電泳應(yīng)用-SEBIA培訓(xùn)課件

電泳技術(shù)在臨床檢驗(yàn)中的應(yīng)用培訓(xùn)專(zhuān)用背景簡(jiǎn)介電泳：在直流電場(chǎng)中，帶電粒子向帶符號(hào)相反的電極移動(dòng)的現(xiàn)象（electrophoresis）電泳技術(shù)就是利用在電場(chǎng)的作用下，由于待分離樣品中各種分子帶電性質(zhì)以及分子本身大小、形狀等性質(zhì)的差異，使帶電分子產(chǎn)生不同的遷移速度，從而對(duì)樣品進(jìn)行分離、鑒定或提純的技術(shù)培訓(xùn)專(zhuān)用發(fā)展歷程1809年俄國(guó)科學(xué)家列伊斯首先發(fā)現(xiàn)電泳現(xiàn)象1937年瑞典科學(xué)家Tiselius建立了界面電泳技術(shù)，并首次證明了血清是由白蛋白及α、β、γ球蛋白組成的因此獲得1948年諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)1950年后，區(qū)帶電泳從發(fā)展到成熟1980年以來(lái)，毛細(xì)管電泳逐漸受到重視培訓(xùn)專(zhuān)用常用的電泳技術(shù)醋酸纖維素薄膜電泳凝膠電泳瓊脂糖凝膠電泳:瓊脂糖凝膠適用于蛋白質(zhì)和核酸的電泳支持介質(zhì).聚丙烯酰胺凝膠電泳:最常用的定性分析蛋白質(zhì)的電泳方法，特別是用于蛋白質(zhì)純度檢測(cè)和測(cè)定蛋白質(zhì)分子量.毛細(xì)管電泳:經(jīng)典電泳技術(shù)和現(xiàn)代微柱分離相結(jié)合的產(chǎn)物培訓(xùn)專(zhuān)用培訓(xùn)專(zhuān)用毛細(xì)管電泳

(CapillaryElectrophoresis)

CE是經(jīng)典電泳技術(shù)和現(xiàn)代微柱分離相結(jié)合的產(chǎn)物“CE”統(tǒng)指以高壓電場(chǎng)為驅(qū)動(dòng)力,以毛細(xì)管為分離通道,依據(jù)樣品中各組分之間電泳速度及分配行為上的差異而實(shí)現(xiàn)分離的一類(lèi)液相分離技術(shù)。培訓(xùn)專(zhuān)用檢測(cè)器200nm紫外光毛細(xì)管圖象處理培訓(xùn)專(zhuān)用毛細(xì)管電泳所用的石英毛細(xì)管柱，在pH>3的情況下，其內(nèi)表面帶負(fù)電，和緩沖液接觸時(shí)形成雙電層，在高壓電場(chǎng)的作用下，形成雙電層，一側(cè)的緩沖液由于帶正電荷而向負(fù)極方向移動(dòng)形成電滲流。同時(shí)，在緩沖液中，帶電粒子在電場(chǎng)的作用下，以不同的速度向其所帶電荷極性相反方向移動(dòng)，形成電泳，電泳流速度即電泳淌度。帶電粒子在毛細(xì)管緩沖液中的遷移速度等于電泳淌度和電滲流的矢量和。各種粒子由于所帶電荷多少、質(zhì)量、體積以及形狀不同等因素引起遷移速度不同而實(shí)現(xiàn)分離。毛細(xì)管電泳培訓(xùn)專(zhuān)用+++++—————飛馳列車(chē)上的反向賽跑—----培訓(xùn)專(zhuān)用影響電泳分離的主要因素實(shí)際上影響電泳的因素介質(zhì)(種類(lèi),寬度等)溶劑(種類(lèi),離子強(qiáng)度,PH)電壓電泳時(shí)間點(diǎn)樣技術(shù)染色劑氣泡的影響培訓(xùn)專(zhuān)用加樣梳培訓(xùn)專(zhuān)用電泳技術(shù)的醫(yī)學(xué)應(yīng)用蛋白質(zhì)電泳分析是實(shí)驗(yàn)室必備的檢測(cè)手段，可全面、精確描繪出患者蛋白質(zhì)的全貌。對(duì)疾病的早期診斷，療效觀察及預(yù)后判斷具有非常重要的臨床價(jià)值。培訓(xùn)專(zhuān)用蛋白的電泳檢測(cè)根據(jù)使用的染料或者是底物的不同，我們可以檢測(cè)到不同類(lèi)型的蛋白:

血清蛋白 脂蛋白(運(yùn)送脂類(lèi)) 各種酶類(lèi) 血紅蛋白培訓(xùn)專(zhuān)用電泳技術(shù)在臨檢中的應(yīng)用：急、慢性炎癥造血系統(tǒng)疾病：多發(fā)性骨髓瘤、腎臟疾病肝臟疾病中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病：多發(fā)性硬化癥遺傳性疾?。旱刂泻Ｘ氀x性疾?。禾悄虿⌒难芗膊。盒墓?、動(dòng)脈粥樣硬化惡性腫瘤培訓(xùn)專(zhuān)用正確解釋電泳結(jié)果

有助于臨床疾病判斷的參考培訓(xùn)專(zhuān)用血清蛋白電泳培訓(xùn)專(zhuān)用免疫球蛋白C3補(bǔ)體Alpha-1抗胰蛋白酶結(jié)合珠蛋白轉(zhuǎn)鐵蛋白白蛋白Alpha-1酸性糖蛋白電泳條帶的鑒定

Alpha-2巨球蛋白血液結(jié)合素白蛋白GammaBeta-2Beta-1Alpha-2Alpha-1培訓(xùn)專(zhuān)用正常血清標(biāo)本培訓(xùn)專(zhuān)用

含有單克隆免疫球蛋白的血清標(biāo)本培訓(xùn)專(zhuān)用血清蛋白電泳的目的是什么？檢測(cè)異常:

含量的變化:條帶中蛋白含量的增加或減少 性質(zhì)的變化:異常條帶的出現(xiàn)培訓(xùn)專(zhuān)用臨床意義將電泳作為常規(guī)檢測(cè)之一，有助于我們對(duì)以下疾病的篩查:

炎癥 營(yíng)養(yǎng)不良 肺氣腫

培訓(xùn)專(zhuān)用臨床意義對(duì)異常條帶的篩查,有助于我們檢測(cè)下列疾病: 骨髓瘤 Waldenstrom巨球蛋白血癥 細(xì)菌和病毒感染 在這些情況下,必須要做其他輔助測(cè)試,比如說(shuō)免疫固定,使用不同類(lèi)型的抗血清對(duì)異常蛋白進(jìn)行檢測(cè).(對(duì)于后期治療有很重要的指導(dǎo)意義)

培訓(xùn)專(zhuān)用什么情況下必須進(jìn)行電泳檢測(cè)？血液沉降速度發(fā)生異常變化出現(xiàn)惡性疾病征兆在免疫球蛋白定量檢測(cè)中發(fā)現(xiàn)某一種免疫球蛋白出現(xiàn)大量異常增加培訓(xùn)專(zhuān)用

雙白蛋白,或者一條寬峰,或者在白蛋白條帶出現(xiàn)附屬條帶可能是由以下原因造成:

-遺傳性雙白蛋白血癥 -暫時(shí)性的雙白蛋白血癥可能是由于藥物刺激導(dǎo)致的 -急性胰腺炎導(dǎo)致的雙白蛋白血癥:大量的胰酶的出現(xiàn)可以導(dǎo)致白蛋白降解

Albumin培訓(xùn)專(zhuān)用培訓(xùn)專(zhuān)用雙白蛋白血癥gba2a1Alb培訓(xùn)專(zhuān)用培訓(xùn)專(zhuān)用

在下列情況下白蛋白會(huì)出現(xiàn)下降: -

腎病綜合癥,蛋白流失,胃腸病:檢查尿蛋白 -淋巴細(xì)胞增生綜合征 -營(yíng)養(yǎng)不良 -肝臟功能不全 -慢性炎癥

-嚴(yán)重?zé)齻?-血液稀釋培訓(xùn)專(zhuān)用在下列情況中白蛋白會(huì)出現(xiàn)增加:

-脫水癥狀 -血液濃縮 -白蛋白注射培訓(xùn)專(zhuān)用Alpha1globulins

將會(huì)在下列情況下出現(xiàn)下降:

-蛋白流失 -肝功能不全 -先天性抗胰蛋白酶缺乏癥

出現(xiàn)兩個(gè)條帶:

-抗胰蛋白酶的不同基因型

出現(xiàn)增加:

-炎癥癥狀培訓(xùn)專(zhuān)用Alpha1-酸性糖蛋白:AAG是主要的急性時(shí)相反應(yīng)蛋白，在急性炎癥時(shí)增高，顯然與免疫防御功能有關(guān)明。AAG的測(cè)定目前主要作為急性時(shí)相反應(yīng)的指標(biāo)，在風(fēng)濕病、惡性腫瘤及心肌梗死患者亦常增高，在營(yíng)養(yǎng)不良、嚴(yán)重肝損害等情況下降低。

培訓(xùn)專(zhuān)用HeterozygousphenotypeofA1AT培訓(xùn)專(zhuān)用Alpha2globulins

下列情況中出現(xiàn)下降:

-肝功能不全 -血管內(nèi)溶血培訓(xùn)專(zhuān)用

出現(xiàn)兩個(gè)條帶: -溶血的標(biāo)本(haptoglobin-hemoglobincomplex) -出現(xiàn)特殊表型的結(jié)合珠蛋白 -出現(xiàn)遷移率靠近正極端的單克隆免疫球蛋白

培訓(xùn)專(zhuān)用

出現(xiàn)兩個(gè)條帶: -溶血的標(biāo)本(haptoglobin-hemoglobincomplex)

-出現(xiàn)特殊表型的結(jié)合珠蛋白 -出現(xiàn)遷移率靠近正極端的單克隆免疫球蛋白

Alpha2條帶在電泳圖譜中,是一個(gè)很特殊的條帶.因?yàn)檫@一條帶中含有五種蛋白:HDL,Haptoglobin,Alpha2Macroglobulin,CeruloplasminandGcglobulin.由于結(jié)合珠蛋白有不同的基因表現(xiàn)型,增加了這一條帶的復(fù)雜程度.結(jié)合珠蛋白非常靠近Alpha1條帶;出現(xiàn)溶血時(shí)結(jié)合珠蛋白的遷移率會(huì)發(fā)生改變.同時(shí),由于HDL的含量或者是存放過(guò)久的標(biāo)本,HDL的遷移速度可能會(huì)更快.培訓(xùn)專(zhuān)用Hemolysedsample培訓(xùn)專(zhuān)用急性炎癥及應(yīng)激型

主要特征：Alb減少或正常，α1、α2-球蛋白增高，γ-球蛋白增高不明顯，當(dāng)炎癥轉(zhuǎn)為慢性時(shí)，可明顯增加。病理生理：Alb下降主要是由于蛋白分解亢進(jìn)所致,α1和α2-球蛋白增加與急性時(shí)相反應(yīng)蛋白α1糖蛋白增加有關(guān)。培訓(xùn)專(zhuān)用培訓(xùn)專(zhuān)用急性時(shí)相反應(yīng)培訓(xùn)專(zhuān)用

下列情況下Alpha2區(qū)域會(huì)出現(xiàn)增加現(xiàn)象:

-炎癥癥狀 -腎病綜合征 -出現(xiàn)游離輕鏈

培訓(xùn)專(zhuān)用Nephroticsyndrome培訓(xùn)專(zhuān)用培訓(xùn)專(zhuān)用腎病綜合征培訓(xùn)專(zhuān)用培訓(xùn)專(zhuān)用Betaglobulins

在下列情況下會(huì)出現(xiàn)下降:

-肝功能不全 -C3長(zhǎng)期缺乏或者C3代謝過(guò)快

(同樣會(huì)出現(xiàn)在存放過(guò)久的標(biāo)本中,C3失活,這時(shí)C3補(bǔ)體會(huì)被分成四部分:1betweena2andb, 1onb1,

1

onb2 and1ong)

培訓(xùn)專(zhuān)用在下列情況下會(huì)出現(xiàn)兩個(gè)條帶:

-長(zhǎng)期存放的標(biāo)本或者是高膽固醇的標(biāo)本,LDL有不同的遷移率;從而導(dǎo)致LDL電泳是偏移Beta位置

培訓(xùn)專(zhuān)用

Beta球蛋白在下列情況下會(huì)出現(xiàn)增加現(xiàn)象:

-Biliaryobstruction膽管阻塞 -腎病綜合征 -肝硬化 -缺鐵性貧血 -血球蛋白異常 -高脂蛋白血癥 -大量溶血

培訓(xùn)專(zhuān)用Betalipoproteins培訓(xùn)專(zhuān)用Betagammablocinalcoholcirrhosis培訓(xùn)專(zhuān)用Freelightchaindisease培訓(xùn)專(zhuān)用Gamma球蛋白區(qū)帶免疫球蛋白是一組具有抗體活性的蛋白質(zhì)，主要存在于生物體血液、組織液和外分泌液中，是檢查機(jī)體體液免疫功能的一項(xiàng)重要指標(biāo)。人類(lèi)的免疫球蛋白分為五類(lèi)，即lgG、lgA、lgM、IgD和lgE，其中IgD和IgE含量很低，故我們常規(guī)所測(cè)定的Ig主要為lgG、lgA、IgM三項(xiàng)。培訓(xùn)專(zhuān)用血清蛋白電泳是M蛋白（MonoclonalProtein）多克?。╬olyclonalProtein)寡克?。∣ligoclonalProtein)的首選檢測(cè)項(xiàng)目培訓(xùn)專(zhuān)用培訓(xùn)專(zhuān)用培訓(xùn)專(zhuān)用Gammaglobulins在下列情況中會(huì)出現(xiàn)下降現(xiàn)象:

-部分的或全部的免疫缺陷 -免疫抑制治療 -游離輕鏈病或非分泌型骨髓瘤

常見(jiàn)于新生兒生理性低γ球蛋白血癥、先天性漿細(xì)胞缺陷或漿細(xì)胞不能產(chǎn)生免疫球蛋白培訓(xùn)專(zhuān)用Hypogammaglobulinemia培訓(xùn)專(zhuān)用多克隆免疫球蛋白的增加:

-炎癥 -肝硬化 -亞急性和慢性感染檢測(cè)到其他條帶

-單克隆免疫球蛋白

-寡克隆免疫球蛋白

培訓(xùn)專(zhuān)用血清蛋白021216－狼瘡病血清蛋白030127－酒精肝B-r橋培訓(xùn)專(zhuān)用與下列各類(lèi)疾病相關(guān)的寡克隆免疫球蛋白(多個(gè)條帶):-自身免疫病-先天性免疫缺陷癥-病毒感染

(CHepatitis,HIVdisease,CMV巨細(xì)胞病毒,EBV,…)-免疫抑制治療

培訓(xùn)專(zhuān)用Oligoclonalpattern培訓(xùn)專(zhuān)用M蛋白疾病(Monoclonalgammapathies,MG)是由于單一克隆漿細(xì)胞無(wú)限增殖產(chǎn)生的均一單克隆蛋白(Monoclonal-proteins)所導(dǎo)致的一組疾病。M蛋白疾病的“M”含義是Myeloma,Macroglobulinemia,Malignantlymphoma和MonoclonalGammapathies均以“M”開(kāi)頭.M蛋白在電泳上表現(xiàn)為高而狹窄的尖峰.培訓(xùn)專(zhuān)用意義未明的單克隆免疫球蛋白疾病:benignMC在法國(guó),在對(duì)獻(xiàn)血者進(jìn)行檢測(cè)時(shí),會(huì)檢測(cè)到0,15%比例的單克隆免疫球蛋白標(biāo)本

在老齡人群中檢測(cè)到的頻率更高(80歲以上人群).在對(duì)60到99歲人群的檢測(cè)顯示,出現(xiàn)Ig的比例從2,6%上升至19,2%(平均數(shù)=5%).

MGUS培訓(xùn)專(zhuān)用特征:

-未出現(xiàn)臨床和影像學(xué)特征 -未出現(xiàn)不良反應(yīng),未檢測(cè)到血鈣升高,也未出現(xiàn)腎功能衰竭 -未見(jiàn)骨髓瘤的臨床特征 -單克隆免疫球蛋白<20g/l

-其他免疫球蛋白都是正常的,同時(shí)在患者尿液中未檢測(cè)到本周氏蛋白 -單克隆免疫球蛋白的濃度隨著時(shí)間的推移未發(fā)生增加現(xiàn)象 -其他的免疫球蛋白的濃度也未隨時(shí)間推移而出現(xiàn)下降

在20%的情況中,MGUS將會(huì)轉(zhuǎn)化成惡性疾病(6-10years)培訓(xùn)專(zhuān)用Kylereport顯示,通過(guò)對(duì)1384名含有MGUS的患者的20–35(average:22years)年的跟蹤監(jiān)測(cè)發(fā)現(xiàn),

24%的患者最終演變成惡性的淋巴細(xì)胞增生癥(multiplemyeloma,macroglobulinemia,amyloidosis,…).從檢測(cè)到單克隆免疫球蛋白,直到作出多發(fā)性骨髓瘤的診斷報(bào)告,這段時(shí)間是不定的,從2-29年(平均是10年左右).培訓(xùn)專(zhuān)用大量報(bào)告顯示,在下列情況中,發(fā)展成為惡性淋巴細(xì)胞增生疾病的可能性很小: -單克隆免疫球蛋白: IgG<15g/L IgA<10g/L IgM<5g/L -尿蛋白中未出現(xiàn)本周氏蛋白 -其他類(lèi)型的免疫球蛋白未出現(xiàn)下降培訓(xùn)專(zhuān)用寡克隆免疫球蛋白

由于藥物原因?qū)е碌拿庖呷毕? -在器官或者骨移植后 -自身免疫病

由于病毒感染導(dǎo)致的免疫缺陷:

-Viral:HIV(63%),EBV,CMV,viralhepatitis,… -Bacterial,parasiticinfections:

(腦膜炎,腦炎,…)培訓(xùn)專(zhuān)用巨球蛋白血癥（Waldenstrom氏）患者血中存在大量單克隆IgM，血粘度明顯增多，骨骼損害不常見(jiàn)，疾病發(fā)展類(lèi)似淋巴瘤。培訓(xùn)專(zhuān)用常所致。血中出現(xiàn)大量無(wú)免疫功能的Ig片段——重鏈。重鏈病是免疫球蛋白的結(jié)構(gòu)異常見(jiàn)有三型，該病發(fā)病率極低。培訓(xùn)專(zhuān)用表1646例M蛋白類(lèi)型分類(lèi)型別例數(shù)%IgG型骨髓瘤20531.73IgA型骨髓瘤9314.40IgM型骨髓瘤568.67IgD型骨髓瘤121.86重鏈病50.77輕鏈病21433.13半分子病10.157SIgM20.31BMG497.59雙M蛋白病81.24培訓(xùn)專(zhuān)用MM是造血系統(tǒng)的惡性腫瘤，占整個(gè)惡性腫瘤的1%。常見(jiàn)于中、老年人(50-70歲居多，40歲以下少見(jiàn))。以往對(duì)此病認(rèn)識(shí)不足，漏診、誤診可達(dá)到70%以上。隨著壽命的延長(zhǎng)對(duì)此病認(rèn)識(shí)的提高病例數(shù)顯著增加。美國(guó)MM的發(fā)病率僅次于非霍奇金淋巴瘤（高于急性白血病）位居血液腫瘤的第二位。多發(fā)性骨髓瘤（MultipleMyeloma,MM）培訓(xùn)專(zhuān)用●骨痛、骨骼腫塊與病理性骨折,骨質(zhì)疏松和溶骨現(xiàn)象●貧血●免疫功能低下,反復(fù)感染●腎臟損害●高鈣、高粘（血漿相對(duì)黏度6以上）、高尿酸血癥表現(xiàn)

MM的臨床表現(xiàn)多樣化，常常因此就診于骨科、腎臟內(nèi)科等，延誤診治。

MM臨床表現(xiàn)特點(diǎn)培訓(xùn)專(zhuān)用多發(fā)性骨髓瘤的免疫學(xué)特征:血中出現(xiàn)M蛋白,正常Ig水平明顯減低尿中出現(xiàn)M蛋白和輕鏈蛋白(BJP)骨髓中漿細(xì)胞明顯增加無(wú)免疫活性Ig導(dǎo)致免疫功能低下培訓(xùn)專(zhuān)用多發(fā)性骨髓瘤病人溶骨報(bào)告培訓(xùn)專(zhuān)用多發(fā)性骨髓瘤病人溶骨報(bào)告(骨盆)培訓(xùn)專(zhuān)用多發(fā)性骨髓瘤病人溶骨報(bào)告(顱骨)培訓(xùn)專(zhuān)用培訓(xùn)專(zhuān)用

MMMGUS

骨髓漿細(xì)胞增多＞15%＜15%電泳中M蛋白水平IgG＞30g/LIgG≤30g/LIgA＞10g/LIgA≤10g/L尿電泳κ、λ輕鏈有本周蛋白≤1.0g/L/24h溶骨損害有無(wú)癥狀體征有無(wú)MGUS與MM的鑒別要點(diǎn)培訓(xùn)專(zhuān)用含有纖維蛋白原的血清電泳曲線gba2a1Alb培訓(xùn)專(zhuān)用血清蛋白質(zhì)的圖譜類(lèi)型總蛋白質(zhì)Albα1α2βγ1.低蛋白血癥↓↓↓↓N↑N↓N↑2.腎病型↓↓↓↓↑↑↑不定3.肝硬化型↓N↑↓↓N↓N↓β-γ↑橋4.急性炎癥或急性時(shí)相反應(yīng)癥N↓N↑↑N5.慢性炎癥型

↓↑↑↑6.彌漫性肝損害型↓N↓↓↑↓↑7.彌漫寬γ球蛋白血癥型↑↓N↑↑8.M蛋白血癥型

在α-γ區(qū)帶中出現(xiàn)M蛋白峰-M區(qū)帶峰9.高α2（β）球蛋白血癥↓↑↑↑10.妊娠型（高α型）↓N↓↑↑N