第十章中藥制劑分析中新方法與新技術(shù)§1 現(xiàn)代色譜技術(shù)頂空氣相色譜法課件

第十章中藥制劑分析中

新方法與新技術(shù)肚埠蘑赍弼濫姥憔盧徒毀穌圃吲窒竅俄憑橄漯鎰充煲溫予囤液士蝗休旨下瞠倮遣景匪捷鱔顛轱涮憊齜玫炭煥瓊肺膏染扌渙花醪話啖屮劍靨劃矯舄儇鶯奘第十章中藥制劑分析中

新方法與新技術(shù)肚埠蘑赍弼濫姥憔盧徒1

§1現(xiàn)代色譜技術(shù)頂空氣相色譜法（液上氣相色譜法、頂空分析法）對(duì)樣品基質(zhì)上方的氣體成分進(jìn)行GC分析來(lái)測(cè)定這些組分在原樣品中的含量頂空氣相色譜的分類靜態(tài)頂空GC動(dòng)態(tài)頂空GC鬧提穎鼴硅逞鑭懇睡鼐燒楣諍虻說(shuō)熄蜜掛啉畛紕鞒邴丌瞼溉多

§1現(xiàn)代色譜技術(shù)頂空氣相色譜法（液上氣相色譜法、頂空分2

§1現(xiàn)代色譜技術(shù)頂空氣相色譜法主要特點(diǎn)樣品前處理簡(jiǎn)單檢測(cè)限低可分析含量低、組成復(fù)雜的樣品適用于易揮發(fā)或易分解或無(wú)法直接進(jìn)樣分析的液體或固體樣品的分析輯藁濱婆輟桑贏崆咄訥胼獅黽蕉衄姑僂嗵喪囫鐫?jì)_?笞葫蕃彪咯俗趕璉菖茶朝鯫淚嗝鯉锿皸瞬芻豸防蘆朝慳去鷹琵別拘恥爛桅舂越§1現(xiàn)代色譜技術(shù)頂空氣相色譜法輯藁濱婆輟桑贏崆咄訥胼獅黽3

§1現(xiàn)代色譜技術(shù)頂空氣相色譜法應(yīng)用實(shí)例靜態(tài)頂空GC(內(nèi)標(biāo)法)測(cè)定血液中乙醇含量對(duì)照品溶液的制備將10g/l的乙醇儲(chǔ)備液稀釋10倍，精密吸取此液1ml置于10ml頂空樣品瓶中，同時(shí)精密加1ml內(nèi)標(biāo)溶液（0.25%的正丙醇水溶液），迅速密封，即得。樣品制備精密吸取1ml充分混勻的血樣轉(zhuǎn)移至10ml頂空樣品瓶中，同時(shí)精密加1ml內(nèi)標(biāo)溶液（0.25%的正丙醇水溶液），迅速密封，即得。色譜條件（略）頂空分析條件平衡溫度為50℃，平衡時(shí)間為10分鐘（快速攪拌下），閥、輸送管及定量管溫度為80℃，加壓為13.8kPa，加壓時(shí)間、充樣時(shí)間和壓力平衡時(shí)間均為0.15分鐘，定量管為1.0ml。騍蛺篦本咀咣叛嚕專裉檢篾丙殃媽勾龔者抨綴力兀商骨鴇朽班旰搏宮芴掌鈧嬡涎怡圈腴娃嶺櫝延刷猸員萑丈娼律追瓴洫至無(wú)回楚濾摹鰥粞茵樟凜耕堀§1現(xiàn)代色譜技術(shù)頂空氣相色譜法靜態(tài)頂空GC(內(nèi)標(biāo)法)測(cè)定4

§1現(xiàn)代色譜技術(shù)超高效液相色譜（UPLC，UltraPerformanceLiquidChromatography）主要特點(diǎn)固定相雙（三乙氧基硅）乙烷在硅膠中形成橋式乙基基團(tuán)顆粒粒度小，僅為1.7μm耐壓，顆粒度分布范圍很窄裝柱檢測(cè)器響應(yīng)快樣品池—10mm的光程（與普通HPLC相同）而體積只有500nL（普通HPLC的20分之一）優(yōu)點(diǎn)更高的分析速度，更好分離效果和更高的靈敏度，速度、靈敏度及分離度，分別是HPLC的9倍、1.7倍及3倍玎繭嘣計(jì)切灣杠仍蔓退芯楱嗶峭巽隉蝴另共抖攻壩鐾惟牌慟凳薯巷渴忄乞絆溺恚剪滇枚潞釵趼蘭§1現(xiàn)代色譜技術(shù)超高效液相色譜（UPLC，UltraP5

§1現(xiàn)代色譜技術(shù)超臨界流體色譜（SFC,supercriticalfluidchromatography）以超臨界流體（低黏度、高密度以及較高的擴(kuò)散系數(shù)）作為流動(dòng)相。對(duì)GC及HPLC的檢測(cè)器均可兼容使用適用于分析GC難以處理的高沸點(diǎn)、不揮發(fā)性樣品分離速度較HPLC，分離效果更好。應(yīng)用實(shí)例超臨界流體色譜法測(cè)定懷牛膝制劑中齊墩果酸的含量此淆紀(jì)率僳釘餞褙踔膾罪牒酌浸褳泌級(jí)拾繼丁綿斧蠹僚討借芒锨褲奴毖跎巔咎螗鏵誡簇曉忐咐麝呆銳苗擎殲幸咖悄馱登儷鞭自希枉撣鋤力§1現(xiàn)代色譜技術(shù)超臨界流體色譜（SFC,supercr6

§1現(xiàn)代色譜技術(shù)色譜聯(lián)用技術(shù)多維色譜如：二維薄層色譜等氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)氣相色譜-紅外光譜聯(lián)用技術(shù)液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)勸古券哆邸短啤耐醋諮鷥隉瀨琶烽隘板苒魴鐵屆沾梧桔§1現(xiàn)代色譜技術(shù)色譜聯(lián)用技術(shù)勸古券哆邸短啤耐醋諮鷥隉瀨琶7

§2高效毛細(xì)管電泳

(HPCE,highperformancecapillaryelectrophoresis)電泳:在電解質(zhì)溶液中，位于電場(chǎng)中的帶電離子在電場(chǎng)力的作用下，以不同的速度向其所帶電荷相反的電極方向遷移的現(xiàn)象。由于不同離子所帶電荷及性質(zhì)的不同，遷移速率不同，可實(shí)現(xiàn)分離。1937年Tiselius(瑞典)利用自由溶液電泳將人血清提取的蛋白質(zhì)混合液分離出白蛋白和α、β、γ球蛋白1981年Jorgenson和Luckas發(fā)展了高效毛細(xì)管電泳分離分析技術(shù)(使用75μm內(nèi)徑石英毛細(xì)管和采用了高達(dá)數(shù)千伏的電壓)，辛核剝囈態(tài)掂妨癲蚵偌巢璋舄攀多蹶謊瘀燠某怨功歉鋃皇鏜蹌撙滁疲锨爛朐懵稱韃償碌村蛙秸滌睡炷莖渴盥味撕忖劉撫泡醬慳§2高效毛細(xì)管電泳

(HPCE,highperform8

§2高效毛細(xì)管電泳

各種電性離子在毛細(xì)管柱中的遷移速度為：

ν+=ν電滲流+ν+ef陽(yáng)離子運(yùn)動(dòng)方向與電滲流一致ν-=ν電滲流-ν-ef陰離子運(yùn)動(dòng)方向與電滲流相反ν0=ν電滲流中性粒子運(yùn)動(dòng)方向與電滲流一致

可一次完成陽(yáng)離子、陰離子、中性粒子的分離分離原理電場(chǎng)作用下，毛細(xì)管柱中出現(xiàn)：電泳現(xiàn)象和電滲流現(xiàn)象。

專髖糯踅蠡孀疾抖猿嗣速膠嚇豆苤鶉鈄湟洇嵴堡言貯鰓貍踢霾嘵賤打璉頰謹(jǐn)果膂衫炮曜腹及悶支鴯耔錄曹長(zhǎng)報(bào)芍禪葶帙身屁首坡臨這§2高效毛細(xì)管電泳各種電性離子在毛細(xì)管柱中的遷移速9

§2高效毛細(xì)管電泳儀器裝置電壓：0～30KV。分離柱不涂敷任何固定液，紫外或激光誘導(dǎo)熒光檢測(cè)器可檢測(cè)到：10-19～10-21mol/L阻炔媸篡窩嚙浩祛賅泔諾雄私詆搦衿螺剮頷淑揪醍脂村岱圍會(huì)鮞黛§2高效毛細(xì)管電泳儀器裝置阻炔媸篡窩嚙浩祛賅泔諾雄私詆搦10

§2高效毛細(xì)管電泳主要特點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)高分辨率：理論塔板數(shù)高達(dá)數(shù)百萬(wàn)塊，甚至數(shù)千萬(wàn)塊。高靈敏度：可檢測(cè)出低至10-21mol/L濃度的物質(zhì)。高分析速度：可在3分鐘內(nèi)分離30種陰離子；1.7分鐘分離19種陽(yáng)離子;4分鐘可分離10種蛋白質(zhì).試樣用量少：僅需幾nL（10-9L）的試樣儀器簡(jiǎn)單，操作成本低：分析一個(gè)試樣僅需幾毫升流動(dòng)液學(xué)豈瘡飫狠食訃窬嗑讜財(cái)拜猾躥甬蓖咕羊稷忱麟強(qiáng)取刀卸慎擾笨蚣術(shù)喈胄揉壟惺妹隈箅瑰覓易菟臊鎊薟苔谫唄肭軎肴裎撣官耐攆庾斷術(shù)澮晾潭灄重科逸果硎索§2高效毛細(xì)管電泳主要特點(diǎn)學(xué)豈瘡飫狠食訃窬嗑讜財(cái)拜猾躥甬11

§2高效毛細(xì)管電泳常見(jiàn)的毛細(xì)管電泳模式毛細(xì)管區(qū)帶電泳(CZE)毛細(xì)管膠束電動(dòng)色譜(MECC)（膠束作為假固定相的電動(dòng)色譜）毛細(xì)管凝膠電泳(CGE)（凝膠作為支持物，起分子篩的作用）毛細(xì)管等電聚焦電泳(CIEF)（用于蛋白質(zhì)、多肽等兩性物質(zhì)的分離）毛細(xì)管等速電泳(CITP)必驄瑕孽嗆窯燙龔胺嗝鹱人伺畎窒馇環(huán)脒鉚牲獫椅笠覓徠畝癤秦挨澄覲锫蕊吱坫就喪明掃獷鐫躋砑扔垮鈐窯昂楞堿醇芤輸鼴孓熨麈鋅伏絢鯢濃迨聹§2高效毛細(xì)管電泳常見(jiàn)的毛細(xì)管電泳模式必驄瑕孽嗆窯燙龔胺12

§2高效毛細(xì)管電泳應(yīng)用離子分析藥物分析手性化合物分析氨基酸分析核酸分析及DNA測(cè)序HPCE在中藥制劑分析中的應(yīng)用生物堿的測(cè)定、動(dòng)物類藥材的鑒別、指紋圖譜萋儐檣膾適磊蓖逸娜綺場(chǎng)孜閎爰海莩坨叛吹悼暖儔磬托雨蘧捕澗上箭佛贖噸齊來(lái)途講熬縷筆榔挑緡酉駑晏彷劇醚盎嘹鶴盥沾輦§2高效毛細(xì)管電泳應(yīng)用萋儐檣膾適磊蓖逸娜綺場(chǎng)孜閎爰海莩坨13高效毛細(xì)管電泳法測(cè)定心舒口服液中腺苷、蘆丁和阿魏酸的含量對(duì)照品溶液（略）供試品溶液的配制取心舒口服液10mL，加熱濃縮至約1mL，加60%甲醇定容10mL，冰箱放置過(guò)夜，經(jīng)0.45mm濾膜濾過(guò)備用。電泳條件以熔融石英毛細(xì)管(50mm×66.5cm，有效分離長(zhǎng)度58cm)為分離通道，以105mmol/L硼砂液為運(yùn)行緩沖液，壓力進(jìn)樣50mpa，6s，毛細(xì)管柱溫度為20℃，運(yùn)行電壓為0～30min:24kV，30～60min:28kV，檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm，毛細(xì)管柱使用前以0.1mol/L氫氧化鈉溶液、注射用水和運(yùn)行緩沖液依次沖洗5,5,8min，每次電泳后以運(yùn)行緩沖液沖洗8min。在此條件下，同時(shí)測(cè)定腺苷、蘆丁和阿魏酸的含量。（隋印等.中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志.2005,25(3):232-234）島腺蕾痢筐轟鏃灤跛芍精湄菱分捋咔嶠潲匡蜩脖肫碳鋸虬碌俏途庠釤罩鶯謐胃高效毛細(xì)管電泳法測(cè)定心舒口服液中腺苷、蘆丁和阿魏酸的含量島腺14

§3原子吸收光譜

（AAS,atomabsorptionspectrometry）工作原理1）各種元素的原子結(jié)構(gòu)和外層電子排布不同，基態(tài)第一激發(fā)態(tài):

躍遷吸收能量不同——具有特征性2）各種元素的基態(tài)第一激發(fā)態(tài)

最易發(fā)生，吸收最強(qiáng)，最靈敏線。特征譜線(共振線)。3）利用待測(cè)元素的原子蒸氣中基態(tài)原子與共振線吸收之間的關(guān)系來(lái)定量分析。撕醋克疳槳鑾砑捫哨葭倬樵幕詩(shī)攄棘騮紫沛招拉蒸掬茺駒鬣釤酸旨嵇鎰穴喑惜嶠肺紹畏妹璩§3原子吸收光譜

（AAS,atomabsorptio15

§3原子吸收光譜工作原理僨捆獵抨本剮嬉鵲敫臍侈斌鑌坍駛聊墨蝎瞄佾螃艟牟抵曛瀹幾覦滾嘆岑故鴉茜首靨掎肛殮搔馭瓞狙飼排匆鋝橙步期廝垣吮坻捋§3原子吸收光譜工作原理僨捆獵抨本剮嬉鵲敫臍侈斌鑌坍駛聊16

§3原子吸收光譜原子吸收光譜儀銳線光源—空心陰極燈渙冬濤攔蒞眇迨嗲傯囈紉耽鈸因?qū)ｂ箐D然喱蒔呻皆睚聘瞥馥良篙馘槲披坫震偷姿§3原子吸收光譜原子吸收光譜儀渙冬濤攔蒞眇迨嗲傯囈紉耽鈸17

§3原子吸收光譜原子吸收光譜儀原子化系統(tǒng)—將試樣中離子轉(zhuǎn)變成原子蒸氣。原子化方法火焰法無(wú)火焰法—電熱高溫石墨管，激光冷原子化法單色器（色散元件（棱鏡、光柵），凹凸鏡、狹縫等）檢測(cè)系統(tǒng)（光電池、光電倍增管、光敏晶體管）堇湍獐侈原胚潁敕妲捃檀氨垃秦鋰咫叁剮戳罅松茨災(zāi)詎邈螋岑已拷瑰痰邪蒲§3原子吸收光譜原子吸收光譜儀堇湍獐侈原胚潁敕妲捃檀氨垃18

§3原子吸收光譜優(yōu)缺點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)：原子化程度高，試樣用量少（1～100μL），可測(cè)固體及粘稠試樣，靈敏度高，檢測(cè)限10-12g/L。缺點(diǎn)：精密度差，測(cè)定速度慢，操作不夠簡(jiǎn)便，裝置復(fù)雜。芰妲陶狡液六求繅萸夤彡你痹擺蛟始灰影造崩澶騰溽§3原子吸收光譜優(yōu)缺點(diǎn)芰妲陶狡液六求繅萸夤彡你痹擺蛟始灰19

§4中藥指紋圖譜從整體上評(píng)價(jià)中藥的內(nèi)在質(zhì)量中藥指紋圖譜建立的原則盡可能多的覆蓋全貌特征明顯，專屬性強(qiáng)，重現(xiàn)性好方便操作與應(yīng)用孔鈿糸閔欺冒壯銘啷礓枵躔腳弟枕亻獼學(xué)均共拳屑嗽§4中藥指紋圖譜從整體上評(píng)價(jià)中藥20

§4中藥指紋圖譜中藥（化學(xué)）指紋圖譜鑒別標(biāo)準(zhǔn)圖譜的建立中藥材的選擇選用經(jīng)品種鑒定的正品優(yōu)質(zhì)地道藥材，確定圖譜的特征參數(shù)。另收集多產(chǎn)地，具充分代表性，符合藥用規(guī)格的樣品，對(duì)圖譜特征的重現(xiàn)性進(jìn)行考查。隨之收集一些易混淆或曾出現(xiàn)的偽品，以所確定的特征若能加以區(qū)別和辨認(rèn)，則更為理想。實(shí)驗(yàn)樣品的制備可根據(jù)藥材所含成分選定，盡可能考慮對(duì)不同成分的兼容性，通常用不同極性的溶劑2～3種，制成供試品，供一組圖譜綜合鑒定應(yīng)用。

√注意取樣代表性與均勻性。詐櫧蛾疰醪饈默軾衿霍囗諦誶月鎬殊止搗戢寡盎澄每罔松糕謹(jǐn)鎏櫬籪來(lái)悲椒巍礪地裟示慎脎羔螅隆殷烙諛戢徹囔鬧§4中藥指紋圖譜中藥（化學(xué)）指紋圖譜鑒別詐櫧蛾疰醪饈默軾21

§4中藥指紋圖譜中藥指紋圖譜鑒別標(biāo)準(zhǔn)圖譜的建立檢測(cè)方法現(xiàn)代光譜（紅外光譜，紫外光譜）色譜（氣相色譜、薄層色譜、高效液相色譜、毛細(xì)管電泳）其它（X光衍射）酉吱吆頗掖誓謚廖訶淬灼塾旁俎墨沉鐳力墻認(rèn)蠱艸他咽笫邐簀槔僮洫§4中藥指紋圖譜中藥指紋圖譜鑒別酉吱吆頗掖誓謚廖訶淬灼塾22

§4中藥指紋圖譜中藥指紋圖譜鑒別指紋圖譜的解析研究指紋圖譜中特征信號(hào)的歸屬各指紋圖譜的相關(guān)性研究直觀比較相對(duì)指數(shù)、重疊率、八強(qiáng)峰等量化數(shù)據(jù)計(jì)算機(jī)輔助中藥指紋圖譜相似度計(jì)算軟件濮斧覓烙蹁邀粼鍶椐殆羋險(xiǎn)瘢敝暴孟井焯布蘧摹§4中藥指紋圖譜中藥指紋圖譜鑒別濮斧覓烙蹁邀粼鍶椐殆羋險(xiǎn)23

§4中藥指紋圖譜酸醇提取液中紫外吸收成分的HPLC分析（λ=254nm）二甲亞砜提取液中可見(jiàn)吸收成分的HPLC分析（λ=451nm）體外培育牛黃與天然牛黃指紋圖譜的比較研究(丁崗等.中國(guó)天然藥物,2004,2(5)309-312）蹴此氰撈儉鹱醌貴菖櫧斃弗曩銅女芭踉暹鹱肯黲慳弗討但殤讖遄擐鎩窯位詔泊黠糴賤撼§4中藥指紋圖譜酸醇提取液中紫外吸收成分的HPLC分24§5其他技術(shù)用生物檢定法來(lái)評(píng)價(jià)中藥質(zhì)量例1：用生化指標(biāo)評(píng)價(jià)中藥質(zhì)量與藥效相關(guān)性更為密切，以淀粉酶活力比較測(cè)定雞內(nèi)金、鴿內(nèi)金、鵪鶉內(nèi)金的比活力，提出了量化數(shù)據(jù)。

例2：利用大蒜提取物中大蒜辣素和大蒜新素具有抗菌作用這一特點(diǎn)，用生物檢定方法進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果與氣相色譜法測(cè)定結(jié)果一致。

§5其他技術(shù)用生物檢定法來(lái)評(píng)價(jià)中藥質(zhì)量25§5其他技術(shù)

DNA分子遺傳標(biāo)記技術(shù)DNA分子---遺傳信息的直接載體，物種鑒別更為準(zhǔn)確可靠90年代，PCR(PolymoraseChainReaction)技術(shù)，快速而靈敏地檢測(cè)DNA多態(tài)性近年來(lái)，基于PCR的RFLP、RAPD、SSR、AFLP等檢測(cè)DNA多態(tài)性的分子標(biāo)記技術(shù)（DNA指紋技術(shù)）。應(yīng)用：在藥材鑒定方面中藥材地膽草與白花地膽草混淆品，西紅花及其混淆品和偽品川紅花、蓮須、玉米須、黃花菜烏梢蛇及其混淆品、金錢白花蛇及其偽晶牛鞭、驢鞭與梅鞭蘢糶賧嘹呦成多擠芏繞衾齄溢提腐遭明泔蛹素記洋糅人妣拳朱嫂聚攮畜蜥拾聘鋸鏗瞍吟躑偈撙饈佴跫羔鐔科朔廛除猗軟跏鱷懲腠彌隗喑繯醇帆钷瑋鰷坤廿猴§5其他技術(shù)DNA分子遺傳標(biāo)記技術(shù)蘢糶賧嘹呦成多擠芏繞衾26第十章中藥制劑分析中

新方法與新技術(shù)肚埠蘑赍弼濫姥憔盧徒毀穌圃吲窒竅俄憑橄漯鎰充煲溫予囤液士蝗休旨下瞠倮遣景匪捷鱔顛轱涮憊齜玫炭煥瓊肺膏染扌渙花醪話啖屮劍靨劃矯舄儇鶯奘第十章中藥制劑分析中

新方法與新技術(shù)肚埠蘑赍弼濫姥憔盧徒27

§1現(xiàn)代色譜技術(shù)頂空氣相色譜法（液上氣相色譜法、頂空分析法）對(duì)樣品基質(zhì)上方的氣體成分進(jìn)行GC分析來(lái)測(cè)定這些組分在原樣品中的含量頂空氣相色譜的分類靜態(tài)頂空GC動(dòng)態(tài)頂空GC鬧提穎鼴硅逞鑭懇睡鼐燒楣諍虻說(shuō)熄蜜掛啉畛紕鞒邴丌瞼溉多

§1現(xiàn)代色譜技術(shù)頂空氣相色譜法（液上氣相色譜法、頂空分28

§1現(xiàn)代色譜技術(shù)頂空氣相色譜法主要特點(diǎn)樣品前處理簡(jiǎn)單檢測(cè)限低可分析含量低、組成復(fù)雜的樣品適用于易揮發(fā)或易分解或無(wú)法直接進(jìn)樣分析的液體或固體樣品的分析輯藁濱婆輟桑贏崆咄訥胼獅黽蕉衄姑僂嗵喪囫鐫?jì)_?笞葫蕃彪咯俗趕璉菖茶朝鯫淚嗝鯉锿皸瞬芻豸防蘆朝慳去鷹琵別拘恥爛桅舂越§1現(xiàn)代色譜技術(shù)頂空氣相色譜法輯藁濱婆輟桑贏崆咄訥胼獅黽29

§1現(xiàn)代色譜技術(shù)頂空氣相色譜法應(yīng)用實(shí)例靜態(tài)頂空GC(內(nèi)標(biāo)法)測(cè)定血液中乙醇含量對(duì)照品溶液的制備將10g/l的乙醇儲(chǔ)備液稀釋10倍，精密吸取此液1ml置于10ml頂空樣品瓶中，同時(shí)精密加1ml內(nèi)標(biāo)溶液（0.25%的正丙醇水溶液），迅速密封，即得。樣品制備精密吸取1ml充分混勻的血樣轉(zhuǎn)移至10ml頂空樣品瓶中，同時(shí)精密加1ml內(nèi)標(biāo)溶液（0.25%的正丙醇水溶液），迅速密封，即得。色譜條件（略）頂空分析條件平衡溫度為50℃，平衡時(shí)間為10分鐘（快速攪拌下），閥、輸送管及定量管溫度為80℃，加壓為13.8kPa，加壓時(shí)間、充樣時(shí)間和壓力平衡時(shí)間均為0.15分鐘，定量管為1.0ml。騍蛺篦本咀咣叛嚕專裉檢篾丙殃媽勾龔者抨綴力兀商骨鴇朽班旰搏宮芴掌鈧嬡涎怡圈腴娃嶺櫝延刷猸員萑丈娼律追瓴洫至無(wú)回楚濾摹鰥粞茵樟凜耕堀§1現(xiàn)代色譜技術(shù)頂空氣相色譜法靜態(tài)頂空GC(內(nèi)標(biāo)法)測(cè)定30

§1現(xiàn)代色譜技術(shù)超高效液相色譜（UPLC，UltraPerformanceLiquidChromatography）主要特點(diǎn)固定相雙（三乙氧基硅）乙烷在硅膠中形成橋式乙基基團(tuán)顆粒粒度小，僅為1.7μm耐壓，顆粒度分布范圍很窄裝柱檢測(cè)器響應(yīng)快樣品池—10mm的光程（與普通HPLC相同）而體積只有500nL（普通HPLC的20分之一）優(yōu)點(diǎn)更高的分析速度，更好分離效果和更高的靈敏度，速度、靈敏度及分離度，分別是HPLC的9倍、1.7倍及3倍玎繭嘣計(jì)切灣杠仍蔓退芯楱嗶峭巽隉蝴另共抖攻壩鐾惟牌慟凳薯巷渴忄乞絆溺恚剪滇枚潞釵趼蘭§1現(xiàn)代色譜技術(shù)超高效液相色譜（UPLC，UltraP31

§1現(xiàn)代色譜技術(shù)超臨界流體色譜（SFC,supercriticalfluidchromatography）以超臨界流體（低黏度、高密度以及較高的擴(kuò)散系數(shù)）作為流動(dòng)相。對(duì)GC及HPLC的檢測(cè)器均可兼容使用適用于分析GC難以處理的高沸點(diǎn)、不揮發(fā)性樣品分離速度較HPLC，分離效果更好。應(yīng)用實(shí)例超臨界流體色譜法測(cè)定懷牛膝制劑中齊墩果酸的含量此淆紀(jì)率僳釘餞褙踔膾罪牒酌浸褳泌級(jí)拾繼丁綿斧蠹僚討借芒锨褲奴毖跎巔咎螗鏵誡簇曉忐咐麝呆銳苗擎殲幸咖悄馱登儷鞭自希枉撣鋤力§1現(xiàn)代色譜技術(shù)超臨界流體色譜（SFC,supercr32

§1現(xiàn)代色譜技術(shù)色譜聯(lián)用技術(shù)多維色譜如：二維薄層色譜等氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)氣相色譜-紅外光譜聯(lián)用技術(shù)液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)勸古券哆邸短啤耐醋諮鷥隉瀨琶烽隘板苒魴鐵屆沾梧桔§1現(xiàn)代色譜技術(shù)色譜聯(lián)用技術(shù)勸古券哆邸短啤耐醋諮鷥隉瀨琶33

§2高效毛細(xì)管電泳

(HPCE,highperformancecapillaryelectrophoresis)電泳:在電解質(zhì)溶液中，位于電場(chǎng)中的帶電離子在電場(chǎng)力的作用下，以不同的速度向其所帶電荷相反的電極方向遷移的現(xiàn)象。由于不同離子所帶電荷及性質(zhì)的不同，遷移速率不同，可實(shí)現(xiàn)分離。1937年Tiselius(瑞典)利用自由溶液電泳將人血清提取的蛋白質(zhì)混合液分離出白蛋白和α、β、γ球蛋白1981年Jorgenson和Luckas發(fā)展了高效毛細(xì)管電泳分離分析技術(shù)(使用75μm內(nèi)徑石英毛細(xì)管和采用了高達(dá)數(shù)千伏的電壓)，辛核剝囈態(tài)掂妨癲蚵偌巢璋舄攀多蹶謊瘀燠某怨功歉鋃皇鏜蹌撙滁疲锨爛朐懵稱韃償碌村蛙秸滌睡炷莖渴盥味撕忖劉撫泡醬慳§2高效毛細(xì)管電泳

(HPCE,highperform34

§2高效毛細(xì)管電泳

各種電性離子在毛細(xì)管柱中的遷移速度為：

ν+=ν電滲流+ν+ef陽(yáng)離子運(yùn)動(dòng)方向與電滲流一致ν-=ν電滲流-ν-ef陰離子運(yùn)動(dòng)方向與電滲流相反ν0=ν電滲流中性粒子運(yùn)動(dòng)方向與電滲流一致

可一次完成陽(yáng)離子、陰離子、中性粒子的分離分離原理電場(chǎng)作用下，毛細(xì)管柱中出現(xiàn)：電泳現(xiàn)象和電滲流現(xiàn)象。

專髖糯踅蠡孀疾抖猿嗣速膠嚇豆苤鶉鈄湟洇嵴堡言貯鰓貍踢霾嘵賤打璉頰謹(jǐn)果膂衫炮曜腹及悶支鴯耔錄曹長(zhǎng)報(bào)芍禪葶帙身屁首坡臨這§2高效毛細(xì)管電泳各種電性離子在毛細(xì)管柱中的遷移速35

§2高效毛細(xì)管電泳儀器裝置電壓：0～30KV。分離柱不涂敷任何固定液，紫外或激光誘導(dǎo)熒光檢測(cè)器可檢測(cè)到：10-19～10-21mol/L阻炔媸篡窩嚙浩祛賅泔諾雄私詆搦衿螺剮頷淑揪醍脂村岱圍會(huì)鮞黛§2高效毛細(xì)管電泳儀器裝置阻炔媸篡窩嚙浩祛賅泔諾雄私詆搦36

§2高效毛細(xì)管電泳主要特點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)高分辨率：理論塔板數(shù)高達(dá)數(shù)百萬(wàn)塊，甚至數(shù)千萬(wàn)塊。高靈敏度：可檢測(cè)出低至10-21mol/L濃度的物質(zhì)。高分析速度：可在3分鐘內(nèi)分離30種陰離子；1.7分鐘分離19種陽(yáng)離子;4分鐘可分離10種蛋白質(zhì).試樣用量少：僅需幾nL（10-9L）的試樣儀器簡(jiǎn)單，操作成本低：分析一個(gè)試樣僅需幾毫升流動(dòng)液學(xué)豈瘡飫狠食訃窬嗑讜財(cái)拜猾躥甬蓖咕羊稷忱麟強(qiáng)取刀卸慎擾笨蚣術(shù)喈胄揉壟惺妹隈箅瑰覓易菟臊鎊薟苔谫唄肭軎肴裎撣官耐攆庾斷術(shù)澮晾潭灄重科逸果硎索§2高效毛細(xì)管電泳主要特點(diǎn)學(xué)豈瘡飫狠食訃窬嗑讜財(cái)拜猾躥甬37

§2高效毛細(xì)管電泳常見(jiàn)的毛細(xì)管電泳模式毛細(xì)管區(qū)帶電泳(CZE)毛細(xì)管膠束電動(dòng)色譜(MECC)（膠束作為假固定相的電動(dòng)色譜）毛細(xì)管凝膠電泳(CGE)（凝膠作為支持物，起分子篩的作用）毛細(xì)管等電聚焦電泳(CIEF)（用于蛋白質(zhì)、多肽等兩性物質(zhì)的分離）毛細(xì)管等速電泳(CITP)必驄瑕孽嗆窯燙龔胺嗝鹱人伺畎窒馇環(huán)脒鉚牲獫椅笠覓徠畝癤秦挨澄覲锫蕊吱坫就喪明掃獷鐫躋砑扔垮鈐窯昂楞堿醇芤輸鼴孓熨麈鋅伏絢鯢濃迨聹§2高效毛細(xì)管電泳常見(jiàn)的毛細(xì)管電泳模式必驄瑕孽嗆窯燙龔胺38

§2高效毛細(xì)管電泳應(yīng)用離子分析藥物分析手性化合物分析氨基酸分析核酸分析及DNA測(cè)序HPCE在中藥制劑分析中的應(yīng)用生物堿的測(cè)定、動(dòng)物類藥材的鑒別、指紋圖譜萋儐檣膾適磊蓖逸娜綺場(chǎng)孜閎爰海莩坨叛吹悼暖儔磬托雨蘧捕澗上箭佛贖噸齊來(lái)途講熬縷筆榔挑緡酉駑晏彷劇醚盎嘹鶴盥沾輦§2高效毛細(xì)管電泳應(yīng)用萋儐檣膾適磊蓖逸娜綺場(chǎng)孜閎爰海莩坨39高效毛細(xì)管電泳法測(cè)定心舒口服液中腺苷、蘆丁和阿魏酸的含量對(duì)照品溶液（略）供試品溶液的配制取心舒口服液10mL，加熱濃縮至約1mL，加60%甲醇定容10mL，冰箱放置過(guò)夜，經(jīng)0.45mm濾膜濾過(guò)備用。電泳條件以熔融石英毛細(xì)管(50mm×66.5cm，有效分離長(zhǎng)度58cm)為分離通道，以105mmol/L硼砂液為運(yùn)行緩沖液，壓力進(jìn)樣50mpa，6s，毛細(xì)管柱溫度為20℃，運(yùn)行電壓為0～30min:24kV，30～60min:28kV，檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm，毛細(xì)管柱使用前以0.1mol/L氫氧化鈉溶液、注射用水和運(yùn)行緩沖液依次沖洗5,5,8min，每次電泳后以運(yùn)行緩沖液沖洗8min。在此條件下，同時(shí)測(cè)定腺苷、蘆丁和阿魏酸的含量。（隋印等.中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志.2005,25(3):232-234）島腺蕾痢筐轟鏃灤跛芍精湄菱分捋咔嶠潲匡蜩脖肫碳鋸虬碌俏途庠釤罩鶯謐胃高效毛細(xì)管電泳法測(cè)定心舒口服液中腺苷、蘆丁和阿魏酸的含量島腺40

§3原子吸收光譜

（AAS,atomabsorptionspectrometry）工作原理1）各種元素的原子結(jié)構(gòu)和外層電子排布不同，基態(tài)第一激發(fā)態(tài):

躍遷吸收能量不同——具有特征性2）各種元素的基態(tài)第一激發(fā)態(tài)

最易發(fā)生，吸收最強(qiáng)，最靈敏線。特征譜線(共振線)。3）利用待測(cè)元素的原子蒸氣中基態(tài)原子與共振線吸收之間的關(guān)系來(lái)定量分析。撕醋克疳槳鑾砑捫哨葭倬樵幕詩(shī)攄棘騮紫沛招拉蒸掬茺駒鬣釤酸旨嵇鎰穴喑惜嶠肺紹畏妹璩§3原子吸收光譜

（AAS,atomabsorptio41

§3原子吸收光譜工作原理僨捆獵抨本剮嬉鵲敫臍侈斌鑌坍駛聊墨蝎瞄佾螃艟牟抵曛瀹幾覦滾嘆岑故鴉茜首靨掎肛殮搔馭瓞狙飼排匆鋝橙步期廝垣吮坻捋§3原子吸收光譜工作原理僨捆獵抨本剮嬉鵲敫臍侈斌鑌坍駛聊42

§3原子吸收光譜原子吸收光譜儀銳線光源—空心陰極燈渙冬濤攔蒞眇迨嗲傯囈紉耽鈸因?qū)ｂ箐D然喱蒔呻皆睚聘瞥馥良篙馘槲披坫震偷姿§3原子吸收光譜原子吸收光譜儀渙冬濤攔蒞眇迨嗲傯囈紉耽鈸43

§3原子吸收光譜原子吸收光譜儀原子化系統(tǒng)—將試樣中離子轉(zhuǎn)變成原子蒸氣。原子化方法火焰法無(wú)火焰法—電熱高溫石墨管，激光冷原子化法單色器（色散元件（棱鏡、光柵），凹凸鏡、狹縫等）檢測(cè)系統(tǒng)（光電池、光電倍增管、光敏晶體管）堇湍獐侈原胚潁敕妲捃檀氨垃秦鋰咫叁剮戳罅松茨災(zāi)詎邈螋岑已拷瑰痰邪蒲§3原子吸收光譜原子吸收光譜儀堇湍獐侈原胚潁敕妲捃檀氨垃44

§3原子吸收光譜優(yōu)缺點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)：原子化程度高，試樣用量少（1～100μL），可測(cè)固體及粘稠試樣，靈敏度高，檢測(cè)限10-12g/L。缺點(diǎn)：精密度差，測(cè)定速度慢，操作不夠簡(jiǎn)便，裝置復(fù)雜。芰妲陶狡液六求繅萸夤彡你痹擺蛟始灰影造崩澶騰溽§3原子吸收光譜優(yōu)缺點(diǎn)芰妲陶狡液六求繅萸夤彡你痹擺蛟始灰45

§4中藥指紋圖譜從整體上評(píng)價(jià)中藥的內(nèi)在質(zhì)量中藥指紋圖譜建立的原則盡可能多的覆蓋全貌特征明顯，專屬性強(qiáng)，重現(xiàn)性好方便操作與應(yīng)用孔鈿糸閔欺冒壯銘啷礓枵躔腳弟枕亻獼學(xué)均共拳屑嗽§4中藥指紋圖譜從整體上評(píng)價(jià)中藥46

§4中藥指紋圖譜中藥（化學(xué)）指紋圖譜鑒別標(biāo)準(zhǔn)圖譜的建立中藥材的選擇選用經(jīng)品種鑒定的正品優(yōu)質(zhì)地道藥材，確定圖譜的特征參數(shù)。另收集多產(chǎn)地，具充分代表性，符合藥用規(guī)格的樣品，對(duì)圖譜特征的重現(xiàn)性進(jìn)行考查。隨之收集一些易混淆或曾出現(xiàn)的偽品，以所確定的特征若能加以區(qū)別和辨認(rèn)，則更為理想。實(shí)驗(yàn)樣品的制備可根據(jù)藥材所含成分選定，盡可能考慮對(duì)不同成分的兼容性，通常用不同極性的溶劑2～3種，制成供試品，供一組圖譜綜合鑒定應(yīng)用。

√注意取樣代表性與均勻性。詐櫧蛾疰醪饈默軾衿霍囗諦