植物細胞工程實驗報告

5/5植物細胞工程實驗報告植物細胞工程實驗報告—（附）開題報告和自選試驗報告

李洋

級班

學號：20

2011年12月

實驗一、培養(yǎng)基母液的配制

分別稱取20倍用量的各種大量無機鹽，依次溶解于大約500mL去離子水中。（一種成分完全溶解后再加入下一種，最后加水，定容至1000mL后裝入試劑瓶中，存放冰箱內(nèi)備用。）

2.微量元素母液（200倍液）

分別稱取200倍用量的微量無機鹽，依次溶解于約500mL去離子水中，加水定容到1000mL。

3.鐵鹽母液（100倍液）

稱取100倍用量的Na2-EDTA（乙二胺四乙酸鈉）和FeSO4·7H2O，溶于約500mL去離子水中，最后定溶到1000mL。

4.鈣鹽母液(20倍):

稱取20倍用量的CaCl2·2H2O溶于500mL去離子水中，最后定溶到1000mL。

5.有機物質(zhì)母液（100倍液）

分別稱取100倍用量的各種有機物質(zhì)，依次溶解于約500mL去離子水中，定容至1000mL裝入棕色試劑瓶中，存放在冰箱中備用。

4.實驗結(jié)果及分析

4.1結(jié)果

按照步驟配好母液：大量元素、微量元素、鐵鹽、維生素等母液，放在冰箱中保存。

4.2實驗中注意事項：

1、配置一些難容的物質(zhì)時，為了保證母液濃度的準確性，一定要等藥品充分溶解后在定容。

2、稱量微量元素時要用分析天平，稱量時一定要精確。

3、母液配好后放入冰箱內(nèi)低溫保存，用時再按比例稀釋。

實驗二、香蕉吸芽的組織培養(yǎng)

然后，用洗衣粉清洗一遍，用自來水沖洗，轉(zhuǎn)入0.1%升汞浸泡15-20min，其間不斷攪拌，棄去升汞用無菌水洗3遍（無菌水漂洗：將從升汞中取出的香蕉吸芽組織塊轉(zhuǎn)入無菌水中漂洗，不斷搖動使漂洗干凈）留在瓶中備用。

2.2.2誘導培養(yǎng)

將香蕉吸芽放到無菌工作臺的無菌紙上，用消毒刀將外植體的假莖的最外層剝掉，以及有消毒刀將已經(jīng)變色的莖外面一小層也切掉，然后從外植體莖中間一分為四，接入誘導培養(yǎng)基，共8瓶。7天后觀察，發(fā)現(xiàn)誘導培養(yǎng)基中香蕉吸芽組織裂開并且有轉(zhuǎn)綠現(xiàn)象。

2.2.3繼代培養(yǎng)

將已經(jīng)啟動培養(yǎng)的香蕉材料從培養(yǎng)室內(nèi)取出，在超凈工作臺上將生長良好的香蕉芽叢分開，切去頂部葉片部分，削去底部褐化部分，將芽叢接種于香蕉繼代增殖培養(yǎng)基中。繼代增殖培養(yǎng)中每瓶培養(yǎng)基的接種香蕉芽叢數(shù)2代內(nèi)可為1-2塊，3-4代可為3-4塊。

2.2.4培養(yǎng)：

在組培實驗室的條件下培養(yǎng),每個星期觀察一次。

3、實驗結(jié)果與分析：

3.1對香蕉的吸芽進行誘導培養(yǎng)時，共接種了4瓶，污染率為1瓶，后來有一瓶在培養(yǎng)過程中死去了。說明用0.1%的升汞對香蕉的吸芽消毒18min的時間控制比較合理，造成污染的原因可能是因為操作不熟或者接種過程中導致然菌。

3.2繼代培養(yǎng)時獲得了2瓶繼代培養(yǎng)物，但是都發(fā)生褐化現(xiàn)象，并沒有發(fā)育成苗?？赡艿脑蚴怯捎诶^代培養(yǎng)時，并沒有完全切除掉原來的褐化組織導致繼代培養(yǎng)繼續(xù)發(fā)生褐化。

3.3由實驗結(jié)果與分析可知，誘導培養(yǎng)基對外植體誘導效果不錯，說明誘導培養(yǎng)基比較合理，由于褐化并未得到分化的小苗，不能驗證分化培養(yǎng)基是否合理。

3.4實驗中注意事項：

1、香蕉吸芽組織不能太大也不能太小，大小適宜才能在以后的操作中方便使用。；

2、在升汞中滅菌時要注意不斷搖晃，是滅菌充分徹底。

3、發(fā)現(xiàn)污染的外植體，要及時清理干凈，以免污染其他的；

4、按時觀察，認真描述并做好記錄香蕉的生長狀況。

實驗三、煙草葉片組織培養(yǎng)

2.1材料

1、煙草葉片

2、誘導培養(yǎng)基：MS＋BA1.0mg／LL+30g/L白糖+8.5g/L卡拉膠

3、繼代培養(yǎng)基：MS＋BA1.0mg／L＋NAA0.5mg／LL+30g/L白糖+8.5g/L卡拉膠

2.2方法

2.2.1外植體消毒方法

將煙草葉片洗凈，將煙草葉片左右墊與牛皮紙上用手術刀切取2cm長，2cm寬的無主葉脈、主側(cè)葉脈的長方形葉片塊（10片左右），置于加了1-2滴土溫的0.1%的升汞溶液中消毒10-15min，期間注意不斷搖動，取出葉片置于無菌水中清洗3次，留于最后清洗的無菌水中備用。

2.2.2誘導培養(yǎng)

將煙草葉片取出將葉片周遍切去，再將每片葉切成2片，接入誘導培養(yǎng)基中，每7天觀察記錄一次。

2.2.3繼代培養(yǎng)

待煙草的愈傷組織分化成為煙草的葉片與莖時，從誘導培養(yǎng)基中取出煙草幼苗分成小叢后轉(zhuǎn)接繼代培養(yǎng)基中，每7天觀察記錄一次。（如果需要分化獲得更多的煙草幼苗可以再次接入誘導培養(yǎng)基中培養(yǎng)）。

2.2.4培養(yǎng)條件：

培養(yǎng)溫度為28（-1、+1）℃，光照強度2000—3000LX，光照時間為12h/d，,每個星期觀察一次。

3.實驗試劑與儀器設備

3.1藥品試劑：

MS培養(yǎng)母液所需的藥品、蔗糖、卡拉膠（或瓊脂）、NaOH溶液、HCl溶液、無菌水、NAA、BA等。

3.2儀器設備：

電子天平、量筒、PH試紙、培養(yǎng)瓶、解剖刀、酒精燈、高壓滅菌鍋、移液管、洗耳球、玻璃棒、藥勺、超凈操作臺、鐵架、鑷子等。

4、實驗結(jié)果與分析：

4.1第一次煙草組織培養(yǎng)時，全部被污染，污染率100%，誘導率為0。原因可能有兩個，（1）用升汞消毒的時間過短，為了和同學們作對照，我的消毒時間是最短的12min，因此應適當延長消毒時間。（2）由于做實驗前后幾天，天氣一直陰天下雨，可能對實驗造成影響，增加了然菌的的機會。

第一次煙草誘導培養(yǎng)結(jié)果統(tǒng)計表

4.2由于第一次誘導培養(yǎng)的材料均被污染，而后來做繼代培養(yǎng)時已經(jīng)沒有實驗材料，并且已經(jīng)來不及從新在做，所以繼代培養(yǎng)沒能正常進行。

4.3由實驗結(jié)果與分析可知，煙草葉片的組織培養(yǎng)污染率比較高，說明用實驗中的消毒方法可能存在一些弊端，此外，在操作時應該格外注意，以防止感染雜菌。

4.4實驗中注意的問題：

1、煙草葉片要平放在培養(yǎng)基表面，并且要讓切口與培養(yǎng)基充分接觸，有利其吸收養(yǎng)分；

2、在升汞里消毒時間不宜太長，也不宜太短，要控制好消毒時間；

3、在組織培養(yǎng)觀察的過程中，發(fā)現(xiàn)有污染的外植體，要及時清理干凈，以免污染其他的。

實驗四、木薯的組織培養(yǎng)

實驗五、桉樹的組織培養(yǎng)

實驗六、柱花草的組織培養(yǎng)

4.3實驗中注意的問題：

1、要選取幼嫩的柱花草葉片為實驗材料，切取外植體時也一定要切葉尖等幼嫩部位

2、消毒時一定要注意不時搖晃升汞溶液，使升汞溶液與外植體充分接觸。

3、發(fā)現(xiàn)污染的外植體，要及時清理干凈，以免污染其他的；

4、定期觀察，觀察時要仔細，認真描述柱花草生長狀況。

實驗七、玉米成熟胚的培養(yǎng)

實驗八、花生成熟胚的培養(yǎng)

實驗九、水稻盾片的組織培養(yǎng)

實驗十、蘆薈的組織培養(yǎng)（自選實驗）

前言：蘆薈屬（學名：Aloe）通稱蘆薈，原產(chǎn)于地中海、非洲，為獨尾草科多年生草本植物，據(jù)考證的野生蘆薈品種300多種，主要分布于非洲等地。這種植物頗受大眾喜愛，主要因其易于栽種，為花葉兼?zhèn)涞挠^賞植物。因此蘆薈具有積極重要的經(jīng)濟價值。

3.2由于自選材料時間有限，沒有進行繼代培養(yǎng)和生根培養(yǎng)。

3.3結(jié)果圖片：

4、注意事項

1、配制培養(yǎng)基時，要嚴格精確地稱取各種化學試劑。

2、實驗時一定要注意無菌操作，萬不可引入雜菌污染培養(yǎng)基。

3、觀察記錄時，要注意拿組培瓶的方式，手要握住組培瓶的下方而不要握住組培瓶的蓋子。

4、觀察記錄時要仔細，認真描述并做好記錄。

細胞工程自選試驗開題報告：

蘆薈組織培養(yǎng)

一、基本背景

蘆薈屬（學名：Aloe）通稱蘆薈，原產(chǎn)于地中海、非洲，為獨尾草科多年生草本植物，據(jù)考證的野生蘆薈品種300多種，主要分布于非洲等地。這種植物頗受大眾喜愛，主要因其易于栽種，為花葉兼?zhèn)涞挠^賞植物。

蘆薈是百合科蘆薈屬多年生常綠多肉質(zhì)草本植物。據(jù)科學研究，發(fā)現(xiàn)蘆薈中有不少成分對人體皮膚有良好的營養(yǎng)滋潤作用，且刺激性少，用后舒適，對皮膚粗糙、面部皺紋、疤痕、雀斑、痤瘡等均有一定療效。此外蘆薈對輕度的撞傷、挫傷、香港腳、凍傷、皮膚龜裂、疣子等都有一定的療效。根據(jù)現(xiàn)代研究顯示，其葉含蘆薈大黃素、異蘆薈大黃素及蘆薈苦味素等，藥理實驗有瀉下、抗癌作用。蘆薈花性寒，味苦澀，有清熱、止咳、止血功效，可治療咳嗽、吐血。而且蘆薈還有極高的營養(yǎng)價值，食用蘆薈的發(fā)展把對蘆薈的研究帶入了一個新的研究階段，尤其是對蘆薈組織培養(yǎng)技術發(fā)展有了極大地推動作用。

二、實驗設備和藥品

1、所需設備

高壓滅菌鍋、超凈工作臺、培養(yǎng)瓶、稱量儀器、移液管、錐形瓶、量筒、鑷子、解剖刀、支架、酒精燈、牛皮紙、牛皮袋

2、藥品

（1）大量元素、鈣鹽、微量元素、鐵鹽、有機元素、蒸餾水、BA、IBA、NAA、蔗糖、卡拉膠（2）75%酒精、0.1%升汞（加吐溫）、95%酒精

3、材料

幼嫩蘆薈的芽

三、實驗內(nèi)容及方法

1．研究方法：

對蘆薈莖尖、吸芽進行滅菌處理，然后接入無菌培養(yǎng)瓶進行組織培養(yǎng)，快速繁殖試管苗。

采集蘆薈→截取根尖、吸芽→外植體消毒→在超凈工作臺接種→放入培養(yǎng)室培養(yǎng)→繼代培養(yǎng)→生根培養(yǎng)

2.試驗方法及步驟：

1)愈傷組織培養(yǎng)將準備好的蘆薈幼苗在清水中沖洗數(shù)次，剪去葉片和大部分莖段，取莖尖部分，再沖洗1-2次，淋干。在超凈臺上，先用75%的乙醇將莖尖浸泡30-60s，再用升汞浸5-l0min，最后用無菌水沖洗數(shù)次。用解剖刀取出包括莖尖生長點的組織切塊，接種到愈傷組織誘導培養(yǎng)基上。培養(yǎng)條件為:

就會長出新芽

3)生根培養(yǎng)當培養(yǎng)瓶中的幼苗葉片長到3cm左右時，將幼苗在無菌條件下取出，放入裝有生根培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件同分化培養(yǎng)。大約半個月后，幼苗即可生根。

3.可行性分析：

外植體接種到誘導培養(yǎng)基上培養(yǎng)10天后，頂芽開始伸長生長，到25天左右在組織塊的基部開始長出腋芽，并且在每個外植體的嫩莖組織基部長出多個小突起，45-50天后小突起和腋芽逐漸長成7-9個綠色單芽，此時芽約有2.0-2.5cm可進行下一步的培養(yǎng)。

將長至3厘米高以上的無根增殖苗由叢生芽塊上單芽切下轉(zhuǎn)到生根培養(yǎng)基上，7天后在苗的基部形成白色的突起，并逐漸伸長，至12天可形成明顯的幼根，逐漸長成完整的小植株，小苗長至7cm以上時即可移栽。

四、可能出現(xiàn)的問題及解決方法:

1、要注意嚴格遵守滅菌操作程序，防止被環(huán)境中的微生物的污染，這是組織培養(yǎng)的關鍵。

2、在培養(yǎng)中，如果出現(xiàn)雜菌污染，應立即將該