枯草桿菌搖瓶發(fā)酵生產(chǎn)淀粉酶課件

枯草桿菌搖瓶發(fā)酵生產(chǎn)淀粉酶枯草桿菌搖瓶發(fā)酵生產(chǎn)淀粉酶1（優(yōu)選）枯草桿菌搖瓶發(fā)酵生產(chǎn)淀粉酶（優(yōu)選）枯草桿菌搖瓶發(fā)酵生產(chǎn)淀粉酶2二、實(shí)驗(yàn)原理酶可由動(dòng)物（如胰蛋白酶、胃蛋白酶）、植物（如木瓜蛋白酶、菠蘿蛋白酶）和微生物（細(xì)菌、霉菌、酵母）產(chǎn)生，其中工業(yè)酶制劑大多數(shù)由微生物發(fā)酵法生產(chǎn)。由于微生物世代時(shí)間短，繁殖快、容易培養(yǎng)和管理，可大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)，所以工業(yè)酶制劑大多由微生物發(fā)酵產(chǎn)生。產(chǎn)酶微生物的獲得：

1、從有關(guān)菌種保藏機(jī)構(gòu)購買

2、從自然界分離篩選二、實(shí)驗(yàn)原理酶可由動(dòng)物（如胰蛋白酶、胃蛋白酶）、植物（如木瓜3產(chǎn)酶微生物的分離篩選方法1)樣品的采集：從富含酶作用底物的場所采集樣品。2)富集培養(yǎng):投其所好，取其所抗。3)分離獲得純培養(yǎng)(pureculture)的微生物。4)初篩：選出產(chǎn)酶菌種，以多為主。5)復(fù)篩：選出產(chǎn)酶水平相對(duì)較高的菌株，以質(zhì)為主。產(chǎn)酶微生物的分離篩選方法1)樣品的采集：從富含酶作用底物的場4產(chǎn)酶工藝條件及其調(diào)節(jié)控制保藏細(xì)胞細(xì)胞活化細(xì)胞擴(kuò)大培養(yǎng)發(fā)酵產(chǎn)酶分離純化酶固定化細(xì)胞原生質(zhì)體固定化原生質(zhì)體培養(yǎng)基預(yù)培養(yǎng)無菌空氣產(chǎn)酶工藝條件及其調(diào)節(jié)控制保藏細(xì)胞細(xì)胞活化細(xì)胞擴(kuò)大培養(yǎng)發(fā)酵產(chǎn)酶5酶制劑的發(fā)酵生產(chǎn)過程圖解酶制劑的發(fā)酵生產(chǎn)過程圖解630升全自動(dòng)發(fā)酵罐30升全自動(dòng)發(fā)酵罐7外觀：棕褐色液體1，求得測試酶液的濃度。擴(kuò)大培養(yǎng)多采用搖瓶培養(yǎng)，即在錐形瓶中加入一定量的液體培養(yǎng)基，在搖床上以一定轉(zhuǎn)速搖動(dòng)進(jìn)行恒溫培養(yǎng)。2、儀器耗材：恒溫培養(yǎng)箱、冰箱、高壓滅菌鍋、無菌操作臺(tái)、搖床、托盤天平、分析天平、電爐、白色搪瓷杯、三角瓶、量筒、紗布、繩子、pH試紙、玻棒等。稀碘液：吸取原碘液2.（優(yōu)選）枯草桿菌搖瓶發(fā)酵生產(chǎn)淀粉酶23g磷酸氫二鈉(Na2HPO4·12H2O)和8.酶的提取與分離純化的工藝流程用途：耐高溫α-淀粉酶具有極好的耐熱性，能廣泛應(yīng)用于淀粉、酒精、啤酒、味精、釀造、紡織退漿等工業(yè)上。酶活力：20000u/ml。(3)在一定的條件下，將一定量的酶液和底物溶液混合均勻，適時(shí)記下反應(yīng)開始的時(shí)間。5mL稀釋好的待測酶液，立即計(jì)時(shí)，搖勻，準(zhǔn)確反應(yīng)5min；0條件下，1小時(shí)液化可溶性淀粉的克數(shù)。外觀：棕褐色液體酶活力：樣品中酶總共有多少個(gè)酶單位?？扇苄缘矸廴芤?20g/L)：稱取2.2)富集培養(yǎng):投其所好，取其所抗?？捎靡员容^每單位質(zhì)量酶蛋白的催化能力。磷酸緩沖液(pH=6.1、將酶與反應(yīng)底物混合均勻，在一定條件下反應(yīng)一段時(shí)間；外觀：棕褐色液體8枯草桿菌搖瓶發(fā)酵生產(chǎn)淀粉酶課件9發(fā)酵工藝參數(shù)的控制pH的調(diào)節(jié)控制溫度的調(diào)節(jié)控制溶解氧的調(diào)節(jié)控制泡沫的控制染菌的控制發(fā)酵工藝參數(shù)的控制pH的調(diào)節(jié)控制10酶的提取與分離純化的工藝流程發(fā)酵液預(yù)處理（細(xì)菌絮凝）固液分離（離心、過濾）菌體（胞內(nèi)酶）動(dòng)植物源酶液體（胞外酶）細(xì)胞破碎提取固液分離液體酶的提取與分離純化的工藝流程發(fā)酵液預(yù)處理（細(xì)菌絮凝）固液分離11工業(yè)、食品、飼料濃縮（蒸發(fā)、超濾、沉淀）濃縮液配方干燥醫(yī)藥、分析、科研液體酶固體酶濃縮分離純化（離心、沉淀、膜分離、層析、電泳、萃取、結(jié)晶）配方、制劑干燥液體酶固體酶工業(yè)、食品、飼料濃縮濃縮液配方干燥醫(yī)藥、分析、科研液體酶固體12酶活力的測定酶活力：也稱酶活性，酶催化一定化學(xué)反應(yīng)的能力。酶活力大小可用在一定條件下，它所催化的某一化學(xué)反應(yīng)的起始速率V0表示，即用反應(yīng)起始階段產(chǎn)物增加(或底物減少)的速率表示。v=-dS/dt=dP/dt酶活力的測定酶活力：v=-dS/dt=dP/dt13酶活力測定方法酶活力測定的要求：快速、簡便、準(zhǔn)確。包括兩個(gè)階段：

1、將酶與反應(yīng)底物混合均勻，在一定條件下反應(yīng)一段時(shí)間；

2、測定反應(yīng)液中底物或產(chǎn)物的變化量。酶活力測定方法酶活力測定的要求：快速、簡便、準(zhǔn)確。14酶活力測定的基本步驟：(1)根據(jù)酶催化的專一性，選擇適宜的底物，并配制成一定濃度的底物溶液。(2)根據(jù)酶的動(dòng)力學(xué)性質(zhì)，確定酶催化反應(yīng)的溫度、pH值、底物濃度、激活劑濃度等反應(yīng)條件。(3)在一定的條件下，將一定量的酶液和底物溶液混合均勻，適時(shí)記下反應(yīng)開始的時(shí)間。(4)反應(yīng)到一定的時(shí)間，取出適量的反應(yīng)液，運(yùn)用各種生化檢測技術(shù)，測定產(chǎn)物的生成量或底物的減少量。注意：若不能即時(shí)測出結(jié)果的，則要及時(shí)終止反應(yīng)，然后再測定。酶活力測定的基本步驟：(1)根據(jù)酶催化的專一性，選擇適宜的15終止酶反應(yīng)的方法：加熱使酶失活；加入適宜的酶變性劑（如三氯醋酸）；調(diào)節(jié)pH值；低溫終止反應(yīng)。終止酶反應(yīng)的方法：16酶活力測定方法根據(jù)測量操作過程終止反應(yīng)法：在恒溫反應(yīng)系統(tǒng)中進(jìn)行酶促反應(yīng)，間隔一定時(shí)間取樣，終止反應(yīng)，進(jìn)行測定。連續(xù)反應(yīng)法：基于反應(yīng)過程中光譜吸收、酸堿度等變化用儀器跟蹤反應(yīng)的進(jìn)程、記錄結(jié)果。酶活力測定方法根據(jù)測量操作過程17酶活力測定方法根據(jù)底物或產(chǎn)物的物理化學(xué)性質(zhì)化學(xué)測定法、光學(xué)測定法、氣體測定法等。如化學(xué)滴定、比色法、紫外光吸收、熒光測定、同位素標(biāo)記底物或稱放射性化學(xué)法、酶偶聯(lián)法等。其中化學(xué)滴定、紫外、可見光比色法最為常用。酶活力測定方法根據(jù)底物或產(chǎn)物的物理化學(xué)性質(zhì)184)初篩：選出產(chǎn)酶菌種，以多為主。耐高溫α-淀粉酶采用地衣芽孢桿菌經(jīng)深層培養(yǎng)，提取等工序精制而成，能隨機(jī)水解淀粉、糖原及其降解物內(nèi)部的α-1，4葡萄糖苷健使得膠狀淀粉溶液的粘度迅速下降，產(chǎn)生可溶性糊精和寡聚糖，過度的水解可產(chǎn)生少量葡萄糖和麥芽糖。酶的反應(yīng)速度受到許多條件的影響：底物濃度、溫度、pH、金屬離子等溶解性：易溶于水1℃）、移液管、試管、燒杯、容量瓶、玻璃棒、秒表。注意：若不能即時(shí)測出結(jié)果的，則要及時(shí)終止反應(yīng)，然后再測定。酶活力測定的基本步驟：（優(yōu)選）枯草桿菌搖瓶發(fā)酵生產(chǎn)淀粉酶v=-dS/dt=dP/dt按產(chǎn)品的適用溫度分為:中溫a一淀粉酶活力：2、測定反應(yīng)液中底物或產(chǎn)物的變化量。液體為2000u/ml1，中溫α-淀粉酶分為固體和液體兩種劑型。磷酸緩沖液(pH=6.按產(chǎn)品的適用溫度分為:2，酶活力定義：1ml酶液(1g酶粉)在60℃，pH6.對(duì)同一種酶，比活力可以代表酶的純度，比活力愈高，表示酶愈純。熱穩(wěn)定性：需Ca2+150ppm，最適作用溫度60-70℃，在70-90℃之間，隨著溫度升高，其反應(yīng)速度加快，但失活也加快，適用于最高達(dá)90℃的液化過程。外觀：棕褐色液體按產(chǎn)品的適用溫度分為:酶的反應(yīng)速度的影響因素酶的反應(yīng)速度受到許多條件的影響：底物濃度、溫度、pH、金屬離子等要準(zhǔn)確地測定酶的活力，必須滿足這些前提條件。最適反應(yīng)條件：最適底物濃度、最適pH、最適溫度、最適離子強(qiáng)度、必要的輔助因子；保證測定的是V0，即線性部分4)初篩：選出產(chǎn)酶菌種，以多為主。酶的反應(yīng)速度的影響因素酶的19酶活力單位國際單位：1961年國際生物化學(xué)與分子生物學(xué)聯(lián)合會(huì)規(guī)定：在特定條件下，每1min催化1μmol的底物轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物的酶量定義為1個(gè)酶活力單位。這個(gè)單位稱為國際單位（IU）國際上另一個(gè)常用的酶活力單位是卡特（Kat）。在特定條件下，每秒催化1mol底物轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物的酶量定義為1卡特（Kat）。酶活力單位國際單位：20酶的比活力酶的比活力是酶純度的一個(gè)指標(biāo)，是指在特定條件下，單位重量（mg）蛋白質(zhì)或RNA所具有的酶活力單位數(shù)。酶活力：樣品中酶總共有多少個(gè)酶單位。比活力：每mg蛋白質(zhì)中有多少個(gè)酶單位。酶比活力＝酶活力（單位）/mg（蛋白或RNA）可用以比較每單位質(zhì)量酶蛋白的催化能力。對(duì)同一種酶，比活力可以代表酶的純度，比活力愈高，表示酶愈純。在酶純化過程中，比活力增高。酶的比活力酶的比活力是酶純度的一個(gè)指標(biāo)，是指在特定條件下，單21淀粉水解酶類凡是能催化淀粉（或糖元）分子及其分子片段中的α-葡萄糖苷鍵水解的酶，統(tǒng)稱為淀粉酶，包括α-淀粉酶，糖化酶，β-淀粉酶，異淀粉酶，環(huán)狀糊精生成酶，麥芽寡糖生成酶等。廣泛應(yīng)用于淀粉糖工業(yè)、酒精、啤酒、味精、釀造、烘焙、飼料、紡織退漿、醫(yī)藥等領(lǐng)域。淀粉水解酶類凡是能催化淀粉（或糖元）分子及其分子片段中的α-22α-淀粉酶alpha-amylase

能水解淀粉分子鏈中的α-1,4-葡萄糖苷鍵，將淀粉鏈切斷成為短鏈糊精和少量麥芽糖和葡萄糖，使淀粉粘度迅速下降的酶制劑。產(chǎn)品分類按產(chǎn)品的適用溫度分為:

中溫α-淀粉酶制劑和耐高溫α-

淀粉酶制劑。按產(chǎn)品形態(tài)分為：液體劑型酶制劑和固體劑型酶制劑。α-淀粉酶alpha-amylase23枯草桿菌搖瓶發(fā)酵生產(chǎn)淀粉酶課件24中溫α-淀粉酶中溫α-液化型淀粉酶系用枯草芽孢桿菌（BacillusSubtilis)經(jīng)發(fā)酵提煉精制而成。用途：本產(chǎn)品適用于酒精、啤酒、味精、發(fā)酵工業(yè)的液化以及紡織退漿等。產(chǎn)品特性：[物理特性]

外觀：棕褐色液體溶解性：易溶于水比重：1.15-1.25g/ml中溫α-淀粉酶中溫α-液化型淀粉酶系用枯草芽孢桿菌（Ba25[化學(xué)物性]

熱穩(wěn)定性：需Ca2+150ppm，最適作用溫度60-70℃，在70-90℃之間，隨著溫度升高，其反應(yīng)速度加快，但失活也加快，適用于最高達(dá)90℃的液化過程。

pH6.0-7.0較為穩(wěn)定；最適作用pH6.0，pH5.0以下失活嚴(yán)重。產(chǎn)品規(guī)格：1，中溫α-淀粉酶分為固體和液體兩種劑型。固體分為2000、4000u/g,6000u/g三種。液體為2000u/ml2，酶活力定義：1ml酶液(1g酶粉)在60℃，pH6.0條件下，1小時(shí)液化可溶性淀粉的克數(shù)。[化學(xué)物性]26耐高溫α-淀粉酶耐高溫α-淀粉酶采用地衣芽孢桿菌經(jīng)深層培養(yǎng)，提取等工序精制而成，能隨機(jī)水解淀粉、糖原及其降解物內(nèi)部的α-1，4葡萄糖苷健使得膠狀淀粉溶液的粘度迅速下降，產(chǎn)生可溶性糊精和寡聚糖，過度的水解可產(chǎn)生少量葡萄糖和麥芽糖。用途：耐高溫α-淀粉酶具有極好的耐熱性，能廣泛應(yīng)用于淀粉、酒精、啤酒、味精、釀造、紡織退漿等工業(yè)上。產(chǎn)品特性:(物理特性)

外觀：棕褐色液體溶解性：易溶于水比重：1.15-1.25g/ml耐高溫α-淀粉酶耐高溫α-淀粉酶采用地衣芽孢桿菌經(jīng)深層培27[化學(xué)物性]鈣離子對(duì)酶活穩(wěn)定性的影響：較低濃度的鈣離子存在，本品即可有很好的穩(wěn)定性，對(duì)于淀粉的水解，推薦加入50-100ppm鈣離子。pH范圍：5.5-7.0最適6.0溫度范圍：90-95℃在噴射液化工藝中瞬間溫度達(dá)105-110℃，仍能有效水解淀粉。產(chǎn)品規(guī)格：

1，耐高溫α-淀粉酶為液體酶制劑。酶活力：20000u/ml。

2，酶活力定義：1ml酶液在70℃，pH6.0條件下，1分鐘液化可溶性淀粉的毫克數(shù)。[化學(xué)物性]280條件下，1分鐘液化可溶性淀粉的毫克數(shù)。5mL稀釋好的待測酶液，立即計(jì)時(shí)，搖勻，準(zhǔn)確反應(yīng)5min；比活力：每mg蛋白質(zhì)中有多少個(gè)酶單位。其中化學(xué)滴定、紫外、可見光比色法最為常用。0mL反應(yīng)液，加到預(yù)先盛有0.酶的提取與分離純化的工藝流程最適反應(yīng)條件：最適底物濃度、最適pH、最適溫度、最適離子強(qiáng)度、必要的輔助因子；1，求得測試酶液的濃度。其中化學(xué)滴定、紫外、可見光比色法最為常用。鹽酸溶液：c(HCI)=0.2，酶活力定義：1ml酶液(1g酶粉)在60℃，pH6.國際上另一個(gè)常用的酶活力單位是卡特（Kat）。其中化學(xué)滴定、紫外、可見光比色法最為常用。注意：若不能即時(shí)測出結(jié)果的，則要及時(shí)終止反應(yīng)，然后再測定?；瘜W(xué)測定法、光學(xué)測定法、氣體測定法等。碘、碘化鉀、α-淀粉酶制劑、磷酸氫二鈉、檸檬酸、鹽酸、可溶性淀粉（湖州展望化學(xué)藥業(yè)有限公司）。酶活力：20000u/ml。4)初篩：選出產(chǎn)酶菌種，以多為主。連續(xù)反應(yīng)法：基于反應(yīng)過程中光譜吸收、酸堿度等變化用儀器跟蹤反應(yīng)的進(jìn)程、記錄結(jié)果。23g磷酸氫二鈉(Na2HPO4·12H2O)和8.擴(kuò)大培養(yǎng)多采用搖瓶培養(yǎng)，即在錐形瓶中加入一定量的液體培養(yǎng)基，在搖床上以一定轉(zhuǎn)速搖動(dòng)進(jìn)行恒溫培養(yǎng)。根據(jù)底物或產(chǎn)物的物理化學(xué)性質(zhì)按產(chǎn)品的適用溫度分為:按產(chǎn)品的適用溫度分為:3)分離獲得純培養(yǎng)(pureculture)的微生物。1、菌種：枯草桿菌（已活化好，每組1支）碘、碘化鉀、α-淀粉酶制劑、磷酸氫二鈉、檸檬酸、鹽酸、可溶性淀粉（湖州展望化學(xué)藥業(yè)有限公司）。液體劑型酶制劑和固體劑型酶制劑。2，酶活力定義：1ml酶液(1g酶粉)在60℃，pH6.α-淀粉酶制劑的衛(wèi)生要求1961年國際生物化學(xué)與分子生物學(xué)聯(lián)合會(huì)規(guī)定：在特定條件下，每1min催化1μmol的底物轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物的酶量定義為1個(gè)酶活力單位。1g固體酶粉(或1mL液體酶)，于70℃、pH=6.用途：耐高溫α-淀粉酶具有極好的耐熱性，能廣泛應(yīng)用于淀粉、酒精、啤酒、味精、釀造、紡織退漿等工業(yè)上。在酶純化過程中，比活力增高。固體分為2000、4000u/g,6000u/g三種。最適反應(yīng)條件：最適底物濃度、最適pH、最適溫度、最適離子強(qiáng)度、必要的輔助因子；在噴射液化工藝中瞬間溫度達(dá)105-110℃，仍能有效水解淀粉。5mL鹽酸溶液和5.也稱酶活性，酶催化一定化學(xué)反應(yīng)的能力。注意：若不能即時(shí)測出結(jié)果的，則要及時(shí)終止反應(yīng)，然后再測定。廣泛應(yīng)用于淀粉糖工業(yè)、酒精、啤酒、味精、釀造、烘焙、飼料、紡織退漿、醫(yī)藥等領(lǐng)域?？捎靡员容^每單位質(zhì)量酶蛋白的催化能力。α-淀粉酶制劑的理化要求0條件下，1分鐘液化可溶性淀粉的毫克數(shù)。根據(jù)底物或產(chǎn)物的物理29α-淀粉酶制劑的衛(wèi)生要求α-淀粉酶制劑的衛(wèi)生要求30三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容微生物發(fā)酵法是酶制劑生產(chǎn)的主要方法。發(fā)酵生產(chǎn)中多用液體深層發(fā)酵法制備酶。大規(guī)模液體深層發(fā)酵之前，首先在實(shí)驗(yàn)室對(duì)保藏的目的菌種進(jìn)行活化和擴(kuò)大培養(yǎng)，制得生產(chǎn)種子。擴(kuò)大培養(yǎng)多采用搖瓶培養(yǎng)，即在錐形瓶中加入一定量的液體培養(yǎng)基，在搖床上以一定轉(zhuǎn)速搖動(dòng)進(jìn)行恒溫培養(yǎng)。搖瓶培養(yǎng)也是實(shí)驗(yàn)室模擬生產(chǎn)上進(jìn)行發(fā)酵產(chǎn)酶的一種模擬實(shí)驗(yàn)。（搖瓶發(fā)酵生產(chǎn)α-淀粉酶）發(fā)酵液酶活力的測定。三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容微生物發(fā)酵法是酶制劑生產(chǎn)的主要方法。發(fā)酵生產(chǎn)中多31（一）搖瓶發(fā)酵產(chǎn)酶儀器和試劑1、菌種：枯草芽孢桿菌2、儀器耗材：恒溫培養(yǎng)箱、冰箱、高壓滅菌鍋、無菌操作臺(tái)、搖床、托盤天平、分析天平、電爐、白色搪瓷杯、三角瓶、量筒、紗布、繩子、pH試紙、玻棒等。（一）搖瓶發(fā)酵產(chǎn)酶儀器和試劑32實(shí)驗(yàn)步驟1、菌種：枯草桿菌（已活化好，每組1支）2、培養(yǎng)基的準(zhǔn)備：查資料，自行設(shè)計(jì)3、工藝條件：查資料，自行設(shè)計(jì)4、菌種的制備：將斜面菌種在無菌條件下接種至液體種子培養(yǎng)基中，在一定溫度、轉(zhuǎn)速下培養(yǎng)。5、發(fā)酵：將搖床培養(yǎng)好的種子培養(yǎng)液接入發(fā)酵培養(yǎng)基中，接種量為5mL，共接3瓶（100ml/250ml瓶），做好標(biāo)記。實(shí)驗(yàn)步驟1、菌種：枯草桿菌（已活化好，每組1支）33實(shí)驗(yàn)步驟發(fā)酵結(jié)束后：檢查是否染菌固液分離：方法自定；

發(fā)酵結(jié)束時(shí)，顯微鏡檢查每個(gè)發(fā)酵瓶是否污染，若無污染合并發(fā)酵液并測定發(fā)酵酶活力。實(shí)驗(yàn)步驟發(fā)酵結(jié)束后：檢查是否染菌34（二）酶活測定原理：α-淀粉酶制劑能將淀粉分子鏈中的α-1,4-葡萄糖苷鍵隨機(jī)切斷成長短不一的短鏈糊精、少量麥芽糖和葡萄糖，而使淀粉對(duì)碘呈籃紫色的特性反應(yīng)逐漸消失，呈現(xiàn)棕紅色，其顏色消失的速度與酶活性有關(guān)，據(jù)此可通過反應(yīng)后的吸光度計(jì)算酶活力。（二）酶活測定原理：α-淀粉酶制劑能將淀粉分子鏈中的α-135酶活定義

中溫a一淀粉酶活力：

1g固體酶粉(或1mL液體酶)，于60℃、pH=6.0條件下，1h液化1g可溶性淀粉所需的酶量，即為1個(gè)酶活力單位，以u(píng)/g(u/mL)表示。耐高溫a-淀粉酶活力：

1g固體酶粉(或1mL液體酶)，于70℃、pH=6.0條件下，1min液化1mg可溶性淀粉所需的酶量，即為1個(gè)酶活力單位，以u(píng)/g(u/mL)表示。酶活定義中溫a一淀粉酶活力：36實(shí)驗(yàn)儀器及試劑儀器：分光光度計(jì)、恒溫水浴鍋（控溫精度±0.1℃）、移液管、試管、燒杯、容量瓶、玻璃棒、秒表。實(shí)驗(yàn)儀器及試劑儀器：37試劑及溶液試劑：碘、碘化鉀、α-淀粉酶制劑、磷酸氫二鈉、檸檬酸、鹽酸、可溶性淀粉（湖州展望化學(xué)藥業(yè)有限公司）。溶液配制：原碘液：稱取11.0g碘和22.0g碘化鉀，用少量水使碘完全溶解，定容至500mL，貯存于棕色瓶中。稀碘液：吸取原碘液2.00mL，加20.0g碘化鉀用水溶解并定容至500mL，貯存于棕色瓶中。試劑及溶液試劑：38試劑及溶液溶液配制：可溶性淀粉溶液(20g/L)：稱取2.000g(精確至0.001g)可溶性淀粉(以絕干計(jì))于燒杯中，用少量水調(diào)成漿狀物，邊攪拌邊緩緩加入70mL沸水中，然后用水分次沖洗裝淀粉的燒杯，洗液倒人其中，攪拌加熱至完全透明，冷卻定容至100mL。溶液現(xiàn)配現(xiàn)用。磷酸緩沖液(pH=6.0)：稱取45.23g磷酸氫二鈉(Na2HPO4·12H2O)和8.07g檸檬酸(C6H8O7·H2O)，用水溶解并定容至1000mL。用pH計(jì)校正后使用。鹽酸溶液：c(HCI)=0.1mol/L。試劑及溶液溶液配制：39實(shí)驗(yàn)方法待測酶液的制備：稱取1g~2g酶粉(精確至0.0001g)或準(zhǔn)確吸取酶液1.00mL，用少量磷酸緩沖液充分溶解，將上清液小心傾入容量瓶中，若有剩余殘?jiān)?，再加少量磷酸緩沖液充分研磨，最終樣品全部移入容量瓶中，用磷酸緩沖液定容至刻度，搖勻。用四層紗布過濾，濾液待用。注:待測中溫a-淀粉酶酶液酶活力控制酶濃度在3.4u/mL~4.5u/mL范圍內(nèi)，待測耐高溫淀粉酶活力控制酶濃度在60u/mL~65u/mL范圍內(nèi)。實(shí)驗(yàn)方法待測酶液的制備：40酶活力測定吸取10.0mL可溶性淀粉溶液于試管中，加入磷酸緩沖液2.5mL，搖勻后，置于60℃±0.2℃(耐高溫α-淀粉酶制劑置于70℃±0.2℃)恒溫水浴中預(yù)熱8min；加入0.5mL稀釋好的待測酶液，立即計(jì)時(shí)，搖勻，準(zhǔn)確反應(yīng)5min；立即用移液管吸取1.0mL反應(yīng)液，加到預(yù)先盛有0.5mL鹽酸溶液和5.00mL稀碘液的試管中，搖勻，并以0.5mL鹽酸溶液和5.00mL稀碘液為空白，于660nm波長下，用10mm比色皿迅速測定其吸光度(A)。根據(jù)吸光度查表A.1，求得測試酶液的濃度。酶活力測定吸取10.0mL可溶性淀粉溶液于試管中，加入磷酸41碘、碘化鉀、α-淀粉酶制劑、磷酸氫二鈉、檸檬酸、鹽酸、可溶性淀粉（湖州展望化學(xué)藥業(yè)有限公司）。發(fā)酵生產(chǎn)中多用液體深層發(fā)酵法制備酶。外觀：棕褐色液體溶解性：易溶于水0001g)或準(zhǔn)確吸取酶液1.3)分離獲得純培養(yǎng)(pureculture)的微生物。5mL鹽酸溶液和5.5mL鹽酸溶液和5.3、工藝條件：查資料，自行設(shè)計(jì)酶的反應(yīng)速度受到許多條件的影響：底物濃度、溫度、pH、金屬離子等化學(xué)測定法、光學(xué)測定法、氣體測定法等。2、儀器耗材：恒溫培養(yǎng)箱、冰箱、高壓滅菌鍋、無菌操作臺(tái)、搖床、托盤天平、分析天平、電爐、白色搪瓷杯、三角瓶、量筒、紗布、繩子、pH試紙、玻棒等。中溫α-液化型淀粉酶系用枯草芽孢桿菌（BacillusSubtilis)經(jīng)發(fā)酵提煉精制而成。微生物發(fā)酵法是酶制劑生產(chǎn)的主要方法。1、將酶與反應(yīng)底物混合均勻，在一定條件下反應(yīng)一段時(shí)間；0mL反應(yīng)液，加到預(yù)先盛有0.連續(xù)反應(yīng)法：基于反應(yīng)過程中光譜吸收、酸堿度等變化用儀器跟蹤反應(yīng)的進(jìn)程、記錄結(jié)果。α-淀粉酶alpha-amylase在特定條件下，每秒催化1mol底物轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物的酶量定義為1卡特（Kat）。酶的提取與分離純化的工藝流程酶可由動(dòng)物（如胰蛋白酶、胃蛋白酶）、植物（如木瓜蛋白酶、菠蘿蛋白酶）和微生物（細(xì)菌、霉菌、酵母）產(chǎn)生，其中工業(yè)酶制劑大多數(shù)由微生物發(fā)酵法生產(chǎn)。按產(chǎn)品的適用溫度分為:(4)反應(yīng)到一定的時(shí)間，取出適量的反應(yīng)液，運(yùn)用各種生化檢測技術(shù)，測定產(chǎn)物的生成量或底物的減少量。凡是能催化淀粉（或糖元）分子及其分子片段中的α-葡萄糖苷鍵水解的酶，統(tǒng)稱為淀粉酶，包括α-淀粉酶，糖化酶，β-淀粉酶，異淀粉酶，環(huán)狀糊精生成酶，麥芽寡糖生成酶等。耐高溫α-淀粉酶采用地衣芽孢桿菌經(jīng)深層培養(yǎng)，提取等工序精制而成，能隨機(jī)水解淀粉、糖原及其降解物內(nèi)部的α-1，4葡萄糖苷健使得膠狀淀粉溶液的粘度迅速下降，產(chǎn)生可溶性糊精和寡聚糖，過度的水解可產(chǎn)生少量葡萄糖和麥芽糖。2、儀器耗材：恒溫培養(yǎng)箱、冰箱、高壓滅菌鍋、無菌操作臺(tái)、搖床、托盤天平、分析天平、電爐、白色搪瓷杯、三角瓶、量筒、紗布、繩子、pH試紙、玻棒等。發(fā)酵結(jié)束后：檢查是否染菌凡是能催化淀粉（或糖元）分子及其分子片段中的α-葡萄糖苷鍵水解的酶，統(tǒng)稱為淀粉酶，包括α-淀粉酶，糖化酶，β-淀粉酶，異淀粉酶，環(huán)狀糊精生成酶，麥芽寡糖生成酶等。中溫α-淀粉酶制劑和耐高溫α-淀粉酶制劑。磷酸緩沖液(pH=6.(1)根據(jù)酶催化的專一性，選擇適宜的底物，并配制成一定濃度的底物溶液。酶活力：20000u/ml。n—樣品的稀釋倍數(shù)（可通過反應(yīng)時(shí)間和加入固定化酶的量來控制）。其中化學(xué)滴定、紫外、可見光比色法最為常用?？扇苄缘矸廴芤?20g/L)：稱取2.（優(yōu)選）枯草桿菌搖瓶發(fā)酵生產(chǎn)淀粉酶酶制劑的發(fā)酵生產(chǎn)過程圖解分光光度計(jì)、恒溫水浴鍋（控溫精度±0.2，酶活力定義：1ml酶液(1g酶粉)在60℃，pH6.1、菌種：枯草芽孢桿菌連續(xù)反應(yīng)法：基于反應(yīng)過程中光譜吸收、酸堿度等變化用儀器跟蹤反應(yīng)的進(jìn)程、記錄結(jié)果。用途：耐高溫α-淀粉酶具有極好的耐熱性，能廣泛應(yīng)用于淀粉、酒精、啤酒、味精、釀造、紡織退漿等工業(yè)上。用四層紗布過濾，濾液待用。5mL鹽酸溶液和5.酶活力計(jì)算中溫α-淀粉酶制劑的酶活力按下式計(jì)算:

X1=c×n式中:X1—樣品的酶活力，u/mL或u/gc—測試酶樣濃度，u/mL或u/gn—樣品的稀釋倍數(shù)（可通過反應(yīng)時(shí)間和加入固定化酶的量來控制）。所得結(jié)果表示至整數(shù)。允許差：平行試驗(yàn)相對(duì)誤差不得超過5%碘、碘化鉀、α-淀粉酶制劑、磷酸氫二鈉、檸檬酸、鹽酸、可溶42枯草桿菌搖瓶發(fā)酵生產(chǎn)淀粉酶枯草桿菌搖瓶發(fā)酵生產(chǎn)淀粉酶43（優(yōu)選）枯草桿菌搖瓶發(fā)酵生產(chǎn)淀粉酶（優(yōu)選）枯草桿菌搖瓶發(fā)酵生產(chǎn)淀粉酶44二、實(shí)驗(yàn)原理酶可由動(dòng)物（如胰蛋白酶、胃蛋白酶）、植物（如木瓜蛋白酶、菠蘿蛋白酶）和微生物（細(xì)菌、霉菌、酵母）產(chǎn)生，其中工業(yè)酶制劑大多數(shù)由微生物發(fā)酵法生產(chǎn)。由于微生物世代時(shí)間短，繁殖快、容易培養(yǎng)和管理，可大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)，所以工業(yè)酶制劑大多由微生物發(fā)酵產(chǎn)生。產(chǎn)酶微生物的獲得：

1、從有關(guān)菌種保藏機(jī)構(gòu)購買

2、從自然界分離篩選二、實(shí)驗(yàn)原理酶可由動(dòng)物（如胰蛋白酶、胃蛋白酶）、植物（如木瓜45產(chǎn)酶微生物的分離篩選方法1)樣品的采集：從富含酶作用底物的場所采集樣品。2)富集培養(yǎng):投其所好，取其所抗。3)分離獲得純培養(yǎng)(pureculture)的微生物。4)初篩：選出產(chǎn)酶菌種，以多為主。5)復(fù)篩：選出產(chǎn)酶水平相對(duì)較高的菌株，以質(zhì)為主。產(chǎn)酶微生物的分離篩選方法1)樣品的采集：從富含酶作用底物的場46產(chǎn)酶工藝條件及其調(diào)節(jié)控制保藏細(xì)胞細(xì)胞活化細(xì)胞擴(kuò)大培養(yǎng)發(fā)酵產(chǎn)酶分離純化酶固定化細(xì)胞原生質(zhì)體固定化原生質(zhì)體培養(yǎng)基預(yù)培養(yǎng)無菌空氣產(chǎn)酶工藝條件及其調(diào)節(jié)控制保藏細(xì)胞細(xì)胞活化細(xì)胞擴(kuò)大培養(yǎng)發(fā)酵產(chǎn)酶47酶制劑的發(fā)酵生產(chǎn)過程圖解酶制劑的發(fā)酵生產(chǎn)過程圖解4830升全自動(dòng)發(fā)酵罐30升全自動(dòng)發(fā)酵罐49外觀：棕褐色液體1，求得測試酶液的濃度。擴(kuò)大培養(yǎng)多采用搖瓶培養(yǎng)，即在錐形瓶中加入一定量的液體培養(yǎng)基，在搖床上以一定轉(zhuǎn)速搖動(dòng)進(jìn)行恒溫培養(yǎng)。2、儀器耗材：恒溫培養(yǎng)箱、冰箱、高壓滅菌鍋、無菌操作臺(tái)、搖床、托盤天平、分析天平、電爐、白色搪瓷杯、三角瓶、量筒、紗布、繩子、pH試紙、玻棒等。稀碘液：吸取原碘液2.（優(yōu)選）枯草桿菌搖瓶發(fā)酵生產(chǎn)淀粉酶23g磷酸氫二鈉(Na2HPO4·12H2O)和8.酶的提取與分離純化的工藝流程用途：耐高溫α-淀粉酶具有極好的耐熱性，能廣泛應(yīng)用于淀粉、酒精、啤酒、味精、釀造、紡織退漿等工業(yè)上。酶活力：20000u/ml。(3)在一定的條件下，將一定量的酶液和底物溶液混合均勻，適時(shí)記下反應(yīng)開始的時(shí)間。5mL稀釋好的待測酶液，立即計(jì)時(shí)，搖勻，準(zhǔn)確反應(yīng)5min；0條件下，1小時(shí)液化可溶性淀粉的克數(shù)。外觀：棕褐色液體酶活力：樣品中酶總共有多少個(gè)酶單位?？扇苄缘矸廴芤?20g/L)：稱取2.2)富集培養(yǎng):投其所好，取其所抗?？捎靡员容^每單位質(zhì)量酶蛋白的催化能力。磷酸緩沖液(pH=6.1、將酶與反應(yīng)底物混合均勻，在一定條件下反應(yīng)一段時(shí)間；外觀：棕褐色液體50枯草桿菌搖瓶發(fā)酵生產(chǎn)淀粉酶課件51發(fā)酵工藝參數(shù)的控制pH的調(diào)節(jié)控制溫度的調(diào)節(jié)控制溶解氧的調(diào)節(jié)控制泡沫的控制染菌的控制發(fā)酵工藝參數(shù)的控制pH的調(diào)節(jié)控制52酶的提取與分離純化的工藝流程發(fā)酵液預(yù)處理（細(xì)菌絮凝）固液分離（離心、過濾）菌體（胞內(nèi)酶）動(dòng)植物源酶液體（胞外酶）細(xì)胞破碎提取固液分離液體酶的提取與分離純化的工藝流程發(fā)酵液預(yù)處理（細(xì)菌絮凝）固液分離53工業(yè)、食品、飼料濃縮（蒸發(fā)、超濾、沉淀）濃縮液配方干燥醫(yī)藥、分析、科研液體酶固體酶濃縮分離純化（離心、沉淀、膜分離、層析、電泳、萃取、結(jié)晶）配方、制劑干燥液體酶固體酶工業(yè)、食品、飼料濃縮濃縮液配方干燥醫(yī)藥、分析、科研液體酶固體54酶活力的測定酶活力：也稱酶活性，酶催化一定化學(xué)反應(yīng)的能力。酶活力大小可用在一定條件下，它所催化的某一化學(xué)反應(yīng)的起始速率V0表示，即用反應(yīng)起始階段產(chǎn)物增加(或底物減少)的速率表示。v=-dS/dt=dP/dt酶活力的測定酶活力：v=-dS/dt=dP/dt55酶活力測定方法酶活力測定的要求：快速、簡便、準(zhǔn)確。包括兩個(gè)階段：

1、將酶與反應(yīng)底物混合均勻，在一定條件下反應(yīng)一段時(shí)間；

2、測定反應(yīng)液中底物或產(chǎn)物的變化量。酶活力測定方法酶活力測定的要求：快速、簡便、準(zhǔn)確。56酶活力測定的基本步驟：(1)根據(jù)酶催化的專一性，選擇適宜的底物，并配制成一定濃度的底物溶液。(2)根據(jù)酶的動(dòng)力學(xué)性質(zhì)，確定酶催化反應(yīng)的溫度、pH值、底物濃度、激活劑濃度等反應(yīng)條件。(3)在一定的條件下，將一定量的酶液和底物溶液混合均勻，適時(shí)記下反應(yīng)開始的時(shí)間。(4)反應(yīng)到一定的時(shí)間，取出適量的反應(yīng)液，運(yùn)用各種生化檢測技術(shù)，測定產(chǎn)物的生成量或底物的減少量。注意：若不能即時(shí)測出結(jié)果的，則要及時(shí)終止反應(yīng)，然后再測定。酶活力測定的基本步驟：(1)根據(jù)酶催化的專一性，選擇適宜的57終止酶反應(yīng)的方法：加熱使酶失活；加入適宜的酶變性劑（如三氯醋酸）；調(diào)節(jié)pH值；低溫終止反應(yīng)。終止酶反應(yīng)的方法：58酶活力測定方法根據(jù)測量操作過程終止反應(yīng)法：在恒溫反應(yīng)系統(tǒng)中進(jìn)行酶促反應(yīng)，間隔一定時(shí)間取樣，終止反應(yīng)，進(jìn)行測定。連續(xù)反應(yīng)法：基于反應(yīng)過程中光譜吸收、酸堿度等變化用儀器跟蹤反應(yīng)的進(jìn)程、記錄結(jié)果。酶活力測定方法根據(jù)測量操作過程59酶活力測定方法根據(jù)底物或產(chǎn)物的物理化學(xué)性質(zhì)化學(xué)測定法、光學(xué)測定法、氣體測定法等。如化學(xué)滴定、比色法、紫外光吸收、熒光測定、同位素標(biāo)記底物或稱放射性化學(xué)法、酶偶聯(lián)法等。其中化學(xué)滴定、紫外、可見光比色法最為常用。酶活力測定方法根據(jù)底物或產(chǎn)物的物理化學(xué)性質(zhì)604)初篩：選出產(chǎn)酶菌種，以多為主。耐高溫α-淀粉酶采用地衣芽孢桿菌經(jīng)深層培養(yǎng)，提取等工序精制而成，能隨機(jī)水解淀粉、糖原及其降解物內(nèi)部的α-1，4葡萄糖苷健使得膠狀淀粉溶液的粘度迅速下降，產(chǎn)生可溶性糊精和寡聚糖，過度的水解可產(chǎn)生少量葡萄糖和麥芽糖。酶的反應(yīng)速度受到許多條件的影響：底物濃度、溫度、pH、金屬離子等溶解性：易溶于水1℃）、移液管、試管、燒杯、容量瓶、玻璃棒、秒表。注意：若不能即時(shí)測出結(jié)果的，則要及時(shí)終止反應(yīng)，然后再測定。酶活力測定的基本步驟：（優(yōu)選）枯草桿菌搖瓶發(fā)酵生產(chǎn)淀粉酶v=-dS/dt=dP/dt按產(chǎn)品的適用溫度分為:中溫a一淀粉酶活力：2、測定反應(yīng)液中底物或產(chǎn)物的變化量。液體為2000u/ml1，中溫α-淀粉酶分為固體和液體兩種劑型。磷酸緩沖液(pH=6.按產(chǎn)品的適用溫度分為:2，酶活力定義：1ml酶液(1g酶粉)在60℃，pH6.對(duì)同一種酶，比活力可以代表酶的純度，比活力愈高，表示酶愈純。熱穩(wěn)定性：需Ca2+150ppm，最適作用溫度60-70℃，在70-90℃之間，隨著溫度升高，其反應(yīng)速度加快，但失活也加快，適用于最高達(dá)90℃的液化過程。外觀：棕褐色液體按產(chǎn)品的適用溫度分為:酶的反應(yīng)速度的影響因素酶的反應(yīng)速度受到許多條件的影響：底物濃度、溫度、pH、金屬離子等要準(zhǔn)確地測定酶的活力，必須滿足這些前提條件。最適反應(yīng)條件：最適底物濃度、最適pH、最適溫度、最適離子強(qiáng)度、必要的輔助因子；保證測定的是V0，即線性部分4)初篩：選出產(chǎn)酶菌種，以多為主。酶的反應(yīng)速度的影響因素酶的61酶活力單位國際單位：1961年國際生物化學(xué)與分子生物學(xué)聯(lián)合會(huì)規(guī)定：在特定條件下，每1min催化1μmol的底物轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物的酶量定義為1個(gè)酶活力單位。這個(gè)單位稱為國際單位（IU）國際上另一個(gè)常用的酶活力單位是卡特（Kat）。在特定條件下，每秒催化1mol底物轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物的酶量定義為1卡特（Kat）。酶活力單位國際單位：62酶的比活力酶的比活力是酶純度的一個(gè)指標(biāo)，是指在特定條件下，單位重量（mg）蛋白質(zhì)或RNA所具有的酶活力單位數(shù)。酶活力：樣品中酶總共有多少個(gè)酶單位。比活力：每mg蛋白質(zhì)中有多少個(gè)酶單位。酶比活力＝酶活力（單位）/mg（蛋白或RNA）可用以比較每單位質(zhì)量酶蛋白的催化能力。對(duì)同一種酶，比活力可以代表酶的純度，比活力愈高，表示酶愈純。在酶純化過程中，比活力增高。酶的比活力酶的比活力是酶純度的一個(gè)指標(biāo)，是指在特定條件下，單63淀粉水解酶類凡是能催化淀粉（或糖元）分子及其分子片段中的α-葡萄糖苷鍵水解的酶，統(tǒng)稱為淀粉酶，包括α-淀粉酶，糖化酶，β-淀粉酶，異淀粉酶，環(huán)狀糊精生成酶，麥芽寡糖生成酶等。廣泛應(yīng)用于淀粉糖工業(yè)、酒精、啤酒、味精、釀造、烘焙、飼料、紡織退漿、醫(yī)藥等領(lǐng)域。淀粉水解酶類凡是能催化淀粉（或糖元）分子及其分子片段中的α-64α-淀粉酶alpha-amylase

能水解淀粉分子鏈中的α-1,4-葡萄糖苷鍵，將淀粉鏈切斷成為短鏈糊精和少量麥芽糖和葡萄糖，使淀粉粘度迅速下降的酶制劑。產(chǎn)品分類按產(chǎn)品的適用溫度分為:

中溫α-淀粉酶制劑和耐高溫α-

淀粉酶制劑。按產(chǎn)品形態(tài)分為：液體劑型酶制劑和固體劑型酶制劑。α-淀粉酶alpha-amylase65枯草桿菌搖瓶發(fā)酵生產(chǎn)淀粉酶課件66中溫α-淀粉酶中溫α-液化型淀粉酶系用枯草芽孢桿菌（BacillusSubtilis)經(jīng)發(fā)酵提煉精制而成。用途：本產(chǎn)品適用于酒精、啤酒、味精、發(fā)酵工業(yè)的液化以及紡織退漿等。產(chǎn)品特性：[物理特性]

外觀：棕褐色液體溶解性：易溶于水比重：1.15-1.25g/ml中溫α-淀粉酶中溫α-液化型淀粉酶系用枯草芽孢桿菌（Ba67[化學(xué)物性]

熱穩(wěn)定性：需Ca2+150ppm，最適作用溫度60-70℃，在70-90℃之間，隨著溫度升高，其反應(yīng)速度加快，但失活也加快，適用于最高達(dá)90℃的液化過程。

pH6.0-7.0較為穩(wěn)定；最適作用pH6.0，pH5.0以下失活嚴(yán)重。產(chǎn)品規(guī)格：1，中溫α-淀粉酶分為固體和液體兩種劑型。固體分為2000、4000u/g,6000u/g三種。液體為2000u/ml2，酶活力定義：1ml酶液(1g酶粉)在60℃，pH6.0條件下，1小時(shí)液化可溶性淀粉的克數(shù)。[化學(xué)物性]68耐高溫α-淀粉酶耐高溫α-淀粉酶采用地衣芽孢桿菌經(jīng)深層培養(yǎng)，提取等工序精制而成，能隨機(jī)水解淀粉、糖原及其降解物內(nèi)部的α-1，4葡萄糖苷健使得膠狀淀粉溶液的粘度迅速下降，產(chǎn)生可溶性糊精和寡聚糖，過度的水解可產(chǎn)生少量葡萄糖和麥芽糖。用途：耐高溫α-淀粉酶具有極好的耐熱性，能廣泛應(yīng)用于淀粉、酒精、啤酒、味精、釀造、紡織退漿等工業(yè)上。產(chǎn)品特性:(物理特性)

外觀：棕褐色液體溶解性：易溶于水比重：1.15-1.25g/ml耐高溫α-淀粉酶耐高溫α-淀粉酶采用地衣芽孢桿菌經(jīng)深層培69[化學(xué)物性]鈣離子對(duì)酶活穩(wěn)定性的影響：較低濃度的鈣離子存在，本品即可有很好的穩(wěn)定性，對(duì)于淀粉的水解，推薦加入50-100ppm鈣離子。pH范圍：5.5-7.0最適6.0溫度范圍：90-95℃在噴射液化工藝中瞬間溫度達(dá)105-110℃，仍能有效水解淀粉。產(chǎn)品規(guī)格：

1，耐高溫α-淀粉酶為液體酶制劑。酶活力：20000u/ml。

2，酶活力定義：1ml酶液在70℃，pH6.0條件下，1分鐘液化可溶性淀粉的毫克數(shù)。[化學(xué)物性]700條件下，1分鐘液化可溶性淀粉的毫克數(shù)。5mL稀釋好的待測酶液，立即計(jì)時(shí)，搖勻，準(zhǔn)確反應(yīng)5min；比活力：每mg蛋白質(zhì)中有多少個(gè)酶單位。其中化學(xué)滴定、紫外、可見光比色法最為常用。0mL反應(yīng)液，加到預(yù)先盛有0.酶的提取與分離純化的工藝流程最適反應(yīng)條件：最適底物濃度、最適pH、最適溫度、最適離子強(qiáng)度、必要的輔助因子；1，求得測試酶液的濃度。其中化學(xué)滴定、紫外、可見光比色法最為常用。鹽酸溶液：c(HCI)=0.2，酶活力定義：1ml酶液(1g酶粉)在60℃，pH6.國際上另一個(gè)常用的酶活力單位是卡特（Kat）。其中化學(xué)滴定、紫外、可見光比色法最為常用。注意：若不能即時(shí)測出結(jié)果的，則要及時(shí)終止反應(yīng)，然后再測定?；瘜W(xué)測定法、光學(xué)測定法、氣體測定法等。碘、碘化鉀、α-淀粉酶制劑、磷酸氫二鈉、檸檬酸、鹽酸、可溶性淀粉（湖州展望化學(xué)藥業(yè)有限公司）。酶活力：20000u/ml。4)初篩：選出產(chǎn)酶菌種，以多為主。連續(xù)反應(yīng)法：基于反應(yīng)過程中光譜吸收、酸堿度等變化用儀器跟蹤反應(yīng)的進(jìn)程、記錄結(jié)果。23g磷酸氫二鈉(Na2HPO4·12H2O)和8.擴(kuò)大培養(yǎng)多采用搖瓶培養(yǎng)，即在錐形瓶中加入一定量的液體培養(yǎng)基，在搖床上以一定轉(zhuǎn)速搖動(dòng)進(jìn)行恒溫培養(yǎng)。根據(jù)底物或產(chǎn)物的物理化學(xué)性質(zhì)按產(chǎn)品的適用溫度分為:按產(chǎn)品的適用溫度分為:3)分離獲得純培養(yǎng)(pureculture)的微生物。1、菌種：枯草桿菌（已活化好，每組1支）碘、碘化鉀、α-淀粉酶制劑、磷酸氫二鈉、檸檬酸、鹽酸、可溶性淀粉（湖州展望化學(xué)藥業(yè)有限公司）。液體劑型酶制劑和固體劑型酶制劑。2，酶活力定義：1ml酶液(1g酶粉)在60℃，pH6.α-淀粉酶制劑的衛(wèi)生要求1961年國際生物化學(xué)與分子生物學(xué)聯(lián)合會(huì)規(guī)定：在特定條件下，每1min催化1μmol的底物轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物的酶量定義為1個(gè)酶活力單位。1g固體酶粉(或1mL液體酶)，于70℃、pH=6.用途：耐高溫α-淀粉酶具有極好的耐熱性，能廣泛應(yīng)用于淀粉、酒精、啤酒、味精、釀造、紡織退漿等工業(yè)上。在酶純化過程中，比活力增高。固體分為2000、4000u/g,6000u/g三種。最適反應(yīng)條件：最適底物濃度、最適pH、最適溫度、最適離子強(qiáng)度、必要的輔助因子；在噴射液化工藝中瞬間溫度達(dá)105-110℃，仍能有效水解淀粉。5mL鹽酸溶液和5.也稱酶活性，酶催化一定化學(xué)反應(yīng)的能力。注意：若不能即時(shí)測出結(jié)果的，則要及時(shí)終止反應(yīng)，然后再測定。廣泛應(yīng)用于淀粉糖工業(yè)、酒精、啤酒、味精、釀造、烘焙、飼料、紡織退漿、醫(yī)藥等領(lǐng)域?？捎靡员容^每單位質(zhì)量酶蛋白的催化能力。α-淀粉酶制劑的理化要求0條件下，1分鐘液化可溶性淀粉的毫克數(shù)。根據(jù)底物或產(chǎn)物的物理71α-淀粉酶制劑的衛(wèi)生要求α-淀粉酶制劑的衛(wèi)生要求72三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容微生物發(fā)酵法是酶制劑生產(chǎn)的主要方法。發(fā)酵生產(chǎn)中多用液體深層發(fā)酵法制備酶。大規(guī)模液體深層發(fā)酵之前，首先在實(shí)驗(yàn)室對(duì)保藏的目的菌種進(jìn)行活化和擴(kuò)大培養(yǎng)，制得生產(chǎn)種子。擴(kuò)大培養(yǎng)多采用搖瓶培養(yǎng)，即在錐形瓶中加入一定量的液體培養(yǎng)基，在搖床上以一定轉(zhuǎn)速搖動(dòng)進(jìn)行恒溫培養(yǎng)。搖瓶培養(yǎng)也是實(shí)驗(yàn)室模擬生產(chǎn)上進(jìn)行發(fā)酵產(chǎn)酶的一種模擬實(shí)驗(yàn)。（搖瓶發(fā)酵生產(chǎn)α-淀粉酶）發(fā)酵液酶活力的測定。三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容微生物發(fā)酵法是酶制劑生產(chǎn)的主要方法。發(fā)酵生產(chǎn)中多73（一）搖瓶發(fā)酵產(chǎn)酶儀器和試劑1、菌種：枯草芽孢桿菌2、儀器耗材：恒溫培養(yǎng)箱、冰箱、高壓滅菌鍋、無菌操作臺(tái)、搖床、托盤天平、分析天平、電爐、白色搪瓷杯、三角瓶、量筒、紗布、繩子、pH試紙、玻棒等。（一）搖瓶發(fā)酵產(chǎn)酶儀器和試劑74實(shí)驗(yàn)步驟1、菌種：枯草桿菌（已活化好，每組1支）2、培養(yǎng)基的準(zhǔn)備：查資料，自行設(shè)計(jì)3、工藝條件：查資料，自行設(shè)計(jì)4、菌種的制備：將斜面菌種在無菌條件下接種至液體種子培養(yǎng)基中，在一定溫度、轉(zhuǎn)速下培養(yǎng)。5、發(fā)酵：將搖床培養(yǎng)好的種子培養(yǎng)液接入發(fā)酵培養(yǎng)基中，接種量為5mL，共接3瓶（100ml/250ml瓶），做好標(biāo)記。實(shí)驗(yàn)步驟1、菌種：枯草桿菌（已活化好，每組1支）75實(shí)驗(yàn)步驟發(fā)酵結(jié)束后：檢查是否染菌固液分離：方法自定；

發(fā)酵結(jié)束時(shí)，顯微鏡檢查每個(gè)發(fā)酵瓶是否污染，若無污染合并發(fā)酵液并測定發(fā)酵酶活力。實(shí)驗(yàn)步驟發(fā)酵結(jié)束后：檢查是否染菌76（二）酶活測定原理：α-淀粉酶制劑能將淀粉分子鏈中的α-1,4-葡萄糖苷鍵隨機(jī)切斷成長短不一的短鏈糊精、少量麥芽糖和葡萄糖，而使淀粉對(duì)碘呈籃紫色的特性反應(yīng)逐漸消失，呈現(xiàn)棕紅色，其顏色消失的速度與酶活性有關(guān)，據(jù)此可通過反應(yīng)后的吸光度計(jì)算酶活力。（二）酶活測定原理：α-淀粉酶制劑能將淀粉分子鏈中的α-177酶活定義

中溫a一淀粉酶活力：

1g固體酶粉(或1mL液體酶)，于60℃、pH=6.0條件下，1h液化1g可溶性淀粉所需的酶量，即為1個(gè)酶活力單位，以u(píng)/g(u/mL)表示。耐高溫a-淀粉酶活力：

1g固體酶粉(或1mL液體酶)，于70℃、pH=6.0條件下，1min液化1mg可溶性淀粉所需的酶量，即為1個(gè)酶活力單位，以u(píng)/g(u/mL)表示。酶活定義中溫a一淀粉酶活力：78實(shí)驗(yàn)儀器及試劑儀器：分光光度計(jì)、恒溫水浴鍋（控溫精度±0.1℃）、移液管、試管、燒杯、容量瓶、玻璃棒、秒表。實(shí)驗(yàn)儀器及試劑儀器：79試劑及溶液試劑：碘、碘化鉀、α-淀粉酶制劑、磷酸氫二鈉、檸檬酸、鹽酸、可溶性淀粉（湖州展望化學(xué)藥業(yè)有限公司）。溶液配制：原碘液：稱取11.0g碘和22.0g碘化鉀，用少量水使碘完全溶解，定容至500mL，貯存于棕色瓶中。稀碘液：吸取原碘液2.00mL，加20.0g碘化鉀用水溶解并定容至500mL，貯存于棕色瓶中。試劑及溶液試劑：80試劑及溶液溶液配制：可溶性淀粉溶液(20g/L)：稱取2.000g(精確至0.001g)可溶性淀粉(以絕干計(jì))于燒杯中，用少量水調(diào)成漿狀物，邊攪拌邊緩緩加入70mL沸水中，然后用水分次沖洗裝淀粉的燒杯，洗液倒人其中，攪拌加熱至完全透明，冷卻定容至100mL。溶液現(xiàn)配現(xiàn)用。磷酸緩沖液(pH=6.0)：稱取45.23g磷酸氫二鈉(Na2HPO4·12H2O)和8.07g檸檬酸(C6H8O7·H2O)，用水溶解并定容至1000mL。用pH計(jì)校正后使用。鹽酸溶液：c(HCI)=0.1mol/L。試劑及溶液溶液配制：81實(shí)驗(yàn)方法待測酶液的制備：稱取1g~2g酶粉(精確至0.0001g)或準(zhǔn)確吸取酶液1.00mL，用少量磷酸緩沖液充分溶解，將上清液小心傾入容量瓶中，若有剩余殘?jiān)?，再加少量磷酸緩沖液充分研磨，最終樣品全部移入容量瓶中，用磷酸緩沖液定容至刻度，搖勻。用四層紗布過濾，濾液待用。注:待測中溫a-淀粉酶酶液酶活力控制酶濃度在3.4u/mL~4.5u/mL范圍內(nèi)，待測耐高溫淀