腫瘤組織庫的建立與管理課件

腫瘤組織庫的建立與管理1、合法而穩(wěn)定的權(quán)力在使用得當(dāng)時很少遇到抵抗。——塞·約翰遜2、權(quán)力會使人漸漸失去溫厚善良的美德?！?、最大限度地行使權(quán)力總是令人反感；權(quán)力不易確定之處始終存在著危險?！ぜs翰遜4、權(quán)力會奴化一切。——塔西佗5、雖然權(quán)力是一頭固執(zhí)的熊，可是金子可以拉著它的鼻子走。——莎士比腫瘤組織庫的建立與管理腫瘤組織庫的建立與管理1、合法而穩(wěn)定的權(quán)力在使用得當(dāng)時很少遇到抵抗?！ぜs翰遜2、權(quán)力會使人漸漸失去溫厚善良的美德?！?、最大限度地行使權(quán)力總是令人反感；權(quán)力不易確定之處始終存在著危險?！ぜs翰遜4、權(quán)力會奴化一切。——塔西佗5、雖然權(quán)力是一頭固執(zhí)的熊，可是金子可以拉著它的鼻子走?！勘饶[瘤組織庫的建立與管理研究目的探討分子生物學(xué)研究中腫瘤庫的建庫條件，標(biāo)本的采集、保存和質(zhì)量控制，以及腫瘤庫的信息化管理等有關(guān)問題，創(chuàng)建腫瘤組織標(biāo)本庫，保護(hù)和合理利用腫瘤的標(biāo)本資源，為臨床和科學(xué)研究人員，提供合適數(shù)量的腫瘤標(biāo)本促進(jìn)腫瘤的研究。根據(jù)新課標(biāo)要求，中學(xué)語文教學(xué)的基本任務(wù)是培養(yǎng)學(xué)生聽說讀寫的能力。這四個方面既有聯(lián)系又有區(qū)別，它們相輔相成，缺一不可。但從農(nóng)村中學(xué)的現(xiàn)狀來看，學(xué)生說話能力之低下，尤令人憂：上課時教師提問，學(xué)生站起來或低頭不語，金口難開；或細(xì)聲細(xì)語，羞若閨秀；或上言不對下語，胡謅亂編。有時教師召開學(xué)生座談會，到會者無一人主動發(fā)言，即使個別學(xué)生能勉強(qiáng)說幾句，也是詞不達(dá)意，甚至語無倫次。產(chǎn)生上述現(xiàn)象的原因，除學(xué)生本身的心理因素外，主要是平時的語文教學(xué)不注重口語訓(xùn)練。有的教師認(rèn)為升學(xué)考試重在讀寫，口語訓(xùn)練可有可無，因此在課堂設(shè)計中忽略口語訓(xùn)練，結(jié)果學(xué)生在課堂上噤若寒蟬，沒有“說”的機(jī)會，久而久之，只好習(xí)慣于耳聽筆練了。此外，加強(qiáng)口語訓(xùn)練，是教育“三個面向”的需要。對于學(xué)生來說，提高說話能力，可為將來的工作打下良好的基礎(chǔ)。因此，教師必須從培育全面發(fā)展人才的高度，有計劃地把口語訓(xùn)練貫徹到語文教學(xué)的全過程中去。如何搞好口語訓(xùn)練呢？筆者認(rèn)為應(yīng)從以下幾方面著手。一、啟發(fā)誘導(dǎo)，打消顧慮與城鎮(zhèn)的學(xué)生相比，農(nóng)村中學(xué)的學(xué)生視野較狹窄，見識不廣，少言寡語，尤其怯于在大庭廣眾中講話。教師應(yīng)該幫助學(xué)生消除害怕心理，大膽地接受口語訓(xùn)練。（1）讓學(xué)生明確聽說讀寫是語文學(xué)習(xí)的四項(xiàng)基本任務(wù)，缺一不可，而能說會寫又是這四項(xiàng)任務(wù)的集中和概括，特別強(qiáng)調(diào)口語在當(dāng)今社會活動和經(jīng)濟(jì)活動中的重要性，使學(xué)習(xí)與時代要求緊密地結(jié)合在一起，從而提高學(xué)生口語訓(xùn)練的自覺性。（2）打破“好口才是天生的”的觀念，通過畫眉練喉、鸚鵡學(xué)舌的故事，使學(xué)生懂得好口才不是天生的，而是靠后天訓(xùn)練而成的。另外還可以給學(xué)生介紹一些外交家和企業(yè)家的用語藝術(shù)以及名人會話、奇聞趣事，增強(qiáng)學(xué)生進(jìn)行口語訓(xùn)練的信心。（3）以典型引路。口語訓(xùn)練主要靠課堂教學(xué)來實(shí)施，其中以問答為常用形式。以課堂提問為例，教師可以設(shè)計難易兩類問題，讓不同水平的學(xué)生作答，而每節(jié)課的第一次體驗(yàn)，應(yīng)首先讓學(xué)優(yōu)生回答或集體回答，以打開局面，活躍氣氛，消除學(xué)困生緊張害怕的心理，為學(xué)困生示范引路，這樣易收到良好的效果。如果上課伊始，先抓住學(xué)困生發(fā)問，學(xué)困生會誤認(rèn)為教師有意懲罰，容易造成僵局，使氣氛緊張，結(jié)果往往會適得其反。（4）應(yīng)多以鼓勵為主?？谡Z訓(xùn)練與其他訓(xùn)練不同，它具有公開性、演示性等特點(diǎn)。一個人口語表達(dá)的好壞，心理因素占很大影響。因此，口語訓(xùn)練不能操之過急，要讓學(xué)生有個逐步適應(yīng)和提高的過程。比如，開始答問時學(xué)困生因膽怯而說話聲音小，其他同學(xué)難以聽清，這時教師不要嫌棄責(zé)備，因?yàn)閷W(xué)生敢說已經(jīng)是一個很大的進(jìn)步，教師應(yīng)給予肯定，可以走近他們，側(cè)耳傾聽，然后再向其他學(xué)生“轉(zhuǎn)播”，使學(xué)困生感到教師是他們的幫手，從而獲得鼓舞。有時學(xué)生回答錯了，教師千萬不要再去找一些表達(dá)較好的學(xué)生加以評論，或說一些“這么簡單的問題都說不清”之類的話，應(yīng)從肯定入手，用“如果這么說就對了”的安慰口氣給予鼓勵。有時學(xué)生回答得沒有條理，教師不妨作示范回答，這樣才有利于調(diào)動學(xué)生的積極性。二、制訂計劃，明確目標(biāo)新課標(biāo)明確指出，中學(xué)生口語訓(xùn)練的目標(biāo)是能用普通話準(zhǔn)確表達(dá)自己的想法和心情。教師應(yīng)明確，中學(xué)語文教學(xué)進(jìn)行口語訓(xùn)練既不是培養(yǎng)電臺播音員，也不是造就演說家，不應(yīng)要求學(xué)生口若懸河，夸夸其談，而只要求學(xué)生能正確、流利地用普通話表情達(dá)意而已。過高的要求是違背課標(biāo)要求且脫離實(shí)際的。口語訓(xùn)練應(yīng)根據(jù)學(xué)生的年齡特征，按照循序漸進(jìn)的規(guī)律，分階段由易到難逐步進(jìn)行。初中階段著重要求學(xué)生養(yǎng)成說普通話的習(xí)慣，訓(xùn)練學(xué)生能清楚地敘述事物，能大膽地表達(dá)意見，做到說話思路清晰、有條不紊。在口語訓(xùn)練中，應(yīng)以課內(nèi)為主，并與課外相結(jié)合。三、方法靈活，形式多樣口語訓(xùn)練不可能一蹴而就，它是一個日積月累的過程，如果方法單一，會使學(xué)生感到枯燥無味，效果不佳。因此，在訓(xùn)練中要力求做到方法靈活，形式多樣。（1）先讀后說。讀一篇文章后，讓學(xué)生進(jìn)行口語復(fù)述，或復(fù)述片段，或復(fù)述全文，或歸納中心意思，或進(jìn)行分析評論，把讀和說結(jié)合起來。（2）先看后說。先組織學(xué)生到校外參觀，回校后暢談所見所聞所感；或組織學(xué)生觀看影視作品，然后發(fā)言，或介紹故事情節(jié)，或褒貶人物，把看和說結(jié)合起來。（3）做后再說。比如學(xué)生做完一次實(shí)驗(yàn)，可介紹實(shí)驗(yàn)過程，分析結(jié)果，說明條件和原因；或通過課外制作活動，介紹作品的制作步驟，說明原理功能，把做和說結(jié)合起來。（4）寫前先說。在寫作前，先口頭作文，說提要，談構(gòu)思，介紹材料的處理安排，然后撰寫成文，把寫和說結(jié)合起來?？谡Z訓(xùn)練所花時間較多，為了不影響教學(xué)進(jìn)度，教師應(yīng)充分利用作文訓(xùn)練，把課內(nèi)練和課外練結(jié)合起來。每學(xué)期有計劃地舉行一些口語訓(xùn)練活動，如舉辦故事會、辯論會、演講比賽、會話游戲等，增加訓(xùn)練的知識性和趣味性。只要教師善于引導(dǎo)，勤于訓(xùn)練，持之以恒，學(xué)生的口頭表達(dá)能力一定會有質(zhì)的改變。（責(zé)編周翠如）G633.41目前高中英語教學(xué)過于關(guān)注學(xué)生的成績，英語教學(xué)只是單純的追求學(xué)生的考試成績，只要學(xué)生考試成績好，那么其他的問題都可以忽略。這樣的教學(xué)思想使得現(xiàn)代高中英語教學(xué)越來越不能夠滿足現(xiàn)代教育的要求。并且，現(xiàn)代高中英語教學(xué)中教師對學(xué)生管的太死板，過分約束了學(xué)生，剝奪了學(xué)生的學(xué)習(xí)自由。這些問題的存在會使得高中英語教學(xué)的質(zhì)量大打折扣。新課程改革對高中英語教學(xué)提出了越來越高的要求，教師必須要解決好目前存在的問題，結(jié)合學(xué)生的實(shí)際情況，找到促進(jìn)教學(xué)質(zhì)量提升的科學(xué)的辦法。一、目前高中英語教學(xué)存在的一些不足1.課堂教學(xué)太過死板僵硬目前大部分高中英語課堂教學(xué)都顯得太多死板和僵硬。在課堂教學(xué)的過程中教師都將教學(xué)重點(diǎn)放在了如何提升學(xué)生的答題能力方面。教學(xué)的目的就是讓學(xué)生學(xué)會怎樣在考試的時候獲得令人滿意的成績。所以在實(shí)際教學(xué)過程中，教師會直接交給學(xué)生解決問題的辦法，并且強(qiáng)制性的要求學(xué)生必須要將解題方法背下來。在遇到不明白的問題的時候，學(xué)生會想到問老師。而這個時候教師往往會直接告訴學(xué)生問題的答案，并沒有在揭示答案前進(jìn)行必要的鋪墊，這樣的教學(xué)方法最終導(dǎo)致雖然學(xué)生會做了這一道題目，但是當(dāng)學(xué)生遇到類似的或者稍微變化了一點(diǎn)的題目的時候，學(xué)生往往會手足無措。并且，通過調(diào)查目前高中英語課堂教學(xué)的實(shí)際情況我們可以發(fā)現(xiàn)，高中課堂顯得十分的死板。在課程進(jìn)行的過程中，我們基本只能夠看到教師在進(jìn)行內(nèi)容的講解，但是有一個很明顯的特征，那就是課程進(jìn)行的過程中基本只能夠看到教師在進(jìn)行講解，但是看不到學(xué)生提問和思考。這表明教師對課堂管理的太死板，沒有彈性。2.評價體系不健全目前高中英語教學(xué)中評價體系還不是很健全。學(xué)生的學(xué)習(xí)成績主要由學(xué)生的考試成績來決定，教師在評價學(xué)生的時候也只是單純的考慮學(xué)生的考試情況。這樣的評價方式會對學(xué)生的學(xué)習(xí)產(chǎn)生巨大的影?。單純以成績來考核學(xué)生會讓部分學(xué)習(xí)能力比較差的學(xué)生喪失學(xué)習(xí)的信心，甚至產(chǎn)生厭學(xué)的情緒。要知道學(xué)生的學(xué)習(xí)能力是有差別的。學(xué)習(xí)能力的差別的存在讓學(xué)生接收知識和處理知識的時候會遇到各種各樣的問題。這個過程中教師需要注意到，不能夠用統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)來衡量學(xué)生，如果用高標(biāo)準(zhǔn)來衡量學(xué)習(xí)能力比較差的學(xué)生的話，學(xué)生會因?yàn)榫薮蟮膲毫Χ鴨适W(xué)習(xí)信心，而如果用比較低的標(biāo)準(zhǔn)來衡量學(xué)生的話，學(xué)生也會因?yàn)闆]有更高的目標(biāo)而喪失學(xué)習(xí)的興趣。3.學(xué)生的學(xué)習(xí)負(fù)擔(dān)太重在高考的壓力下，為了讓學(xué)生擁有足夠理想的成績，大部分學(xué)校都會采用題海戰(zhàn)術(shù)。但是要知道，雖然題海戰(zhàn)術(shù)能夠從某種程度上提升學(xué)生的考試成績，但是題海戰(zhàn)術(shù)對于學(xué)生對知識的深層次理解仍然會產(chǎn)生消極的影響。大量的機(jī)械式的訓(xùn)練會讓學(xué)生的思維僵化，在遇到問題的時候，學(xué)生會想當(dāng)然的將這一問題和自己解決過的問題進(jìn)行比對，如果差別比較大，學(xué)生很可能就會無計可施。更加重要的是，大量的作業(yè)訓(xùn)練占用了學(xué)生大部分的時間，學(xué)生根本沒有時間去培養(yǎng)自己的興趣愛好，也沒有時間去時間去鍛煉身體，所以過重的學(xué)習(xí)負(fù)擔(dān)會讓學(xué)生付出太大的代價。二、對高中英語教學(xué)提出的一些建議1.將學(xué)生當(dāng)做英語教學(xué)的核心現(xiàn)代教育的不斷發(fā)展和課程改革的不斷推進(jìn)都對高中英語教學(xué)提出了更高的要求。在高中英語教學(xué)中，教師必須要將學(xué)生當(dāng)做是課堂教學(xué)的核心，讓學(xué)生有思考的時間、讓學(xué)生有選擇的權(quán)利。這是做好高中英語教學(xué)前提。舉個例子來講，在實(shí)際教學(xué)中，當(dāng)教師拋出來一個問題的時候，教師可以讓學(xué)生先進(jìn)行思考，然后給學(xué)生陳述自己的觀點(diǎn)的機(jī)會。這雖然會需要比較多的時間，但是學(xué)生在敘述自己的觀點(diǎn)的同時也需要傾聽別人的觀點(diǎn)，這很具有啟發(fā)意義。通過將自己和他人的觀點(diǎn)進(jìn)行比較，我們可以很明顯的發(fā)現(xiàn)學(xué)生會有更多的想法。這對啟發(fā)學(xué)生的思維、提升學(xué)生的思維多樣性能夠起到巨大的幫助作用。而在進(jìn)行問題講解、傳授學(xué)生知識的時候，教師也需要注意到，要交給學(xué)生解決問題的辦法，而不是讓學(xué)生死記硬背一些解題技巧。只有在理解的基礎(chǔ)上學(xué)生才能夠真正的學(xué)習(xí)好英語。2.建立健全科學(xué)完善的評價體系建立健全科學(xué)完善的評價體系能夠讓高中英語教學(xué)的質(zhì)量得到更加明顯的提升。評價是學(xué)生和教師進(jìn)行交流的一個重要的紐帶。通過評價學(xué)生可以了解教師對自己的認(rèn)識，看清楚自己的優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn)。這樣學(xué)生在學(xué)習(xí)的時候就能夠知道應(yīng)該通過什么樣的方式提升自己。比如說有的學(xué)生對單詞的記憶效率比較差，有的學(xué)生對語法的掌握比較差，那么教師可以分別評價這兩個，讓兩個學(xué)生找到自己的問題所在。同時，教師還需要考慮到不同學(xué)生的能力情況，對于學(xué)習(xí)能力比較差的但是很努力的學(xué)生來說，教師簡單的鼓勵往往能夠讓他們繼續(xù)堅持下去。3.有意識的控制作業(yè)量提多的作業(yè)會讓學(xué)生感到疲憊，喪失學(xué)習(xí)的興趣。這樣學(xué)生的學(xué)習(xí)動力也會減弱。為了讓學(xué)生保持積極的學(xué)習(xí)狀態(tài)，教師應(yīng)該減少作業(yè)量，把作業(yè)控制在適當(dāng)?shù)姆秶鷥?nèi)，保證學(xué)生既能夠溫習(xí)學(xué)到的知識不至于遺忘。高中英語教學(xué)意義重大，教師應(yīng)該迅速采取措施解決當(dāng)前教學(xué)過程中存在的一些問題。相信只要解決好這些問題，高中英語教學(xué)一定會取得更好的成績。腫瘤組織庫的建立與管理1、合法而穩(wěn)定的權(quán)力在使用得當(dāng)時很少遇1腫瘤組織庫的建立與管理課件2腫瘤組織庫的建立與管理課件3腫瘤組織庫的建立與管理課件4腫瘤組織庫的建立與管理課件5理論基礎(chǔ)“銀行”模式的組織庫：按照一定的標(biāo)準(zhǔn)化運(yùn)轉(zhuǎn)程序（standardoperatingprocesseds,SOPs）規(guī)范人體組織的收集、加工和儲存。組織標(biāo)本形式：通常為低溫冷凍組織或蠟塊。缺點(diǎn)：不能提供新鮮的、未被冰凍的人體組織，亦不能提供某些有特殊加工需求的組織樣本。不能滿足研究者對組織塊的個性化需求。優(yōu)點(diǎn)：可向研究者提供大量的組織樣本，并且這些組織均有相關(guān)的臨床信息和流行病學(xué)信息。理論基礎(chǔ)“銀行”模式的組織庫：按照一定的標(biāo)準(zhǔn)化運(yùn)轉(zhuǎn)程序（st6理論基礎(chǔ)臨床試驗(yàn)?zāi)Ｊ剑菏恰便y行“模式的一個亞型，是由一個或多個臨床試驗(yàn)收集的標(biāo)本構(gòu)成的標(biāo)本庫。缺點(diǎn)：其內(nèi)組織標(biāo)本的應(yīng)用受限于倫理委員會的要求，無法被廣泛的應(yīng)用與其他臨床研究。同樣，組織的大小、采集及加工的方法也不能滿足所有研究者的需求。理論基礎(chǔ)臨床試驗(yàn)?zāi)Ｊ剑菏恰便y行“模式的一個亞型，是由一個或多7理論基礎(chǔ)前瞻性收集模式：研究者指定需要的組織類型，同時也制定出所需的組織采集、處理及儲存方法。缺點(diǎn)：沒有現(xiàn)成的大量的組織標(biāo)本以及臨床資料，因?yàn)榻M織需要前瞻性的去收集。優(yōu)點(diǎn)：研究者能獲得他們需要的組織樣本，能夠滿足其研究的個性化需求。理論基礎(chǔ)前瞻性收集模式：研究者指定需要的組織類型，同時也制定8理論基礎(chǔ)二、組織收集盡量縮短和記錄手術(shù)摘除或從手術(shù)室轉(zhuǎn)移到標(biāo)本庫的時間間隔很重要Spruessel等人報道，組織離體后30分鐘內(nèi)稱80%基因變化少于2個折疊[1]

Maine等人報道，前列腺組織離體1小時內(nèi)僅有不到1%基因發(fā)生了變化[2]

術(shù)后標(biāo)本在體外保存5分鐘和60分鐘相比，其mRNA變化不明顯[3]1.SpruesselA,SteinmannG,JungM,LeeSA,CarrT,FentzAJ,SpangenbergJ,ZornigC,JuhlHH,DavidKA.Tissueischemiatimeaffectsgeneandproteinexpressionpatternswithinminutesfollowingsurgicaltumorexcision.

Biotechniques.

2004;36(6):1030–1037.2.MaineIP,VaramballyS,ShenR,ChinnaiyanM,RubinMA.Changesindifferentialgeneexpressionbecauseofwarmischemiatimeofradicalprostatectomyspecimens.

AmJPathol.2002;161(5):1743–1748.3.HuangJ,QiR,QuackenbushJ,DauwayE,LazaridisE,YeatmanT.Effecsofischemiaongeneexpression.

JSurgRes.

2001;99:222–227.理論基礎(chǔ)二、組織收集1.SpruesselA,Stei9理論基礎(chǔ)三、組織儲存北京大學(xué)季加孚等研究發(fā)現(xiàn)：手術(shù)后1h內(nèi)取材的組織經(jīng)過3年低溫保存，90％以上的標(biāo)本仍有清晰的28S和18SRNA條帶，提示RNA完整性較好[4]DNA分子穩(wěn)定性較mRNA好，在-80℃環(huán)境中保存5年，DNA完整性良好[5]4.季加孚．北京大學(xué)臨床腫瘤學(xué)院腫瘤標(biāo)本庫的建設(shè)[J]．北京大學(xué)學(xué)報：醫(yī)學(xué)版，2005，37(3)：329—330．5.張佳年，于穎彥，計駿.等.低溫凍存時間對腫瘤組織生物大分子的影響[J].診斷學(xué)理論與實(shí)踐2009，V01．8，No1理論基礎(chǔ)三、組織儲存4.季加孚．北京大學(xué)臨床腫瘤學(xué)院腫瘤標(biāo)本10材料與方法腫瘤組織庫庫房，放置液氮罐、冰箱、冰柜等冷凍設(shè)備，用于存放標(biāo)本；分子生物室（中心實(shí)驗(yàn)室）用于提取血清、血漿、分離淋巴細(xì)胞。庫房設(shè)備：液氮罐1個（YDS-30，沈陽新光），-80℃立式超低溫保存箱2臺（DW-86L628，青島海爾），4℃～-20℃冰柜1臺（BCD-130Eb，青島海爾）；聯(lián)想電腦、條碼掃描器、條碼打印機(jī)1套（BP-IP300，德國BRADY）等。材料與方法腫瘤組織庫庫房，放置液氮罐、冰箱、冰柜等冷凍設(shè)備，11庫房庫房12生物樣本庫資源信息管理系統(tǒng)生物樣本庫資源信息管理系統(tǒng)13主要設(shè)備BRADY條碼打印機(jī)液氮罐海爾-80℃冰箱主要設(shè)備BRADY條碼打印機(jī)液氮罐海爾-80℃冰箱14患者入院后行生物安全性檢查。檢測HIV以及嗜肝病毒HBV及HCV感染情況。HIV感染患者不列為采集對象。HBV及HCV感染者需在標(biāo)本上明確注明。尊重患者的知情權(quán)和隱私權(quán)，在向患者及家屬介紹標(biāo)本采集和使用目的，獲得患者自愿簽署知情同意書后，方可安排標(biāo)本采集和數(shù)據(jù)錄入?；颊呷朐汉笮猩锇踩詸z查。檢測HIV以及嗜肝病毒HBV及H15組織采集手術(shù)結(jié)束后，標(biāo)本離體30分鐘內(nèi)完成，在臨床腫瘤專家的指導(dǎo)下，在不影響病理診斷取材需要的前提下，采集組織樣本。1）標(biāo)本取材部位：腫瘤組織、癌旁組織（癌組織旁1cm）和正常組織（癌組織旁5cm及以外或最遠(yuǎn)處）。2）過程：使用數(shù)碼相機(jī)拍攝標(biāo)本外觀后，將標(biāo)本切成小塊（直徑0.5×0.5cm，厚度＜0.5cm），為減少處理時間，標(biāo)本不應(yīng)切得太小，然后放入無菌凍存管內(nèi)，做好標(biāo)記，記錄標(biāo)本采集的時間及標(biāo)本的類型。每例病人樣本保存3~5份凍存管標(biāo)本。每份組織重量原則不低于2g。3）標(biāo)本凍存管標(biāo)記后直接凍存于液氮中，后轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱中。標(biāo)本運(yùn)送過程中，將其置于冰中保存。組織采集手術(shù)結(jié)束后，標(biāo)本離體30分鐘內(nèi)完成，在臨床腫瘤專家的16術(shù)前血：指臨床診斷明確，患者未經(jīng)任何治療，即放療、化療及免疫治療等，已接受上述治療的患者樣本需詳細(xì)注明。術(shù)后血：指接受手術(shù)后2周，患者未接受任何放療、化療或免疫治療等。術(shù)前血：指臨床診斷明確，患者未經(jīng)任何治療，即放療、化療及免疫171、取血液標(biāo)本，每例采集10ml（不少于5ml），約10ml全血平均分裝于紅帽管（不含抗凝劑，1管）和紫帽管（含2%EDTA抗凝劑，2管）中。2、紅帽管用于分離血清，室溫放置30分鐘后離心；紫帽管用于分離血漿及淋巴細(xì)胞。3、1500r/min離心10分鐘，此時懸液分層，上層淡黃色為血清（紅帽管）或血漿（紫帽管），底層為紅細(xì)胞，紫帽管中中層呈灰白色的為外周血淋巴細(xì)胞。4、輕輕吸取淡黃色上層血清（血漿）放入1.5ml離心管中，每管200μl，共12管（血清6管，血漿6管），做好標(biāo)記。5、新鮮抗凝血（含2%EDTA抗凝）去血漿后，按照1:1比例加入PBS液混勻。6、15ml離心管內(nèi)先加入3ml淋巴細(xì)胞分離液，后加入6ml稀釋樣品，注意加入樣品要緩慢進(jìn)行，不要沖破液面，影響離心效果。20±2℃下2000r/min離心20分鐘。7、離心后血樣分四層，將移液管插入液面，輕吸灰白色的淋巴細(xì)胞層，放入另一15ml離心管中，注意吸取過程中避免吸入分層液和血漿。8、按1:5的比例向淋巴細(xì)胞中加入PBS液，混勻洗滌，室溫1000r/min離心10min。9、棄去上清液保留底部沉淀，適用1.5mlPBS液吹打洗滌，置入標(biāo)記好的1.5ml細(xì)胞凍存管中，高速離心機(jī)500r/min離心5分鐘。10、棄去上清液保留底部沉淀，血清、血漿及淋巴細(xì)胞分裝完畢后貼好二維標(biāo)簽。1、取血液標(biāo)本，每例采集10ml（不少于5ml），約10ml18質(zhì)量控制樣本DNA完整性檢測方法一：提取樣本基因組DNA，檢測OD260/OD280值。進(jìn)行0.7%瓊脂糖凝膠電泳。通過DNA電泳判斷組織標(biāo)本的基因組是否完整。無基因組DNA或DNA出現(xiàn)明顯降解為不可用樣本。方法二：通過PCR選擇擴(kuò)增管家基因，如GAPD、HHPRT、β-actin，分析擴(kuò)增產(chǎn)物的含量。產(chǎn)物含量相對較少或無產(chǎn)物，可判斷為不可使用標(biāo)本。質(zhì)量控制樣本DNA完整性檢測19質(zhì)量控制樣本RNA完整性檢測方法一：參照Trizol試劑盒操作指南進(jìn)行組織總RNA的提取。應(yīng)用紫外分光光度計測260nm、280nmOD值定量分析RNA（OD260/OD280為1.7-2.0）；1%瓊脂糖凝膠電泳后觀察5S、18S和28S條帶情況。28S和18S條帶亮度的比值約2:1，表明標(biāo)本中的RNA完整性較好。出現(xiàn)降解者為不可用樣本。方法二：RT-PCR擴(kuò)增β-actin、HHPRT管家基因，分析擴(kuò)增產(chǎn)物的含量，產(chǎn)物含量相對較少或無產(chǎn)物可判斷為不可用樣本。方法三：NorthernBlot檢測β-actin、HHPRT管家基因，無印記者列為不可使用樣本。質(zhì)量控制樣本RNA完整性檢測20蛋白質(zhì)完整性檢測蛋白質(zhì)完整性通過WesternBlot進(jìn)行檢測，檢查標(biāo)本樣本中β-actin的蛋白表達(dá)量變化，通過分析印記條帶，判斷蛋白量是否有變化，無條帶或條帶變?nèi)跽邽榘l(fā)生組織降解樣本。蛋白質(zhì)完整性檢測21結(jié)果自2010年7月建庫以來共收集保存了各類腫瘤（胃癌、結(jié)腸癌、直腸癌、甲狀腺癌、胃腸道間質(zhì)瘤等）患者的組織標(biāo)本1333例，胃癌患者424例，直腸癌267例，結(jié)腸癌246例，甲狀腺腫瘤254例，胃腸道間質(zhì)瘤45例，其他類型腫瘤97例。標(biāo)本總量11919份，其中包括腫瘤組織1170份，腫瘤旁組織900份，正常組織1113份，血清3923份，血漿3931份，淋巴細(xì)胞843份，糞便39份。已向外省提供60份患者血淋巴細(xì)胞樣本，用于DNA相關(guān)研究，效果良好。結(jié)果自2010年7月建庫以來共收集保存了各類腫瘤（胃癌、結(jié)腸22隨機(jī)抽取近1年的組織樣本20例，用Trizol試劑提取組織總RNA，測量各標(biāo)本的OD260/OD280比值均在1.8-2.0之間。1%瓊脂糖凝膠電泳后，28S和18S條帶清晰明亮，5S條帶很弱，且28S和18S條帶亮度的比值約為2:1，表明標(biāo)本中的RNA完整性較好。隨機(jī)抽取近1年的組織樣本20例，用Trizol試劑提取組織總23腫瘤組織庫的建立與管理課件24腫瘤組織庫的建立與管理課件25腫瘤組織庫的建立與管理課件26討論我科室有穩(wěn)定的腫瘤標(biāo)本來源，以保證庫存標(biāo)本在數(shù)量上不斷補(bǔ)充。目前我科室腫瘤標(biāo)本庫標(biāo)本的收集、保存及信息的采集，技術(shù)路線已經(jīng)基本成熟和規(guī)范，本腫瘤庫可為腫瘤的基礎(chǔ)和臨床研究提供可靠的標(biāo)本來源。組織庫運(yùn)行中的細(xì)節(jié)、大量組織標(biāo)本的質(zhì)量控制以及如何合理利用現(xiàn)有的標(biāo)本資源，是我們需要進(jìn)一步完善解決的問題。討論我科室有穩(wěn)定的腫瘤標(biāo)本來源，以保證庫存標(biāo)本在數(shù)量上不斷補(bǔ)27謝謝！腫瘤組織庫的建立與管理課件2826、要使整個人生都過得舒適、愉快，這是不可能的，因?yàn)槿祟惐仨毦邆湟环N能應(yīng)付逆境的態(tài)度?！R梭

27、只有把抱怨環(huán)境的心情，化為上進(jìn)的力量，才是成功的保證?！_曼·羅蘭

28、知之者不如好之者，好之者不如樂之者?！鬃?/p>

29、勇猛、大膽和堅定的決心能夠抵得上武器的精良?！_(dá)·芬奇

30、意志是一個強(qiáng)壯的盲人，倚靠在明眼的跛子肩上?！灞救A謝謝！2926、要使整個人生都過得舒適、愉快，這是不可能的，因?yàn)槿祟惐啬[瘤組織庫的建立與管理1、合法而穩(wěn)定的權(quán)力在使用得當(dāng)時很少遇到抵抗?！ぜs翰遜2、權(quán)力會使人漸漸失去溫厚善良的美德。——伯克3、最大限度地行使權(quán)力總是令人反感；權(quán)力不易確定之處始終存在著危險。——塞·約翰遜4、權(quán)力會奴化一切?！髻?、雖然權(quán)力是一頭固執(zhí)的熊，可是金子可以拉著它的鼻子走?！勘饶[瘤組織庫的建立與管理腫瘤組織庫的建立與管理1、合法而穩(wěn)定的權(quán)力在使用得當(dāng)時很少遇到抵抗?！ぜs翰遜2、權(quán)力會使人漸漸失去溫厚善良的美德?！?、最大限度地行使權(quán)力總是令人反感；權(quán)力不易確定之處始終存在著危險?！ぜs翰遜4、權(quán)力會奴化一切?！髻?、雖然權(quán)力是一頭固執(zhí)的熊，可是金子可以拉著它的鼻子走?！勘饶[瘤組織庫的建立與管理研究目的探討分子生物學(xué)研究中腫瘤庫的建庫條件，標(biāo)本的采集、保存和質(zhì)量控制，以及腫瘤庫的信息化管理等有關(guān)問題，創(chuàng)建腫瘤組織標(biāo)本庫，保護(hù)和合理利用腫瘤的標(biāo)本資源，為臨床和科學(xué)研究人員，提供合適數(shù)量的腫瘤標(biāo)本促進(jìn)腫瘤的研究。根據(jù)新課標(biāo)要求，中學(xué)語文教學(xué)的基本任務(wù)是培養(yǎng)學(xué)生聽說讀寫的能力。這四個方面既有聯(lián)系又有區(qū)別，它們相輔相成，缺一不可。但從農(nóng)村中學(xué)的現(xiàn)狀來看，學(xué)生說話能力之低下，尤令人憂：上課時教師提問，學(xué)生站起來或低頭不語，金口難開；或細(xì)聲細(xì)語，羞若閨秀；或上言不對下語，胡謅亂編。有時教師召開學(xué)生座談會，到會者無一人主動發(fā)言，即使個別學(xué)生能勉強(qiáng)說幾句，也是詞不達(dá)意，甚至語無倫次。產(chǎn)生上述現(xiàn)象的原因，除學(xué)生本身的心理因素外，主要是平時的語文教學(xué)不注重口語訓(xùn)練。有的教師認(rèn)為升學(xué)考試重在讀寫，口語訓(xùn)練可有可無，因此在課堂設(shè)計中忽略口語訓(xùn)練，結(jié)果學(xué)生在課堂上噤若寒蟬，沒有“說”的機(jī)會，久而久之，只好習(xí)慣于耳聽筆練了。此外，加強(qiáng)口語訓(xùn)練，是教育“三個面向”的需要。對于學(xué)生來說，提高說話能力，可為將來的工作打下良好的基礎(chǔ)。因此，教師必須從培育全面發(fā)展人才的高度，有計劃地把口語訓(xùn)練貫徹到語文教學(xué)的全過程中去。如何搞好口語訓(xùn)練呢？筆者認(rèn)為應(yīng)從以下幾方面著手。一、啟發(fā)誘導(dǎo)，打消顧慮與城鎮(zhèn)的學(xué)生相比，農(nóng)村中學(xué)的學(xué)生視野較狹窄，見識不廣，少言寡語，尤其怯于在大庭廣眾中講話。教師應(yīng)該幫助學(xué)生消除害怕心理，大膽地接受口語訓(xùn)練。（1）讓學(xué)生明確聽說讀寫是語文學(xué)習(xí)的四項(xiàng)基本任務(wù)，缺一不可，而能說會寫又是這四項(xiàng)任務(wù)的集中和概括，特別強(qiáng)調(diào)口語在當(dāng)今社會活動和經(jīng)濟(jì)活動中的重要性，使學(xué)習(xí)與時代要求緊密地結(jié)合在一起，從而提高學(xué)生口語訓(xùn)練的自覺性。（2）打破“好口才是天生的”的觀念，通過畫眉練喉、鸚鵡學(xué)舌的故事，使學(xué)生懂得好口才不是天生的，而是靠后天訓(xùn)練而成的。另外還可以給學(xué)生介紹一些外交家和企業(yè)家的用語藝術(shù)以及名人會話、奇聞趣事，增強(qiáng)學(xué)生進(jìn)行口語訓(xùn)練的信心。（3）以典型引路。口語訓(xùn)練主要靠課堂教學(xué)來實(shí)施，其中以問答為常用形式。以課堂提問為例，教師可以設(shè)計難易兩類問題，讓不同水平的學(xué)生作答，而每節(jié)課的第一次體驗(yàn)，應(yīng)首先讓學(xué)優(yōu)生回答或集體回答，以打開局面，活躍氣氛，消除學(xué)困生緊張害怕的心理，為學(xué)困生示范引路，這樣易收到良好的效果。如果上課伊始，先抓住學(xué)困生發(fā)問，學(xué)困生會誤認(rèn)為教師有意懲罰，容易造成僵局，使氣氛緊張，結(jié)果往往會適得其反。（4）應(yīng)多以鼓勵為主?？谡Z訓(xùn)練與其他訓(xùn)練不同，它具有公開性、演示性等特點(diǎn)。一個人口語表達(dá)的好壞，心理因素占很大影響。因此，口語訓(xùn)練不能操之過急，要讓學(xué)生有個逐步適應(yīng)和提高的過程。比如，開始答問時學(xué)困生因膽怯而說話聲音小，其他同學(xué)難以聽清，這時教師不要嫌棄責(zé)備，因?yàn)閷W(xué)生敢說已經(jīng)是一個很大的進(jìn)步，教師應(yīng)給予肯定，可以走近他們，側(cè)耳傾聽，然后再向其他學(xué)生“轉(zhuǎn)播”，使學(xué)困生感到教師是他們的幫手，從而獲得鼓舞。有時學(xué)生回答錯了，教師千萬不要再去找一些表達(dá)較好的學(xué)生加以評論，或說一些“這么簡單的問題都說不清”之類的話，應(yīng)從肯定入手，用“如果這么說就對了”的安慰口氣給予鼓勵。有時學(xué)生回答得沒有條理，教師不妨作示范回答，這樣才有利于調(diào)動學(xué)生的積極性。二、制訂計劃，明確目標(biāo)新課標(biāo)明確指出，中學(xué)生口語訓(xùn)練的目標(biāo)是能用普通話準(zhǔn)確表達(dá)自己的想法和心情。教師應(yīng)明確，中學(xué)語文教學(xué)進(jìn)行口語訓(xùn)練既不是培養(yǎng)電臺播音員，也不是造就演說家，不應(yīng)要求學(xué)生口若懸河，夸夸其談，而只要求學(xué)生能正確、流利地用普通話表情達(dá)意而已。過高的要求是違背課標(biāo)要求且脫離實(shí)際的?？谡Z訓(xùn)練應(yīng)根據(jù)學(xué)生的年齡特征，按照循序漸進(jìn)的規(guī)律，分階段由易到難逐步進(jìn)行。初中階段著重要求學(xué)生養(yǎng)成說普通話的習(xí)慣，訓(xùn)練學(xué)生能清楚地敘述事物，能大膽地表達(dá)意見，做到說話思路清晰、有條不紊。在口語訓(xùn)練中，應(yīng)以課內(nèi)為主，并與課外相結(jié)合。三、方法靈活，形式多樣口語訓(xùn)練不可能一蹴而就，它是一個日積月累的過程，如果方法單一，會使學(xué)生感到枯燥無味，效果不佳。因此，在訓(xùn)練中要力求做到方法靈活，形式多樣。（1）先讀后說。讀一篇文章后，讓學(xué)生進(jìn)行口語復(fù)述，或復(fù)述片段，或復(fù)述全文，或歸納中心意思，或進(jìn)行分析評論，把讀和說結(jié)合起來。（2）先看后說。先組織學(xué)生到校外參觀，回校后暢談所見所聞所感；或組織學(xué)生觀看影視作品，然后發(fā)言，或介紹故事情節(jié)，或褒貶人物，把看和說結(jié)合起來。（3）做后再說。比如學(xué)生做完一次實(shí)驗(yàn)，可介紹實(shí)驗(yàn)過程，分析結(jié)果，說明條件和原因；或通過課外制作活動，介紹作品的制作步驟，說明原理功能，把做和說結(jié)合起來。（4）寫前先說。在寫作前，先口頭作文，說提要，談構(gòu)思，介紹材料的處理安排，然后撰寫成文，把寫和說結(jié)合起來。口語訓(xùn)練所花時間較多，為了不影響教學(xué)進(jìn)度，教師應(yīng)充分利用作文訓(xùn)練，把課內(nèi)練和課外練結(jié)合起來。每學(xué)期有計劃地舉行一些口語訓(xùn)練活動，如舉辦故事會、辯論會、演講比賽、會話游戲等，增加訓(xùn)練的知識性和趣味性。只要教師善于引導(dǎo)，勤于訓(xùn)練，持之以恒，學(xué)生的口頭表達(dá)能力一定會有質(zhì)的改變。（責(zé)編周翠如）G633.41目前高中英語教學(xué)過于關(guān)注學(xué)生的成績，英語教學(xué)只是單純的追求學(xué)生的考試成績，只要學(xué)生考試成績好，那么其他的問題都可以忽略。這樣的教學(xué)思想使得現(xiàn)代高中英語教學(xué)越來越不能夠滿足現(xiàn)代教育的要求。并且，現(xiàn)代高中英語教學(xué)中教師對學(xué)生管的太死板，過分約束了學(xué)生，剝奪了學(xué)生的學(xué)習(xí)自由。這些問題的存在會使得高中英語教學(xué)的質(zhì)量大打折扣。新課程改革對高中英語教學(xué)提出了越來越高的要求，教師必須要解決好目前存在的問題，結(jié)合學(xué)生的實(shí)際情況，找到促進(jìn)教學(xué)質(zhì)量提升的科學(xué)的辦法。一、目前高中英語教學(xué)存在的一些不足1.課堂教學(xué)太過死板僵硬目前大部分高中英語課堂教學(xué)都顯得太多死板和僵硬。在課堂教學(xué)的過程中教師都將教學(xué)重點(diǎn)放在了如何提升學(xué)生的答題能力方面。教學(xué)的目的就是讓學(xué)生學(xué)會怎樣在考試的時候獲得令人滿意的成績。所以在實(shí)際教學(xué)過程中，教師會直接交給學(xué)生解決問題的辦法，并且強(qiáng)制性的要求學(xué)生必須要將解題方法背下來。在遇到不明白的問題的時候，學(xué)生會想到問老師。而這個時候教師往往會直接告訴學(xué)生問題的答案，并沒有在揭示答案前進(jìn)行必要的鋪墊，這樣的教學(xué)方法最終導(dǎo)致雖然學(xué)生會做了這一道題目，但是當(dāng)學(xué)生遇到類似的或者稍微變化了一點(diǎn)的題目的時候，學(xué)生往往會手足無措。并且，通過調(diào)查目前高中英語課堂教學(xué)的實(shí)際情況我們可以發(fā)現(xiàn)，高中課堂顯得十分的死板。在課程進(jìn)行的過程中，我們基本只能夠看到教師在進(jìn)行內(nèi)容的講解，但是有一個很明顯的特征，那就是課程進(jìn)行的過程中基本只能夠看到教師在進(jìn)行講解，但是看不到學(xué)生提問和思考。這表明教師對課堂管理的太死板，沒有彈性。2.評價體系不健全目前高中英語教學(xué)中評價體系還不是很健全。學(xué)生的學(xué)習(xí)成績主要由學(xué)生的考試成績來決定，教師在評價學(xué)生的時候也只是單純的考慮學(xué)生的考試情況。這樣的評價方式會對學(xué)生的學(xué)習(xí)產(chǎn)生巨大的影?。單純以成績來考核學(xué)生會讓部分學(xué)習(xí)能力比較差的學(xué)生喪失學(xué)習(xí)的信心，甚至產(chǎn)生厭學(xué)的情緒。要知道學(xué)生的學(xué)習(xí)能力是有差別的。學(xué)習(xí)能力的差別的存在讓學(xué)生接收知識和處理知識的時候會遇到各種各樣的問題。這個過程中教師需要注意到，不能夠用統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)來衡量學(xué)生，如果用高標(biāo)準(zhǔn)來衡量學(xué)習(xí)能力比較差的學(xué)生的話，學(xué)生會因?yàn)榫薮蟮膲毫Χ鴨适W(xué)習(xí)信心，而如果用比較低的標(biāo)準(zhǔn)來衡量學(xué)生的話，學(xué)生也會因?yàn)闆]有更高的目標(biāo)而喪失學(xué)習(xí)的興趣。3.學(xué)生的學(xué)習(xí)負(fù)擔(dān)太重在高考的壓力下，為了讓學(xué)生擁有足夠理想的成績，大部分學(xué)校都會采用題海戰(zhàn)術(shù)。但是要知道，雖然題海戰(zhàn)術(shù)能夠從某種程度上提升學(xué)生的考試成績，但是題海戰(zhàn)術(shù)對于學(xué)生對知識的深層次理解仍然會產(chǎn)生消極的影響。大量的機(jī)械式的訓(xùn)練會讓學(xué)生的思維僵化，在遇到問題的時候，學(xué)生會想當(dāng)然的將這一問題和自己解決過的問題進(jìn)行比對，如果差別比較大，學(xué)生很可能就會無計可施。更加重要的是，大量的作業(yè)訓(xùn)練占用了學(xué)生大部分的時間，學(xué)生根本沒有時間去培養(yǎng)自己的興趣愛好，也沒有時間去時間去鍛煉身體，所以過重的學(xué)習(xí)負(fù)擔(dān)會讓學(xué)生付出太大的代價。二、對高中英語教學(xué)提出的一些建議1.將學(xué)生當(dāng)做英語教學(xué)的核心現(xiàn)代教育的不斷發(fā)展和課程改革的不斷推進(jìn)都對高中英語教學(xué)提出了更高的要求。在高中英語教學(xué)中，教師必須要將學(xué)生當(dāng)做是課堂教學(xué)的核心，讓學(xué)生有思考的時間、讓學(xué)生有選擇的權(quán)利。這是做好高中英語教學(xué)前提。舉個例子來講，在實(shí)際教學(xué)中，當(dāng)教師拋出來一個問題的時候，教師可以讓學(xué)生先進(jìn)行思考，然后給學(xué)生陳述自己的觀點(diǎn)的機(jī)會。這雖然會需要比較多的時間，但是學(xué)生在敘述自己的觀點(diǎn)的同時也需要傾聽別人的觀點(diǎn)，這很具有啟發(fā)意義。通過將自己和他人的觀點(diǎn)進(jìn)行比較，我們可以很明顯的發(fā)現(xiàn)學(xué)生會有更多的想法。這對啟發(fā)學(xué)生的思維、提升學(xué)生的思維多樣性能夠起到巨大的幫助作用。而在進(jìn)行問題講解、傳授學(xué)生知識的時候，教師也需要注意到，要交給學(xué)生解決問題的辦法，而不是讓學(xué)生死記硬背一些解題技巧。只有在理解的基礎(chǔ)上學(xué)生才能夠真正的學(xué)習(xí)好英語。2.建立健全科學(xué)完善的評價體系建立健全科學(xué)完善的評價體系能夠讓高中英語教學(xué)的質(zhì)量得到更加明顯的提升。評價是學(xué)生和教師進(jìn)行交流的一個重要的紐帶。通過評價學(xué)生可以了解教師對自己的認(rèn)識，看清楚自己的優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn)。這樣學(xué)生在學(xué)習(xí)的時候就能夠知道應(yīng)該通過什么樣的方式提升自己。比如說有的學(xué)生對單詞的記憶效率比較差，有的學(xué)生對語法的掌握比較差，那么教師可以分別評價這兩個，讓兩個學(xué)生找到自己的問題所在。同時，教師還需要考慮到不同學(xué)生的能力情況，對于學(xué)習(xí)能力比較差的但是很努力的學(xué)生來說，教師簡單的鼓勵往往能夠讓他們繼續(xù)堅持下去。3.有意識的控制作業(yè)量提多的作業(yè)會讓學(xué)生感到疲憊，喪失學(xué)習(xí)的興趣。這樣學(xué)生的學(xué)習(xí)動力也會減弱。為了讓學(xué)生保持積極的學(xué)習(xí)狀態(tài)，教師應(yīng)該減少作業(yè)量，把作業(yè)控制在適當(dāng)?shù)姆秶鷥?nèi)，保證學(xué)生既能夠溫習(xí)學(xué)到的知識不至于遺忘。高中英語教學(xué)意義重大，教師應(yīng)該迅速采取措施解決當(dāng)前教學(xué)過程中存在的一些問題。相信只要解決好這些問題，高中英語教學(xué)一定會取得更好的成績。腫瘤組織庫的建立與管理1、合法而穩(wěn)定的權(quán)力在使用得當(dāng)時很少遇30腫瘤組織庫的建立與管理課件31腫瘤組織庫的建立與管理課件32腫瘤組織庫的建立與管理課件33腫瘤組織庫的建立與管理課件34理論基礎(chǔ)“銀行”模式的組織庫：按照一定的標(biāo)準(zhǔn)化運(yùn)轉(zhuǎn)程序（standardoperatingprocesseds,SOPs）規(guī)范人體組織的收集、加工和儲存。組織標(biāo)本形式：通常為低溫冷凍組織或蠟塊。缺點(diǎn)：不能提供新鮮的、未被冰凍的人體組織，亦不能提供某些有特殊加工需求的組織樣本。不能滿足研究者對組織塊的個性化需求。優(yōu)點(diǎn)：可向研究者提供大量的組織樣本，并且這些組織均有相關(guān)的臨床信息和流行病學(xué)信息。理論基礎(chǔ)“銀行”模式的組織庫：按照一定的標(biāo)準(zhǔn)化運(yùn)轉(zhuǎn)程序（st35理論基礎(chǔ)臨床試驗(yàn)?zāi)Ｊ剑菏恰便y行“模式的一個亞型，是由一個或多個臨床試驗(yàn)收集的標(biāo)本構(gòu)成的標(biāo)本庫。缺點(diǎn)：其內(nèi)組織標(biāo)本的應(yīng)用受限于倫理委員會的要求，無法被廣泛的應(yīng)用與其他臨床研究。同樣，組織的大小、采集及加工的方法也不能滿足所有研究者的需求。理論基礎(chǔ)臨床試驗(yàn)?zāi)Ｊ剑菏恰便y行“模式的一個亞型，是由一個或多36理論基礎(chǔ)前瞻性收集模式：研究者指定需要的組織類型，同時也制定出所需的組織采集、處理及儲存方法。缺點(diǎn)：沒有現(xiàn)成的大量的組織標(biāo)本以及臨床資料，因?yàn)榻M織需要前瞻性的去收集。優(yōu)點(diǎn)：研究者能獲得他們需要的組織樣本，能夠滿足其研究的個性化需求。理論基礎(chǔ)前瞻性收集模式：研究者指定需要的組織類型，同時也制定37理論基礎(chǔ)二、組織收集盡量縮短和記錄手術(shù)摘除或從手術(shù)室轉(zhuǎn)移到標(biāo)本庫的時間間隔很重要Spruessel等人報道，組織離體后30分鐘內(nèi)稱80%基因變化少于2個折疊[1]

Maine等人報道，前列腺組織離體1小時內(nèi)僅有不到1%基因發(fā)生了變化[2]

術(shù)后標(biāo)本在體外保存5分鐘和60分鐘相比，其mRNA變化不明顯[3]1.SpruesselA,SteinmannG,JungM,LeeSA,CarrT,FentzAJ,SpangenbergJ,ZornigC,JuhlHH,DavidKA.Tissueischemiatimeaffectsgeneandproteinexpressionpatternswithinminutesfollowingsurgicaltumorexcision.

Biotechniques.

2004;36(6):1030–1037.2.MaineIP,VaramballyS,ShenR,ChinnaiyanM,RubinMA.Changesindifferentialgeneexpressionbecauseofwarmischemiatimeofradicalprostatectomyspecimens.

AmJPathol.2002;161(5):1743–1748.3.HuangJ,QiR,QuackenbushJ,DauwayE,LazaridisE,YeatmanT.Effecsofischemiaongeneexpression.

JSurgRes.

2001;99:222–227.理論基礎(chǔ)二、組織收集1.SpruesselA,Stei38理論基礎(chǔ)三、組織儲存北京大學(xué)季加孚等研究發(fā)現(xiàn)：手術(shù)后1h內(nèi)取材的組織經(jīng)過3年低溫保存，90％以上的標(biāo)本仍有清晰的28S和18SRNA條帶，提示RNA完整性較好[4]DNA分子穩(wěn)定性較mRNA好，在-80℃環(huán)境中保存5年，DNA完整性良好[5]4.季加孚．北京大學(xué)臨床腫瘤學(xué)院腫瘤標(biāo)本庫的建設(shè)[J]．北京大學(xué)學(xué)報：醫(yī)學(xué)版，2005，37(3)：329—330．5.張佳年，于穎彥，計駿.等.低溫凍存時間對腫瘤組織生物大分子的影響[J].診斷學(xué)理論與實(shí)踐2009，V01．8，No1理論基礎(chǔ)三、組織儲存4.季加孚．北京大學(xué)臨床腫瘤學(xué)院腫瘤標(biāo)本39材料與方法腫瘤組織庫庫房，放置液氮罐、冰箱、冰柜等冷凍設(shè)備，用于存放標(biāo)本；分子生物室（中心實(shí)驗(yàn)室）用于提取血清、血漿、分離淋巴細(xì)胞。庫房設(shè)備：液氮罐1個（YDS-30，沈陽新光），-80℃立式超低溫保存箱2臺（DW-86L628，青島海爾），4℃～-20℃冰柜1臺（BCD-130Eb，青島海爾）；聯(lián)想電腦、條碼掃描器、條碼打印機(jī)1套（BP-IP300，德國BRADY）等。材料與方法腫瘤組織庫庫房，放置液氮罐、冰箱、冰柜等冷凍設(shè)備，40庫房庫房41生物樣本庫資源信息管理系統(tǒng)生物樣本庫資源信息管理系統(tǒng)42主要設(shè)備BRADY條碼打印機(jī)液氮罐海爾-80℃冰箱主要設(shè)備BRADY條碼打印機(jī)液氮罐海爾-80℃冰箱43患者入院后行生物安全性檢查。檢測HIV以及嗜肝病毒HBV及HCV感染情況。HIV感染患者不列為采集對象。HBV及HCV感染者需在標(biāo)本上明確注明。尊重患者的知情權(quán)和隱私權(quán)，在向患者及家屬介紹標(biāo)本采集和使用目的，獲得患者自愿簽署知情同意書后，方可安排標(biāo)本采集和數(shù)據(jù)錄入?；颊呷朐汉笮猩锇踩詸z查。檢測HIV以及嗜肝病毒HBV及H44組織采集手術(shù)結(jié)束后，標(biāo)本離體30分鐘內(nèi)完成，在臨床腫瘤專家的指導(dǎo)下，在不影響病理診斷取材需要的前提下，采集組織樣本。1）標(biāo)本取材部位：腫瘤組織、癌旁組織（癌組織旁1cm）和正常組織（癌組織旁5cm及以外或最遠(yuǎn)處）。2）過程：使用數(shù)碼相機(jī)拍攝標(biāo)本外觀后，將標(biāo)本切成小塊（直徑0.5×0.5cm，厚度＜0.5cm），為減少處理時間，標(biāo)本不應(yīng)切得太小，然后放入無菌凍存管內(nèi)，做好標(biāo)記，記錄標(biāo)本采集的時間及標(biāo)本的類型。每例病人樣本保存3~5份凍存管標(biāo)本。每份組織重量原則不低于2g。3）標(biāo)本凍存管標(biāo)記后直接凍存于液氮中，后轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱中。標(biāo)本運(yùn)送過程中，將其置于冰中保存。組織采集手術(shù)結(jié)束后，標(biāo)本離體30分鐘內(nèi)完成，在臨床腫瘤專家的45術(shù)前血：指臨床診斷明確，患者未經(jīng)任何治療，即放療、化療及免疫治療等，已接受上述治療的患者樣本需詳細(xì)注明。術(shù)后血：指接受手術(shù)后2周，患者未接受任何放療、化療或免疫治療等。術(shù)前血：指臨床診斷明確，患者未經(jīng)任何治療，即放療、化療及免疫461、取血液標(biāo)本，每例采集10ml（不少于5ml），約10ml全血平均分裝于紅帽管（不含抗凝劑，1管）和紫帽管（含2%EDTA抗凝劑，2管）中。2、紅帽管用于分離血清，室溫放置30分鐘后離心；紫帽管用于分離血漿及淋巴細(xì)胞。3、1500r/min離心10分鐘，此時懸液分層，上層淡黃色為血清（紅帽管）或血漿（紫帽管），底層為紅細(xì)胞，紫帽管中中層呈灰白色的為外周血淋巴細(xì)胞。4、輕輕吸取淡黃色上層血清（血漿）放入1.5ml離心管中，每管200μl，共12管（血清6管，血漿6管），做好標(biāo)記。5、新鮮抗凝血（含2%EDTA抗凝）去血漿后，按照1:1比例加入PBS液混勻。6、15ml離心管內(nèi)先加入3ml淋巴細(xì)胞分離液，后加入6ml稀釋樣品，注意加入樣品要緩慢進(jìn)行，不要沖破液面，影響離心效果。20±2℃下2000r/min離心20分鐘。7、離心后血樣分四層，將移液管插入液