脂肪酸合成酶（FAS）活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書- 微量法UPLC-MS-4433

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微量法產(chǎn)品內(nèi)容：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系工作人員。試劑名稱規(guī)格保存條件提取液液體110mL×1瓶4℃保存試劑一粉劑×2支-20℃保存試劑二粉劑×2支-20℃保存試劑三液體20mL×1瓶4℃保存試劑四粉劑×2支-20℃保存溶液的配制：11mL試劑三，充分溶解，用不完的試劑分裝后-20℃2禁止反復(fù)凍融。21mL試劑三，充分溶解，用不完的試劑分裝后-20℃2禁止反復(fù)凍融。30.5mL試劑三，充分溶解，用不完的試劑分裝后-20℃2禁止反復(fù)凍融。產(chǎn)品說(shuō)明：（Fattyacidsynthetase，F(xiàn)AS）ANADPH340nm340nmFAS活性。注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。需自備的儀器和用品：紫外分光光度計(jì)//UV板、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。操作步驟：一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）1、細(xì)菌、細(xì)胞樣本的制備：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）:提取液體積（mL）500~1000:1的比例（5001mL提取液）（300W395ming20min，取上清液，置于冰上待測(cè)。2（g）:提取液一體積(mL)1:5~10（0.1g1mL提取液）加入提取液，冰浴勻漿后于4℃，12000g離心20min，取上清液，置于冰上待測(cè)。3、血清（漿）等液體樣本：直接測(cè)定二、測(cè)定步驟1、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340nm，蒸餾水調(diào)零。2、試劑三臨用前置于37℃（哺乳動(dòng)物）或者25℃（其他物種）保溫15min。3、加樣表（在96孔UV板或者微量石英比色皿中加入下列試劑）試劑名稱測(cè)定管空白管上清液20-蒸餾水-20試劑一1616試劑二1616試劑三140140試劑四8815s1（1空白）1min15s2（2空白），ΔA（A1測(cè)定-A2測(cè)定）-（A1空白-A2空白）?？瞻坠苤恍铚y(cè)定1-2次，如果樣本數(shù)量過(guò)多也可以將試劑一到試劑四按上述比例混勻配制成工作液進(jìn)行測(cè)定。三、FAS活性計(jì)算使用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式按照蛋白濃度計(jì)算37℃（哺乳動(dòng)物）25℃（其他物種）1nmolNADPH1酶活單位。FAS(U/mgprot)=[ΔA÷(ε×d)×V反總×109]÷(Cpr×V樣)÷T=1607.7×ΔA÷Cpr按照樣本質(zhì)量計(jì)算37℃（哺乳動(dòng)物）25℃（其他物種）1nmolNADPH1活單位。FAS(U/g質(zhì)量)=[ΔA÷(ε×d)×V反總×109]÷(W×V樣÷V樣總)÷T=1607.7×ΔA÷W按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算37℃（哺乳動(dòng)物）25℃（其他物種）1041nmolNADPH1個(gè)酶活單位。FAS(U/104cell)=[ΔA÷(ε×d)×V反總×109]÷(細(xì)胞數(shù)量×V樣÷V樣總)÷T=1607.7×ΔA÷細(xì)胞數(shù)量按液體體積計(jì)算單位定義：在37℃（哺乳動(dòng)物）或25℃（其他物種）條件下，每毫升樣本每分鐘氧化1nmolNADPH為1個(gè)酶活單位。FAS(U/mL)=[ΔA÷(ε×d)×V反總×109]÷V樣÷T=1607.7×ΔAμL=2×10-20μL=0.02樣總：提取液體積，1mL；T：反應(yīng)時(shí)間，1min；細(xì)胞數(shù)量：以萬(wàn)計(jì)。使用96孔UV板測(cè)定的計(jì)算公式將上述計(jì)算公式中比色皿光徑d-1cm變?yōu)閐-0.6cm進(jìn)行計(jì)算即可。注意事項(xiàng)：1、提取液中含有BSA（約2mg/mL），測(cè)定上清液蛋白濃