菊花的組織培養(yǎng)-課件

通過初中的學(xué)習(xí)，我們已經(jīng)了解到大多綠色開花植物都是靠種子來繁殖的。那么，有沒有不用種子來培育植物的方法呢？組織培養(yǎng)營養(yǎng)繁殖扦插嫁接壓條

通過初中的學(xué)習(xí)，我們已經(jīng)了解到大多綠色開花植物1扦插嫁接壓條

扦插嫁接壓條2愈傷組織胚狀體1958，美國，斯圖爾德

植物組織培養(yǎng)離體回顧知識(shí)（二）愈傷組織胚狀體1958，美國，斯圖爾德離體回顧知識(shí)（二）3思考這個(gè)試驗(yàn)說明了動(dòng)物已經(jīng)分化的細(xì)胞核具有什么特性？高度分化的動(dòng)物體細(xì)胞的細(xì)胞核有發(fā)育成完整個(gè)體的潛能多利羊的誕生動(dòng)物細(xì)胞有沒有這種能力？思考這個(gè)試驗(yàn)說明了動(dòng)物已經(jīng)分化的細(xì)胞核具有什么特性？高度分化4已經(jīng)分化的細(xì)胞，仍然具有發(fā)育成完整個(gè)體的潛能。即細(xì)胞的全能性思考為什么已經(jīng)分化的細(xì)胞具有全能性呢？生物體的每一個(gè)細(xì)胞都是由同一個(gè)受精卵有絲分裂而來的，所以高度分化的細(xì)胞含有保持物種發(fā)育所需要的全套遺傳信息植物組織培養(yǎng)技術(shù)動(dòng)物的克隆技術(shù)已經(jīng)分化的細(xì)胞，仍然具有發(fā)育成完整個(gè)體的潛能。即細(xì)胞的全能性5一、植物組織培養(yǎng)的理論基礎(chǔ)（課本P32）當(dāng)植物細(xì)胞脫離了原來所在植物體的器官或組織而處于離體狀態(tài)時(shí)，在一定的營養(yǎng)物質(zhì)、激素和其他外界條件的作用下，就可能表現(xiàn)出全能性，發(fā)育成完整的植株。植物組織培養(yǎng)原理：植物細(xì)胞的全能性一、植物組織培養(yǎng)的理論基礎(chǔ)（課本P32）植物組織培養(yǎng)原理：植61、培育無病毒植株2、大規(guī)模培養(yǎng)愈傷組織（提取紫草素，治療燙傷和割傷的藥物以及染料和化妝品的原料）4、基因工程中亦需用到植物組織培養(yǎng)的方法（受體細(xì)胞為植物細(xì)胞）植物組織培養(yǎng)的應(yīng)用：

3、人工種子（解決有些作物品種繁殖能力差，結(jié)子困難或發(fā)芽率低等問題）1、培育無病毒植株2、大規(guī)模培養(yǎng)愈傷組織（提取紫草素，治療7菊花的組織培養(yǎng)菊花的組織培養(yǎng)8什么叫細(xì)胞分化？愈傷組織的細(xì)胞有什么特點(diǎn)？什么叫脫（去）分化、再分化？如何控制細(xì)胞的脫分化與去分化？

（閱讀32-33頁第一段解決下列問題）二、植物組織培養(yǎng)的基本過程什么叫細(xì)胞分化？（閱讀32-33頁第一段解決下列問題）二、植9愈傷組織愈傷組織10三、掌握幾個(gè)概念外植體:用于離體培養(yǎng)的植物器官或組織片段.細(xì)胞分化：植物的個(gè)體發(fā)育過程中，細(xì)胞在形態(tài)、結(jié)構(gòu)和生理功能上都會(huì)出現(xiàn)穩(wěn)定性的差異，形成這些差異的過程叫做細(xì)胞分化。愈傷組織：離體的植物組織或細(xì)胞，培養(yǎng)一段時(shí)間后，會(huì)通過細(xì)胞有絲分裂，形成愈傷組織。愈傷組織的細(xì)胞排列疏松而無規(guī)則，是一種高度液泡化的呈無定形狀態(tài)的薄壁細(xì)胞。脫分化（去分化）：由高度分化的植物組織或細(xì)胞產(chǎn)生愈傷組織的過程，稱為植物細(xì)胞的脫分化或者叫做去分化。再分化：脫分化產(chǎn)生的愈傷組織繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng)，又可以重新分化成根或芽等器官，這個(gè)過程叫做再分化。三、掌握幾個(gè)概念11二、植物組織培養(yǎng)的基本過程二、植物組織培養(yǎng)的基本過程12影響植物組織培養(yǎng)的因素1、外植體的影響1）不同的植物組織培養(yǎng)的難易程度差別很大，容易進(jìn)行無性繁殖的植物也容易進(jìn)行組織培養(yǎng)。2)同一種材料，材料的年齡，保存時(shí)間也有影響。幼齡、保存時(shí)間短的材料容易培養(yǎng)成功。

菊花的組織培養(yǎng)一般選擇未開花植株的莖上部新萌生的側(cè)枝，因?yàn)檫@種嫩枝生理狀態(tài)良好，易誘導(dǎo)脫分化和再分化。影響植物組織培養(yǎng)的因素132、營養(yǎng)因素的影響：MS培養(yǎng)基主要成分包括：

大量元素N、P、S、K、Ca、Mg等無機(jī)物

微量元素Fe、Mn、B、Zn、Mo、Cu、Co、I等有機(jī)物：甘氨酸、煙酸、肌醇、維生素、蔗糖等植物激素：生長素、細(xì)胞分裂素、赤霉素等2、營養(yǎng)因素的影響：14討論：你能說出各種營養(yǎng)物質(zhì)的作用嗎？同專題2中微生物培養(yǎng)基的配方相比，MS培養(yǎng)基的配方有哪些明顯的不同？（P83、84）答：微量元素和大量元素提供植物細(xì)胞生活所必需的無機(jī)鹽；蔗糖提供碳源，同時(shí)能夠維持細(xì)胞的滲透壓；甘氨酸、維生素等物質(zhì)主要是為了滿足離體植物細(xì)胞在正常代謝途徑受到一定影響后所產(chǎn)生的特殊營養(yǎng)需求。微生物培養(yǎng)基以有機(jī)營養(yǎng)為主。與微生物的培養(yǎng)不同，MS培養(yǎng)基則需提供大量無機(jī)營養(yǎng)，無機(jī)鹽混合物包括植物生長必須的大量元素和微量元素兩大類。討論：你能說出各種營養(yǎng)物質(zhì)的作用嗎？同專題2中微生物培養(yǎng)基的153、激素的影響

在配置好的MS培養(yǎng)基中，常常需要添加植物激素，最常用的是生長素和細(xì)胞分裂素。它們是啟動(dòng)細(xì)胞分裂、脫分化和再分化的關(guān)鍵因素。生長素的作用：促進(jìn)細(xì)胞伸長。細(xì)胞分裂素的作用：促進(jìn)細(xì)胞的分裂、生長和發(fā)育。1)按照不同的順序使用這兩類激素，會(huì)得到不同的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。3、激素的影響

在配置好的MS培養(yǎng)基中，常162)當(dāng)同時(shí)使用這兩類激素時(shí)，兩者用量的比例影響植物細(xì)胞的發(fā)育方向（課本P33）所以植物激素的濃度、使用的先后順序以及用量的比例等都會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

注意:不是所有外植體都需要植物激素，菊花嫩枝的組織培養(yǎng)比較容易，因此不必添加植物激素。2)當(dāng)同時(shí)使用這兩類激素時(shí)，兩者用量的比例影響植物細(xì)胞的發(fā)育174、消毒和滅菌對(duì)植物組織培養(yǎng)的影響

如外植體的消毒、器械的滅菌不徹底會(huì)導(dǎo)致整個(gè)實(shí)驗(yàn)前功盡棄。5、其它因素的影響

PH

5.8左右

溫度

18~22℃

光照

一般前14d進(jìn)行暗培養(yǎng)，形成愈傷組織后進(jìn)行光照，因?yàn)槿~片中的葉綠素只有在有光照的條件下才能形成，一般光照12h/d。4、消毒和滅菌對(duì)植物組織培養(yǎng)的影響18植物組織培養(yǎng)過程:離體組織或細(xì)胞植物體脫分化細(xì)胞分裂素≈生長素愈傷組織芽根細(xì)胞分裂素>生長素細(xì)胞分裂素<生長素再分化植物細(xì)胞培養(yǎng)不需要光需要光植物組織培養(yǎng)過程:離體組織或細(xì)胞植物體脫分化細(xì)胞分裂素≈生長19影響植物組織培養(yǎng)的因素材料的種類、年齡及保存時(shí)間長短等營養(yǎng)植物激素消毒和滅菌PH、溫度、光照等條件影響植物組織培養(yǎng)的因素材料的種類、年齡及保存時(shí)間長短等20五、實(shí)驗(yàn)操作1、植物組織培養(yǎng)的操作流程制備MS固體培養(yǎng)基外植體的消毒接種培養(yǎng)移栽栽培五、實(shí)驗(yàn)操作212、各步具體操作及注意事項(xiàng)（1）MS固體培養(yǎng)基的配制1）配制各種母液（為什么？）①無機(jī)物中大量元素濃縮10倍，微量元素濃縮100倍，常溫保存②激素類、維生素類以及用量較小的有機(jī)物一般可按1mg/ml的質(zhì)量濃度單獨(dú)配制成母液③用母液配制培養(yǎng)基時(shí)，需要根據(jù)各種母液的濃縮倍數(shù)，計(jì)算用量菊花的組織培養(yǎng)-課件222）配制培養(yǎng)基①配制培養(yǎng)液②調(diào)PH③培養(yǎng)基的分裝分裝到錐形瓶中，每瓶分裝50ml或100ml，由于菊花的莖段的組織培養(yǎng)比較容易，因此不必添加植物激素3）滅菌分裝好的培養(yǎng)基連同其他器械一起進(jìn)行高壓蒸汽滅菌2）配制培養(yǎng)基231、選材：菊花莖段，取生長旺盛的嫩枝（2）外植體消毒2、消毒①流水沖洗菊花莖段用流水沖洗后可少許洗衣粉，用軟刷輕輕刷洗，刷洗后在流水下沖洗20min左右②酒精處理用無菌吸水紙吸干外植體表面的水分，放入體積分?jǐn)?shù)為70％的酒精中搖動(dòng)2－3次，持續(xù)6－7s，立即將外植體取出，在無菌水中清洗③消毒液處理取出后用無菌吸水紙吸干外植體表面的水分，放入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1％的氯化汞溶液中1－2min，取出后在無菌水中至少清洗3次，漂凈消毒液1、選材：菊花莖段，取生長旺盛的嫩枝（2）外植體消毒2、消毒24注意事項(xiàng)：

1.在消毒過程中，我們既要考慮藥劑的消毒效果，又要考慮外植體的耐受能力，不同藥劑不同植物材料甚至不同器官要區(qū)別對(duì)待。

2.外植體滅菌用過的有毒藥品要妥善處理（氯化汞）以免引起環(huán)境污染。一般收集后統(tǒng)一交給有關(guān)專業(yè)部門處理。注意事項(xiàng)：25思考題：為什么要對(duì)外植體進(jìn)行一系列的消毒？對(duì)外植體的消毒需要注意什么？外植體材料的體積小抗性很差，剛?cè)』貋淼耐庵搀w帶有很多微生物，如果不進(jìn)行一系列的消毒，這些微生物就會(huì)與外植體競爭營養(yǎng)物質(zhì)，同時(shí)會(huì)產(chǎn)生一些有害物質(zhì)，因此要對(duì)外植體進(jìn)行一系列的消毒。 對(duì)外植體的消毒既要考慮藥劑的消毒效果，又要考慮外植體的耐受能力。思考題：26（3）接種污染的主要來源是空氣中的細(xì)菌和孢子，接種室消毒是至關(guān)重要的。接種前用70％的酒精噴霧使空氣消毒，用70％酒精或新潔爾滅擦拭一遍工作臺(tái)并用紫外線照射20分鐘。工作臺(tái)消毒后，首先點(diǎn)燃酒精燈。1、接種室消毒2、無菌操作要求所有操作都要在酒精燈火焰旁完成，每次使用器械后，都需要用火焰灼燒滅菌，接種后立即蓋好瓶蓋。3、材料的切取和接種（課本P34頁）（3）接種污染的主要來源是空氣中的細(xì)菌和孢子，接種室消毒是至27菊花的組織培養(yǎng)-課件284、接種注意事項(xiàng)①每接種一塊外植體前，鑷子需放入體積分?jǐn)?shù)為70％的酒精溶液中消毒一次，然后在酒精燈火焰上燒一遍，冷卻后再接種②外植體在培養(yǎng)基中要分布均勻，放置外植體數(shù)量根據(jù)錐形瓶的大小確定，一般胡蘿卜3－4塊，菊的莖或葉6－8塊，也不要太少，以充分利用培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分和光照條件③插入時(shí)應(yīng)注意方向，外植體的形態(tài)學(xué)上端朝上，不要倒插。4、接種注意事項(xiàng)①每接種一塊外植體前，鑷子需放入體積分?jǐn)?shù)為7294.培養(yǎng)： 1.將接種后的錐形瓶及對(duì)照組放在無菌培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，并且定期消毒，溫度控制在18~22℃，前14天進(jìn)行暗培養(yǎng)，愈傷組織形成后每天光照12h，愈傷組織為乳白色或黃色的瘤狀 2.愈傷組織形成后，更換培養(yǎng)基進(jìn)行叢芽培養(yǎng) 3.再更換培養(yǎng)基進(jìn)行生根培養(yǎng)就能得到完整的植株。4.培養(yǎng)：30思考題：1.為什么愈傷組織形成后需要光照？答：愈傷組織形成后進(jìn)行叢芽培養(yǎng),培養(yǎng)中會(huì)形成葉片，而葉片中葉綠素的形成需要光照。2.為什么植物組織培養(yǎng)過程中需要更換培養(yǎng)基？答：愈傷組織形成后培養(yǎng)基中的營養(yǎng)也幾乎耗盡，生根培養(yǎng)和叢芽培養(yǎng)所需的激素的量或比例也不一樣，因此需要更換培養(yǎng)基。菊花的組織培養(yǎng)-課件315.移栽：

移栽生根的菊花試管苗之前，應(yīng)先打開培養(yǎng)瓶的封口膜，讓試管苗在培養(yǎng)間生長幾日1、打開封口膜2、清洗轉(zhuǎn)移

用流水清洗根部的培養(yǎng)基，將幼苗移植到消過毒的蛭石或珍珠巖等環(huán)境下生活一段時(shí)間3、移栽幼苗長壯后，移栽到土壤中注意事項(xiàng)：移栽過程中既要充分清洗根系表面的培養(yǎng)基，又不能傷及根系。5.移栽：移栽生根的菊花試管苗之前，應(yīng)先打開培養(yǎng)瓶的326.栽培：將幼苗移栽后每天觀察并記錄幼苗生長情況，適時(shí)澆水，施肥，直至開花。6.栽培：將幼苗移栽后每天觀察并記錄幼苗生長情況，適時(shí)澆水，33正常苗污染苗正常苗污染苗341、外植體帶菌2、培養(yǎng)基及接種器具滅菌不徹底3、接種操作時(shí)帶入4、環(huán)境不清潔污染途徑1、外植體帶菌2、培養(yǎng)基及接種器具滅菌不徹底3、接種操作時(shí)帶35思考：植物組織培養(yǎng)的整個(gè)操作過程中如何實(shí)現(xiàn)無菌環(huán)境？

（1）器械及培養(yǎng)基的滅菌（高壓蒸汽滅菌）（2）外植體的消毒（70%酒精、0.1%氯化汞）（3）接種的無菌操作（酒精、酒精燈、灼燒）（4）無菌培養(yǎng)箱中培養(yǎng)（5）移栽到消毒的環(huán)境中生存一段時(shí)間菊花的組織培養(yǎng)-課件36思考：你打算做幾組重復(fù)？你打算設(shè)置對(duì)照實(shí)驗(yàn)嗎？答：每種材料或配方至少要做一組以上的重復(fù)。設(shè)置對(duì)照實(shí)驗(yàn)可以取用一個(gè)經(jīng)過滅菌的裝有培養(yǎng)基的錐形瓶，與接種操作后的錐形瓶一同培養(yǎng)，用以說明培養(yǎng)基制作合格，沒有被雜菌污染。思考：你打算做幾組重復(fù)？你打算設(shè)置對(duì)照實(shí)驗(yàn)嗎？答：每種材料或37三、課題延伸1、一般來說，容易進(jìn)行無性繁殖的植物，也容易進(jìn)行組織培養(yǎng)2、實(shí)例：蘆薈、豆瓣綠、秋海棠、月季三、課題延伸1、一般來說，容易進(jìn)行無性繁殖的植物，也容易進(jìn)行38課題延伸（略）練習(xí)1.答：植物組織培養(yǎng)所利用的植物材料體積小、抗性差，對(duì)培養(yǎng)條件的要求較高。用于植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基同樣適合于某些微生物的生長，如一些細(xì)菌、真菌等的生長。而培養(yǎng)物一旦受到微生物的污染，就會(huì)導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)前功盡棄，因此要進(jìn)行嚴(yán)格的無菌操作。2.答：外植體的生理狀態(tài)是成功進(jìn)行組織培養(yǎng)的重要條件之一。生長旺盛的嫩枝生理狀況好，容易誘導(dǎo)脫分化和再分化。課題延伸（略）練習(xí)39通過初中的學(xué)習(xí)，我們已經(jīng)了解到大多綠色開花植物都是靠種子來繁殖的。那么，有沒有不用種子來培育植物的方法呢？組織培養(yǎng)營養(yǎng)繁殖扦插嫁接壓條

通過初中的學(xué)習(xí)，我們已經(jīng)了解到大多綠色開花植物40扦插嫁接壓條

扦插嫁接壓條41愈傷組織胚狀體1958，美國，斯圖爾德

植物組織培養(yǎng)離體回顧知識(shí)（二）愈傷組織胚狀體1958，美國，斯圖爾德離體回顧知識(shí)（二）42思考這個(gè)試驗(yàn)說明了動(dòng)物已經(jīng)分化的細(xì)胞核具有什么特性？高度分化的動(dòng)物體細(xì)胞的細(xì)胞核有發(fā)育成完整個(gè)體的潛能多利羊的誕生動(dòng)物細(xì)胞有沒有這種能力？思考這個(gè)試驗(yàn)說明了動(dòng)物已經(jīng)分化的細(xì)胞核具有什么特性？高度分化43已經(jīng)分化的細(xì)胞，仍然具有發(fā)育成完整個(gè)體的潛能。即細(xì)胞的全能性思考為什么已經(jīng)分化的細(xì)胞具有全能性呢？生物體的每一個(gè)細(xì)胞都是由同一個(gè)受精卵有絲分裂而來的，所以高度分化的細(xì)胞含有保持物種發(fā)育所需要的全套遺傳信息植物組織培養(yǎng)技術(shù)動(dòng)物的克隆技術(shù)已經(jīng)分化的細(xì)胞，仍然具有發(fā)育成完整個(gè)體的潛能。即細(xì)胞的全能性44一、植物組織培養(yǎng)的理論基礎(chǔ)（課本P32）當(dāng)植物細(xì)胞脫離了原來所在植物體的器官或組織而處于離體狀態(tài)時(shí)，在一定的營養(yǎng)物質(zhì)、激素和其他外界條件的作用下，就可能表現(xiàn)出全能性，發(fā)育成完整的植株。植物組織培養(yǎng)原理：植物細(xì)胞的全能性一、植物組織培養(yǎng)的理論基礎(chǔ)（課本P32）植物組織培養(yǎng)原理：植451、培育無病毒植株2、大規(guī)模培養(yǎng)愈傷組織（提取紫草素，治療燙傷和割傷的藥物以及染料和化妝品的原料）4、基因工程中亦需用到植物組織培養(yǎng)的方法（受體細(xì)胞為植物細(xì)胞）植物組織培養(yǎng)的應(yīng)用：

3、人工種子（解決有些作物品種繁殖能力差，結(jié)子困難或發(fā)芽率低等問題）1、培育無病毒植株2、大規(guī)模培養(yǎng)愈傷組織（提取紫草素，治療46菊花的組織培養(yǎng)菊花的組織培養(yǎng)47什么叫細(xì)胞分化？愈傷組織的細(xì)胞有什么特點(diǎn)？什么叫脫（去）分化、再分化？如何控制細(xì)胞的脫分化與去分化？

（閱讀32-33頁第一段解決下列問題）二、植物組織培養(yǎng)的基本過程什么叫細(xì)胞分化？（閱讀32-33頁第一段解決下列問題）二、植48愈傷組織愈傷組織49三、掌握幾個(gè)概念外植體:用于離體培養(yǎng)的植物器官或組織片段.細(xì)胞分化：植物的個(gè)體發(fā)育過程中，細(xì)胞在形態(tài)、結(jié)構(gòu)和生理功能上都會(huì)出現(xiàn)穩(wěn)定性的差異，形成這些差異的過程叫做細(xì)胞分化。愈傷組織：離體的植物組織或細(xì)胞，培養(yǎng)一段時(shí)間后，會(huì)通過細(xì)胞有絲分裂，形成愈傷組織。愈傷組織的細(xì)胞排列疏松而無規(guī)則，是一種高度液泡化的呈無定形狀態(tài)的薄壁細(xì)胞。脫分化（去分化）：由高度分化的植物組織或細(xì)胞產(chǎn)生愈傷組織的過程，稱為植物細(xì)胞的脫分化或者叫做去分化。再分化：脫分化產(chǎn)生的愈傷組織繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng)，又可以重新分化成根或芽等器官，這個(gè)過程叫做再分化。三、掌握幾個(gè)概念50二、植物組織培養(yǎng)的基本過程二、植物組織培養(yǎng)的基本過程51影響植物組織培養(yǎng)的因素1、外植體的影響1）不同的植物組織培養(yǎng)的難易程度差別很大，容易進(jìn)行無性繁殖的植物也容易進(jìn)行組織培養(yǎng)。2)同一種材料，材料的年齡，保存時(shí)間也有影響。幼齡、保存時(shí)間短的材料容易培養(yǎng)成功。

菊花的組織培養(yǎng)一般選擇未開花植株的莖上部新萌生的側(cè)枝，因?yàn)檫@種嫩枝生理狀態(tài)良好，易誘導(dǎo)脫分化和再分化。影響植物組織培養(yǎng)的因素522、營養(yǎng)因素的影響：MS培養(yǎng)基主要成分包括：

大量元素N、P、S、K、Ca、Mg等無機(jī)物

微量元素Fe、Mn、B、Zn、Mo、Cu、Co、I等有機(jī)物：甘氨酸、煙酸、肌醇、維生素、蔗糖等植物激素：生長素、細(xì)胞分裂素、赤霉素等2、營養(yǎng)因素的影響：53討論：你能說出各種營養(yǎng)物質(zhì)的作用嗎？同專題2中微生物培養(yǎng)基的配方相比，MS培養(yǎng)基的配方有哪些明顯的不同？（P83、84）答：微量元素和大量元素提供植物細(xì)胞生活所必需的無機(jī)鹽；蔗糖提供碳源，同時(shí)能夠維持細(xì)胞的滲透壓；甘氨酸、維生素等物質(zhì)主要是為了滿足離體植物細(xì)胞在正常代謝途徑受到一定影響后所產(chǎn)生的特殊營養(yǎng)需求。微生物培養(yǎng)基以有機(jī)營養(yǎng)為主。與微生物的培養(yǎng)不同，MS培養(yǎng)基則需提供大量無機(jī)營養(yǎng)，無機(jī)鹽混合物包括植物生長必須的大量元素和微量元素兩大類。討論：你能說出各種營養(yǎng)物質(zhì)的作用嗎？同專題2中微生物培養(yǎng)基的543、激素的影響

在配置好的MS培養(yǎng)基中，常常需要添加植物激素，最常用的是生長素和細(xì)胞分裂素。它們是啟動(dòng)細(xì)胞分裂、脫分化和再分化的關(guān)鍵因素。生長素的作用：促進(jìn)細(xì)胞伸長。細(xì)胞分裂素的作用：促進(jìn)細(xì)胞的分裂、生長和發(fā)育。1)按照不同的順序使用這兩類激素，會(huì)得到不同的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。3、激素的影響

在配置好的MS培養(yǎng)基中，常552)當(dāng)同時(shí)使用這兩類激素時(shí)，兩者用量的比例影響植物細(xì)胞的發(fā)育方向（課本P33）所以植物激素的濃度、使用的先后順序以及用量的比例等都會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

注意:不是所有外植體都需要植物激素，菊花嫩枝的組織培養(yǎng)比較容易，因此不必添加植物激素。2)當(dāng)同時(shí)使用這兩類激素時(shí)，兩者用量的比例影響植物細(xì)胞的發(fā)育564、消毒和滅菌對(duì)植物組織培養(yǎng)的影響

如外植體的消毒、器械的滅菌不徹底會(huì)導(dǎo)致整個(gè)實(shí)驗(yàn)前功盡棄。5、其它因素的影響

PH

5.8左右

溫度

18~22℃

光照

一般前14d進(jìn)行暗培養(yǎng)，形成愈傷組織后進(jìn)行光照，因?yàn)槿~片中的葉綠素只有在有光照的條件下才能形成，一般光照12h/d。4、消毒和滅菌對(duì)植物組織培養(yǎng)的影響57植物組織培養(yǎng)過程:離體組織或細(xì)胞植物體脫分化細(xì)胞分裂素≈生長素愈傷組織芽根細(xì)胞分裂素>生長素細(xì)胞分裂素<生長素再分化植物細(xì)胞培養(yǎng)不需要光需要光植物組織培養(yǎng)過程:離體組織或細(xì)胞植物體脫分化細(xì)胞分裂素≈生長58影響植物組織培養(yǎng)的因素材料的種類、年齡及保存時(shí)間長短等營養(yǎng)植物激素消毒和滅菌PH、溫度、光照等條件影響植物組織培養(yǎng)的因素材料的種類、年齡及保存時(shí)間長短等59五、實(shí)驗(yàn)操作1、植物組織培養(yǎng)的操作流程制備MS固體培養(yǎng)基外植體的消毒接種培養(yǎng)移栽栽培五、實(shí)驗(yàn)操作602、各步具體操作及注意事項(xiàng)（1）MS固體培養(yǎng)基的配制1）配制各種母液（為什么？）①無機(jī)物中大量元素濃縮10倍，微量元素濃縮100倍，常溫保存②激素類、維生素類以及用量較小的有機(jī)物一般可按1mg/ml的質(zhì)量濃度單獨(dú)配制成母液③用母液配制培養(yǎng)基時(shí)，需要根據(jù)各種母液的濃縮倍數(shù)，計(jì)算用量菊花的組織培養(yǎng)-課件612）配制培養(yǎng)基①配制培養(yǎng)液②調(diào)PH③培養(yǎng)基的分裝分裝到錐形瓶中，每瓶分裝50ml或100ml，由于菊花的莖段的組織培養(yǎng)比較容易，因此不必添加植物激素3）滅菌分裝好的培養(yǎng)基連同其他器械一起進(jìn)行高壓蒸汽滅菌2）配制培養(yǎng)基621、選材：菊花莖段，取生長旺盛的嫩枝（2）外植體消毒2、消毒①流水沖洗菊花莖段用流水沖洗后可少許洗衣粉，用軟刷輕輕刷洗，刷洗后在流水下沖洗20min左右②酒精處理用無菌吸水紙吸干外植體表面的水分，放入體積分?jǐn)?shù)為70％的酒精中搖動(dòng)2－3次，持續(xù)6－7s，立即將外植體取出，在無菌水中清洗③消毒液處理取出后用無菌吸水紙吸干外植體表面的水分，放入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1％的氯化汞溶液中1－2min，取出后在無菌水中至少清洗3次，漂凈消毒液1、選材：菊花莖段，取生長旺盛的嫩枝（2）外植體消毒2、消毒63注意事項(xiàng)：

1.在消毒過程中，我們既要考慮藥劑的消毒效果，又要考慮外植體的耐受能力，不同藥劑不同植物材料甚至不同器官要區(qū)別對(duì)待。

2.外植體滅菌用過的有毒藥品要妥善處理（氯化汞）以免引起環(huán)境污染。一般收集后統(tǒng)一交給有關(guān)專業(yè)部門處理。注意事項(xiàng)：64思考題：為什么要對(duì)外植體進(jìn)行一系列的消毒？對(duì)外植體的消毒需要注意什么？外植體材料的體積小抗性很差，剛?cè)』貋淼耐庵搀w帶有很多微生物，如果不進(jìn)行一系列的消毒，這些微生物就會(huì)與外植體競爭營養(yǎng)物質(zhì)，同時(shí)會(huì)產(chǎn)生一些有害物質(zhì)，因此要對(duì)外植體進(jìn)行一系列的消毒。 對(duì)外植體的消毒既要考慮藥劑的消毒效果，又要考慮外植體的耐受能力。思考題：65（3）接種污染的主要來源是空氣中的細(xì)菌和孢子，接種室消毒是至關(guān)重要的。接種前用70％的酒精噴霧使空氣消毒，用70％酒精或新潔爾滅擦拭一遍工作臺(tái)并用紫外線照射20分鐘。工作臺(tái)消毒后，首先點(diǎn)燃酒精燈。1、接種室消毒2、無菌操作要求所有操作都要在酒精燈火焰旁完成，每次使用器械后，都需要用火焰灼燒滅菌，接種后立即蓋好瓶蓋。3、材料的切取和接種（課本P34頁）（3）接種污染的主要來源是空氣中的細(xì)菌和孢子，接種室消毒是至66菊花的組織培養(yǎng)-課件674、接種注意事項(xiàng)①每接種一塊外植體前，鑷子需放入體積分?jǐn)?shù)為70％的酒精溶液中消毒一次，然后在酒精燈火焰上燒一遍，冷卻后再接種②外植體在培養(yǎng)基中要分布均勻，放置外植體數(shù)量根據(jù)錐形瓶的大小確定，一般胡蘿卜3－4塊，菊的莖或葉6－8塊，也不要太少，以充分利用培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分和光照條件③插入時(shí)應(yīng)注意方向，外植體的形態(tài)學(xué)上端朝上，不要倒插。4、接種注意事項(xiàng)①每接種一塊外植體前，鑷子需放入體積分?jǐn)?shù)為7684.培養(yǎng)： 1.將接種后的錐形瓶及對(duì)照組放在無菌培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，并且定期消毒，溫度控制在18~22℃，前14天進(jìn)行暗培養(yǎng)，愈傷組織形成后每天光照12h，愈傷組織為乳白色或黃色的瘤狀 2.愈傷組織形成后，更換培養(yǎng)基進(jìn)行叢芽培養(yǎng) 3.再更換培養(yǎng)基進(jìn)行生根培養(yǎng)就能得到完整的植株。4.培養(yǎng)：69思考題：1.為什么愈傷組織形成后需要光照？答：愈傷組織形成后進(jìn)行叢芽培養(yǎng),培養(yǎng)中會(huì)形成