SN∕T 4544.2-2022 商品化試劑盒檢測(cè)方法 菌落總數(shù) 方法二

. S700SC3. 中華人民共和國(guó)出入境檢驗(yàn)檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)T2商品化試劑盒檢測(cè)方菌落總數(shù) 方法二Ⅱ4發(fā)布 1實(shí)施中華人民共和國(guó)海關(guān)總署 發(fā)布T2前 言本文件按照標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則 第1部分標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則的規(guī)定起草。本文件是商品化試劑盒檢測(cè)方法 菌落總數(shù)的第2部分T4已經(jīng)發(fā)布了以下部分:—商品化試劑盒檢測(cè)方法 菌落總數(shù) 方法一;—商品化試劑盒檢測(cè)方法 菌落總數(shù) 方法二。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。本文件由中華人民共和國(guó)海關(guān)總署提出并歸口。本文件起草單位中華人民共和國(guó)福州海關(guān)。本文件主要起草人鄭晶林杰郭菁肖穎陳彬董健柯璐徐珊張溫玲戴曉麗。ⅠT2商品化試劑盒檢測(cè)方菌落總數(shù) 方法二范圍本文件規(guī)定了食品中兩種M菌落總數(shù)測(cè)試片MMe和M-Md的檢測(cè)方法。本文件適用于食品中菌落總數(shù)的測(cè)定。該方法不適于米粉等0倍稀釋后流動(dòng)性不強(qiáng)的食品不適于0倍稀釋后色度較深的食品。規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中注日期的引用文件僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于本文件。2食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)菌落總數(shù)測(cè)定9實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求5實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范 食品微生物檢5商品化食品檢測(cè)試劑盒評(píng)價(jià)方法6食品微生物檢驗(yàn)方法確認(rèn)技術(shù)規(guī)范術(shù)語(yǔ)和定義本文件沒(méi)有需要界定的術(shù)語(yǔ)和定義。生物安全措施為了保護(hù)實(shí)驗(yàn)室人員的安全和防止污染應(yīng)由具備資格的工作人員檢測(cè)菌落總數(shù)。所有培養(yǎng)物和廢棄物應(yīng)按照9和5中的有關(guān)規(guī)定執(zhí)行。技術(shù)概要菌落總數(shù)測(cè)試片MM是一種預(yù)先制備好的培養(yǎng)基系統(tǒng)其培養(yǎng)基為標(biāo)準(zhǔn)的平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基并且含菌落指示劑菌落在測(cè)試片上呈紅色這樣可增強(qiáng)菌落計(jì)數(shù)效果。菌落總數(shù)測(cè)試片MMd是一種預(yù)先制備好的培養(yǎng)基系統(tǒng)包含營(yíng)養(yǎng)成分冷水可溶性凝膠及雙聯(lián)指示劑技術(shù)菌落在測(cè)試片上呈紅色和藍(lán)色h即可對(duì)食品基質(zhì)進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)。1T2儀器和設(shè)備除微生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)滅菌和培養(yǎng)設(shè)備外其他設(shè)備和材料如下:1恒溫培養(yǎng)箱61℃01℃。2冰箱2℃5℃。3恒溫水浴箱61℃天平感量為。均質(zhì)器。振蕩器。: (

( ) 。無(wú)菌吸管1L具1L刻度0L具L刻度

或微量移液器及吸頭無(wú)菌錐形瓶容量為00。無(wú)菌培養(yǎng)皿直徑為0。計(jì)或比色管或精密試紙。放大鏡或和菌落計(jì)數(shù)器。壓板。試劑和材料菌落總數(shù)測(cè)試片本文件使用的測(cè)試片MMce和MMde由M有限公司生產(chǎn)參考5和按商品化食品檢測(cè)試劑盒評(píng)價(jià)程序進(jìn)行評(píng)價(jià)評(píng)價(jià)結(jié)果參見(jiàn)附錄A和附錄。磷酸鹽緩沖液按附錄C中。無(wú)菌生理鹽水按附錄C中。1L氫氧化鈉稱取gH溶于0L蒸餾水中。1L鹽酸移取0L濃鹽酸用蒸餾水稀釋至0。檢測(cè)程序菌落總數(shù)測(cè)試片檢測(cè)程序見(jiàn)圖。2T2圖1菌落總數(shù)測(cè)試片檢測(cè)方法程序操作步驟樣品制備和稀釋按照2的方法制備0樣品勻液。無(wú)菌操作調(diào)節(jié)該樣品勻液的H為,酸性樣液用1L氫氧化鈉調(diào)節(jié)堿性樣液用1L鹽酸調(diào)節(jié)或根據(jù)產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的酸堿溶液來(lái)調(diào)節(jié)值。按照2方法吸取0樣品勻液接種

制備0倍系列稀釋樣品勻液。根據(jù)對(duì)樣品污染情況的估計(jì)選擇2個(gè)個(gè)適宜稀釋度樣品勻液進(jìn)行檢驗(yàn)根據(jù)需要選擇Me測(cè)試片或MMde測(cè)試片。將菌落總數(shù)測(cè)試片置于平坦表面處揭開上層膜吸取某一稀釋度的1樣品勻液垂直滴加在測(cè)試片的中央處然后將上層膜輕輕放下將壓板放置在上層膜中央處輕輕的壓下使樣液均勻覆蓋于圓形的培養(yǎng)面積上切勿扭轉(zhuǎn)壓板。拿起壓板靜置至少1n以使培養(yǎng)基凝固。每個(gè)稀釋度接種兩張測(cè)試片。同時(shí)分別吸取1空白稀釋液加入兩張測(cè)試片內(nèi)作空白對(duì)照。3T2培養(yǎng)MM培養(yǎng)將測(cè)試片的透明面朝上水平置于培養(yǎng)箱內(nèi)可堆疊至0片。在6℃1℃條件下培養(yǎng)8±h水產(chǎn)品01℃培養(yǎng)。MMd培養(yǎng)在61℃條件下培養(yǎng)如有產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)等特殊要求則按相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)或要求進(jìn)行。菌落計(jì)數(shù)MM計(jì)數(shù)到培養(yǎng)時(shí)間應(yīng)立即計(jì)數(shù)選取菌落數(shù)在00U之間的測(cè)試片計(jì)數(shù)菌落總數(shù)記錄稀釋倍數(shù)和相應(yīng)的菌落數(shù)量。菌落計(jì)數(shù)以菌落形成單位表示。計(jì)數(shù)所有紅色菌落。如果無(wú)法確定紅點(diǎn)是菌落還是紅色食品基質(zhì)可以延長(zhǎng)培養(yǎng)h后觀察。如果紅點(diǎn)變大則確定是菌落如果紅點(diǎn)未變大則確定是基質(zhì)。當(dāng)細(xì)菌濃度很高時(shí)整個(gè)測(cè)試片會(huì)變成紅色將結(jié)果記錄為多不可計(jì)o。MMe有0個(gè)等分格當(dāng)菌落數(shù)量過(guò)多計(jì)數(shù)困難時(shí)可選擇幾個(gè)有代表性菌落的小方格計(jì)算平均菌落數(shù)再乘以相應(yīng)倍數(shù)即可得到整個(gè)測(cè)試片上的估算菌落數(shù)。一些微生物會(huì)液化凝膠造成局部擴(kuò)散或菌落模糊的現(xiàn)象。如果液化現(xiàn)象干擾計(jì)數(shù)可以計(jì)數(shù)未液化的面積來(lái)估算菌落濃度。MMd計(jì)數(shù)到培養(yǎng)時(shí)間應(yīng)立即計(jì)數(shù)選取菌落數(shù)在00U之間的測(cè)試片計(jì)數(shù)菌落總數(shù)記錄稀釋倍數(shù)和相應(yīng)的菌落數(shù)量。菌落計(jì)數(shù)以菌落形成單位s表示。計(jì)數(shù)所有藍(lán)色和紅色菌落。如果無(wú)法確定紅點(diǎn)是菌落還是紅色食品基質(zhì)可以延長(zhǎng)培養(yǎng)h后觀察。如果紅點(diǎn)變大則確定是菌落如果紅點(diǎn)未變大則確定是基質(zhì)。當(dāng)細(xì)菌濃度很高時(shí)整個(gè)測(cè)試片會(huì)變成紅色或藍(lán)色將結(jié)果記錄為多不可計(jì)s。MMde有0個(gè)等分格當(dāng)菌落數(shù)量過(guò)多計(jì)數(shù)困難時(shí)可選擇幾個(gè)有代表性菌落的小方格計(jì)算平均菌落數(shù)再乘以相應(yīng)倍數(shù)即可得到整個(gè)測(cè)試片上的估算菌落數(shù)。一些微生物會(huì)液化凝膠造成局部擴(kuò)散或菌落模糊的現(xiàn)象。如果液化現(xiàn)象干擾計(jì)數(shù)可以計(jì)數(shù)未液化的面積來(lái)估算菌落濃度。結(jié)果和報(bào)告菌落總數(shù)的計(jì)算方法和菌落總數(shù)報(bào)告的規(guī)則按照。4T2附 錄A資料性)菌落總數(shù)測(cè)試片MM評(píng)價(jià)結(jié)果線性和準(zhǔn)確度見(jiàn)表1和表。表1測(cè)試片方法和參考方法的線性關(guān)系食品種類食品基質(zhì)線性方程相關(guān)系數(shù)2)T檢驗(yàn)值肉類凍雞肉847熟雞肉852魚類和海產(chǎn)品丁香魚592旗魚松960凍帶魚354水果和蔬菜制品蘿卜絲901沙拉739青豆892乳制品純牛奶702嬰兒奶粉478全脂奶粉186雜品餡餅192面條523咖喱粉405綠茶42051表25類食品的線性關(guān)系食品種類g值范圍線性方程相關(guān)系數(shù)2)肉類696魚類和海產(chǎn)品582水果和蔬菜制品644乳制品071雜品625所有食品54注y為測(cè)試片法菌落數(shù)的對(duì)數(shù)值x為參考法菌落數(shù)的對(duì)數(shù)值。5T2耐變性選用兩個(gè)污染水平的奶粉樣品對(duì)培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時(shí)間兩個(gè)變量進(jìn)行耐變性試驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)證培養(yǎng)溫度選擇5℃和7℃培養(yǎng)時(shí)間選擇h和對(duì)檢測(cè)結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)偏差與在重復(fù)性條件下得到的標(biāo)準(zhǔn)偏差沒(méi)有明顯差別表明說(shuō)明書中對(duì)培養(yǎng)溫度為61℃和培養(yǎng)時(shí)間為h的耐變性范圍不影響檢測(cè)結(jié)果。見(jiàn)表。表3耐變性試驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)條件菌株添加水平測(cè)試結(jié)果平均值Sr123457℃h高濃度6063039低濃度00000437℃h高濃度9249974低濃度00622255℃h高濃度6564658低濃度04826275℃h高濃度0494654低濃度4446651批間變異取3個(gè)不同批號(hào)的測(cè)試片對(duì)兩個(gè)污染濃度奶粉樣品進(jìn)行批間變異實(shí)驗(yàn)3個(gè)不同批號(hào)測(cè)試片測(cè)試結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)偏差與在重復(fù)性條件下得到的標(biāo)準(zhǔn)偏差沒(méi)有明顯差別說(shuō)明不同批號(hào)產(chǎn)品無(wú)明顯差異。見(jiàn)表。表4批間變異試驗(yàn)結(jié)果菌株濃度批號(hào)測(cè)定結(jié)果nSrRSD12345高濃度U08888810B48260639G64266523總平均值7總Sr2低濃度U18666358B28925931G35594953總平均值1總Sr46實(shí)驗(yàn)室間驗(yàn)證試驗(yàn)

T28家實(shí)驗(yàn)室對(duì)高中低3個(gè)接種水平樣品的5個(gè)平行測(cè)試結(jié)果室間重復(fù)性和再現(xiàn)性分析表明方法穩(wěn)定可靠。見(jiàn)表。表5實(shí)驗(yàn)室間驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果添加水平實(shí)驗(yàn)室數(shù)參考法測(cè)試片法rRrR高85831中82832低830997T2附 錄B資料性)菌落總數(shù)測(cè)試片MMd評(píng)價(jià)結(jié)果線性和準(zhǔn)確度見(jiàn)表1和表。表1測(cè)試片方法和參考方法的線性關(guān)系食品種類食品基質(zhì)線性方程相關(guān)系數(shù)2)T檢驗(yàn)值肉類糟鴨855凍豬肉080鹵牛肉628魚類和海產(chǎn)品魷魚絲994明蝦084鯧魚611水果和蔬菜制品開心果671葡萄汁796沙拉083乳制品純牛奶761奶粉276圣代261雜品茶葉018五谷粉630雞精95851表25類食品的線性關(guān)系食品種類g值范圍線性方程相關(guān)系數(shù)2)肉制品036魚類和海產(chǎn)品874雜品586乳制品895家禽類984所有樣品74注y為測(cè)試片方法菌落數(shù)的對(duì)數(shù)值x為參考方法菌落數(shù)的對(duì)數(shù)值。8耐變性

T2選用兩個(gè)污染水平的純牛奶樣品對(duì)培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時(shí)間兩個(gè)變量進(jìn)行耐變性試驗(yàn)。經(jīng)驗(yàn)證培養(yǎng)溫度選擇5℃和7℃培養(yǎng)時(shí)間選擇h和h對(duì)檢測(cè)結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)偏差r與在重復(fù)性條件下得到的標(biāo)準(zhǔn)偏差r無(wú)顯著差異表明說(shuō)明書中對(duì)培養(yǎng)溫度61℃和培養(yǎng)時(shí)間h的耐變性范圍不影響檢測(cè)結(jié)果。見(jiàn)表。表3耐變性試驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)條件菌株添加水平測(cè)試結(jié)果值平均值SrRSD123457℃h高水平27016701低水平908490547℃h高水平12530678低水平319951825℃h高水平96013280低水平435254335℃h高水平29395003低水平39409126批間變異取3個(gè)不同批號(hào)測(cè)試片對(duì)兩個(gè)污染濃度奶粉樣品進(jìn)行批間變異實(shí)驗(yàn)3個(gè)不同批號(hào)測(cè)試片測(cè)試結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)偏差與在重復(fù)性條件下得到的標(biāo)準(zhǔn)偏差沒(méi)有明顯差別說(shuō)明不同批號(hào)產(chǎn)品無(wú)明顯差異。見(jiàn)表。表4批間變異試驗(yàn)結(jié)果菌株濃度批號(hào)測(cè)定結(jié)果值平均值SrRSD12345高水平1A251032086A688693148A43368519總平均值4總Sr8低水平1A501555376A185185108A88158686總平均值5總Sr99T2實(shí)驗(yàn)室間驗(yàn)證試驗(yàn)8家實(shí)驗(yàn)室對(duì)高中低3個(gè)接種水平樣品的5個(gè)平行測(cè)試結(jié)果室間重復(fù)性和再現(xiàn)性分析表明方法穩(wěn)定可靠。見(jiàn)表。表5實(shí)驗(yàn)室間驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果添加水平實(shí)驗(yàn)室數(shù)rR參考法測(cè)試片法參考法測(cè)試片法高86161中82424低817170T2附 錄C規(guī)范性)培養(yǎng)基和試劑磷酸鹽緩沖液成分磷酸二氫鉀4) g蒸餾水 0LH值 2制法貯存液稱取g的磷酸二氫鉀溶于0L蒸餾水中用大約5L的1L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)用蒸餾水稀釋至0L后貯存于冰箱。稀釋液取貯存液5用蒸餾水稀釋至0分裝于適宜容器中于1℃高壓下滅菌5。