分離以尿素為氮源的微生物3-浙科版課件

實(shí)驗(yàn)2分離以尿素為氮源的微生物實(shí)驗(yàn)2分離以尿素為氮任務(wù)1：怎么從土壤中分離出能分解尿素并將其作為氮源的微生物呢？利用以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基進(jìn)行篩選。任務(wù)1：怎么從土壤中分離出能分解尿素并將其作為氮源的微生物呢（1）將土壤中的固氮菌分離出來(lái)（2）將土壤中自養(yǎng)微生物分離出來(lái)舉一反三（3）篩選出抗青霉素的微生物（4）篩選出耐高濃度食鹽的微生物……（1）將土壤中的固氮菌分離出來(lái)（2）將土壤中自養(yǎng)微生物分離出配制培養(yǎng)基尿素培養(yǎng)基25ml

葡萄糖0.025gNaCl0.12gK2HPO40.12g水15ml

尿素

10ml

功能上是選擇培養(yǎng)基瓊脂是未被純化的混合物,內(nèi)含一定量的含氮化合物瓊脂糖不含氮元素，但有固化作用。物理性質(zhì)（形態(tài)）上是固體培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基：在微生物學(xué)中，將允許特定種類的微生物生長(zhǎng)，同時(shí)抑制和阻止其他種類微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基，稱作選擇培養(yǎng)基。

配制培養(yǎng)基尿素培養(yǎng)基25ml功能上是選擇培養(yǎng)基瓊脂是未被純化配制培養(yǎng)基尿素培養(yǎng)基25ml

葡萄糖0.025gNaCl0.12gK2HPO40.12g水15ml

尿素10ml

瓊脂糖

0.5g瓊脂是未被純化的混合物,內(nèi)含一定量的含氮化合物瓊脂糖不含氮元素，但有固化作用。配制培養(yǎng)基尿素培養(yǎng)基25ml瓊脂是未被純化的混合物,內(nèi)含一定1、通過什么方法可以判斷細(xì)菌確實(shí)能將尿素分解成氨。思考：方法：在以尿素作為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑,接種培養(yǎng)該細(xì)菌，若指示劑變紅，說明該種菌能將尿素分解成氨。尿素培養(yǎng)基葡萄糖0.025gNaCl0.12gK2HPO40.12g瓊脂糖0.5g酚紅

0.25g尿素10ml水15ml1、通過什么方法可以判斷細(xì)菌確實(shí)能將尿素分解成氨。思考：

細(xì)菌尿素NH3

中性堿性酚紅顏色：黃色

紅色(變色范圍

pH6.4-8.2)任務(wù)1：怎么從土壤中分離出它們呢？利用以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基進(jìn)行篩選。

2、要驗(yàn)證以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基對(duì)土壤中的細(xì)菌確實(shí)具有選擇作用，你該如何設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)。思考：2、要驗(yàn)證以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基思考：配制培養(yǎng)基尿素培養(yǎng)基

葡萄糖0.025gNaCl0.12gK2HPO40.12g

瓊脂糖0.5g

酚紅0.25g

尿素10mlLB培養(yǎng)基蛋白胨：0.25g

酵母粉：0.12gNaCl：0.25g

瓊脂糖：0.5g

對(duì)照組選擇培養(yǎng)基實(shí)驗(yàn)組配制培養(yǎng)基尿素培養(yǎng)基LB培養(yǎng)基對(duì)照組選擇培養(yǎng)基實(shí)驗(yàn)組二、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?

使用以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基分離細(xì)菌(有脲酶)

通過指示劑（酚紅）顏色的變化檢知培養(yǎng)基pH的變化(脲酶催化的化學(xué)反應(yīng))

統(tǒng)計(jì)被檢測(cè)的土壤中含有的以尿素為氮源的微生物的數(shù)量二、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?使用以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基分離細(xì)菌(有脲酶三、實(shí)驗(yàn)中涉及到的一些問題：（一）哪些土壤中含有這種以尿素為氮源的微生物多？（選材的問題）（二）此實(shí)驗(yàn)用到的選擇培養(yǎng)基必需含有哪些物質(zhì)？（三）可用什么指標(biāo)認(rèn)定不同土壤中選擇出的微生物對(duì)尿素分解能力的高低？（四）統(tǒng)計(jì)微生物的數(shù)量可用哪些方法？沒硬化，腐殖質(zhì)豐富的土壤碳源、尿素、無(wú)機(jī)鹽、水、酚紅培養(yǎng)基紅色的深淺和區(qū)域的大小稀釋涂布平板法，顯微鏡直接計(jì)數(shù)法三、實(shí)驗(yàn)中涉及到的一些問題：（一）哪些土壤中含有這種以尿素為三、實(shí)驗(yàn)中涉及到的一些問題：（五）用稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)時(shí)，菌落數(shù)在30-300計(jì)數(shù)。重復(fù)性原則對(duì)照原則（排除實(shí)驗(yàn)組中非測(cè)試因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，提高實(shí)驗(yàn)的可信度）做一系列濃度梯度實(shí)驗(yàn)，探究合適的稀釋度（六）實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)要遵循的原則：三、實(shí)驗(yàn)中涉及到的一些問題：（五）用稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)時(shí)，菌

過濾滅菌后的尿素過濾滅菌后的尿素（二）制備細(xì)菌懸液制備成10-2、10-3、10-4、10-5土壤稀釋液（二）制備細(xì)菌懸液配制菌懸液1個(gè)99ml無(wú)菌水2個(gè)4.5ml無(wú)菌水得10-2,10-3,10-4的菌懸液1g土壤配制菌懸液1個(gè)99ml無(wú)菌水2個(gè)4倒平板需要倒3個(gè)LB平板，9個(gè)尿素平板LB(對(duì)照)尿素10-310-410-5每個(gè)稀釋度1個(gè)LB對(duì)照平板

3個(gè)尿素平板(平行重復(fù)組)倒平板需要倒3個(gè)LB平板，9個(gè)尿素平板LB(對(duì)照)尿素10-接種取0.1ml菌懸液接種取0.1ml菌懸液涂布分離涂布分離涂布分離涂布分離分離以尿素為氮源的微生物3-浙科版課件37℃倒置培養(yǎng)按濃度捆成一摞恒溫37℃培養(yǎng)37℃倒置培養(yǎng)按濃度捆成一摞恒溫37℃培養(yǎng)10-4

、10-3,、10-210-4、10-3,、10-2利用血球計(jì)數(shù)板的缺點(diǎn):不能區(qū)分死菌與活菌不適于對(duì)運(yùn)動(dòng)的細(xì)菌計(jì)數(shù)需要相對(duì)高的細(xì)菌濃度個(gè)體小的細(xì)菌在顯微鏡底下難以觀察利用血球計(jì)數(shù)板的缺點(diǎn):不能區(qū)分死菌與活菌不適于對(duì)運(yùn)動(dòng)的細(xì)菌計(jì)練習(xí)題1、選擇培養(yǎng)基：在微生物學(xué)中，將允許

種類的微生物生長(zhǎng)，同時(shí)

和

其他種類微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基，稱作選擇培養(yǎng)基。

阻止

特定抑制2、常用稀釋涂布平板法來(lái)統(tǒng)計(jì)樣品中活菌的數(shù)目。當(dāng)樣品的

足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)

。通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌。為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在

的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。此外，測(cè)定微生物數(shù)量的常用方法還有

直接計(jì)數(shù)。顯微鏡

稀釋度細(xì)菌30-3003、在同一稀釋度下，至少對(duì)3個(gè)平板進(jìn)行重復(fù)計(jì)數(shù)，然后求出

，并根據(jù)平板所對(duì)應(yīng)的稀釋度計(jì)算出樣品中細(xì)菌的數(shù)目。平均數(shù)練習(xí)題1、選擇培養(yǎng)基：在微生物學(xué)中，將允許種類的微生4、用稀釋涂布平板法測(cè)定同一土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)，在對(duì)應(yīng)稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中．得到以下幾種統(tǒng)計(jì)結(jié)果，正確的是

A．涂布了一個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是230B．涂布了兩個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是215和260，取平均值238C．涂布了三個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是21、212和256，取平均值163D．涂布了三個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是2l0、240和250，取平均值233D

5.在做分離分解尿素的細(xì)菌實(shí)驗(yàn)時(shí)，A同學(xué)從對(duì)應(yīng)106培養(yǎng)基上篩選出大約150個(gè)菌落，而其他同學(xué)只選擇出大約50個(gè)菌落。A同學(xué)的結(jié)果產(chǎn)生原因可能有()①由于土樣不同②由于培養(yǎng)基污染③由于操作失誤④沒有設(shè)置對(duì)照

A．①②③B．②③④C．①③④D．①②④A

4、用稀釋涂布平板法測(cè)定同一土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)，在對(duì)應(yīng)稀釋倍夢(mèng)想的力量當(dāng)我充滿自信地，朝著夢(mèng)想的方向邁進(jìn)并且毫不畏懼地，過著我理想中的生活成功，會(huì)在不期然間忽然降臨！夢(mèng)想的力量當(dāng)我充滿自信地，朝著夢(mèng)想的方向邁進(jìn)并且毫不畏懼地，1、聰明出于勤奮，天才在于積累。2、三更燈火五更雞，正是男兒讀書時(shí)。黑發(fā)不知勤學(xué)早，白首方悔讀書遲。3、鳥欲高飛先振翅，人求上進(jìn)先讀書。4、勤學(xué)如春起之苗，不見其增，日有所長(zhǎng)；輟學(xué)如磨刀之石，不見其損，日有所虧。1、聰明出于勤奮，天才在于積累。實(shí)驗(yàn)2分離以尿素為氮源的微生物實(shí)驗(yàn)2分離以尿素為氮任務(wù)1：怎么從土壤中分離出能分解尿素并將其作為氮源的微生物呢？利用以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基進(jìn)行篩選。任務(wù)1：怎么從土壤中分離出能分解尿素并將其作為氮源的微生物呢（1）將土壤中的固氮菌分離出來(lái)（2）將土壤中自養(yǎng)微生物分離出來(lái)舉一反三（3）篩選出抗青霉素的微生物（4）篩選出耐高濃度食鹽的微生物……（1）將土壤中的固氮菌分離出來(lái)（2）將土壤中自養(yǎng)微生物分離出配制培養(yǎng)基尿素培養(yǎng)基25ml

葡萄糖0.025gNaCl0.12gK2HPO40.12g水15ml

尿素

10ml

功能上是選擇培養(yǎng)基瓊脂是未被純化的混合物,內(nèi)含一定量的含氮化合物瓊脂糖不含氮元素，但有固化作用。物理性質(zhì)（形態(tài)）上是固體培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基：在微生物學(xué)中，將允許特定種類的微生物生長(zhǎng)，同時(shí)抑制和阻止其他種類微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基，稱作選擇培養(yǎng)基。

配制培養(yǎng)基尿素培養(yǎng)基25ml功能上是選擇培養(yǎng)基瓊脂是未被純化配制培養(yǎng)基尿素培養(yǎng)基25ml

葡萄糖0.025gNaCl0.12gK2HPO40.12g水15ml

尿素10ml

瓊脂糖

0.5g瓊脂是未被純化的混合物,內(nèi)含一定量的含氮化合物瓊脂糖不含氮元素，但有固化作用。配制培養(yǎng)基尿素培養(yǎng)基25ml瓊脂是未被純化的混合物,內(nèi)含一定1、通過什么方法可以判斷細(xì)菌確實(shí)能將尿素分解成氨。思考：方法：在以尿素作為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑,接種培養(yǎng)該細(xì)菌，若指示劑變紅，說明該種菌能將尿素分解成氨。尿素培養(yǎng)基葡萄糖0.025gNaCl0.12gK2HPO40.12g瓊脂糖0.5g酚紅

0.25g尿素10ml水15ml1、通過什么方法可以判斷細(xì)菌確實(shí)能將尿素分解成氨。思考：

細(xì)菌尿素NH3

中性堿性酚紅顏色：黃色

紅色(變色范圍

pH6.4-8.2)任務(wù)1：怎么從土壤中分離出它們呢？利用以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基進(jìn)行篩選。

2、要驗(yàn)證以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基對(duì)土壤中的細(xì)菌確實(shí)具有選擇作用，你該如何設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)。思考：2、要驗(yàn)證以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基思考：配制培養(yǎng)基尿素培養(yǎng)基

葡萄糖0.025gNaCl0.12gK2HPO40.12g

瓊脂糖0.5g

酚紅0.25g

尿素10mlLB培養(yǎng)基蛋白胨：0.25g

酵母粉：0.12gNaCl：0.25g

瓊脂糖：0.5g

對(duì)照組選擇培養(yǎng)基實(shí)驗(yàn)組配制培養(yǎng)基尿素培養(yǎng)基LB培養(yǎng)基對(duì)照組選擇培養(yǎng)基實(shí)驗(yàn)組二、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?

使用以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基分離細(xì)菌(有脲酶)

通過指示劑（酚紅）顏色的變化檢知培養(yǎng)基pH的變化(脲酶催化的化學(xué)反應(yīng))

統(tǒng)計(jì)被檢測(cè)的土壤中含有的以尿素為氮源的微生物的數(shù)量二、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?使用以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基分離細(xì)菌(有脲酶三、實(shí)驗(yàn)中涉及到的一些問題：（一）哪些土壤中含有這種以尿素為氮源的微生物多？（選材的問題）（二）此實(shí)驗(yàn)用到的選擇培養(yǎng)基必需含有哪些物質(zhì)？（三）可用什么指標(biāo)認(rèn)定不同土壤中選擇出的微生物對(duì)尿素分解能力的高低？（四）統(tǒng)計(jì)微生物的數(shù)量可用哪些方法？沒硬化，腐殖質(zhì)豐富的土壤碳源、尿素、無(wú)機(jī)鹽、水、酚紅培養(yǎng)基紅色的深淺和區(qū)域的大小稀釋涂布平板法，顯微鏡直接計(jì)數(shù)法三、實(shí)驗(yàn)中涉及到的一些問題：（一）哪些土壤中含有這種以尿素為三、實(shí)驗(yàn)中涉及到的一些問題：（五）用稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)時(shí)，菌落數(shù)在30-300計(jì)數(shù)。重復(fù)性原則對(duì)照原則（排除實(shí)驗(yàn)組中非測(cè)試因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，提高實(shí)驗(yàn)的可信度）做一系列濃度梯度實(shí)驗(yàn)，探究合適的稀釋度（六）實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)要遵循的原則：三、實(shí)驗(yàn)中涉及到的一些問題：（五）用稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)時(shí)，菌

過濾滅菌后的尿素過濾滅菌后的尿素（二）制備細(xì)菌懸液制備成10-2、10-3、10-4、10-5土壤稀釋液（二）制備細(xì)菌懸液配制菌懸液1個(gè)99ml無(wú)菌水2個(gè)4.5ml無(wú)菌水得10-2,10-3,10-4的菌懸液1g土壤配制菌懸液1個(gè)99ml無(wú)菌水2個(gè)4倒平板需要倒3個(gè)LB平板，9個(gè)尿素平板LB(對(duì)照)尿素10-310-410-5每個(gè)稀釋度1個(gè)LB對(duì)照平板

3個(gè)尿素平板(平行重復(fù)組)倒平板需要倒3個(gè)LB平板，9個(gè)尿素平板LB(對(duì)照)尿素10-接種取0.1ml菌懸液接種取0.1ml菌懸液涂布分離涂布分離涂布分離涂布分離分離以尿素為氮源的微生物3-浙科版課件37℃倒置培養(yǎng)按濃度捆成一摞恒溫37℃培養(yǎng)37℃倒置培養(yǎng)按濃度捆成一摞恒溫37℃培養(yǎng)10-4

、10-3,、10-210-4、10-3,、10-2利用血球計(jì)數(shù)板的缺點(diǎn):不能區(qū)分死菌與活菌不適于對(duì)運(yùn)動(dòng)的細(xì)菌計(jì)數(shù)需要相對(duì)高的細(xì)菌濃度個(gè)體小的細(xì)菌在顯微鏡底下難以觀察利用血球計(jì)數(shù)板的缺點(diǎn):不能區(qū)分死菌與活菌不適于對(duì)運(yùn)動(dòng)的細(xì)菌計(jì)練習(xí)題1、選擇培養(yǎng)基：在微生物學(xué)中，將允許

種類的微生物生長(zhǎng)，同時(shí)

和

其他種類微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基，稱作選擇培養(yǎng)基。

阻止

特定抑制2、常用稀釋涂布平板法來(lái)統(tǒng)計(jì)樣品中活菌的數(shù)目。當(dāng)樣品的

足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)

。通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌。為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在

的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。此外，測(cè)定微生物數(shù)量的常用方法還有

直接計(jì)數(shù)。顯微鏡

稀