨髓增殖綜合征(MPD)CML但它們的子代經(jīng)過一段埋伏期后表現(xiàn)骨髓增生綜合征CML轉(zhuǎn)基因鼠是格外重要的。【模型應(yīng)用】CML動(dòng)物模型的爭辯進(jìn)展快速,分子遺傳學(xué)和分子生物學(xué)技術(shù)的進(jìn)步使我們有可能制備出更加完善的CML動(dòng)物模型,用于我們對(duì)CML發(fā)病機(jī)理的爭辯和有效治療方法的探究。六、出血性疾病動(dòng)物模型特別、凝血系統(tǒng)的特別以及纖溶系統(tǒng)的特別。特發(fā)性血小板削減性紫癜〔ITP〕，因血小板因素特別導(dǎo)致。獲得性血友病A則因凝血系統(tǒng)的特別導(dǎo)致。目前，該兩種疾病已有相應(yīng)的動(dòng)物模型，均為兔和小鼠。特發(fā)性血小板削減性紫斑(idiopathicthrombocytopenicpurpura,ITP)兔、小鼠模型【造模機(jī)理】動(dòng)物體內(nèi)血小板消耗而導(dǎo)致血小板數(shù)量削減．故又稱為免疫性消耗性血小板削減癥。【造模方法】ITP兔模型：承受西蘭白兔，雄雌均可，體重2～4kg；脈鼠，大于3月齡均可，雌雄不拘。豚鼠抗兔血小板血清的(GP-APs)制備：用米巴比妥鈉(30mg/kg體重)從耳緣靜脈注6:1(V/V)從免頸動(dòng)脈取全血與酸性枸椽酸右旋糖(Acidcitratedextrose，ACD)混合，pH值4.5，經(jīng)離心，分別血小板，并洗滌，用生理鹽水稀釋制成混懸液。用上述血小板混懸液(10９血小板)123次(3×10９個(gè)血小飯)。末次注射后的第6天，從脈鼠心臟穿刺取血，離心后取上層血清，隨即分別用等量1:1(V/V)兔壓緊紅細(xì)胞和洗滌過的兔淋巴細(xì)胞各吸附血清一次，用生理鹽水稀釋，即為豚鼠抗免血小板抗血清，分裝后儲(chǔ)存于-70℃冰箱待用、按ELISA法和放射免疫沉淀法檢測抗血清效價(jià)。ITP模型的建立：急性短期兔ITP模型：苯巴比妥鈉麻醉兔，插入頸動(dòng)脈套管后。耳緣靜脈注射豚鼠抗兔