丹皮酚對apoE基因敲除小鼠早期動脈粥樣硬化抗氧化作用的研究

安徽中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院本科生畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）開題報(bào)告表學(xué)生姓名：李超年級專業(yè)：11中藥（1）班學(xué)號：11311020指導(dǎo)教師：戴敏職稱/職務(wù)：教授畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）題目：丹皮酚對ApoE基因敲除小鼠早期動脈粥樣硬化抗氧化作用的研究立題依據(jù)（課題研究的目的與意義及國內(nèi)外研究現(xiàn)狀）：動脈粥樣硬化（atherosclerosis，AS）已成為嚴(yán)重威脅人們生命安全的重大疾病。動脈粥樣硬化病變形成機(jī)制復(fù)雜，其中炎癥與氧化應(yīng)激被認(rèn)為是AS的核心發(fā)病機(jī)制，參與AS發(fā)生、發(fā)展乃至惡化的全過程。氧化應(yīng)激通過氧化修飾LDL，刺激組織因子的表達(dá)，誘導(dǎo)平滑肌細(xì)胞和巨噬細(xì)胞增殖，激活基質(zhì)金屬蛋白酶和基質(zhì)降解酶等多方面參與AS的進(jìn)程。［1-2］SOD、MDA以及0X-LDL三個(gè)指標(biāo)能從不同的方面反映氧化應(yīng)激程度，SOD反映的是機(jī)體清除氧自由基的能力［3］，MDA反映的是細(xì)胞受氧自由基損傷的程度⑷，ox-LDL在參與泡沫細(xì)胞的形成，誘導(dǎo)平滑肌細(xì)胞增生、促進(jìn)血小板粘附聚集、引起血栓形成等多個(gè)方面發(fā)揮重要的作用［5］。NO是檢測血管內(nèi)皮功能的重要的血清指標(biāo)之一［6］。因此本研究從氧化應(yīng)激的角度出發(fā)，蹄選了具有代表性的MDA、SOD、OX-LDL等作為氧化應(yīng)激的研究指標(biāo),探討丹皮酚對AS的抗氧化作用。丹皮酚（paeonol）為毛茛科植物牡丹的根皮的活性成分之一，具有抗炎、抗氧化、心血管保護(hù)作用等藥理作用，臨床多用于心腦血管、炎癥及免疫系統(tǒng)等疾?。?］。大量文獻(xiàn)表明丹皮酚可通過調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝、抗脂質(zhì)過氧化反應(yīng)、保護(hù)動脈內(nèi)皮細(xì)胞等途徑達(dá)到抗動脈粥樣硬化作用［8-9］。丹皮酚對早期動脈粥樣硬化具有一定的治療作用，其作用可能與減輕自由基的損傷、保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞有關(guān)，可增強(qiáng)SOD活性［10］、減少M(fèi)DA及ox-LDL水平，抑制健康人血清LDL的體外氧化修飾反應(yīng)［11］。而丹皮酚分子上的酚羥基也與抗氧化作用有關(guān)。從病因?qū)W和病理學(xué)的研究所知，AS是受多種因素影響所形成的一類復(fù)雜的病理性變化，目前關(guān)于中醫(yī)藥治療AS的研究成為熱點(diǎn)。本研究擬以ApoE基因敲除小鼠為實(shí)驗(yàn)對象,建立動脈粥樣硬化動物模型，觀察早期小鼠動脈內(nèi)粥樣硬化發(fā)生、發(fā)展等病理生理情況,并觀察丹皮酚對動脈粥樣硬化抗氧化的作用。以AS的“氧化應(yīng)激作用”為研究方向，觀察ApoE基因敲除小鼠治療前后血脂、脂蛋白、超氧化物歧化酶、丙二醛、氧化型低密度脂蛋白等含量的變化以及主動脈彩超檢査的結(jié)果。以期通過該研究明確丹皮酚對早期AS的抗氧化作用。從抗氧化作用方面探討丹皮酚防治AS的作用機(jī)理，同時(shí)評價(jià)其療效。該研究對于發(fā)掘丹皮酚在防治AS方面的優(yōu)勢有非常重要的意義。課題研究內(nèi)容：1、高脂飲食法復(fù)制ApoE基因敲除小鼠動脈粥樣硬化病理模型；2、測定方法及觀察指標(biāo)；2.1切片及染色方法：HE染色并光鏡觀察主動脈病理學(xué)改變；2.2指標(biāo)的檢測：采用黃嘌呤氧化酶法測定SOD活力，硫代巴比妥酸法（TBA）測定MDA含量，酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測定氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）,硝酸還原酶法測NO含量，具體操作按試劑盒說明書進(jìn)行。課題研究的條件（材料、主要實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備等）：1、動物：6~8周齡ApoE基因敲除小鼠、同種屬空白鼠。2、藥物：丹皮酚。用0.5%羧甲基纖維素鈉（CMC-Na）配成適當(dāng)濃度的混懸液。3、儀器：移液槍、電子分析天平、醫(yī)學(xué)凈化工作臺、CO2培養(yǎng)箱、低速普通離心機(jī)、光學(xué)顯微鏡、冰凍切片機(jī)、高速離心機(jī)、全自動生化分析儀、紫外分光光度計(jì)4、試劑：油紅O染料、血清丙二醛試劑盒、超氧化物歧化酶試劑盒、胎牛血清。研究計(jì)劃與進(jìn)度安排:2015年1月--2月完成相關(guān)文獻(xiàn)檢索；定實(shí)驗(yàn)方案，書寫開題報(bào)告。2015年2月--4月按照既定實(shí)驗(yàn)方案進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究。2015年4月--5月整理實(shí)驗(yàn)資料，撰寫結(jié)題報(bào)告；完成畢業(yè)論文。主要參考文獻(xiàn)：徐也魯?動脈粥樣硬化一種慢性炎癥過程[J]?中國動脈硬化雜志,2001,9(2):93-95.LibbyP.Inflammationinatherosclerosis[J].Nature,2002,420:868-874.范黎?食藥用真菌:天然抗氧化劑的重要來源?微生物學(xué)通報(bào)，2011,38(6):957.陳瑗，周玫?氧化應(yīng)激一一炎癥在動脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展中作用研究的新進(jìn)展.中國動脈硬化雜志,2008,16(10):757-762.徐佳楊?氧化低密度脂蛋白與動脈粥樣硬化的研究[J].安徽醫(yī)藥,2011:152)228-230.⑹徐倩，曹凱，周曉慧等.丹皮酚對同型半胱氨酸損傷內(nèi)皮細(xì)胞eNOS表達(dá)及NO水平的影響[J]?中成藥,2012,34(12):2286-2301郭齊,李貽奎，王志國等?丹皮酚藥理研究進(jìn)展[J]?中醫(yī)藥信息,2009,26(1):20-24.戴敏,訾曉梅，彭代銀等?丹皮酚抗鵪鶉試驗(yàn)性動脈粥樣硬化作用[J]?中國中藥雜志,1999,24(8):488-90.戴敏,李后開?丹皮酚對動脈粥樣硬化家兔血管平滑肌細(xì)胞增殖的影響[J]?中國藥理學(xué)通報(bào),2006,22(5):587-591.王惠，騫秀芳,朱哲等?丹皮酚對動脈粥樣硬化大鼠抗氧化作用研究[J].實(shí)用中醫(yī)藥雜志,2014,30(11):998-9