組化和免疫組化染色結(jié)果定量測定課件

第十四章.組化和免疫組化染色結(jié)果的定量測定(TheQuantitationAssayofHistochemistryImmunohistochemistryStaining)將組化,免疫組化和原位雜交等的染色結(jié)果分析提高到定量水平.最常用的有圖像分析術(shù)(mageanalysistechnique),顯微分光光度術(shù)(Microspectrophotomettechnique),流式細胞術(shù),(Techniqueofflowcytometry,FcM)和激光掃描共聚焦顯微鏡術(shù)Techniqueoflaserscanningconfocalmicroscopy,LSCM)f第十四章.組化和免疫組化染色結(jié)果的定量測定1.圖像分析術(shù)A.目測半定量:依據(jù)反應產(chǎn)物的面積和顏色深淺,主觀性大B.圖像分析儀(mageanalyzer:又稱圖像分析系統(tǒng)1.主要結(jié)構(gòu)和工作原理:a.顯微鏡:獲取染色結(jié)果的光學信息.b.圖像輸入裝置:攝像機或掃描器,將光學信息輸入電腦c.電腦:將光學信息轉(zhuǎn)換成電子信息將光學信號的灰度分為256級可發(fā)現(xiàn)染色深淺的微小差別彩色有兩種:真彩色(Realcolo)是指標本染色的真實顏色,而假彩色(Pseudocolor是指將不同灰度轉(zhuǎn)換成不同的顏色以增強對比度d.輸出裝置:顯示器或打印機等給出圖象表面幾何形狀測量(體積面積表面積長度等和圖象密度測量(數(shù)目)等客觀數(shù)據(jù).圖像分析術(shù)22.應用:定量給出組織細胞形態(tài)的幾何參數(shù)和組織結(jié)構(gòu)(包括宏觀和微觀)的特征性參數(shù),從平面測量推算到空間參數(shù)和組織結(jié)構(gòu)的三維圖像重建3注意事項加c9a.照片高質(zhì)量高倍對照組照片的放大倍數(shù)應相同b復染會影響灰度值的準確性.c.必要時要進行圖像的加工處理,如陽性區(qū)選擇和圖像切割2.應用:定量給出組織細3左側(cè)睪丸和附睪體部精子結(jié)合抗原蛋白異構(gòu)體11(SPAG11日免疫組化染色西安交通大學醫(yī)學院解剖與組胚專業(yè)博士生田宏2019左側(cè)睪丸:A左側(cè)假手術(shù)對照組;B.精索靜脈曲張(ELV)2周組周;C.ELV4周附睪體部:D左側(cè)假手術(shù)對照組;E.ELV2周;FELV4周左側(cè)睪丸和附睪體部精子結(jié)合抗原蛋白異構(gòu)體11(SPAG11日4TestisEpidydimisControl10392±2.291181727210082±2.5512385±1.26Controln55551155512.279844+3.13127.35±0.76ELV大鼠睪丸和附睪SPAG11E免疫組化灰度值測定結(jié)果睪丸:ELV2周和4周組SPAG1E蛋白的平均灰度值與其相應的對照組比較未見明顯改變(P>0.05附睪:ELV2周和4周組SPAG11E蛋白的表達均較同期對照組顯著減弱(P<0.05或P≤0.01),ELV4周組附睪SPAG11E蛋白的表達較ELV2周組顯著減弱(P<0.01)Testis5組化和免疫組化染色結(jié)果定量測定課件6組化和免疫組化染色結(jié)果定量測定課件7組化和免疫組化染色結(jié)果定量測定課件8組化和免疫組化染色結(jié)果定量測定課件9組化和免疫組化染色結(jié)果定量測定課件10組化和免疫組化染色結(jié)果定量測定課件11組化和免疫組化染色結(jié)果定量測定課件12組化和免疫組化染色結(jié)果定量測定課件13組化和免疫組化染色結(jié)果定量測定課件14組化和免疫組化染色結(jié)果定量測定課件15組化和免疫組化染色結(jié)果定量測定課件16組化和免疫組化染色結(jié)果定量測定課件17組化和免疫組化染色結(jié)果定量測定課件18組化和免疫組化染色結(jié)果定量測定課件19組化和免疫組化染色結(jié)果定量測定課件20組化和免疫組化染色結(jié)果定量測定課件21組化和免疫組化染色結(jié)果定量測定課件22組化和免疫組化染色結(jié)果定量測定課件23組化和免疫組化染色結(jié)果定量測定課件24組化和免疫組化染色結(jié)果定量測定課件25第十四章.組化和免疫組化染色結(jié)果的定量測定(TheQuantitationAssayofHistochemistryImmunohistochemistryStaining)將組化,免疫組化和原位雜交等的染色結(jié)果分析提高到定量水平.最常用的有圖像分析術(shù)(mageanalysistechnique),顯微分光光度術(shù)(Microspectrophotomettechnique),流式細胞術(shù),(Techniqueofflowcytometry,FcM)和激光掃描共聚焦顯微鏡術(shù)Techniqueoflaserscanningconfocalmicroscopy,LSCM)f第十四章.組化和免疫組化染色結(jié)果的定量測定26.圖像分析術(shù)A.目測半定量:依據(jù)反應產(chǎn)物的面積和顏色深淺,主觀性大B.圖像分析儀(mageanalyzer:又稱圖像分析系統(tǒng)1.主要結(jié)構(gòu)和工作原理:a.顯微鏡:獲取染色結(jié)果的光學信息.b.圖像輸入裝置:攝像機或掃描器,將光學信息輸入電腦c.電腦:將光學信息轉(zhuǎn)換成電子信息將光學信號的灰度分為256級可發(fā)現(xiàn)染色深淺的微小差別彩色有兩種:真彩色(Realcolo)是指標本染色的真實顏色,而假彩色(Pseudocolor是指將不同灰度轉(zhuǎn)換成不同的顏色以增強對比度d.輸出裝置:顯示器或打印機等給出圖象表面幾何形狀測量(體積面積表面積長度等和圖象密度測量(數(shù)目)等客觀數(shù)據(jù).圖像分析術(shù)272.應用:定量給出組織細胞形態(tài)的幾何參數(shù)和組織結(jié)構(gòu)(包括宏觀和微觀)的特征性參數(shù),從平面測量推算到空間參數(shù)和組織結(jié)構(gòu)的三維圖像重建3注意事項加c9a.照片高質(zhì)量高倍對照組照片的放大倍數(shù)應相同b復染會影響灰度值的準確性.c.必要時要進行圖像的加工處理,如陽性區(qū)選擇和圖像切割2.應用:定量給出組織細28左側(cè)睪丸和附睪體部精子結(jié)合抗原蛋白異構(gòu)體11(SPAG11日免疫組化染色西安交通大學醫(yī)學院解剖與組胚專業(yè)博士生田宏2019左側(cè)睪丸:A左側(cè)假手術(shù)對照組;B.精索靜脈曲張(ELV)2周組周;C.ELV4周附睪體部:D左側(cè)假手術(shù)對照組;E.ELV2周;FELV4周左側(cè)睪丸和附睪體部精子結(jié)合抗原蛋白異構(gòu)體11(SPAG11日29TestisEpidydimisControl10392±2.291181727210082±2.5512385±1.26Controln55551155512.279844+3.13127.35±0.76ELV大鼠睪丸和附睪SPAG11E免疫組化灰度值測定結(jié)果睪丸:ELV2周和4周組SPAG1E蛋白的平均灰度值與其相應的對照組比較未見明顯改變(P>0.05附睪:ELV2周和4周組SPAG11E蛋白的表達均較同期對照組顯著減弱(P<0.05或P≤0.01),ELV4周組附睪SPAG11E蛋白的表達較ELV2周組顯著減弱(P<0.01)Testis30組化和免疫組化染色結(jié)果定量測定課件31組化和免疫組化染色結(jié)果定量測定課件32組化和免疫組化染色結(jié)果定量測定課件33組化和免疫組化染色結(jié)果定量測定課件34組化和免疫組化染色結(jié)果定量測定課件35組化和免疫組化染色結(jié)果定量測定課件36組化和免疫組化染色結(jié)果定量測定課件37組化和免疫組化染色結(jié)果定量測定課件38組化和免疫組化染色結(jié)果定量測定課件39組化和免疫組化染色結(jié)果定量測定課件40組化和免疫組化染色結(jié)果定量測定課件41組化和免疫組化染色結(jié)果定量測定課件42