胎盤干細胞課件

胎盤干細胞臍帶組1胎盤干細胞臍帶組1主要內(nèi)容胎盤構(gòu)造胎盤干細胞概述胎盤干細胞的優(yōu)缺點胎盤干細胞的種類：胎盤造血干細胞胎盤亞全能干細胞胎盤間充質(zhì)干細胞2主要內(nèi)容胎盤構(gòu)造2胎盤概述胎盤（placenta）是母體與胎兒間進行物質(zhì)交換的器官，是胚胎與母體組織的結(jié)合體。由羊膜（amnioticmembrane）、葉狀絨毛膜（chorionfrondosum）和底蛻膜構(gòu)成。胎盤組織由滋養(yǎng)細胞、間充質(zhì)干細胞和血管共同組成，為免疫“豁免”的組織。胎盤又叫胞衣、衣胞、紫河車、胎衣、胎膜。3胎盤概述胎盤（placenta）是母體與胎兒間進行物質(zhì)交換4455胎盤干細胞概念胎盤干細胞是來源于新生兒胎盤組織的一族亞全能干細胞。特點使用不需配型數(shù)量豐富分化能力強沒有倫理學問題6胎盤干細胞概念6胎盤干細胞的種類目前已知證明的胎盤干細胞包括：造血干細胞間充質(zhì)干細胞亞全能干細胞血管干細胞皮膚干細胞神經(jīng)干細胞等7胎盤干細胞的種類目前已知證明的胎盤干細胞包括：7胎盤造血干細胞概述胎盤是一個造血組織，從胚胎形成后3周開始造血。胎盤組織中存在大量造血干細胞。公認的人造血干細胞的表面標記有CD34+、CD38-Lin-、CD45RA-、c-kit+、CD71-以及近年來新發(fā)現(xiàn)的CD43。胎盤造血干細胞表達許多與胎肝和骨髓來源造血干細胞相同的標記。CD133是較CD34更為原始的造血干/祖細胞表面標志，其膜抗原可作為胎盤造血干/祖細胞的分選標志。

8胎盤造血干細胞概述8胎盤造血干細胞的制備1、灌注法AMD3100灌注法

AMD3100是基質(zhì)細胞衍生因子（SDF-1）受體CXCR4的拮抗劑，能有效與CXCR4結(jié)合，阻斷SDF-1與CXCR4的結(jié)合；能快速動員造血干細胞/祖細胞。酶消化液灌注法2、酶消化法

主要應(yīng)用中性蛋白酶、胰蛋白酶及膠原酶進行組織塊消化

9胎盤造血干細胞的制備1、灌注法9胎盤造血干細胞的制備酶消化液灌注法：對新鮮娩出胎盤立即進行預(yù)處理，然后分離出臍動脈和臍靜脈；用清洗液灌注胎盤絨毛血管，收集灌注后的清洗液；用酶消化液灌注胎盤絨毛血管，置37℃溫度下消化5～20min；用收集液灌注胎盤，收集灌注后的液體；將得到的液體離心，棄上清后重懸細胞；重懸的細胞懸液經(jīng)羥乙基淀粉和淋巴細胞分離液兩步法分離，得到臨床應(yīng)用級胎盤造血干細胞。10胎盤造血干細胞的制備酶消化液灌注法：10胎盤造血干細胞的應(yīng)用前景運用流式細胞計數(shù)技術(shù)檢測臍血、胎盤血、胎盤中造血干細胞（CD34+CD38-細胞）以及造血祖細胞（CD34+CD38+細胞）的含量11胎盤造血干細胞的應(yīng)用前景運用流式細胞計數(shù)技術(shù)檢測臍血、胎盤血人足月胎盤可以提供大量的CD34陽性、CD133陽性細胞以及其他原始的造血祖先細胞，適合人類移植。由胎盤取得的造血干細胞或培養(yǎng)出的群落形成單元的總數(shù)量可以是同一來源臍帶血可得造血干細胞的10倍。臍帶血分離的干細胞數(shù)量少會限制它使用的有效性，只能用在一個幼兒或少年患者的移植胎盤可以提供自體干細胞足夠的數(shù)量重建成年人的造血系統(tǒng)。12人足月胎盤可以提供大量的CD34陽性、CD133陽性細胞胎盤來源的CD34+CD38+、CD34+CD38-兩個造血干/祖細胞亞群均具有增殖分化為粒細胞-單核細胞集落生成單位、紅細胞爆裂型集落生成單位、混合集落生成單位的能力。人胎盤組織具有淋巴細胞亞群低比例和抑制性T細胞高比例的特性。

13胎盤來源的CD34+CD38+、CD34+CD38-兩個造1414胎盤亞全能干細胞概述胎盤亞全能干細胞是來源于新生兒胎盤組織的一族胚胎后亞全能干細胞（Post-embryonipluripotentstemcells）。在發(fā)育階段與胚胎干細胞接近，具備分化形成三個胚層的組織細胞的能力。與胚胎干細胞的不同之處是不會形成畸胎瘤，這一特性使亞全能干細胞可以直接用于體內(nèi)而不必擔心在體內(nèi)產(chǎn)生畸胎瘤。15胎盤亞全能干細胞概述15胚胎發(fā)育成熟后逐漸失去部分原始干細胞表型，但在胚胎發(fā)育為成體后仍具有亞全能基因組，其中組織特異性基因在適當?shù)奈h(huán)境下可以被激活，因各自所處的微環(huán)境不同而向不同的組織分化，能夠全方位地選擇分化為各種組織細胞。亞全能干細胞作為胚胎干細胞的后代，可與其他各個成熟階段的干細胞和祖細胞共存于組織中胎盤亞全能干細胞16胚胎發(fā)育成熟后逐漸失去部分原始干細胞表型，但在胚胎發(fā)育為成體優(yōu)勢：原始性強，分化潛能強，可分化多種類型細胞數(shù)量豐富，可體外擴增，傳代擴增30多代后仍具有干細胞特性免疫原性低，異體使用不需配型，不會產(chǎn)生免疫排斥反應(yīng)無致瘤性及倫理學問題胎盤亞全能干細胞17優(yōu)勢：胎盤亞全能干細胞17分化能力：在適宜的體內(nèi)或體外環(huán)境下具有分化為間充質(zhì)干細胞、上皮干細胞、神經(jīng)干細胞、肝干細胞，肌細胞、成骨細胞、軟骨細胞、基質(zhì)細胞等多種細胞的能力?？梢杂脕硇迯褪軗p或病變的組織器官，治療心、腦血管疾病、神經(jīng)系統(tǒng)疾病、肝臟疾病、骨組織病、角膜損傷、燒傷燙傷、肌病等多種疾病。胎盤亞全能干細胞18分化能力：胎盤亞全能干細胞18表面標志亞全能干細胞的鑒別標志有所不同房佰俊等采用Flk1+CD31-CD34-組合細胞表面標志來鑒別亞全能干細胞北京漢氏聯(lián)合用CD184-CD151+/OCT4+組合鑒定胎盤亞全能干細胞19表面標志胎盤亞全能干細胞19胎盤亞全能干細胞的制備將胎盤組織破碎，蛋白酶降解、過篩，分離得到原代單個核細胞，使用常規(guī)的磁式細胞分選法，以CD184-CD151+/OCT4+為細胞表面組合標志來分選，從采集的單個核細胞中分選出目的細胞。磁式細胞分選法：利用結(jié)合磁性微粒的單克隆抗體標記細胞,在外加磁場的作用下，將樣品中與不帶磁的細胞分開,達到分離純化目的的方法。20胎盤亞全能干細胞的制備將胎盤組織破碎，蛋白酶降解、過篩，分離胎盤亞全能干細胞應(yīng)用前景胎盤作為理想的亞全能干細胞來源，在抗衰老及疾病治療領(lǐng)域顯示了其獨特的功能，治療疾病種類如下：心腦血管系統(tǒng)疾病糖尿病肝腎損傷腦及脊髓神經(jīng)損傷自身免疫性疾病

移植物抗宿主病與造血干細胞共移植治療血液病肺及其它組織器官纖維化

21胎盤亞全能干細胞應(yīng)用前景胎盤作為理想的亞全能干細胞來源，在抗胎盤間充質(zhì)干細胞概述胎盤間充質(zhì)干細胞（mesenchymalstemcell，MSC）是一種多能干細胞，在胚胎發(fā)育中來源于中胚層。胎盤的各個部位，羊膜、絨毛膜、以及底蛻膜均含有間充質(zhì)干細胞。22胎盤間充質(zhì)干細胞概述22生物學特性1.外觀貼壁生長、具有成纖維細胞的形態(tài)2.免疫表型具有典型的MSC表型，表達CD166、CD105、CD90、CD73、CD44、CD29、CD13、MHCⅠ；不表達CD14、CD19、CD40、CD45、CD80、CD83、CD86、CD117、CD34、MHCⅡ表達一個特異性的表面分子標記frizzled9(FZD9、CD349）23生物學特性233、增殖能力圍產(chǎn)期來源的胎兒間充質(zhì)干細胞具有比成體來源的間充質(zhì)干細胞更強的增殖能力。胎盤間充質(zhì)干細胞的增殖受多種生長因子的影響，在合適的的生長因子條件下可迅速增殖。炎癥因子也可以調(diào)節(jié)胎盤MSC的增殖，低濃度的炎癥因子如IL-1、IL-6、IL-8刺激胎盤MSC的增殖，抗炎因子IL-4、肝生長因子（HGF）抑制胎盤的增殖。243、增殖能力244、遷移能力不同來源的間充質(zhì)干細胞的遷移能力不一樣。骨髓和胎盤來源的MSC相對于臍帶MSC具有更強的遷移能力。5、分化能力：在適宜的體內(nèi)或體外環(huán)境下具有分化為：上皮干細胞、神經(jīng)干細胞、肝干細胞，肌細胞、成骨細胞、軟骨細胞、基質(zhì)細胞等多種細胞。254、遷移能力256、可溶性因子分泌和對其他細胞的營養(yǎng)作用胎盤MSC可分泌大量可溶性因子，包括趨化因子、生長因子和免疫相關(guān)的因子，這些因子對于維持體內(nèi)微環(huán)境至關(guān)重要，并且與MSC參與的損傷修復、免疫調(diào)節(jié)、造血支持密切相關(guān)。分泌的因子對個體原來存在的干細胞有營養(yǎng)作用，促進自身干細胞的增殖和分化。266、可溶性因子分泌和對其他細胞的營養(yǎng)作用267、免疫調(diào)節(jié)能力MSC抑制異源T細胞增殖抑制細胞或者絲裂原誘導的正常人外周血和臍血單個核細胞或T淋巴細胞的增殖，提示胎盤MSC可以降低GVHD277、免疫調(diào)節(jié)能力27骨髓、臍帶、胎盤、脂肪來源的MSC在增殖、分化、造血支持、免疫調(diào)節(jié)等方面的差異比較28骨髓、臍帶、胎盤、脂肪來源的MSC在增殖、分化、造血支持、免優(yōu)勢：1）具有低免疫原性以及免疫抑制作用，這就使得治療用的MSC不僅可以來源于自體，也可以來源于異體；2）具有強大的免疫調(diào)節(jié)作用，使得移植的MSC在修復受損組織的同時，還可以調(diào)節(jié)患者的免疫狀態(tài)；3）具有向特定細胞定向分化的特性，避免了胚胎干細胞等全能干細胞致瘤性風險；4）來源非常廣泛，骨髓、胎盤臍帶為富含MSC的部位，此外在脂肪、臍帶血以及其他成體組織器官中也能分離到MSC。29優(yōu)勢：29胎盤間充質(zhì)干細胞的制備胎盤MSC的分離1、酶消化法膠原酶Ⅳ+羥乙基淀粉沉淀組膠原酶Ⅱ+羥乙基淀粉沉淀組膠原酶Ⅱ+淋巴細胞分層液分離組膠原酶Ⅱ+氯化銨裂解紅細胞組膠原酶+胰酶膠原酶Ⅳ+DispaseⅡ2、組織塊培養(yǎng)法(原代培養(yǎng)時間長）30胎盤間充質(zhì)干細胞的制備胎盤MSC的分離30應(yīng)用前景1、在造血干細胞移植中的應(yīng)用造血干細胞和MSC共移植可以促進造血干細胞重新建造血微環(huán)境。胎盤來源的MSC具有免疫調(diào)節(jié)作用，并且由于其處在母嬰耐受交界面，在免疫調(diào)節(jié)上具有一些其他來源MSC不同的性質(zhì)，因此在治療GVHD時可能會具有獨特的優(yōu)勢。31應(yīng)用前景1、在造血干細胞移植中的應(yīng)用312、治療自身免疫性疾病3、治療組織損傷

肝臟疾病，如病毒性肝炎、酒精肝、脂肪肝引起的肝纖維化。神經(jīng)系統(tǒng)疾病，如帕金森癥。322、治療自身免疫性疾病32胎盤干細胞臍帶組33胎盤干細胞臍帶組1主要內(nèi)容胎盤構(gòu)造胎盤干細胞概述胎盤干細胞的優(yōu)缺點胎盤干細胞的種類：胎盤造血干細胞胎盤亞全能干細胞胎盤間充質(zhì)干細胞34主要內(nèi)容胎盤構(gòu)造2胎盤概述胎盤（placenta）是母體與胎兒間進行物質(zhì)交換的器官，是胚胎與母體組織的結(jié)合體。由羊膜（amnioticmembrane）、葉狀絨毛膜（chorionfrondosum）和底蛻膜構(gòu)成。胎盤組織由滋養(yǎng)細胞、間充質(zhì)干細胞和血管共同組成，為免疫“豁免”的組織。胎盤又叫胞衣、衣胞、紫河車、胎衣、胎膜。35胎盤概述胎盤（placenta）是母體與胎兒間進行物質(zhì)交換364375胎盤干細胞概念胎盤干細胞是來源于新生兒胎盤組織的一族亞全能干細胞。特點使用不需配型數(shù)量豐富分化能力強沒有倫理學問題38胎盤干細胞概念6胎盤干細胞的種類目前已知證明的胎盤干細胞包括：造血干細胞間充質(zhì)干細胞亞全能干細胞血管干細胞皮膚干細胞神經(jīng)干細胞等39胎盤干細胞的種類目前已知證明的胎盤干細胞包括：7胎盤造血干細胞概述胎盤是一個造血組織，從胚胎形成后3周開始造血。胎盤組織中存在大量造血干細胞。公認的人造血干細胞的表面標記有CD34+、CD38-Lin-、CD45RA-、c-kit+、CD71-以及近年來新發(fā)現(xiàn)的CD43。胎盤造血干細胞表達許多與胎肝和骨髓來源造血干細胞相同的標記。CD133是較CD34更為原始的造血干/祖細胞表面標志，其膜抗原可作為胎盤造血干/祖細胞的分選標志。

40胎盤造血干細胞概述8胎盤造血干細胞的制備1、灌注法AMD3100灌注法

AMD3100是基質(zhì)細胞衍生因子（SDF-1）受體CXCR4的拮抗劑，能有效與CXCR4結(jié)合，阻斷SDF-1與CXCR4的結(jié)合；能快速動員造血干細胞/祖細胞。酶消化液灌注法2、酶消化法

主要應(yīng)用中性蛋白酶、胰蛋白酶及膠原酶進行組織塊消化

41胎盤造血干細胞的制備1、灌注法9胎盤造血干細胞的制備酶消化液灌注法：對新鮮娩出胎盤立即進行預(yù)處理，然后分離出臍動脈和臍靜脈；用清洗液灌注胎盤絨毛血管，收集灌注后的清洗液；用酶消化液灌注胎盤絨毛血管，置37℃溫度下消化5～20min；用收集液灌注胎盤，收集灌注后的液體；將得到的液體離心，棄上清后重懸細胞；重懸的細胞懸液經(jīng)羥乙基淀粉和淋巴細胞分離液兩步法分離，得到臨床應(yīng)用級胎盤造血干細胞。42胎盤造血干細胞的制備酶消化液灌注法：10胎盤造血干細胞的應(yīng)用前景運用流式細胞計數(shù)技術(shù)檢測臍血、胎盤血、胎盤中造血干細胞（CD34+CD38-細胞）以及造血祖細胞（CD34+CD38+細胞）的含量43胎盤造血干細胞的應(yīng)用前景運用流式細胞計數(shù)技術(shù)檢測臍血、胎盤血人足月胎盤可以提供大量的CD34陽性、CD133陽性細胞以及其他原始的造血祖先細胞，適合人類移植。由胎盤取得的造血干細胞或培養(yǎng)出的群落形成單元的總數(shù)量可以是同一來源臍帶血可得造血干細胞的10倍。臍帶血分離的干細胞數(shù)量少會限制它使用的有效性，只能用在一個幼兒或少年患者的移植胎盤可以提供自體干細胞足夠的數(shù)量重建成年人的造血系統(tǒng)。44人足月胎盤可以提供大量的CD34陽性、CD133陽性細胞胎盤來源的CD34+CD38+、CD34+CD38-兩個造血干/祖細胞亞群均具有增殖分化為粒細胞-單核細胞集落生成單位、紅細胞爆裂型集落生成單位、混合集落生成單位的能力。人胎盤組織具有淋巴細胞亞群低比例和抑制性T細胞高比例的特性。

45胎盤來源的CD34+CD38+、CD34+CD38-兩個造4614胎盤亞全能干細胞概述胎盤亞全能干細胞是來源于新生兒胎盤組織的一族胚胎后亞全能干細胞（Post-embryonipluripotentstemcells）。在發(fā)育階段與胚胎干細胞接近，具備分化形成三個胚層的組織細胞的能力。與胚胎干細胞的不同之處是不會形成畸胎瘤，這一特性使亞全能干細胞可以直接用于體內(nèi)而不必擔心在體內(nèi)產(chǎn)生畸胎瘤。47胎盤亞全能干細胞概述15胚胎發(fā)育成熟后逐漸失去部分原始干細胞表型，但在胚胎發(fā)育為成體后仍具有亞全能基因組，其中組織特異性基因在適當?shù)奈h(huán)境下可以被激活，因各自所處的微環(huán)境不同而向不同的組織分化，能夠全方位地選擇分化為各種組織細胞。亞全能干細胞作為胚胎干細胞的后代，可與其他各個成熟階段的干細胞和祖細胞共存于組織中胎盤亞全能干細胞48胚胎發(fā)育成熟后逐漸失去部分原始干細胞表型，但在胚胎發(fā)育為成體優(yōu)勢：原始性強，分化潛能強，可分化多種類型細胞數(shù)量豐富，可體外擴增，傳代擴增30多代后仍具有干細胞特性免疫原性低，異體使用不需配型，不會產(chǎn)生免疫排斥反應(yīng)無致瘤性及倫理學問題胎盤亞全能干細胞49優(yōu)勢：胎盤亞全能干細胞17分化能力：在適宜的體內(nèi)或體外環(huán)境下具有分化為間充質(zhì)干細胞、上皮干細胞、神經(jīng)干細胞、肝干細胞，肌細胞、成骨細胞、軟骨細胞、基質(zhì)細胞等多種細胞的能力?？梢杂脕硇迯褪軗p或病變的組織器官，治療心、腦血管疾病、神經(jīng)系統(tǒng)疾病、肝臟疾病、骨組織病、角膜損傷、燒傷燙傷、肌病等多種疾病。胎盤亞全能干細胞50分化能力：胎盤亞全能干細胞18表面標志亞全能干細胞的鑒別標志有所不同房佰俊等采用Flk1+CD31-CD34-組合細胞表面標志來鑒別亞全能干細胞北京漢氏聯(lián)合用CD184-CD151+/OCT4+組合鑒定胎盤亞全能干細胞51表面標志胎盤亞全能干細胞19胎盤亞全能干細胞的制備將胎盤組織破碎，蛋白酶降解、過篩，分離得到原代單個核細胞，使用常規(guī)的磁式細胞分選法，以CD184-CD151+/OCT4+為細胞表面組合標志來分選，從采集的單個核細胞中分選出目的細胞。磁式細胞分選法：利用結(jié)合磁性微粒的單克隆抗體標記細胞,在外加磁場的作用下，將樣品中與不帶磁的細胞分開,達到分離純化目的的方法。52胎盤亞全能干細胞的制備將胎盤組織破碎，蛋白酶降解、過篩，分離胎盤亞全能干細胞應(yīng)用前景胎盤作為理想的亞全能干細胞來源，在抗衰老及疾病治療領(lǐng)域顯示了其獨特的功能，治療疾病種類如下：心腦血管系統(tǒng)疾病糖尿病肝腎損傷腦及脊髓神經(jīng)損傷自身免疫性疾病

移植物抗宿主病與造血干細胞共移植治療血液病肺及其它組織器官纖維化

53胎盤亞全能干細胞應(yīng)用前景胎盤作為理想的亞全能干細胞來源，在抗胎盤間充質(zhì)干細胞概述胎盤間充質(zhì)干細胞（mesenchymalstemcell，MSC）是一種多能干細胞，在胚胎發(fā)育中來源于中胚層。胎盤的各個部位，羊膜、絨毛膜、以及底蛻膜均含有間充質(zhì)干細胞。54胎盤間充質(zhì)干細胞概述22生物學特性1.外觀貼壁生長、具有成纖維細胞的形態(tài)2.免疫表型具有典型的MSC表型，表達CD166、CD105、CD90、CD73、CD44、CD29、CD13、MHCⅠ；不表達CD14、CD19、CD40、CD45、CD80、CD83、CD86、CD117、CD34、MHCⅡ表達一個特異性的表面分子標記frizzled9(FZD9、CD349）55生物學特性233、增殖能力圍產(chǎn)期來源的胎兒間充質(zhì)干細胞具有比成體來源的間充質(zhì)干細胞更強的增殖能力。胎盤間充質(zhì)干細胞的增殖受多種生長因子的影響，在合適的的生長因子條件下可迅速增殖。炎癥因子也可以調(diào)節(jié)胎盤MSC的增殖，低濃度的炎癥因子如IL-1、IL-6、IL-8刺激胎盤MSC的增殖，抗炎因子IL-4、肝生長因子（HGF）抑制胎盤的增殖。563、增殖能力244、遷移能力不同來源的間充質(zhì)干細胞的遷移能力不一樣。骨髓和胎盤來源的MSC相對于臍帶MSC具有更強的遷移能力。5、分化能力：在適宜的體內(nèi)或體外環(huán)境下具有分化為：上皮干細胞、神經(jīng)干細胞、肝干細胞，肌細胞、成骨細胞、軟骨細胞、基質(zhì)細胞等多種細胞。574、遷移能力256、可溶性因子分泌和對其他細胞的營養(yǎng)作用胎盤MSC可分泌大量可溶性因子，包括趨化因子、生長因子和免疫相