厭氧菌的種類與人體分布課件

厭氧菌厭氧菌1重點(diǎn)：厭氧菌的實(shí)驗(yàn)室檢查常見厭氧菌的生物學(xué)特征重點(diǎn)：2概述一、厭氧菌的種類與人體分布：定義：在有氧條件下不能生長，無氧的環(huán)境中才能生長的細(xì)菌。（缺乏完善的酶系統(tǒng)，只能以無氧發(fā)酵進(jìn)行能量代謝）分類：(1)生物學(xué)分類:1.革蘭+有芽胞桿菌2.G+無芽胞桿菌、G-無芽胞桿菌、G+厭氧球菌、G-厭氧球菌(2)對氧耐受程度分類:對氧極端敏感的厭氧菌、中度厭氧菌、耐氧厭氧菌分布：自然界廣泛分布，是人體正常菌群，其中腸道中厭氧菌量最多。概述一、厭氧菌的種類與人體分布：3二、臨床意義感染普遍，以混合感染為主。內(nèi)源性＞外源性，無芽胞..＞芽胞..感染原因1.局部組織的氧化還原電勢（Eh）↓2.機(jī)體免疫功能↓3.機(jī)體局部屏障作用破壞感染的臨床及細(xì)菌學(xué)指征：1.局部氣體產(chǎn)生2.發(fā)生在黏膜附近的感染3.深部外傷4.有特殊的分泌物5.某些抗生素治療無效的感染6.其它：鏡檢有菌而培養(yǎng)陰性等二、臨床意義4

臨床標(biāo)本肉眼觀察分離培養(yǎng)增菌培養(yǎng)及直接鏡檢厭氧培養(yǎng)

2-7d確定厭養(yǎng)培養(yǎng)

需氧培養(yǎng)厭氧培養(yǎng)生長無生長生長

兼性厭氧菌專性厭氧菌保存菌種分類鑒定藥物敏感試驗(yàn)形態(tài)與染色菌落特性生化反應(yīng)藥敏性鑒定氣液相色譜厭氧菌的檢驗(yàn)厭氧菌的檢驗(yàn)5梭狀芽胞桿菌屬嚴(yán)格厭氧菌，革蘭陽性芽胞比菌體粗，菌體膨大呈梭狀，抵抗力強(qiáng)周鞭毛，無莢膜（除產(chǎn)氣莢膜梭菌外）致病菌產(chǎn)生外毒素致病，病情嚴(yán)重防治：類毒素與抗毒素梭狀芽胞桿菌屬嚴(yán)格厭氧菌，革蘭陽性6引起人類疾病的各種常見厭氧芽胞梭菌

細(xì)菌名稱所致疾病破傷風(fēng)梭菌破傷風(fēng)產(chǎn)氣莢膜梭菌菌血癥、氣性壞疽、軟組織感染、食物中毒等肉毒梭菌食物中毒、嬰兒肉毒梭菌癥、創(chuàng)傷肉毒癥艱難梭菌抗生素相關(guān)性腹瀉、抗生素相關(guān)性偽膜性腸炎引起人類疾病的各種7破傷風(fēng)梭菌（C．tetani）

(一)生物學(xué)性狀圖

1.形態(tài)染色:革蘭陽性芽胞圓形，比菌體大，位于菌體頂端呈鼓槌狀，無莢膜，有鞭毛。2.培養(yǎng)特性:專性厭氧菌,在血平板上有遷徙生長，菌落呈羽毛狀，庖肉培養(yǎng)基輕度變濁，肉渣部分消化，微變黑，惡臭，產(chǎn)少量氣體。3.生化反應(yīng)：不發(fā)酵分解糖類，硝酸鹽－，H2S＋，明膠＋4.抵抗力：芽胞耐121℃20min或干熱150℃1h，在干燥的土壤

和塵埃中可存活數(shù)年對P、C、E、TE等敏感，氨基糖苷類耐藥。

破傷風(fēng)梭菌8二、致病條件傷口需形成厭氧微環(huán)境傷口窄而深（如刺傷），有泥土或異物污染大面積創(chuàng)傷、燒傷，壞死組織多，局部組織缺血有需氧菌或兼性厭氧菌混合感染的傷口無侵襲力，僅在局部繁殖，外毒素致病二、致病條件傷口需形成厭氧微環(huán)境9對氧敏感的破傷風(fēng)溶血毒素(tetanolysin)質(zhì)粒編碼的破傷風(fēng)痙攣毒素(tetanospasmin)屬神經(jīng)毒(neurotoxin)，毒性極強(qiáng)(對人致死量<1μg)蛋白質(zhì)，不耐熱三、致病因子對氧敏感的破傷風(fēng)溶血毒素(tetanolysin)三、致病10四、破傷風(fēng)痙攣毒素結(jié)構(gòu)菌體：一條多肽釋出菌體：輕鏈（A鏈）-S-S-重鏈（B鏈）B鏈：神經(jīng)節(jié)苷脂結(jié)合的單位A鏈：毒性作用作用機(jī)制四、破傷風(fēng)痙攣毒素結(jié)構(gòu)作用機(jī)制11苦笑面容角弓反張苦笑面容角弓反張12五、免疫性破傷風(fēng)免疫屬外毒素免疫，主要是抗毒素發(fā)揮中和作用抗毒素人工免疫六、微生物學(xué)檢查法一般不進(jìn)行涂片鏡檢和分離培養(yǎng)典型的癥狀和病史即可作出診斷五、免疫性破傷風(fēng)免疫屬外毒素免疫，六、微生物學(xué)檢查法一般不進(jìn)13七、防治原則防止創(chuàng)口厭氧微環(huán)境的形成特異性預(yù)防：注射破傷風(fēng)類毒素緊急預(yù)防：注射破傷風(fēng)抗毒素（tetanusantitoxin，TAT）特異性治療：早期足量抗毒素及抗生素七、防治原則防止創(chuàng)口厭氧微環(huán)境的形成14產(chǎn)氣莢膜梭菌

(C．perfringens)

（一）生物學(xué)性狀

圖

1.形態(tài)染色：革蘭陽性粗短大桿菌，兩端鈍圓，芽胞圓形位于

菌體中央或次極端，直徑不大于菌體，但較少形

成，有莢膜，無鞭毛。

2.培養(yǎng)特性：生長迅速，代謝活躍，45℃生長最好血平板上雙

層溶血環(huán)，Nagler反應(yīng)，“洶涌發(fā)酵”

3.生化反應(yīng)：H2S＋，明膠＋，葡萄糖＋，乳糖＋，麥芽糖＋，

蔗糖＋，卵磷脂酶＋

產(chǎn)氣莢膜梭菌

15二、致病物質(zhì)α毒素以A型產(chǎn)生量最大引起血管通透性增加伴大量溶血、組織壞死、肝臟、心功能受損在氣性壞疽的形成中起主要作用β、ε、ι毒素引起壞死損傷和血管通透性增加腸毒素二、致病物質(zhì)α毒素16氣性壞疽食物中毒氣性壞疽食物中毒17三、微生物學(xué)檢查法直接涂片鏡檢深部創(chuàng)口取材涂片革蘭陽性大桿菌白細(xì)胞少且不典型伴有其他雜菌早期診斷可避免病人最終截肢或死亡

分離培養(yǎng)及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)接種血平板或庖肉培養(yǎng)基，鏡檢及生化反應(yīng)鑒定動(dòng)物實(shí)驗(yàn)如懷疑食物中毒，在發(fā)病后一日內(nèi)，檢出大于105病菌/克食品或106病菌/克糞便可確立診斷

三、微生物學(xué)檢查法直接涂片鏡檢分離培養(yǎng)及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)18四、防治原則預(yù)防及時(shí)處理傷口，破壞和消除厭氧微環(huán)境預(yù)防性的使用抗生素治療局部感染的處理抗生素α抗毒素高壓氧艙法四、防治原則預(yù)防19肉毒梭菌（一）生物學(xué)性狀：圖1.形態(tài)染色：革蘭陽性大桿菌，芽胞橢圓形位于菌體次極端，比菌體粗，呈網(wǎng)球拍狀。無莢膜，有鞭毛。2.培養(yǎng)特性：普通培養(yǎng)基生長，血平板上β溶血環(huán)，庖肉培養(yǎng)基肉渣消化，變黑，惡臭。3.生化反應(yīng)：H2S＋,明膠＋,葡萄糖＋,乳糖－,麥芽糖＋,吲哚－,脂酶＋

（二）臨床意義肉毒毒素--毒性最強(qiáng)嗜神經(jīng)性。食物中毒。劇毒（對人致死量為0.1μg)（三）微生物學(xué)檢查

直接涂片鏡檢，分離培養(yǎng)，鑒定鑒別肉毒梭菌20艱難梭菌（一）生物學(xué)性狀：圖1.形態(tài)染色：革蘭陽性大桿菌，芽胞橢圓形或長方形，位于菌體次極端，無莢膜，有鞭毛。2.培養(yǎng)特性：嚴(yán)格厭氧，血平板無溶血環(huán)，CCFA平板呈黃色菌落，在紫外燈下可見黃綠熒光。3.生化反應(yīng)：H2S－,蔗糖－,葡萄糖＋,乳糖－,麥芽糖－,吲哚－,脂酶－

（二）臨床意義正常菌群。醫(yī)院感染的重要病原菌。產(chǎn)生A、B兩種毒素，即腸毒素和細(xì)胞毒素，引起假膜性腸炎（三）微生物學(xué)檢查

直接涂片鏡檢，分離培養(yǎng)，鑒定鑒別艱難梭菌21

革蘭陰性無芽胞厭氧桿菌臨床厭氧菌感染中最常見的病原菌一、類桿菌屬BBE平板上有黑色暈圈二、普雷沃菌屬圖KVLB出現(xiàn)黑色菌落三、卟啉單胞菌屬四、梭桿菌屬革蘭陰性無芽胞厭氧桿菌22

革蘭陽性無芽胞桿厭氧桿菌一、丙酸桿菌屬二、優(yōu)桿菌屬三、乳酸桿菌屬四、雙歧桿菌屬革蘭陽性無芽胞桿厭氧桿菌23

厭氧性球菌一、消化球菌屬革蘭陽性黑色消化球菌二、消化鏈球菌屬革蘭陽性厭氧消化鏈球菌圖三、韋榮球菌屬革蘭陰性小韋榮球菌

厭氧菌的種類與人體分布課件24謝謝謝謝25

標(biāo)本采集采集時(shí)注意不被正常菌群污染，盡量避免接觸空氣易污染標(biāo)本不宜厭氧培養(yǎng)齒齦、咽喉拭子、痰液或氣管吸出物、小腸內(nèi)容物、陰道或?qū)m頸拭子、尿液或?qū)蛞?、糞便、洗胃液、皮膚表面或傷口邊緣等標(biāo)本不同部位標(biāo)本采集法針筒抽取、穿刺術(shù)、外科切開等即送即檢，避免標(biāo)本干燥、接觸空氣和低溫保存1.針筒運(yùn)送法：各種液體標(biāo)本，簡便易行2.無菌小瓶法：少量膿液運(yùn)送，加指示劑3.厭氧袋法：床邊接種4.標(biāo)本充盈法：大量液體標(biāo)本5.組織塊運(yùn)送法：厭氧罐，鋼絲絨6.棉拭子法：急需時(shí)用－A、B管標(biāo)本采集26檢驗(yàn)方法

直接鏡檢形態(tài)、大小、排列、染色性、有無芽胞、色素、氣味等特分離培養(yǎng)1.初代培養(yǎng)：1）培養(yǎng)基：新鮮、預(yù)還原

非選擇性培養(yǎng)基：BAP(血、維生素、氯化血紅素等)選擇培養(yǎng)基：KVLB、EYA、BBE、TS…2）標(biāo)本接種

固體和液體培養(yǎng)基同時(shí)接種3）培養(yǎng)方法

厭氧罐培養(yǎng)法、厭氧氣袋培養(yǎng)法、厭氧培養(yǎng)箱培養(yǎng)法4）結(jié)果觀察2.次代培養(yǎng)和厭氧菌在確定3.厭氧菌培養(yǎng)失誤的原因

采集運(yùn)送培養(yǎng)基厭氧環(huán)境時(shí)間等因素

檢驗(yàn)方法27厭氧罐法－以物理或化學(xué)方法造成無氧環(huán)境

圖美藍(lán)指示劑（有氧藍(lán)色）刃天青指示劑（有氧紅色）抽氣換氣法：

10%H2、10%CO2、80%N2、鈀粒

冷觸媒法：

產(chǎn)氣袋、鈀粒、美藍(lán)鈀粒硼氫化鉀、碳酸氫鈉、枸櫞酸藥片C2O+H2↑H2O鋼末法：O2黃磷燃燒法：

厭氧罐法－以物理或化學(xué)方法造成無氧環(huán)境圖28

氣袋法：圖

原理同上冷觸媒法簡便

厭氧手套箱：圖

設(shè)備自動(dòng)

其他：

OxyplatesTM（氧凈）厭氧培養(yǎng)皿－－可反復(fù)打開，Oxyrase酶系統(tǒng)能使培養(yǎng)基中O2去除，并產(chǎn)生CO2。

氣袋法：圖

原理同上冷觸媒法簡便

厭氧手套29鑒定試驗(yàn)

形態(tài)與染色：

用24h內(nèi)幼齡菌，多染色性，多形性菌落性狀：

色素、溶血、熒光等

生化試驗(yàn)：糖發(fā)酵試驗(yàn)、吲哚試驗(yàn)、硝酸鹽還原試驗(yàn)、觸酶試驗(yàn)等

抗生素敏感試驗(yàn)：

滅滴靈（厭氧菌S）、卡那霉素（梭桿S）、萬古霉素等聚茴香腦磺酸鈉（SPS）敏感試驗(yàn)：厭氧消化鏈S氣液相色譜技術(shù)（GLC）

厭氧菌產(chǎn)生大量的有機(jī)酸（揮發(fā)性和非揮發(fā)性脂肪酸），過柱分析定性定量DNAG+Cmol%

值差越大，親緣關(guān)系越遠(yuǎn)鑒定試驗(yàn)形態(tài)與染色：

用24h內(nèi)幼齡菌，多染色性30藥物敏感試驗(yàn)考慮做體外藥敏試驗(yàn)的臨床情況：明確厭氧菌引起的嚴(yán)重感染、已確證厭氧菌感染而經(jīng)驗(yàn)用無效、需長期用藥的厭氧菌感染。方法培養(yǎng)基接種濃度孵育時(shí)間優(yōu)點(diǎn)瓊脂稀釋法布氏血瓊脂105細(xì)胞／點(diǎn)48H可同時(shí)測多個(gè)菌株肉湯稀釋法布氏心老浸液106CFU／ML48H經(jīng)濟(jì)，可商品化E試驗(yàn)布氏血瓊脂0.5麥?zhǔn)媳葷岫?4－48HMIC精確?內(nèi)酰胺酶瓊脂培養(yǎng)基單個(gè)菌落30－50min經(jīng)濟(jì)快速檢測對青霉素G和AMP的耐藥耐藥性：甲硝唑敏感，氨基糖甙類耐藥藥物敏感試驗(yàn)考慮做體外藥敏試驗(yàn)的臨床情況：明確厭氧菌引起的嚴(yán)31厭氧菌直接鏡檢初步鑒別

菌名革蘭染色形態(tài)及其他特征破傷風(fēng)桿菌G+b細(xì)長、梭形或鼓狀，有芽胞、周鞭毛產(chǎn)氣莢膜梭菌G+b粗大桿菌，呈單或雙排列，有芽胞，有莢膜放線菌G+b分支呈棒狀、X、Y、V或柵狀，膿汁中的黃色顆粒有琥珀酸氣味產(chǎn)黑色素類桿菌G-b多形性，長短不一，標(biāo)本有惡臭，琥珀味，紫外線照射發(fā)紅色熒光韋榮球菌G-c極小的革蘭陰性球菌消化鏈球菌G+c革蘭陽性呈現(xiàn)鏈狀的小球菌厭氧菌直接鏡檢初步鑒別32厭氧菌的種類與人體分布課件33厭氧菌的種類與人體分布課件34厭氧菌的種類與人體分布課件35厭氧菌的種類與人體分布課件36厭氧菌的種類與人體分布課件37厭氧菌的種類與人體分布課件38厭氧菌的種類與人體分布課件39厭氧菌的種類與人體分布課件40厭氧菌的種類與人體分布課件41厭氧菌的種類與人體分布課件42厭氧菌的種類與人體分布課件43厭氧菌的種類與人體分布課件44厭氧菌的種類與人體分布課件45厭氧菌的種類與人體分布課件46厭氧菌的種類與人體分布課件47厭氧菌的種類與人體分布課件48厭氧菌的種類與人體分布課件49厭氧菌厭氧菌50重點(diǎn)：厭氧菌的實(shí)驗(yàn)室檢查常見厭氧菌的生物學(xué)特征重點(diǎn)：51概述一、厭氧菌的種類與人體分布：定義：在有氧條件下不能生長，無氧的環(huán)境中才能生長的細(xì)菌。（缺乏完善的酶系統(tǒng)，只能以無氧發(fā)酵進(jìn)行能量代謝）分類：(1)生物學(xué)分類:1.革蘭+有芽胞桿菌2.G+無芽胞桿菌、G-無芽胞桿菌、G+厭氧球菌、G-厭氧球菌(2)對氧耐受程度分類:對氧極端敏感的厭氧菌、中度厭氧菌、耐氧厭氧菌分布：自然界廣泛分布，是人體正常菌群，其中腸道中厭氧菌量最多。概述一、厭氧菌的種類與人體分布：52二、臨床意義感染普遍，以混合感染為主。內(nèi)源性＞外源性，無芽胞..＞芽胞..感染原因1.局部組織的氧化還原電勢（Eh）↓2.機(jī)體免疫功能↓3.機(jī)體局部屏障作用破壞感染的臨床及細(xì)菌學(xué)指征：1.局部氣體產(chǎn)生2.發(fā)生在黏膜附近的感染3.深部外傷4.有特殊的分泌物5.某些抗生素治療無效的感染6.其它：鏡檢有菌而培養(yǎng)陰性等二、臨床意義53

臨床標(biāo)本肉眼觀察分離培養(yǎng)增菌培養(yǎng)及直接鏡檢厭氧培養(yǎng)

2-7d確定厭養(yǎng)培養(yǎng)

需氧培養(yǎng)厭氧培養(yǎng)生長無生長生長

兼性厭氧菌專性厭氧菌保存菌種分類鑒定藥物敏感試驗(yàn)形態(tài)與染色菌落特性生化反應(yīng)藥敏性鑒定氣液相色譜厭氧菌的檢驗(yàn)厭氧菌的檢驗(yàn)54梭狀芽胞桿菌屬嚴(yán)格厭氧菌，革蘭陽性芽胞比菌體粗，菌體膨大呈梭狀，抵抗力強(qiáng)周鞭毛，無莢膜（除產(chǎn)氣莢膜梭菌外）致病菌產(chǎn)生外毒素致病，病情嚴(yán)重防治：類毒素與抗毒素梭狀芽胞桿菌屬嚴(yán)格厭氧菌，革蘭陽性55引起人類疾病的各種常見厭氧芽胞梭菌

細(xì)菌名稱所致疾病破傷風(fēng)梭菌破傷風(fēng)產(chǎn)氣莢膜梭菌菌血癥、氣性壞疽、軟組織感染、食物中毒等肉毒梭菌食物中毒、嬰兒肉毒梭菌癥、創(chuàng)傷肉毒癥艱難梭菌抗生素相關(guān)性腹瀉、抗生素相關(guān)性偽膜性腸炎引起人類疾病的各種56破傷風(fēng)梭菌（C．tetani）

(一)生物學(xué)性狀圖

1.形態(tài)染色:革蘭陽性芽胞圓形，比菌體大，位于菌體頂端呈鼓槌狀，無莢膜，有鞭毛。2.培養(yǎng)特性:專性厭氧菌,在血平板上有遷徙生長，菌落呈羽毛狀，庖肉培養(yǎng)基輕度變濁，肉渣部分消化，微變黑，惡臭，產(chǎn)少量氣體。3.生化反應(yīng)：不發(fā)酵分解糖類，硝酸鹽－，H2S＋，明膠＋4.抵抗力：芽胞耐121℃20min或干熱150℃1h，在干燥的土壤

和塵埃中可存活數(shù)年對P、C、E、TE等敏感，氨基糖苷類耐藥。

破傷風(fēng)梭菌57二、致病條件傷口需形成厭氧微環(huán)境傷口窄而深（如刺傷），有泥土或異物污染大面積創(chuàng)傷、燒傷，壞死組織多，局部組織缺血有需氧菌或兼性厭氧菌混合感染的傷口無侵襲力，僅在局部繁殖，外毒素致病二、致病條件傷口需形成厭氧微環(huán)境58對氧敏感的破傷風(fēng)溶血毒素(tetanolysin)質(zhì)粒編碼的破傷風(fēng)痙攣毒素(tetanospasmin)屬神經(jīng)毒(neurotoxin)，毒性極強(qiáng)(對人致死量<1μg)蛋白質(zhì)，不耐熱三、致病因子對氧敏感的破傷風(fēng)溶血毒素(tetanolysin)三、致病59四、破傷風(fēng)痙攣毒素結(jié)構(gòu)菌體：一條多肽釋出菌體：輕鏈（A鏈）-S-S-重鏈（B鏈）B鏈：神經(jīng)節(jié)苷脂結(jié)合的單位A鏈：毒性作用作用機(jī)制四、破傷風(fēng)痙攣毒素結(jié)構(gòu)作用機(jī)制60苦笑面容角弓反張苦笑面容角弓反張61五、免疫性破傷風(fēng)免疫屬外毒素免疫，主要是抗毒素發(fā)揮中和作用抗毒素人工免疫六、微生物學(xué)檢查法一般不進(jìn)行涂片鏡檢和分離培養(yǎng)典型的癥狀和病史即可作出診斷五、免疫性破傷風(fēng)免疫屬外毒素免疫，六、微生物學(xué)檢查法一般不進(jìn)62七、防治原則防止創(chuàng)口厭氧微環(huán)境的形成特異性預(yù)防：注射破傷風(fēng)類毒素緊急預(yù)防：注射破傷風(fēng)抗毒素（tetanusantitoxin，TAT）特異性治療：早期足量抗毒素及抗生素七、防治原則防止創(chuàng)口厭氧微環(huán)境的形成63產(chǎn)氣莢膜梭菌

(C．perfringens)

（一）生物學(xué)性狀

圖

1.形態(tài)染色：革蘭陽性粗短大桿菌，兩端鈍圓，芽胞圓形位于

菌體中央或次極端，直徑不大于菌體，但較少形

成，有莢膜，無鞭毛。

2.培養(yǎng)特性：生長迅速，代謝活躍，45℃生長最好血平板上雙

層溶血環(huán)，Nagler反應(yīng)，“洶涌發(fā)酵”

3.生化反應(yīng)：H2S＋，明膠＋，葡萄糖＋，乳糖＋，麥芽糖＋，

蔗糖＋，卵磷脂酶＋

產(chǎn)氣莢膜梭菌

64二、致病物質(zhì)α毒素以A型產(chǎn)生量最大引起血管通透性增加伴大量溶血、組織壞死、肝臟、心功能受損在氣性壞疽的形成中起主要作用β、ε、ι毒素引起壞死損傷和血管通透性增加腸毒素二、致病物質(zhì)α毒素65氣性壞疽食物中毒氣性壞疽食物中毒66三、微生物學(xué)檢查法直接涂片鏡檢深部創(chuàng)口取材涂片革蘭陽性大桿菌白細(xì)胞少且不典型伴有其他雜菌早期診斷可避免病人最終截肢或死亡

分離培養(yǎng)及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)接種血平板或庖肉培養(yǎng)基，鏡檢及生化反應(yīng)鑒定動(dòng)物實(shí)驗(yàn)如懷疑食物中毒，在發(fā)病后一日內(nèi)，檢出大于105病菌/克食品或106病菌/克糞便可確立診斷

三、微生物學(xué)檢查法直接涂片鏡檢分離培養(yǎng)及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)67四、防治原則預(yù)防及時(shí)處理傷口，破壞和消除厭氧微環(huán)境預(yù)防性的使用抗生素治療局部感染的處理抗生素α抗毒素高壓氧艙法四、防治原則預(yù)防68肉毒梭菌（一）生物學(xué)性狀：圖1.形態(tài)染色：革蘭陽性大桿菌，芽胞橢圓形位于菌體次極端，比菌體粗，呈網(wǎng)球拍狀。無莢膜，有鞭毛。2.培養(yǎng)特性：普通培養(yǎng)基生長，血平板上β溶血環(huán)，庖肉培養(yǎng)基肉渣消化，變黑，惡臭。3.生化反應(yīng)：H2S＋,明膠＋,葡萄糖＋,乳糖－,麥芽糖＋,吲哚－,脂酶＋

（二）臨床意義肉毒毒素--毒性最強(qiáng)嗜神經(jīng)性。食物中毒。劇毒（對人致死量為0.1μg)（三）微生物學(xué)檢查

直接涂片鏡檢，分離培養(yǎng)，鑒定鑒別肉毒梭菌69艱難梭菌（一）生物學(xué)性狀：圖1.形態(tài)染色：革蘭陽性大桿菌，芽胞橢圓形或長方形，位于菌體次極端，無莢膜，有鞭毛。2.培養(yǎng)特性：嚴(yán)格厭氧，血平板無溶血環(huán)，CCFA平板呈黃色菌落，在紫外燈下可見黃綠熒光。3.生化反應(yīng)：H2S－,蔗糖－,葡萄糖＋,乳糖－,麥芽糖－,吲哚－,脂酶－

（二）臨床意義正常菌群。醫(yī)院感染的重要病原菌。產(chǎn)生A、B兩種毒素，即腸毒素和細(xì)胞毒素，引起假膜性腸炎（三）微生物學(xué)檢查

直接涂片鏡檢，分離培養(yǎng)，鑒定鑒別艱難梭菌70

革蘭陰性無芽胞厭氧桿菌臨床厭氧菌感染中最常見的病原菌一、類桿菌屬BBE平板上有黑色暈圈二、普雷沃菌屬圖KVLB出現(xiàn)黑色菌落三、卟啉單胞菌屬四、梭桿菌屬革蘭陰性無芽胞厭氧桿菌71

革蘭陽性無芽胞桿厭氧桿菌一、丙酸桿菌屬二、優(yōu)桿菌屬三、乳酸桿菌屬四、雙歧桿菌屬革蘭陽性無芽胞桿厭氧桿菌72

厭氧性球菌一、消化球菌屬革蘭陽性黑色消化球菌二、消化鏈球菌屬革蘭陽性厭氧消化鏈球菌圖三、韋榮球菌屬革蘭陰性小韋榮球菌

厭氧菌的種類與人體分布課件73謝謝謝謝74

標(biāo)本采集采集時(shí)注意不被正常菌群污染，盡量避免接觸空氣易污染標(biāo)本不宜厭氧培養(yǎng)齒齦、咽喉拭子、痰液或氣管吸出物、小腸內(nèi)容物、陰道或?qū)m頸拭子、尿液或?qū)蛞?、糞便、洗胃液、皮膚表面或傷口邊緣等標(biāo)本不同部位標(biāo)本采集法針筒抽取、穿刺術(shù)、外科切開等即送即檢，避免標(biāo)本干燥、接觸空氣和低溫保存1.針筒運(yùn)送法：各種液體標(biāo)本，簡便易行2.無菌小瓶法：少量膿液運(yùn)送，加指示劑3.厭氧袋法：床邊接種4.標(biāo)本充盈法：大量液體標(biāo)本5.組織塊運(yùn)送法：厭氧罐，鋼絲絨6.棉拭子法：急需時(shí)用－A、B管標(biāo)本采集75檢驗(yàn)方法

直接鏡檢形態(tài)、大小、排列、染色性、有無芽胞、色素、氣味等特分離培養(yǎng)1.初代培養(yǎng)：1）培養(yǎng)基：新鮮、預(yù)還原

非選擇性培養(yǎng)基：BAP(血、維生素、氯化血紅素等)選擇培養(yǎng)基：KVLB、EYA、BBE、TS…2）標(biāo)本接種

固體和液體培養(yǎng)基同時(shí)接種3）培養(yǎng)方法

厭氧罐培養(yǎng)法、厭氧氣袋培養(yǎng)法、厭氧培養(yǎng)箱培養(yǎng)法4）結(jié)果觀察2.次代培養(yǎng)和厭氧菌在確定3.厭氧菌培養(yǎng)失誤的原因

采集運(yùn)送培養(yǎng)基厭氧環(huán)境時(shí)間等因素

檢驗(yàn)方法76厭氧罐法－以物理或化學(xué)方法造成無氧環(huán)境

圖美藍(lán)指示劑（有氧藍(lán)色）刃天青指示劑（有氧紅色）抽氣換氣法：

10%H2、10%CO2、80%N2、鈀粒

冷觸媒法：

產(chǎn)氣袋、鈀粒、美藍(lán)鈀粒硼氫化鉀、碳酸氫鈉、枸櫞酸藥片C2O+H2↑H2O鋼末法：O2黃磷燃燒法：

厭氧罐法－以物理或化學(xué)方法造成無氧環(huán)境圖77

氣袋法：圖

原理同上冷觸媒法簡便

厭氧手套箱：圖

設(shè)備自動(dòng)

其他：

OxyplatesTM（氧凈）厭氧培養(yǎng)皿－－可反復(fù)打開，Oxyrase酶系統(tǒng)能使培養(yǎng)基中O2去除，并產(chǎn)生CO2。

氣袋法：圖

原理同上冷觸媒法簡便

厭氧手套78鑒定試驗(yàn)

形態(tài)與染色：

用24h內(nèi)幼齡菌，多染色性，多形性菌落性狀：

色素、溶血、熒光等

生化試驗(yàn)：糖發(fā)酵試驗(yàn)、吲哚試驗(yàn)、硝酸鹽還原試驗(yàn)、觸酶試驗(yàn)等

抗生素敏感試驗(yàn)：

滅滴靈（厭氧菌S）、卡那霉素（梭桿S）、萬古霉素等聚茴香腦磺酸鈉（SPS）敏感試驗(yàn)：厭氧消化鏈S氣液相色譜技術(shù)（GLC）

厭氧菌產(chǎn)生大量的有機(jī)酸（揮發(fā)性和非揮發(fā)性脂肪酸），過柱分析定性定量DNAG+Cmol%

值差越大，親緣關(guān)系越遠(yuǎn)鑒定試驗(yàn)形態(tài)與染色：

用24h內(nèi)幼齡菌，多染色性79藥物敏感試驗(yàn)考慮做體外藥敏試驗(yàn)的臨床情況：明確厭氧菌引起的嚴(yán)重感染、已確證厭氧菌感染而經(jīng)驗(yàn)用無效、需長期用藥的厭氧菌感染。方法培養(yǎng)基接種濃度孵育時(shí)間優(yōu)點(diǎn)瓊脂稀釋法布氏血瓊脂105細(xì)胞／點(diǎn)48H可同時(shí)測多個(gè)菌株肉湯稀釋法布氏心老浸液106CFU／ML48H