抗核抗體譜免疫印跡法

抗核抗體譜檢測及其臨床意義1抗核抗體譜的走義抗核抗體譜的免疫1抗核抗體譜的走義抗核抗體譜的免疫E卩跡法原理抗樓抗體譜的臨床意義?抗核抗體譜的定義?抗核抗體譜的定義?抗核抗體譜的定義?抗核抗體譜的定義抗核抗體譜的定義單擊添加文本……11＞抗核抗體譜的定義11＞抗核抗體譜的定義11＞抗核抗體譜的定義11＞抗核抗體譜的定義傳統(tǒng)定義:針對細(xì)胞核成分的自身抗體的總稱。????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????根據(jù)細(xì)胞核內(nèi)靶抗原分子理化特性和分布部位分類：A多核昔酸:dsDNA,ssDNA,RNAA組蛋白：HlzH2A,H2BzH3zH4zH2A-H2B復(fù)合體A核漿中的核糖核蛋白（ENA）:SmznRNP,SSA/Ro,SSB/LaA核仁抗原:U3-nRNP/Fibrillaria,PM-Scl/PM-1z7-2-RNP/To,4-6-S-RNAA著絲點：著絲點蛋白A其屜董白：S^I-70,PCNA,核點,Mi-1,Mi-2,Ku,板層素,NOR-90廣義定義：指抗細(xì)胞內(nèi)所有抗原成分的自身抗體的總稱。對ANA的理解已不再局限于核成分,而是指抗核酸(nucleicacid)和核蛋白(nucleoprotein)抗體的總稱。????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????整個細(xì)胞，包括細(xì)胞核、細(xì)胞漿、細(xì)胞骨架、細(xì)胞分裂周期蛋白等。W自身免疫性疾病與ANA啲相關(guān)性?系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）?系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）I］慢性炎癥性結(jié)締組織病統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）是一種多發(fā)于青年女性的累及多臟器的自身免疫性炎癥性結(jié)締組織病，早期、輕型和不典型的病例日漸增多。有些重癥患者（除患者有彌漫性增生性腎小球腎炎者外），有時亦可自行緩解。有些患者呈“一過性”發(fā)作，經(jīng)過數(shù)月的短暫病程后疾病可完全消失。

SLE在臨床上各器官受累的表現(xiàn)神經(jīng)系統(tǒng)受累（30%）SLE在臨床上各器官受累的表現(xiàn)皮膚（蝴蝶狀皮疹，盤狀狼瘡；74%）漿膜炎（胸膜炎，心包炎；77%）狼瘡腎炎（51%）血液系統(tǒng)受累（貧血等；60%）姜節(jié)炎（至少2個關(guān)節(jié)以上受累；96%）IBANAs與系統(tǒng)性紅斑IBANAs與系統(tǒng)性紅斑3良瘡(SLE)的相關(guān)性IBANAs與系統(tǒng)性紅斑IBANAs與系統(tǒng)性紅斑3良瘡(SLE)的相關(guān)性系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)中的自身抗體抗原陽性率雙鏈DNA60-90%單鏈DNA70-95%RNA50%組蛋口95%Ul?nRNP15-40%Sm5-40%SS-A(Ro)20-60%SS-B(La)10-20%細(xì)胞周期蛋口(PCNA)3%Ku10%核糖體P蛋口(rRNP)10%熱休克蛋fl90kDA：Hsp-9050%心磷脂40-60%W類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(W類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)W類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(W類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)是一種病因未明的慢性、以炎性滑膜炎為主的系統(tǒng)性疾病。其特征是手、足小關(guān)節(jié)的多關(guān)節(jié)、對稱性、侵襲性關(guān)節(jié)炎癥，經(jīng)常伴有關(guān)節(jié)外器官受累及血清類風(fēng)濕因子陽性，可以導(dǎo)致關(guān)節(jié)畸形及功能喪失。[]>ANAs與類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎[]>ANAs與類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（RA）的相關(guān)性[]>ANAs與類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎[]>ANAs與類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（RA）的相關(guān)性

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎中的抗核抗體抗原陽性率組蛋白15-50%單鏈DNA(ssDNA)8%Ul-nRNP3%RANA90-95%W干燥綜合征（W干燥綜合征（SS）W干燥綜合征（W干燥綜合征（SS）夕卜分泌腺受累的自身免疫疾病癥狀：-口腔干燥-唾液及眼淚減少-腮腺腫脹-胰腺外分泌腺分泌不足腮腺腫脹3[:多發(fā)性肌炎（3[:多發(fā)性肌炎（PM）及皮肌炎（DM）3[:多發(fā)性肌炎（3[:多發(fā)性肌炎（PM）及皮肌炎（DM）[TANAs與干燥綜合征（[TANAs與干燥綜合征（SS）的相關(guān)性原發(fā)性干燥綜合征中的自身抗體抗原陽性率SS-A(Ro)40-95%SS-B(La)40-95%單鏈DNA(ss-DNA)13%RANA70%唾液腺分泌管40-60%類風(fēng)濕因子60-80%皮膚與肌肉受累的自身免疫疾病癥狀：■肌肉疼痛/肌無力（如：肩膀/骨盆）皮膚癥狀：-膝蓋/手指關(guān)節(jié)處皮膚異變-紅斑-皮膚褪色[]>ANAs與多發(fā)性肌炎（[]>ANAs與多發(fā)性肌炎（PM）及皮肌炎（DM）的相關(guān)性[]>ANAs與多發(fā)性肌炎（[]>ANAs與多發(fā)性肌炎（PM）及皮肌炎（DM）的相關(guān)性多肌炎和皮肌炎抗原陽性率PM-Scl(PM-1)50-70%Jo-1（組氨酰?tRNA合成酶）25-35%Mi-110%Mi-25%Ku50%單鏈AND(ss-DNA)40-50%PL-7（蘇氨酰?tRNA合成酶）4%PL-12（丙氨酰?tRNA合成酶）3%IBANAs與進行性系統(tǒng)性硬化癥（IBANAs與進行性系統(tǒng)性硬化癥（SSc）的相關(guān)性IBANAs與進行性系統(tǒng)性硬化癥（IBANAs與進行性系統(tǒng)性硬化癥（SSc）的相關(guān)性W進行性系統(tǒng)性硬化癥（W進行性系統(tǒng)性硬化癥（SSc）血管與結(jié)締組織受累的自身免疫疾病癥狀：-扌旨扌掃硬化（thin,scleroticfingers）■爪型手-面具臉（嘴周邊出現(xiàn)皺紋，嘴唇變薄）-毛細(xì)血管擴張（表面血管永久性擴張）-表皮鈣質(zhì)沉著（血管壁與皮膚鈣化）指端硬化:爪型手面具臉毛細(xì)血管擴張皮膚鈣質(zhì)沉著

彌漫性進行性系統(tǒng)性碩化癥（DSSC）抗原陽性率原纖維蛋白5-10%PM-Scl(PM-1)50-70%Scl-7025-75%RNA多聚酶I4%7-2-RNP(To)罕見NOR-90（核仁形成區(qū)）罕見局限性進行性系統(tǒng)性碩化癥（LSSC）抗原陽性率著絲點80-95%11＞抗核抗體譜的檢測及意義抗核抗體譜的免疫印跡法原理抗核抗體譜的免疫印跡法原理抗核抗體譜的免疫印跡法原理抗核抗體譜的免疫印跡法原理詩拴抗住詩拴抗住詩拴抗住詩拴抗住?抗核抗體譜的檢測采用免疫印跡法(ImmunoblottingTestJBT)，用于定性檢測人血清?中抗核抗體譜共15中抗體。?條膜上平行包被了經(jīng)純化的抗核抗體譜中要檢測的抗原及質(zhì)控帶。?第一次孵育時，已稀釋的病人樣本與膜條上的抗原反應(yīng)。如果樣本陽性，特異性的IgG抗體將與相應(yīng)的抗原結(jié)合。為檢測已結(jié)合的抗體，在加入酶標(biāo)羊抗人IgG(堿性磷酸酶結(jié)合物)?第二次孵善，然后加入底物液以產(chǎn)生藍(lán)紫色顏色反應(yīng)。JL.+?抗核抗體譜的免疫印跡法原理?抗核抗體譜的免疫印跡法原理?抗核抗體譜的免疫印跡法原理?抗核抗體譜的免疫印跡法原理擠孩"1%濤（lgG>檢測試劑盤實馳操作流程削預(yù)處理\\材楡測膜條放入沮育>>?中.并在毎槽中加//入1.5ml樣左韁沖海需擺｝8床iQ育5mln〕\第一步:/溫育\/\/、xIR去槽內(nèi)液體?衽眼\\仲捕中先后分別加入//l.SmW本級沖液?//待檢樣*;清洗\\吸丿槽內(nèi)液體.在據(jù)XXfflffiU；上用1.5ml?//n后的最縮洗液清洗//腹條3次，每次5mg清洗內(nèi)液體.在超>>育權(quán)中加入l.SmlW//奔后的曲結(jié)合物：清洗內(nèi)液體.在超>>育權(quán)中加入l.SmlW//奔后的曲結(jié)合物：\第二步:/溫育X\吸必補內(nèi)液體，住搖\

床上用1.5ml?W\

//^的濃綁洗JR清洗膜7//條3次.卻次5min：/\第三步:/溫育吸力權(quán)內(nèi)浪體?在檣內(nèi)分別加入l?5ml顯色底物液,終止終止>吸去權(quán)內(nèi)液怵，焙水溝洗3次，毎次1.5ml.毎次lmln；判斷結(jié)果悅眼現(xiàn)察反噸區(qū)內(nèi)各抗廉帶育無著色及著色滉淺抗原在檢測膜條上的位豊：ANA讒15項ANAi§12JMnRNP/SmSmSSARo52SSBScl-70PM-SclJo-1CENP-BPCNAdsDNA樓小體級貴白rRNPAMA-M2Si控帶nRNP/SmSmSSARo52SSBScl-70Jo-1CENP-BnRNP/SmSmSSARo52SSBScl-70J0-1抗Ul-nRNP抗Ul-nRNP與Sm抗體抗Ul-nRNP抗Ul-nRNP與Sm抗體?靶抗原：位于細(xì)胞核內(nèi)的一組含尿卩密噪豐富的核糖核蛋白，Sm和U1RNP是同一分子復(fù)合物中的不同位點。?Sm含有u1、u2和u4-u6,而nRNP(ulRNP)僅含uIRNAo也即抗Sm抗70kDaRNPU1RNAAbbdefg體陽性均伴有抗U1RNP抗體，而抗U1RNP抗體可以單獨存在。70kDaRNPU1RNAAbbdefg?抗Sm：SLE的標(biāo)記性抗體，是前瞻性及回顧性診斷的指標(biāo)。陽性率低：SLE(30%)?抗U1RNP：多種CTD均可出現(xiàn)，與手指腫脹、雷諾現(xiàn)象、肌炎、指端硬化等相關(guān)，但腎炎發(fā)生率低。陽性率：40-60%,其中SLE(30-40%),SSc(14%),pSS(12%),PM/DM(15%)?高滴度抗U1RNP+抗Sm-MCTD?抗U1RNP+抗Sm+SLE?抗U1RNP-抗Sm+實驗室誤差？U1RNP丟失？芯抗芯抗SS-A/Ro-52抗體芯抗芯抗SS-A/Ro-52抗體ControlControlBoireetal.,1995:?Ro-52抗體不與SS?A抗原結(jié)合■純化的SS-A抗原不包含Ro-52

抗SS?A(60kDa)和抗Ro-52總是分開檢測!nRNP/SmSmSS-ARo<52SS-BScl-70PM-SclJo-1CENPBPCNAdsDNAnuclGOSomeshistonesrib.P-prot.AMAM2WHY?-天然SS-A=RNA+SS-A60kDa蛋白質(zhì)一無需Ro-52O-Ro-52并非SLE或SS患者診斷所需抗體?！鯯S-A60和Ro-52抗原的混合包被會降低SSA抗體的疾病特異性。-歐蒙產(chǎn)品始終分別檢測SS-A60和Ro-52o?抗SS-A/Ro-52?抗SS-A/Ro-52抗體?抗SS-A/Ro-52?抗SS-A/Ro-52抗體抗Ro-52抗體:不同組別中均可出現(xiàn)123If＞抗If＞抗SS-A抗體and抗SS-B抗體If＞抗If＞抗SS-A抗體and抗SS-B抗體藝抗SS-B藝抗SS-B抗體?在原發(fā)性SS病人中，抗SSA/Ro和抗SSB/La陽性率分別為60%和40%,它們是診斷干燥綜合征的血清學(xué)標(biāo)志。?抗SSB抗體較抗SSA抗體診斷干燥綜合征更為特異。?免疫擴散法與免疫印跡法(WesternBlot)得出的結(jié)果常常不一致。?SSA和抗SSB抗體陽性可造成新生兒狼瘡及嬰兒心臟傳導(dǎo)阻滯等先天性心臟病。?抗SSA和抗SSB抗體常與血管炎、淋巴結(jié)腫大、白細(xì)胞減少、光過敏、皮損、紫瘢等臨床癥狀相關(guān)。

SS-A(Ro-60),Ro-52andSS-B功能：調(diào)控RNA翻譯抗SS-A(60kDa)抗體干燥綜合癥：40-95%SLE：功能：調(diào)控RNA翻譯抗SS-A(60kDa)抗體干燥綜合癥：40-95%SLE：20-60%報生兒狼瘡：96%抗Ro?52(52kDa)抗體非特異功能:RNA聚合酶III輔助蛋白干燥綜合癥：40-95%SLE:10-20%SS-B47kDaJSS-B47kDaJ?抗?抗Scl-70抗體?抗?抗Scl-70抗體?靶抗原：DNA拓樸異構(gòu)酶I的降解產(chǎn)物主要存在核仁中。?SSc的標(biāo)記抗體，陽性率20?30%。DNA?與ILD（肺動脈高壓）、彌漫性皮膚Scl-70?多見于DSSc（彌漫型系統(tǒng)性硬化癥）,病情進展快，提DNA?與ILD（肺動脈高壓）、彌漫性皮膚Scl-70硬化有關(guān)，而PAH（間質(zhì)性肺?。┥僖?。lf＞抗lf＞抗PM-Sd抗體lf＞抗lf＞抗PM-Sd抗體?常見于多肌炎與硬化癥的重疊癥狀中，在重疊癥狀中的陽性率為50%；也可以僅出現(xiàn)于多肌炎患者中，陽性率為8%,彌散性硬化癥中的陽性率為2%-5%o［抗［抗Jo?l抗體［抗［抗Jo?l抗體靶抗原：組氨酸t(yī)RNA合成酶胞漿中的磷酸蛋白

?PM/DM的標(biāo)記抗體，陽（4*20-30%?抗體效價與疾病活動性相關(guān)?抗Jo?1抗體綜合征：急性發(fā)熱，對稱性關(guān)節(jié)炎，技工手，雷諾現(xiàn)象，肌炎（相對輕），肺間質(zhì)病諾現(xiàn)象，肌炎（相對輕），肺間質(zhì)病?其他抗合成酶抗體：抗PL?7、抗PL?12、抗OJ、抗EJ毛細(xì)血管擴張皮膚鈣質(zhì)沉著?抗?抗PCNA抗體?抗?抗PCNA抗體?抗CENP-B?抗CENP-B抗體?主要靶抗原：著絲點蛋白七?多見于LSSc,病程緩慢，提示預(yù)后較好。?CREST綜合征：軟組織鈣化（C），雷諾現(xiàn)象（R），食道功能障礙（E），指端硬化（S），毛細(xì)血管擴張（T）,但并非標(biāo)記抗體，也見于孤立性雷諾現(xiàn)象、SS、PBC、AIH等。?國外文獻：與PAH相關(guān)，而ILD少見中國人群：未發(fā)現(xiàn)與PAH（肺動脈高壓）相關(guān)，但ILD（間質(zhì)性肺疾病）少見?CENP-B白伊娜，王遷等?中國系統(tǒng)性硬化癥患者硬皮病相關(guān)自身抗體的檢測及其臨床意義?中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志?20口（5）：?CENP-B抗增殖細(xì)胞核抗原抗體（PCNA）?抗核糖體P蛋白抗體為SLE的高特異性指標(biāo)，陽性率在10-40%o?SLE患者伴有狼瘡性腦病時，此抗體陽性率可達56-90%oSLE患者出現(xiàn)核糖體P蛋白抗體與中樞神經(jīng)系統(tǒng)、肝臟或腎臟受累有關(guān)。在抗核抗體陰性的SLE患者，抗核糖體抗體陽性有重要診斷價值。?抗ds?抗ds?DNA抗體?抗ds?抗ds?DNA抗體?SLE的血清特異性抗體。?多有致病性（IgG型），與親和力（高）有關(guān)。?與LN與SLE疾病活動性相關(guān)，活動期達90%?？捎糜赟LE疾病活動期判斷&藥物療效觀察。?與SLE急性皮疹、血管炎、漿膜腔炎、白細(xì)胞減少等有關(guān)。芯抗核小體抗體(芯抗核小體抗體(ANuA)?核小體是真核細(xì)胞染色質(zhì)的基本復(fù)制單位，含組蛋白二聚體H2A-H2B和H3-H4,其外面為146個堿基對組成的雙鏈DNA。?參與SLE發(fā)病機制：多克隆B細(xì)胞活化劑產(chǎn)生ANuA,先于其他ANA促進抗dsDNA與AHA形成參與LN的發(fā)生。核小休核小體抗體是SLE的診斷標(biāo)記，其診斷靈敏度為70-90%o在SLE的活性期，此抗體的檢出率幾乎為100%,在非活動期的SLE中為62%(相應(yīng)的dsDNA抗體檢出率僅為3.3%)。核小體抗體對SLE的診斷靈敏度高于dsDNA抗體，抗核小體抗體甚至可在dsDNA抗體陰性的病人中檢測到。它們是SLE惡化的早期標(biāo)記，因為它們比dsDNA抗體