高效毛細管電泳課件

藥學院教師程寒儀器分析

一、化學分析法與儀器分析法二、儀器分析法分類三、儀器分析法的發(fā)展趨勢儀器分析簡介1、什么是化學分析法？2、什么是儀器分析法？3、儀器分析法的特點一、化學分析法與儀器分析法

一般的說，儀器分析是指采用比較復(fù)雜或特殊的儀器設(shè)備，通過測量物質(zhì)的某些物理或物理化學性質(zhì)的參數(shù)及其變化來獲取物質(zhì)的化學組成、成分含量及化學結(jié)構(gòu)等信息的一類方法。這些方法一般都有獨立的方法原理及理論基礎(chǔ)。2、什么是儀器分析法？方法的相對檢出限可達：微克數(shù)量級每毫升（μg?ml－1）納克每毫升（ng?ml－1

）皮克每毫升（pg?ml－1

）適于痕量組分（<0.1%）的測定化學分析法只適于常量組分（>1%）及微量組分（0.01%~1%）的分析

3、儀器分析法的特點（1）儀器分析的取樣量一般較少。固體：從幾mg～幾μg液體：從幾μl～幾nl可用于微量分析（0.1~10mg或0.01~1ml）超微量分析（<0.1mg或<0.01ml）化學分析方法取樣量較大，可用于常量分析（>0.1g或10ml）和半微量分析（0.01g~0.1g或1~10ml）3、儀器分析法的特點（2）儀器分析法一般都有較強的檢測能力。方法的絕對檢出限可達：微克數(shù)量級（10_6g）

納克數(shù)量級（10_9g）皮克數(shù)量級（10_12g）飛克數(shù)量級（10_15g）3、儀器分析法的特點（3）儀器分析具有更廣泛的用途，不但可用于成分分析，而且也可用于價態(tài)分析、結(jié)構(gòu)分析、無損分析、表面分析?；瘜W分析只能用于離線的成分分析。3、儀器分析法的特點（5）（一）、光學分析法（二）、電化學分析法（三）、分離分析法（四）、其它儀器分析法二、儀器分析法分類根據(jù)物質(zhì)在溶液中的電化學性質(zhì)建立的一類分析方法：如電導(dǎo)法，電位法，電解法，庫侖法，伏安法，極譜法等。（二）、電化學分析法

利用樣品中共存組分間溶解能力、親和能力、滲透能力、吸附和解吸附、遷移速率等方面的差異，先分離，后按順序進行測定的一類分析法稱為分離分析法。這類方法的分離過程和測定通常在儀器內(nèi)部連續(xù)進行，方便快捷。如：氣相色譜法，高效液相色譜法，薄層色譜法，離子色譜法，超臨界流體色譜法，紙色譜和高效毛細管電泳等分析方法。（三）、分離分析法

1、質(zhì)譜法是根據(jù)物質(zhì)帶電粒子的質(zhì)荷比（質(zhì)量與電荷的比值）在電磁場作用下進行定性，定量和結(jié)構(gòu)分析的方法。2、放射分析法是根據(jù)物質(zhì)的放射性輻射來進行分析的方法。如同位素稀釋法等。（四）、其他儀器分析法

（1）計算機技術(shù)在儀器分析中的應(yīng)用將更加普遍和深入，智能化的儀器分析方法將逐漸成為常規(guī)分析的重要手段。（2）儀器分析方法的靈敏度和選擇性將進一步提高，許多新的超痕量分析方法和超微量分析方法將逐步建立。三、儀器分析的發(fā)展趨勢（3）儀器分析方法將在更大的程度上應(yīng)用于物質(zhì)的結(jié)構(gòu)分析，狀態(tài)和價態(tài)分析，表面及微區(qū)分析等，同時在許多學科的研究工作中將得到越來越廣泛的應(yīng)用。（4）儀器分析中各種方法的聯(lián)用，將進一步發(fā)揮各種方法的效能，這種聯(lián)用方法無疑是解決復(fù)雜分析問題的有力手段。三、儀器分析的發(fā)展趨勢

在電解質(zhì)溶液中，位于電場中的帶電離子在電場力的作用下，以不同的速度向其所帶電荷相反的電極方向遷移的現(xiàn)象，稱之為電泳。由于不同離子所帶電荷及性質(zhì)的不同，遷移速率不同，可實現(xiàn)分離。

1808年，Reuss（俄國）首次發(fā)現(xiàn)電泳現(xiàn)象。

1937年，Tiselius（瑞典）用于人血清蛋白質(zhì)混合液的分離：

發(fā)現(xiàn)樣品的遷移速度和方向由其電荷和淌度決定；第一臺電泳儀；

1948年，

Tiselius（瑞典）獲諾貝爾化學獎；電泳按形狀分類：U型管電泳、柱狀電泳、板電泳；按載體分類：濾紙電泳、瓊脂電泳、聚丙烯酰胺電泳、自由電泳；

經(jīng)典電泳

利用電泳現(xiàn)象對某些化學或生物物質(zhì)進行分離分析的方法和技術(shù)叫電泳法或電泳技術(shù)。U型管電泳儀傳統(tǒng)電泳分析：操作煩瑣，分離效率低，定量困難，無法與其他分析方法相比。高效毛細管電泳在技術(shù)上采取了兩項重要改進：采用了25-100μm內(nèi)徑的毛細管；采用了高達數(shù)千伏的電壓。毛細管的采用使產(chǎn)生的熱量能夠較快散發(fā)，大大減小了溫度效應(yīng)，使電場電壓可以很高。電壓升高，電場推動力大，又可進一步使柱徑變小，柱長增加，毛細管電泳的柱效遠高于HPLC，理論塔板數(shù)高達幾十萬塊/米，特殊柱子可以達到數(shù)百萬。高效毛細管電泳

（HighperformanceCapillaryElectrophoresis,HPCE）

電場作用下，毛細管柱中出現(xiàn)：電泳現(xiàn)象和電滲流現(xiàn)象。

帶電粒子的遷移速度=電泳+電滲流；兩種速度的矢量和。

陽離子：兩種效應(yīng)的運動方向一致，在負極最先流出；

中性粒子無電泳現(xiàn)象，受電滲流影響，在陽離子后流出；

陰離子：兩種效應(yīng)的運動方向相反。ν電滲流>ν電泳時,陰離子在負極最后流出除中性粒子外,同種類離子由于受到的電場力大小不一樣也同時被相互分離。分離過程一、CE基本原理二、電滲現(xiàn)象與電滲流electroosmoticflow三、影響電滲流的因素四、淌度mobility五、CE中的參數(shù)與關(guān)系式六、影響分離效率的因素毛細管電泳理論基礎(chǔ)

電泳是指帶電離子在電場中的定向移動，不同離子具有不同的遷移速度，遷移速度與哪些因素有關(guān)？當帶電離子以速度ν

在電場中移動時，受到大小相等、方向相反的電場推動力和平動摩擦阻力的作用。電場力：FE=qE

阻力：F=fν故：qE=fνq—離子所帶的有效電荷；E—電場強度；ν—離子在電場中的遷移速度；f—平動摩擦系數(shù)(對于球形離子：f=6πηγ；γ—離子的表觀液態(tài)動力學半徑；η—介質(zhì)的粘度；)一、毛細管電泳（CE）基本原理所以，遷移速度：（球形離子）

物質(zhì)離子在電場中差速遷移是電泳分離的基礎(chǔ)。淌度μ

：單位電場強度下的平均電泳速度。

q—離子所帶的有效電荷；E—電場強度；γ—離子的表觀液態(tài)動力學半徑η—介質(zhì)的粘度；

石英毛細管柱，內(nèi)充液pH>3時，表面電離成-SiO-,管內(nèi)壁帶負電荷，形成雙電層。

在高電場的作用下，帶正電荷的溶液表面及擴散層向陰極移動，由于這些陽離子實際上是溶劑化的，故將引起柱中的溶液整體向負極移動，速度ν電滲流。2.HPCE中的電滲現(xiàn)象與電滲流

二、電滲現(xiàn)象與電滲流

電滲流的大小用電滲流速度ν電滲流表示，取決于電滲淌度μ和電場強度E。即

ν電滲流

=μE實際電泳分析，可在實驗測定相應(yīng)參數(shù)后，按下式計算

ν電滲流

=Lef/teoLef—毛細管有效長度；teo—電滲流標記物（中性物質(zhì)）的遷移時間。3.HPCE中電滲流的大小與方向

二、電滲現(xiàn)象與電滲流

電滲流的方向取決于毛細管內(nèi)表面電荷的性質(zhì)：內(nèi)表面帶負電荷，溶液帶正電荷，電滲流流向負極；內(nèi)表面帶正電荷，溶液帶負電荷，電滲流流向正極；

石英毛細管，帶負電荷，電滲流流向陰極；改變電滲流方向的方法：

（1）毛細管改性表面鍵合陽離子基團；

（2）加電滲流反轉(zhuǎn)劑內(nèi)充液中加入大量的陽離子表面活性劑，將使石英毛細管壁帶正電荷，溶液表面帶負電荷。電滲流流向正極。二、電滲現(xiàn)象與電滲流

3.CE中電滲流的大小與方向

4.CE中電滲流的流形

電荷均勻分布，整體移動，電滲流的流動為平流，塞式流動（譜帶展寬很?。?；液相色譜中的溶液流動為層流，拋物線流型，管壁處流速為零，管中心處的速度為平均速度的2倍（引起譜帶展寬較大）。二、電滲現(xiàn)象與電滲流

電滲流的速度約等于一般離子電泳速度的5～7倍；

各種電性離子在毛細管柱中的遷移速度為：

ν+=ν電滲流

+ν+ef陽離子運動方向與電滲流一致；

ν-=ν電滲流

-ν-ef陰離子運動方向與電滲流相反；

ν0=ν電滲流中性粒子運動方向與電滲流一致；（1）可一次完成陽離子、陰離子、中性粒子的分離；（2）電滲流的微小變化影響結(jié)果的重現(xiàn)性；在CE中，控制電滲流非常重要。5.CE中電滲流的作用二、電滲現(xiàn)象與電滲流

1.電場強度的影響

電滲流速度和電場強度成正比，當毛細管長度一定時，電滲流速度正比于工作電壓。2.毛細管材料的影響

不同材料毛細管的表面電荷特性不同，產(chǎn)生的電滲流大小不同；三、CE中影響電滲流的因素

電解質(zhì)溶液pH的影響

對于石英毛細管，溶液pH增高時，表面電離多，電荷密度增加，管壁zeta電勢增大，電滲流增大，pH=7，達到最大；pH<3，完全被氫離子中和，表面電中性，電滲流為零。分析時，采用緩沖溶液來保持pH穩(wěn)定。3.電解質(zhì)溶液性質(zhì)的影響三、CE中影響電滲流的因素

毛細管內(nèi)溫度的升高，使溶液的黏度下降，電滲流增大。溫度變化來自于“焦耳熱”；

焦耳熱：毛細管溶液中有電流通過時，產(chǎn)生的熱量；

CE中的焦耳熱與背景電解質(zhì)的摩爾電導(dǎo)、濃度及電場強度成正比。溫度每變化1℃，將引起背景電解質(zhì)溶液黏度變化2%～3%；4.溫度的影響三、CE中影響電滲流的因素

（1）加入濃度較大的中性鹽，如K2SO4，溶液離子強度增大，使溶液的黏度增大，電滲流減小。（2）加入有機溶劑如甲醇、乙腈，使電滲流增大。

（3）加入表面活性劑，可改變電滲流的大小和方向；

加入陰離子表面活性劑，如十二烷基硫酸鈉（SDS），可以使壁表面負電荷增加，zeta電勢增大，電滲流增大；加入不同陽離子表面活性劑來控制電滲流。5.添加劑的影響三、CE中影響電滲流的因素

淌度：帶電離子在單位電場下的遷移速度；

淌度不同是電泳分離的基礎(chǔ)。1.絕對淌度(absolutemobility)μab

無限稀釋溶液中帶電離子在單位電場強度下的平均遷移速度，簡稱淌度?？稍谑謨灾胁殚啞?.有效淌度(effectivemobility)μef

實際溶液中的淌度(實驗中測定的)。四、淌度Mobility1.遷移時間（保留時間）

CE兼具有電化學的特性和色譜分析的特性。有關(guān)色譜理論也適用。V—外加電壓L—毛細管總長度Lef—毛細管有效長度五、CE中的參數(shù)與關(guān)系式五、CE中的參數(shù)與關(guān)系式2.分離度相鄰兩峰的遷移時間之差與平均峰寬的比值。也叫分辨率，表示相鄰兩峰的分離程度。R越大，表明相鄰兩組分分離越好。當R<1時，兩峰有部分重疊；當R=1.0時，分離度可達98%；當R=1.5時，分離度可達99.7%。通常用R=1.5作為相鄰兩組分已完全分離的標志。分離度可按譜圖直接由下式計算：1.縱向擴散的影響在HPCE中，縱向擴散引起峰展寬。由擴散系數(shù)和遷移時間決定。大分子的擴散系數(shù)小，可獲得更高的分離效率。2.進樣的影響

當進樣塞長度太大時，引起的峰展寬大于縱向擴散。分離效率明顯下降；實際操作時進樣塞長度小于或等于毛細管總長度的1%～2%。六、影響分離效率的因素-區(qū)帶展寬

電泳過程產(chǎn)生的焦耳熱可由下式計算：m—電解質(zhì)溶液的摩爾電導(dǎo)；I—工作電流：cm—電解質(zhì)濃度；

散熱過程中，在毛細管內(nèi)形成溫度梯度（中心溫度高），破壞了塞流，導(dǎo)致區(qū)帶展寬。改善方法：（1）減小毛細管內(nèi)徑；（2）控制散熱；3.焦耳熱與溫度梯度的影響六、影響分離效率的因素-區(qū)帶展寬

存在吸附與疏水作用，造成譜帶展寬；蛋白質(zhì)、多肽帶電荷數(shù)多，有較多的疏水基，吸附問題特別嚴重，是目前分離分析該類物質(zhì)的一大難題。細內(nèi)徑毛細管柱，一方面有利于散熱，另一方面比表面積大，又增加了溶質(zhì)吸附的機會。

4.溶質(zhì)與管壁間的相互作用六、影響分離效率的因素-區(qū)帶展寬一、高效毛細管電泳儀二、儀器主要部件及操作三、進樣方式四、分離模式五、檢測技術(shù)六、CE相關(guān)技術(shù)七、CE的應(yīng)用毛細管電泳操作及應(yīng)用一、高效毛細管電泳儀

電壓：0～30kV；

分離柱不涂敷任何固定液；紫外或激光誘導(dǎo)熒光檢測器；（可檢測到：10-19～10-21mol/L）二、儀器主要部件及操作

（1）0～30

kV穩(wěn)定、連續(xù)可調(diào)的直流電源；（2）具有恒壓、恒流、恒功率輸出；（3）電場強度程序控制系統(tǒng)；（4）電壓穩(wěn)定性：0.1%；2.毛細管柱

（1）材料：石英：各項性能好；玻璃：光學、機械性能差；（2）規(guī)格：內(nèi)徑20～75μm，外徑350～400μm；長度<=1m1.高壓電源二、儀器主要部件及操作

化學惰性，機械穩(wěn)定性好；4.檢測器要求：具有極高靈敏度，可柱端檢測；檢測器、數(shù)據(jù)采集與計算機數(shù)據(jù)處理一體化；

類型檢測限/mol特點紫外-可見10-13～10-15

加二極管陣列，光譜信息熒光10-15～10-17靈敏度高，樣品需衍生激光誘導(dǎo)熒光10-18～10-20靈敏度極高，樣品需衍生電導(dǎo)10-18～10-19離子靈敏，需專用的裝置；3.緩沖液池二、儀器主要部件及操作

CE具體操作步驟：

毛細管電泳的基本步驟包括清洗毛細管、更換電泳緩沖液、進樣、電泳并同時在線檢測。

1).清洗毛細管

對于一根新的或久未使用的毛細管，需用1mol/L的NaOH溶液、0.1mol/LNaOH溶液、超純水依次清洗。在有些情況下還需用0.1mol/LHCl、甲醇或去垢劑清洗，強堿溶液可以清除吸附在毛細管內(nèi)壁的油脂、蛋白質(zhì)等，強酸溶液可以清除一些金屬或金屬離子，甲醇、去垢劑可去除疏水性強的雜質(zhì)。在進行每次分析前可用相當于毛細管總體積2~3倍的0.1mol/L的NaOH溶液清洗一遍，一般為2~3min，而后注入電泳緩沖液，以保證分析結(jié)果的重復(fù)性。二、儀器主要部件及操作

2).

更換電泳緩沖液清洗過程結(jié)束后，毛細管和電極從清洗液中移至電泳緩沖液，不可避免地將強堿或強酸等溶液帶至其中。緩沖液本身也會因揮發(fā)、電泳等而改變其離子強度。因此對于精確分析，每分析五次后需更換一次樣品盤中的緩沖液。一般情況下，半天更換一次即可。二、儀器主要部件及操作

毛細管一端插入樣品瓶，加電壓；

進樣不均：電歧視現(xiàn)象，淌度大的離子比淌度小的進樣量大；離子丟失：淌度大且與電滲流方向相反的離子可能進不去；特別適合黏度大的試樣；

1.電動進樣方式二、儀器主要部件及操作

3).

進樣方式進樣量：毛細管長度的1%-2%；nL級、非常小；

2.流體力學進樣方式

（1）進樣端加壓（2）出口端抽真空（3）虹吸進樣二、儀器主要部件及操作

根據(jù)試樣性質(zhì)不同，采用不同的分離類型；每種機理的選擇性不同；毛細管電泳常用的分離模式包括毛細管區(qū)帶電泳（CZE）或稱自由溶液毛細管電泳（FSCE）、膠束電動毛細管色譜（MECC）、毛細管凝膠電泳CGE）、毛細管等電聚焦（CIEF）和毛細管等速電泳（CITP）等。分離模式毛細管區(qū)帶電泳也稱自由溶液電泳，是毛細管電泳最基本，應(yīng)用最廣泛的一種分離模式。

帶電粒子的遷移速度=電泳和電滲流速度的矢量和。

正離子：兩種效應(yīng)的運動方向一致，在負極最先流出；中性粒子：無電泳現(xiàn)象，受電滲流影響，在陽離子后流出；

陰離子：兩種效應(yīng)的運動方向相反；ν電滲流>ν電泳時,陰離子在負極最后流出。在這種情況下,不但可以按類分離,同種類離子由于差速遷移被相互分離。

（一）毛細管區(qū)帶電泳

capillaryzoneelectrophoresis，CZE（一）毛細管區(qū)帶電泳

capillaryzoneelectrophoresis，CZE毛細管區(qū)帶電泳分離依據(jù)：基于試樣組分所帶電荷與半徑比值的差異。毛細管區(qū)帶電泳的分離對象：特別適合分離帶電化合物，包括無機陰離子，無機陽離子，有機酸，胺類化合物，氨基酸，蛋白質(zhì)等，不能分離中性化合物。

將聚丙烯酰胺等在毛細管柱內(nèi)交聯(lián)生成凝膠。其具有多孔性，類似分子篩的作用，試樣分子按大小分離。能夠有效減小組分擴散，所得峰型尖銳，分離效率高。蛋白質(zhì)、DNA等的電荷/質(zhì)量比與分子大小無關(guān)，CZE模式很難分離，采用CGE能獲得良好分離，DAN排序的重要手段。特點：抗對流性好，散熱性好，分離度極高。無膠篩分技術(shù)：采用低粘度的線性聚合物溶液代替高粘度交聯(lián)聚丙烯酰胺。柱便宜、易制備。（二）毛細管凝膠電泳

capillarygelelectrophoresis，CGE

1.緩沖溶液中加入陰離子型表面活性劑，其濃度達到臨界濃度，形成一疏水內(nèi)核、外部帶負電的膠束。

在電場力的作用下，膠束在柱中移動。（三）膠束電動毛細管色譜（MEKC）

Micellarelectrokineticcapillarychromatography，MEKC

2.電泳流和電滲流的方向相反，且ν電滲流

>ν電泳，負電膠束以較慢的速度向負極移動；

5.色譜與電泳分離模式的結(jié)合。

3.中性分子在膠束相和溶液（水相）間分配，疏水性強的組分與膠束結(jié)合的較牢，流出時間長；

4.可用來分離中性物質(zhì)，擴展了高效毛細管電泳的應(yīng)用范圍；（三）膠束電動毛細管色譜（MEKC）

Micellarelectrokineticcapillarychromatography，MEKC毛細管膠束電動力學毛細管電泳（MECC）的原理：當把離子型表面活性劑加入緩沖液中，并且其濃度足夠大時，就結(jié)合在一起形成球體，稱為膠束。以十二烷基磺酸鈉（SDS）為例。2022/12/1660（三）膠束電動毛細管色譜（MEKC）

Micellarelectrokineticcapillarychromatography，MEKCSO3-SO3-SO3-SO3-SO3-SO3-SO3-SO3-2022/12/1661（三）膠束電動毛細管色譜（MEKC）

Micellarelectrokineticcapillarychromatography，MEKC在MECC的系統(tǒng)中存在兩個相：流動的水相和起到固定相作用的膠束相，被分離物在這兩個相之間分配，由于它們在膠束中具有保留能力而產(chǎn)生不同的保留時間。2022/12/1662（三）膠束電動毛細管色譜（MEKC）

Micellarelectrokineticcapillarychromatography，MEKCMECC的優(yōu)點：1、極高的分離效率。5萬—50萬理論塔板數(shù)/m。2、分離速度快。一般20分鐘左右。3、可分離中性化合物。2022/12/1663（三）膠束電動毛細管色譜（MEKC）

Micellarelectrokineticcapillarychromatography，MEKC

1.根據(jù)等電點差別分離生物大分子的高分辨率電泳技術(shù)；

2.毛細管內(nèi)充有兩性電解質(zhì)（合成的具有不同等電點范圍的脂肪族多胺基多羧酸混合物），當施加直流電壓（6～8V）時，管內(nèi)將建立一個由陽極到陰極逐步升高的pH梯度；

3.氨基酸、蛋白質(zhì)、多肽等的所帶電荷與溶液pH有關(guān)，在酸性溶液中帶正電荷，反之帶負電荷。在其等電點時，呈電中性，淌度為零；（四）毛細管等電聚焦電泳

Capillaryisoelectricfocusing，CIEF

4.聚焦：具有不同等電點的生物試樣在電場力的作用下遷移，分別到達滿足其等電點pH的位置時，呈電中性，停止移動，形成窄溶質(zhì)帶而相互分離；（四）毛細管等電聚焦電泳

Capillaryisoelectricfocusing，CIEF毛細管電泳檢測技術(shù)

CE對檢測器靈敏度要求相當高，故檢測是CE中的關(guān)鍵問題。迄今為止除了原子吸收光譜與紅外光譜末用于CE外，其它檢測手段均已用于CE?，F(xiàn)選擇重要的幾類檢測器進行介紹。五、檢測技術(shù)1)紫外檢測器(UV)

在毛細管合適位置除去涂層，將透明部分對準光路。為提高UV檢測器靈敏度，可采用毛細管彎折、吹泡技術(shù)擴大光路。也有用光散射二極管(LEDS)作光源，其線性范圍和信噪比優(yōu)于汞燈?？傮w來說進展不大。五、檢測技術(shù)2)激光誘導(dǎo)熒光檢測[LIF]

LIF是CE最靈敏的檢測器之一，極大地拓展了CE的應(yīng)用，DNA測序須用LIF，單細胞和單分子檢測也離不開LIF。利用CE-LIF技術(shù)可檢出染色的單個DNA分子，有望用于癌癥的早期診斷。CE／LIF和微透析結(jié)合可測定腦中神經(jīng)肽。一些適用于二極管激光器的熒光標記試劑如CY—5等，正在不斷開發(fā)和應(yīng)用。五、檢測技術(shù)3)電化學檢測器（EC）

EC可避免光學類檢測器遇到的光程太短的問題，故和LIF同為CE中靈敏度最高的檢測器。報道最多的是電化學伏安檢測器，常用碳纖維微電極進行單細胞及微量神經(jīng)遞質(zhì)(如多巴胺等)的測定?？捎妹}沖伏安法測定糖、糖肽及金屬離子，也可用循環(huán)伏安法，另一類常用的EC為電導(dǎo)檢測器，Li＋的檢測限達10-7mol/L(10-15mol)。五、檢測技術(shù)1.銅絲;2.環(huán)氧樹脂;3.玻璃毛細管;4.碳纖維與銅絲粘合處;5.碳纖維;6.玻璃/碳纖維界面;7.碳纖維尖端碳纖維電極結(jié)構(gòu)示意圖五、檢測技術(shù)ABCD50μm40μm6μm3μm碳纖維電極的掃描電鏡圖片，A．納米碳纖維電極全貌,B.微米碳纖維電極全貌,C.納米碳纖維電極尖端，D.微米碳纖維電極尖端五、檢測技術(shù)四種電活性物質(zhì)的電泳分離電化學檢測圖譜

五、檢測技術(shù)在5.0×10-7mol/L～1.0×10-4mol/L范范圍內(nèi)，電泳峰峰面積與DA、E、NE的濃度呈線性關(guān)系a.DA濃度與峰高的關(guān)系b.E濃度與峰高的關(guān)系c.NE濃度與峰高的關(guān)系五、檢測技術(shù)4)化學發(fā)光檢測器(CL)

CL具有結(jié)構(gòu)簡單、靈敏度高的特點，近年來引起重視。用CE—CL檢測血紅蛋白，其檢測限比CE—UV低約4個數(shù)量級。應(yīng)用最多的仍是魯米諾(luminol)體系，因為該體系對多數(shù)待測物如一些金屬離子、氨基酸及其衍生物的檢測靈敏度很高，且反應(yīng)在水相進行。五、檢測技術(shù)

總之，檢測器是CE中具有挑戰(zhàn)性的研究工作。CE/MS聯(lián)用是最有應(yīng)用價值的檢測器，但價格昂貴，不易推廣。發(fā)展新型檢測器、提高UV等檢測器靈敏度，以及發(fā)展CE和其它分離方法、檢測方法的聯(lián)用是CE研究重點之一。五、檢測技術(shù)毛細管電泳柱技術(shù)毛細管是CE的核心部件之一．早期研究集中在毛細管直徑、長度、形狀和材料方面，目前集中在管壁的改性和各種柱的制備。

六、CE相關(guān)技術(shù)1)動態(tài)修飾毛細管內(nèi)壁

管壁改性主要是消除吸附和控制電滲流，通常采用動態(tài)修飾和表面涂層兩類方法。動態(tài)修飾采用在運行緩沖液中加入添加劑，如加入陽離子表面活性劑十四烷基三甲基溴化銨(TTAB)，能在內(nèi)壁形成物理吸附層，使EOF反向．添加劑還有聚胺、聚乙烯亞胺(PEI)等，甲基纖維素(MC)可形成一中性親水性覆蓋層。

六、CE相關(guān)技術(shù)2)毛細管內(nèi)壁表面涂層

涂層方法有很多種，包括物理涂布、化學涂層。最常用的方法是采用雙官能團的偶聯(lián)劑，如各種有機硅烷，第一個官能團(如甲氧基)與管壁上的游離羥基進行反應(yīng)，使其與管壁進行共價結(jié)合，再用第二個官能團(如乙烯基)與涂漬物(如聚丙烯酰胺)進行反應(yīng)，形成一穩(wěn)定的涂層．六、CE相關(guān)技術(shù)1、離子分析（analysisofion）

陽離子分析遷移方向和電滲流方向一致；

4.5min內(nèi)分離了24種金屬離子；陽極進樣，陰極檢測；具有很高的靈敏度；

圖

陽離子分離毛細管電泳圖2022/12/1679七、CE的應(yīng)用陰離子分析陰離子電泳方向和電滲流方向相反、速度接近，分析時間長、效率低；質(zhì)量小、電荷密度大的離子如：SO4-2、Cl-、F-等，電泳速率大于電滲流，陽極端流出，在陰極端無法檢測；加入電滲流改性劑，十六烷基三甲基溴化胺等，使電泳方向和電滲流方向一致，可在3.1min內(nèi)分離36種陰離子；陰極進樣，陽極檢測；離子價態(tài)及存在形態(tài)分析

圖

陰離子毛細管分離圖2022/12/1680七、CE的應(yīng)用CE在藥物分析中的應(yīng)用CE的快速性和高分辨率使它成為藥物分析中理想的分析手段，目前已被應(yīng)用于藥品質(zhì)量控制、監(jiān)測化學化學合成，藥物純度分析、藥物臨床分析、手性藥物分析等領(lǐng)域。離子型藥物通常采用毛細管區(qū)帶電泳非離子型藥物通常采用膠束電動毛細管色譜包括：小分子藥物，如抗生素，維生素等，還包括大分子肽和蛋白等生物制劑，并已開始應(yīng)用于天然產(chǎn)品，如中藥，中成藥的成分分析。七、CE的應(yīng)用2、藥物分析（analysisofpharmaceutics）采用毛細管區(qū)帶電泳方式，在11