高效液相色譜法的建立課件

北京中醫(yī)藥大學馬長華高效液相色譜法的建立21、靜念園林好，人間良可辭。22、步步尋往跡，有處特依依。23、望云慚高鳥，臨木愧游魚。24、結廬在人境，而無車馬喧；問君何能爾？心遠地自偏。25、人生歸有道，衣食固其端。北京中醫(yī)藥大學馬長華高效液相色譜法的建立北京中醫(yī)藥大學馬長華高效液相色譜法的建立21、靜念園林好，人間良可辭。22、步步尋往跡，有處特依依。23、望云慚高鳥，臨木愧游魚。24、結廬在人境，而無車馬喧；問君何能爾？心遠地自偏。25、人生歸有道，衣食固其端。實用高效液相色譜法的建立L.R.Snyder,J.J.Kirkland,J.L.GlajchPracticalHPLCmethoddevelopment2nd1997(第一版1988年出版)HPLC技術問世已有30余年,已步入發(fā)展與應用的成熟時期,關于方法建立的研究目前已開始逐步趨向穩(wěn)定。我們相信本書在未來十年或二十年中，理應不會過時并仍有參考價值。實用高效液相色譜法的建立1緒論*9常規(guī)樣品分離2分離的基礎*10計算機輔助方法3檢測靈敏度與選擇性11生化樣品4樣品的制備12手性分離5色譜柱*13制備分離6中性樣品*14定量7離子樣品*15完善方法8梯度洗脫*北京中醫(yī)藥大學馬長華高效液相色譜法的建立21、靜念園林好，人1高效液相色譜法的建立課件2高效液相色譜法的建立課件3高效液相色譜法的建立課件4高效液相色譜法的建立課件51-2建立分離方法1-2-1選擇HPLC分離模式與起始條件假設為一般樣品（分子量〈2000）選擇HPLC分離模式(圖1--3)1-2-2開始方法建立1-2-3改善分離1-2-4可重現(xiàn)的分離1-2-5完善方法1-2建立分離方法1-2-1選擇HPLC分離模式與起始條6高效液相色譜法的建立課件7主要HPLC方法的特性

反相HPLC流動相：水-有機溶劑(A%--B%)色譜柱：C18、C8、苯基、三甲基硅烷、氰基適合的樣品能溶于水-有機混合液的大多數(shù)樣品，尤其是中性或非離子性化合物的首選。主要HPLC方法的特性

反相HPLC8主要HPLC方法的特性

離子對HPLC流動相：水-有機溶劑，控制PH的緩沖溶液和離子對試劑色譜柱：C18、C8、氰基適合的樣品離子或可電離的化合物，尤其是堿或陽離子樣品的良好選擇。主要HPLC方法的特性

離子對HPLC9主要HPLC方法的特性

正相HPLC流動相：有機溶劑混合液色譜柱：氰基、氨基、二醇基、硅膠適合的樣品當反相或離子對HPLC無效是的第二個良好選擇；不溶于水-有機混合液的親脂樣品的首選；異構體混合物。主要HPLC方法的特性

正相HPLC101-2-2開始方法建立首次HPLC分離較好的實驗條件色譜柱C18、C85μm15×0.46cm流動相水或緩沖溶液-乙氰(80-100%)緩沖溶液25mmol磷酸鉀2.0<PH>3.0添加劑胺改性劑、離子對試劑（開始不用）流速1.5—2.0ml/min溫度35—45℃樣品量體積<25μL重量<100μg1-2-2開始方法建立首次HPLC分離較好的實驗條件11為了避免漏檢樣品中可能存在的化合物,建議用洗脫能力非常強的流動相,做第一次預實驗,然后按照一定速度(20%)降低強溶劑的比例,如例（圖1--4）所示.當樣品中存在對純乙氰或純甲醇強保留的組分時可以考慮用非水反相色譜NARP或者是正相色譜HPLC方法建立的目標（表1--5）為了避免漏檢樣品中可能存在的化合物,建議用洗脫能力非常強的流12高效液相色譜法的建立課件13高效液相色譜法的建立課件14高效液相色譜法的建立課件15END16、業(yè)余生活要有意義，不要越軌?！A盛頓

17、一個人即使已登上頂峰，也仍要自強不息?！_素·貝克

18、最大的挑戰(zhàn)和突破在于用人，而用人最大的突破在于信任人?！R云

19、自己活著，就是為了使別人過得更美好。——雷鋒

20、要掌握書，莫被書掌握；要為生而讀，莫為讀而生。——布爾沃END16、業(yè)余生活要有意義，不要越軌?！A盛頓16北京中醫(yī)藥大學馬長華高效液相色譜法的建立21、靜念園林好，人間良可辭。22、步步尋往跡，有處特依依。23、望云慚高鳥，臨木愧游魚。24、結廬在人境，而無車馬喧；問君何能爾？心遠地自偏。25、人生歸有道，衣食固其端。北京中醫(yī)藥大學馬長華高效液相色譜法的建立北京中醫(yī)藥大學馬長華高效液相色譜法的建立21、靜念園林好，人間良可辭。22、步步尋往跡，有處特依依。23、望云慚高鳥，臨木愧游魚。24、結廬在人境，而無車馬喧；問君何能爾？心遠地自偏。25、人生歸有道，衣食固其端。實用高效液相色譜法的建立L.R.Snyder,J.J.Kirkland,J.L.GlajchPracticalHPLCmethoddevelopment2nd1997(第一版1988年出版)HPLC技術問世已有30余年,已步入發(fā)展與應用的成熟時期,關于方法建立的研究目前已開始逐步趨向穩(wěn)定。我們相信本書在未來十年或二十年中，理應不會過時并仍有參考價值。實用高效液相色譜法的建立1緒論*9常規(guī)樣品分離2分離的基礎*10計算機輔助方法3檢測靈敏度與選擇性11生化樣品4樣品的制備12手性分離5色譜柱*13制備分離6中性樣品*14定量7離子樣品*15完善方法8梯度洗脫*北京中醫(yī)藥大學馬長華高效液相色譜法的建立21、靜念園林好，人17高效液相色譜法的建立課件18高效液相色譜法的建立課件19高效液相色譜法的建立課件20高效液相色譜法的建立課件211-2建立分離方法1-2-1選擇HPLC分離模式與起始條件假設為一般樣品（分子量〈2000）選擇HPLC分離模式(圖1--3)1-2-2開始方法建立1-2-3改善分離1-2-4可重現(xiàn)的分離1-2-5完善方法1-2建立分離方法1-2-1選擇HPLC分離模式與起始條22高效液相色譜法的建立課件23主要HPLC方法的特性

反相HPLC流動相：水-有機溶劑(A%--B%)色譜柱：C18、C8、苯基、三甲基硅烷、氰基適合的樣品能溶于水-有機混合液的大多數(shù)樣品，尤其是中性或非離子性化合物的首選。主要HPLC方法的特性

反相HPLC24主要HPLC方法的特性

離子對HPLC流動相：水-有機溶劑，控制PH的緩沖溶液和離子對試劑色譜柱：C18、C8、氰基適合的樣品離子或可電離的化合物，尤其是堿或陽離子樣品的良好選擇。主要HPLC方法的特性

離子對HPLC25主要HPLC方法的特性

正相HPLC流動相：有機溶劑混合液色譜柱：氰基、氨基、二醇基、硅膠適合的樣品當反相或離子對HPLC無效是的第二個良好選擇；不溶于水-有機混合液的親脂樣品的首選；異構體混合物。主要HPLC方法的特性

正相HPLC261-2-2開始方法建立首次HPLC分離較好的實驗條件色譜柱C18、C85μm15×0.46cm流動相水或緩沖溶液-乙氰(80-100%)緩沖溶液25mmol磷酸鉀2.0<PH>3.0添加劑胺改性劑、離子對試劑（開始不用）流速1.5—2.0ml/min溫度35—45℃樣品量體積<25μL重量<100μg1-2-2開始方法建立首次HPLC分離較好的實驗條件27為了避免漏檢樣品中可能存在的化合物,建議用洗脫能力非常強的流動相,做第一次預實驗,然后按照一定速度(20%)降低強溶劑的比例,如例（圖1--4）所示.當樣品中存在對純乙氰或純甲醇強保留的組分時可以考慮用非水反相色譜NARP或者是正相色譜HPLC方法建立的目標（表1--5）為了避免漏檢樣品中可能存在的化合物,建議用洗脫能力非常強的流28高效液相色譜法的建立課件29高效液相色譜法