β-葡萄糖苷酶（β-GC）活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書-微量法UPLC-MS-4219

電話：400-998-2324郵箱：service_uplc_ms@163.com網(wǎng)址：本產(chǎn)品僅供科學(xué)研究使用！請(qǐng)勿用于臨床、診斷、食品、化妝品檢測(cè)等用途！-上海液質(zhì)檢測(cè)技術(shù)有限公司第第頁(yè)β-葡萄糖苷酶（β-GC）活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書微量法UPLC-MS-4219100T/48S試劑名稱規(guī)格保存條件提取液液體100mL×1瓶2-8℃保存試劑一粉劑×2瓶-20℃保存試劑二液體15mL×1瓶2-8℃保存試劑三液體15mL×1瓶2-8℃保存標(biāo)準(zhǔn)品液體1mL×1支2-8℃保存溶液的配制：116mL-20℃4周，避免反復(fù)凍融；2、標(biāo)準(zhǔn)品：5μmol/mL的對(duì)硝基苯酚溶液。β-GC（EC1）β-β-GC分解對(duì)-硝基苯-β-D-吡喃葡萄糖苷生成對(duì)-硝基苯酚，后者在400nm有最大吸收峰，通過(guò)測(cè)定吸光值升高速率來(lái)計(jì)算β-GC活性。p-Nitrophenylβ-D-glucopyranoside

β-GC

Nitrophenol(400nm)注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。//96一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）1（14（L為50~1001建議0001L（冰0031030次15000，02（g為15100.gL液150，0二、測(cè)定步驟1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至400nm，分光光度計(jì)用蒸餾水調(diào)零。2、標(biāo)準(zhǔn)液的稀釋：臨用前將5μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)液稀釋至100、50、25、12.5、6.25、0nmol/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液待測(cè)。3、標(biāo)準(zhǔn)液稀釋可參考下表：序號(hào)（nmol/mL）標(biāo)準(zhǔn)液體積（μL）蒸餾水體積（μL）（nmol/mL）1500010040010002100020018001003100100010005045010001000255251000100012.5612.5100010006.2576.25010000（空白管）備注：實(shí)驗(yàn)中每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)管需30μL標(biāo)準(zhǔn)溶液。4、加樣表：試劑名稱（μL）測(cè)定管對(duì)照管標(biāo)準(zhǔn)管試劑一120試劑二150150樣本3030充分混勻，放入37℃水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱中準(zhǔn)確水浴30min后，立即放入沸水浴中煮沸5min（蓋緊，以防止水分散失），流水冷卻后充分混勻（以保證濃度不變）試劑一120充分混勻，8000g，4℃離心5min，取上清液待測(cè)上清液7070標(biāo)準(zhǔn)液70試劑三1301301302minAAA標(biāo)準(zhǔn)、AΔA=A-A=A標(biāo)準(zhǔn)-A1-2次。三、β-GC活力單位的計(jì)算1、標(biāo)準(zhǔn)曲線建立：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)管的濃度（x，nmol/mL）和吸光度（y，ΔA標(biāo)準(zhǔn)），建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，將ΔA（y，ΔA測(cè)定）帶入公式計(jì)算樣本產(chǎn)物濃度x（nmol/mL）。2、按樣本蛋白濃度計(jì)算單位的定義：每mg組織蛋白每小時(shí)產(chǎn)生1nmol對(duì)-硝基苯酚定義為一個(gè)酶活力單位。β-GC(U/mg樣3單位的定義：每g組織在每小時(shí)產(chǎn)生1nmol對(duì)-硝基苯酚定義為一個(gè)酶活力單位。β-GC(U/g)=樣4單位的定義：每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每小時(shí)產(chǎn)生1nmol對(duì)-硝基苯酚定義為一個(gè)酶活力單位。β-GC活力(U/104cell)=(x