兔肝脫氧核糖核酸的提取

關(guān)于兔肝脫氧核糖核酸的提取第一頁，共十三頁，2022年，8月28日實驗?zāi)康恼莆諒膭游锝M織中提取DNA的原理和方法。第二頁，共十三頁，2022年，8月28日基本原理第三頁，共十三頁，2022年，8月28日步驟：(一)脫氧核糖核蛋白的制備10ml刻度離心管取8ml兔肝勻漿，3000轉(zhuǎn)10分鐘；（取試管標號，加試劑）棄上清后，沉淀

+0.15M氯化鈉-0.10M乙二胺四乙酸鈉8ml

，攪勻后3000轉(zhuǎn)10分鐘。棄上清所得即脫氧核糖核蛋白。（加DNA標準液和蒸餾水，二苯胺試劑，加二苯胺試劑的試管不能放在試管架上）第四頁，共十三頁，2022年，8月28日（二）DNA粗制品的提取沉淀

+0.15M氯化鈉-0.10M乙二胺四乙酸鈉（終體積為4ml）；攪勻后，逐滴+0.5ml

15％SDS，攪拌3-5min

，溶液粘稠略帶透明。（DNA與蛋白分離）

+1.0ml5MNaCl（終濃度1M），輕攪3-5min；

+等體積氯仿-異丙醇，加塞（塞緊防漏）振蕩3-5min，3000轉(zhuǎn)10分鐘；（實驗二的試管放沸水浴）第五頁，共十三頁，2022年，8月28日吸管取上清于一10ml的刻度離心管中，+

等體積氯仿-異丙醇，加塞（塞緊防漏）振蕩3-5min，3500轉(zhuǎn)15分鐘；（取出實驗二的試管室溫放冷并595nm比色，注意添水到水浴鍋中）吸管取上清于一10ml的刻度離心管中，+

兩倍體積的95％的乙醇抽提；DNA析出，棄乙醇后則得到白色DNA粗制品。*進行實驗二的第二步第六頁，共十三頁，2022年，8月28日二苯胺顯色法測定DNA含量第七頁，共十三頁，2022年，8月28日熟悉751－型分光光度計的使用。掌握DNA純度測定的原理和方法實驗?zāi)康牡诎隧?，共十三頁?022年，8月28日基本原理DNA在的α-脫氧核糖在酸性條件下轉(zhuǎn)變成ω-羥基-r酮基戊醛，與二苯胺共熱后形成藍色化合物，該化合物在595nm處最大吸收。每ml含20－40ug范圍內(nèi)光密度與DNA的濃度成正比。反應(yīng)液中加入少量乙醛，可提高反應(yīng)的靈敏度。第九頁，共十三頁，2022年，8月28日步驟一、

DNA標準曲線的制定

0號管調(diào)0，以A為縱坐標，DNA含量（ug/ml)為橫坐標，繪制標準曲線。二、樣品含量測定

沸水浴10min，冷卻后595nm比色，并從標準曲線上讀數(shù)。

U

B所提DNA1ml+1mlNaOH

H2O2ml二苯胺4ml二苯胺4ml第十頁，共十三頁，2022年，8月28日DNA純度的測定原理：核酸在220-320nm處呈特征性吸收，260nm處有最大吸收，測260/280可得知核酸的大致純度。

260/280＝1.6~1.8表示純

>1.8含RNA<1.6蛋白含量高第十一頁，共十三頁，2022年，8月28日島津UV-120有