海參鈣離子通道基因的克隆與性質(zhì)分析課件

研究生：楊冠科指導(dǎo)教師：叢麗娜教授海參鈣離子通道基因的克隆與性質(zhì)分析研究生：楊冠科海參鈣離子通道基因的克隆與性質(zhì)分析1海參鈣離子通道簡介論文的主要工作內(nèi)容結(jié)論與展望②①③海參鈣離子通道簡介論文的主要工作內(nèi)容結(jié)論與展望②①③2海參（SeaCucumber）海參（SeaCucumber）3海參自溶現(xiàn)象，困擾生產(chǎn)商多年養(yǎng)殖過程中遇到的諸多問題，持續(xù)出現(xiàn)傳統(tǒng)的理論解釋和研究方法不能滿足生產(chǎn)和科研的需要。關(guān)鍵問題-------海洋的高鹽濃度及高壓環(huán)境鹽離子濃度離子通道海參自溶現(xiàn)象，困擾生產(chǎn)商多年4離子通道（IonChannel）離子通道（IonChannel）5鈣離子通道鈣離子通道6本文用分子生物學(xué)手段對海參體內(nèi)的鈣離子通道β亞基基因進(jìn)行了研究用生物信息學(xué)手段對所得到的該基因全序列進(jìn)行了性質(zhì)分析本文用分子生物學(xué)手段對海參體內(nèi)的鈣離子通道β亞基基因進(jìn)行了研7論文的主要工作內(nèi)容總RNA的提取利用設(shè)計的簡并引物進(jìn)行RT-PCR設(shè)計引物，進(jìn)行3'RACEPCR設(shè)計引物，進(jìn)行5'RACEPCR拼接全序列并進(jìn)行生物信息學(xué)分析論文的主要工作內(nèi)容總RNA的提取8總RNA的提取TRIzol法總RNA的提取TRIzol法9RT-PCR簡并引物的設(shè)計

為了設(shè)計簡并引物，我們比對了如下物種鈣離子通道β亞基的氨基酸序列：

合浦珠母貝(Pinctadafucata,GenBankaccessionnumber:EF154452)

紫色球海膽（Strongylocentrotuspurpuratus,GenBankaccessionnumber:XM_785360）

錐實螺(Lymnaeastagnalis,GenBankaccessionnumber:AF484087)

人(Homosapiens,GenBankaccessionnumber:BC075049)

秀麗隱桿線蟲(Caenorhabditiselegans,GenBankaccessionnumber:AF000198)

牛（BosTaurus,GenBankaccessionnumber:AF174417）

曼森血吸蟲(Schistosomamansoni,GenBankaccessionnumber:AY277532)目的：擴(kuò)增海參的鈣離子通道β亞基的保守區(qū)RT-PCR簡并引物的設(shè)計為了設(shè)計簡并引物，我們比對10海參鈣離子通道基因的克隆與性質(zhì)分析課件11最終引物HS4-1:5′-ARYAATGAYTGGTGGAT-3′HS4-2:5′-GCYTTYTGCATCATRTCT-3′注：R=A/GY=C/T最終引物HS4-1:5′-ARYAATGAYTGGTGG12RT-PCR結(jié)果

RT-PCR結(jié)果13二次PCR結(jié)果二次PCR結(jié)果14RT-PCR割膠回收及菌落PCR結(jié)果割膠回收產(chǎn)物電泳圖菌落PCR產(chǎn)物電泳圖RT-PCR割膠回收及菌落PCR結(jié)果割膠回收產(chǎn)物電泳圖菌落P15SjCaβ保守區(qū)測序結(jié)果443bpSjCaβ保守區(qū)測序結(jié)果443bp16SjCaβ保守區(qū)的BLASTXSjCaβ保守區(qū)的BLASTX17長度為443bp的產(chǎn)物5‘RACE實驗3‘RACE實驗拼接SjCaβ全序列長度為443bp的產(chǎn)物5‘RACE實驗3‘RACE實驗183′RACE引物設(shè)計3′RACEOuterPrimer:5′-TACCGTCGTTCCACTAGTGATTT-3′HS4-1-GSP1(OuterPrimer):5′-TTCACCCTGGCTAACTCACG-3′3′RACEInnerPrimer:5′-CGCGGATCCTCCACTAGTGATTTCACTATAGG-3’HS4-1-GSP2(InnerPrimer):5′-GAATCGCTACGGAGAACGAAAAGTG-3′使用試劑盒：3′-FullRACECoreSetVer.2.0（TaKaRa）

3′RACE引物設(shè)計3′RACEOuterPrim193'RACEPCR結(jié)果

3’OuterPCR3’InnerPCR3'RACEPCR結(jié)果

3’OuterPCR3’Inn203’RACE割膠回收及菌落PCR結(jié)果割膠回收產(chǎn)物電泳圖菌落PCR產(chǎn)物電泳圖3’RACE割膠回收及菌落PCR結(jié)果割膠回收產(chǎn)物電泳圖菌落21SjCaβ3'RACE測序結(jié)果SjCaβ3'RACE測序結(jié)果22序列長為1019bp經(jīng)過序列比對得到此序列的5′端與SjCaβ序列保守區(qū)的3′端有188個堿基重合，且有poly(A)尾初步判斷3′端的擴(kuò)增是成功的序列長為1019bp235′RACE引物設(shè)計5′RACEOuterPrimer:5′-CATGGCTACATGCTGACAGCCTA-3′HS4-1-GSP3(OuterPrimer):5′-AGGCGGTGTGTTATCAGATTGCT-3′5′RACEInnerPrimer:5′-CGCGGATCCACAGCCTACTGATGATCAGTCGATG-3′HS4-1-GSP4(InnerPrimer):5′-GTGTCCCACTTTTCGTTCTCCGTAGC-3′使用試劑盒：5′-FullRACEKit（TaKaRa）

5′RACE引物設(shè)計5′RACEOuterPrim245'RACEPCR結(jié)果

5’InnerPCR5'RACEPCR結(jié)果

5’InnerPCR255’RACE割膠回收及菌落PCR結(jié)果割膠回收產(chǎn)物電泳圖菌落PCR產(chǎn)物電泳圖5’RACE割膠回收及菌落PCR結(jié)果割膠回收產(chǎn)物電泳圖菌落26SjCaβ5'RACE測序結(jié)果SjCaβ5'RACE測序結(jié)果27序列長為879bp經(jīng)過序列比對得到此序列的3′端與SjCaβ序列保守區(qū)的5′端有281個堿基重合因此可初步判斷5′端是擴(kuò)增成功的序列長為879bp28把上述三段序列拼接并校正后，得到SjCaβcDNA基因全長1867bp將該cDNA序列提交至GenBank（GenBankaccessionnumber:EU853658）把上述三段序列拼接并校正后，得到SjCaβcDNA基因全長29SjCaβ的生物信息學(xué)分析利用NCBI的ORFFinder分析，SjCaβ全長cDNA中，5′非編碼區(qū)（UTR）179bp，3′UTR74bp，開放閱讀框（ORF）長度1614bp，編碼537個氨基酸在3′端的非編碼區(qū)中，距離poly(A)尾上游10個核苷酸的位置有推測的真核生物基因的多聚腺苷酸加尾信號（polyadenylationsignalsite）AATAAA的出現(xiàn)SjCaβ的分子量預(yù)測值為59.8kD，理論等電點(diǎn)為8.77，分子式為C2583H4151N771O834S13Dipro軟件分析表明,在該氨基酸序列中共有3個半胱氨酸殘基，其中Cys410和Cys428之間可能會形成一個二硫鍵

SjCaβ的生物信息學(xué)分析利用NCBI的ORFFinder30ProtScale程序運(yùn)算的結(jié)果顯示：SjCaβ的第370位異亮氨酸（Ile）疏水性最強(qiáng)，第501位組氨酸（His）親水性最強(qiáng)，大部分氨基酸屬于親水性氨基酸（分?jǐn)?shù)為負(fù)值），由此可以推測此蛋白可能為親水性蛋白

ProtScale程序運(yùn)算的結(jié)果顯示：31海參鈣離子通道基因的克隆與性質(zhì)分析課件32海參鈣離子通道基因的克隆與性質(zhì)分析課件33SjCaβ包含有三個高度保守的功能區(qū)位于D4區(qū)的VDCCα亞基結(jié)合相關(guān)的BID區(qū)（Lys250~Phe290）位于D2區(qū)能夠調(diào)節(jié)激酶活性的SH3功能區(qū)（Val99~Ser159）位于D4區(qū)調(diào)節(jié)VDCCβ亞基活性的GK功能區(qū)（Arg265~Trp439）SjCaβ包含有三個高度保守的功能區(qū)34D1D2D2D3D3D4D4D4D5D5BIDSH3功能區(qū)GK功能區(qū)幾乎是整個D4區(qū)D1D2D2D3D3D4D4D4D5D5BIDSH3功能區(qū)G35SjCaβ內(nèi)的活性位點(diǎn)

9個蛋白激酶C（PKC）磷酸化位點(diǎn)ProteinkinaseC(PKC)phosphorylationsites9個酪蛋白激酶Ⅱ（CK2）磷酸化位點(diǎn)CaseinkinaseⅡ(CK2)phosphorylationsites2個cAMP依賴型蛋白激酶磷酸化位點(diǎn)cAMP-dependentproteinkinasephosphorylationsites

SjCaβ內(nèi)的活性位點(diǎn)9個蛋白激酶C（PKC）磷酸化位點(diǎn)36此圖模擬SjCaβ部分氨基酸（Glu77~His443）構(gòu)成的三級結(jié)構(gòu)。用箭頭指出了氨基酸殘基Pro262，Pro266，Pro272和Tyr277在此三維結(jié)構(gòu)中的位置（因其可能為β亞基與α1亞基重要的結(jié)合部位）。SjCaβ的SH3區(qū)和GK區(qū)均用白色表示。此圖模擬SjCaβ部分氨基酸（Glu77~His443）構(gòu)成37SjCaβ中GK區(qū)（Arg265~Trp439）的三級結(jié)構(gòu)預(yù)測。圖中BID區(qū)N端的序列用白色標(biāo)出。此模型顯示在這個重要的功能片段中是由一個中央β折疊和一個α螺旋組成。

SjCaβ中SH3區(qū)（Val99~Ser159）的三級結(jié)構(gòu)預(yù)測SjCaβ中GK區(qū)（Arg265~Trp439）的三級結(jié)構(gòu)預(yù)38討論SjCaβ具有其他VDCCβ亞基共有的SH3區(qū)，GK區(qū)以及BID區(qū)其他物種BID區(qū)中高度保守的序列PSMRP在SjCaβ中變成了PTIRP-------這段保守序列中重要的氨基酸是PKC磷酸化位點(diǎn)SMR中的絲氨酸，而TIR中的蘇氨酸也同樣是PKC磷酸化位點(diǎn)，且二者都是中性氨基酸，因此推測這種變化并不會造成SjCaβ與其他物種的VDCCβ亞基在功能的差異。曼森血吸蟲（Schistosomamansoni）、日本血吸蟲（Schistosomajaponicum）和長槍烏賊（Loligobleekeri）等無脊椎動物亦有此現(xiàn)象。討論SjCaβ具有其他VDCCβ亞基共有的SH3區(qū)，39結(jié)論首次從海參中克隆了電壓依賴性鈣離子通道β亞基基因的全長cDNA序列，并由此推測出相應(yīng)的氨基酸序列。所獲得基因的cDNA全長1867bp，包含一個開放閱讀框1614bp，編碼537個氨基酸。SjCaβ的分子量為59.8kD，理論等電點(diǎn)為8.77，分子式為C2583H4151N771O834S13。親水性蛋白。結(jié)論首次從海參中克隆了電壓依賴性鈣離子通道β亞基基因的40SjCaβ具有其他VDCCβ亞基共有的SH3區(qū)，GK區(qū)以及BID區(qū)，雖在氨基酸上略有不同，但其功能卻與其它的海洋棘皮動物比較相似。SjCaβ具有其他VDCCβ亞基共有的SH3區(qū)，GK區(qū)以及41致謝感謝叢麗娜教授、朱蓓薇教授、張宗申教授、侯英敏老師、王璐老師等老師的指導(dǎo)感謝鄢榮歆、王秀霞、郝明、趙文超、王雪霞、薛衛(wèi)巍、田鵬瑋、郭茵、邊蕾、謝三群等同學(xué)的幫助最后還要感謝一直支持著我的親朋好友！致謝感謝叢麗娜教授、朱蓓薇教授、張宗申教授、侯英敏老師42THANKYOU！THANKYOU！433’RACEPCR反應(yīng)5’3’mRNAAAAA…TTTT…TTTT…AAAA…TTTT…5’3’3’adaptorouterprimerPCR反應(yīng)雙鏈DNA直接測序已知序列特異性引物Gsp1Gsp23’adaptorprimerinnerprimer3’RACEPCR反應(yīng)5’3’mRNAAAAA…TTTT445’RACEPCR反應(yīng)5’m7G-P-P-PAAA…3’5’m7G-P-P-PAAA…3’AAA…3’TAPHO-P5’adaptorRTAAA…3’5’5’Gsp1已知序列特異性引物

5’outerprimermRNAcDNARandom9mers5’RACEPCR反應(yīng)5’m7G-P-P-PAAA…45使用5’RACE方法擴(kuò)增5‘端序列3‘完整的RNA不完整的RNA3‘3‘PP去磷酸化酶（CIAP）去“帽子”酶（TAP）P5’RACEAdaptor使用5’RACE方法擴(kuò)增5‘端序列3‘完整的RNA不46TAP(—)反應(yīng)：檢驗去磷酸化的反應(yīng)不徹底造成假陽性3‘完整的RNA不完整的RNA3‘3‘PP去磷酸化酶（CIAP）去“帽子”酶（TAP）5’RACEAdaptorTAP(—)反應(yīng)：檢驗去磷酸化的反應(yīng)不徹底造成假陽性3‘47M-MLV(—)反應(yīng)：檢測染色體DNA造成的假陽性3‘完整的RNA不完整的RNA3‘3‘PP反轉(zhuǎn)錄酶M-MLVP5’RACEAdaptorM-MLV(—)反應(yīng)：檢測染色體DNA造成的假陽性3‘48ProteinkinaseC（Ser/Thr-X-Lys/Arg）CaseinkinaseII（Ser/Thr-X-X-Asp/Glu）cAMP-dependentproteinkinase（Lys/Arg-Lys/Arg-X-X-Ser/Thr）ProteinkinaseC（Ser/Thr-X-49研究生：楊冠科指導(dǎo)教師：叢麗娜教授海參鈣離子通道基因的克隆與性質(zhì)分析研究生：楊冠科海參鈣離子通道基因的克隆與性質(zhì)分析50海參鈣離子通道簡介論文的主要工作內(nèi)容結(jié)論與展望②①③海參鈣離子通道簡介論文的主要工作內(nèi)容結(jié)論與展望②①③51海參（SeaCucumber）海參（SeaCucumber）52海參自溶現(xiàn)象，困擾生產(chǎn)商多年養(yǎng)殖過程中遇到的諸多問題，持續(xù)出現(xiàn)傳統(tǒng)的理論解釋和研究方法不能滿足生產(chǎn)和科研的需要。關(guān)鍵問題-------海洋的高鹽濃度及高壓環(huán)境鹽離子濃度離子通道海參自溶現(xiàn)象，困擾生產(chǎn)商多年53離子通道（IonChannel）離子通道（IonChannel）54鈣離子通道鈣離子通道55本文用分子生物學(xué)手段對海參體內(nèi)的鈣離子通道β亞基基因進(jìn)行了研究用生物信息學(xué)手段對所得到的該基因全序列進(jìn)行了性質(zhì)分析本文用分子生物學(xué)手段對海參體內(nèi)的鈣離子通道β亞基基因進(jìn)行了研56論文的主要工作內(nèi)容總RNA的提取利用設(shè)計的簡并引物進(jìn)行RT-PCR設(shè)計引物，進(jìn)行3'RACEPCR設(shè)計引物，進(jìn)行5'RACEPCR拼接全序列并進(jìn)行生物信息學(xué)分析論文的主要工作內(nèi)容總RNA的提取57總RNA的提取TRIzol法總RNA的提取TRIzol法58RT-PCR簡并引物的設(shè)計

為了設(shè)計簡并引物，我們比對了如下物種鈣離子通道β亞基的氨基酸序列：

合浦珠母貝(Pinctadafucata,GenBankaccessionnumber:EF154452)

紫色球海膽（Strongylocentrotuspurpuratus,GenBankaccessionnumber:XM_785360）

錐實螺(Lymnaeastagnalis,GenBankaccessionnumber:AF484087)

人(Homosapiens,GenBankaccessionnumber:BC075049)

秀麗隱桿線蟲(Caenorhabditiselegans,GenBankaccessionnumber:AF000198)

牛（BosTaurus,GenBankaccessionnumber:AF174417）

曼森血吸蟲(Schistosomamansoni,GenBankaccessionnumber:AY277532)目的：擴(kuò)增海參的鈣離子通道β亞基的保守區(qū)RT-PCR簡并引物的設(shè)計為了設(shè)計簡并引物，我們比對59海參鈣離子通道基因的克隆與性質(zhì)分析課件60最終引物HS4-1:5′-ARYAATGAYTGGTGGAT-3′HS4-2:5′-GCYTTYTGCATCATRTCT-3′注：R=A/GY=C/T最終引物HS4-1:5′-ARYAATGAYTGGTGG61RT-PCR結(jié)果

RT-PCR結(jié)果62二次PCR結(jié)果二次PCR結(jié)果63RT-PCR割膠回收及菌落PCR結(jié)果割膠回收產(chǎn)物電泳圖菌落PCR產(chǎn)物電泳圖RT-PCR割膠回收及菌落PCR結(jié)果割膠回收產(chǎn)物電泳圖菌落P64SjCaβ保守區(qū)測序結(jié)果443bpSjCaβ保守區(qū)測序結(jié)果443bp65SjCaβ保守區(qū)的BLASTXSjCaβ保守區(qū)的BLASTX66長度為443bp的產(chǎn)物5‘RACE實驗3‘RACE實驗拼接SjCaβ全序列長度為443bp的產(chǎn)物5‘RACE實驗3‘RACE實驗673′RACE引物設(shè)計3′RACEOuterPrimer:5′-TACCGTCGTTCCACTAGTGATTT-3′HS4-1-GSP1(OuterPrimer):5′-TTCACCCTGGCTAACTCACG-3′3′RACEInnerPrimer:5′-CGCGGATCCTCCACTAGTGATTTCACTATAGG-3’HS4-1-GSP2(InnerPrimer):5′-GAATCGCTACGGAGAACGAAAAGTG-3′使用試劑盒：3′-FullRACECoreSetVer.2.0（TaKaRa）

3′RACE引物設(shè)計3′RACEOuterPrim683'RACEPCR結(jié)果

3’OuterPCR3’InnerPCR3'RACEPCR結(jié)果

3’OuterPCR3’Inn693’RACE割膠回收及菌落PCR結(jié)果割膠回收產(chǎn)物電泳圖菌落PCR產(chǎn)物電泳圖3’RACE割膠回收及菌落PCR結(jié)果割膠回收產(chǎn)物電泳圖菌落70SjCaβ3'RACE測序結(jié)果SjCaβ3'RACE測序結(jié)果71序列長為1019bp經(jīng)過序列比對得到此序列的5′端與SjCaβ序列保守區(qū)的3′端有188個堿基重合，且有poly(A)尾初步判斷3′端的擴(kuò)增是成功的序列長為1019bp725′RACE引物設(shè)計5′RACEOuterPrimer:5′-CATGGCTACATGCTGACAGCCTA-3′HS4-1-GSP3(OuterPrimer):5′-AGGCGGTGTGTTATCAGATTGCT-3′5′RACEInnerPrimer:5′-CGCGGATCCACAGCCTACTGATGATCAGTCGATG-3′HS4-1-GSP4(InnerPrimer):5′-GTGTCCCACTTTTCGTTCTCCGTAGC-3′使用試劑盒：5′-FullRACEKit（TaKaRa）

5′RACE引物設(shè)計5′RACEOuterPrim735'RACEPCR結(jié)果

5’InnerPCR5'RACEPCR結(jié)果

5’InnerPCR745’RACE割膠回收及菌落PCR結(jié)果割膠回收產(chǎn)物電泳圖菌落PCR產(chǎn)物電泳圖5’RACE割膠回收及菌落PCR結(jié)果割膠回收產(chǎn)物電泳圖菌落75SjCaβ5'RACE測序結(jié)果SjCaβ5'RACE測序結(jié)果76序列長為879bp經(jīng)過序列比對得到此序列的3′端與SjCaβ序列保守區(qū)的5′端有281個堿基重合因此可初步判斷5′端是擴(kuò)增成功的序列長為879bp77把上述三段序列拼接并校正后，得到SjCaβcDNA基因全長1867bp將該cDNA序列提交至GenBank（GenBankaccessionnumber:EU853658）把上述三段序列拼接并校正后，得到SjCaβcDNA基因全長78SjCaβ的生物信息學(xué)分析利用NCBI的ORFFinder分析，SjCaβ全長cDNA中，5′非編碼區(qū)（UTR）179bp，3′UTR74bp，開放閱讀框（ORF）長度1614bp，編碼537個氨基酸在3′端的非編碼區(qū)中，距離poly(A)尾上游10個核苷酸的位置有推測的真核生物基因的多聚腺苷酸加尾信號（polyadenylationsignalsite）AATAAA的出現(xiàn)SjCaβ的分子量預(yù)測值為59.8kD，理論等電點(diǎn)為8.77，分子式為C2583H4151N771O834S13Dipro軟件分析表明,在該氨基酸序列中共有3個半胱氨酸殘基，其中Cys410和Cys428之間可能會形成一個二硫鍵

SjCaβ的生物信息學(xué)分析利用NCBI的ORFFinder79ProtScale程序運(yùn)算的結(jié)果顯示：SjCaβ的第370位異亮氨酸（Ile）疏水性最強(qiáng)，第501位組氨酸（His）親水性最強(qiáng)，大部分氨基酸屬于親水性氨基酸（分?jǐn)?shù)為負(fù)值），由此可以推測此蛋白可能為親水性蛋白

ProtScale程序運(yùn)算的結(jié)果顯示：80海參鈣離子通道基因的克隆與性質(zhì)分析課件81海參鈣離子通道基因的克隆與性質(zhì)分析課件82SjCaβ包含有三個高度保守的功能區(qū)位于D4區(qū)的VDCCα亞基結(jié)合相關(guān)的BID區(qū)（Lys250~Phe290）位于D2區(qū)能夠調(diào)節(jié)激酶活性的SH3功能區(qū)（Val99~Ser159）位于D4區(qū)調(diào)節(jié)VDCCβ亞基活性的GK功能區(qū)（Arg265~Trp439）SjCaβ包含有三個高度保守的功能區(qū)83D1D2D2D3D3D4D4D4D5D5BIDSH3功能區(qū)GK功能區(qū)幾乎是整個D4區(qū)D1D2D2D3D3D4D4D4D5D5BIDSH3功能區(qū)G84SjCaβ內(nèi)的活性位點(diǎn)

9個蛋白激酶C（PKC）磷酸化位點(diǎn)ProteinkinaseC(PKC)phosphorylationsites9個酪蛋白激酶Ⅱ（CK2）磷酸化位點(diǎn)CaseinkinaseⅡ(CK2)phosphorylationsites2個cAMP依賴型蛋白激酶磷酸化位點(diǎn)cAMP-dependentproteinkinasephosphorylationsites

SjCaβ內(nèi)的活性位點(diǎn)9個蛋白激酶C（PKC）磷酸化位點(diǎn)85此圖模擬SjCaβ部分氨基酸（Glu77~His443）構(gòu)成的三級結(jié)構(gòu)。用箭頭指出了氨基酸殘基Pro262，Pro266，Pro272和Tyr277在此三維結(jié)構(gòu)中的位置（因其可能為β亞基與α1亞基重要的結(jié)合部位）。SjCaβ的SH3區(qū)和GK區(qū)均用白色表示。此圖模擬SjCaβ部分氨基酸（Glu77~His443）構(gòu)成86SjCaβ中GK區(qū)（Arg265~Trp439）的三級結(jié)構(gòu)預(yù)測。圖中BID區(qū)N端的序列用白色標(biāo)出。此模型顯示在這個重要的功能片段中是由一個中央β折疊和一個α螺旋組成。

SjCaβ中SH3區(qū)（Val99~Ser159）的三級結(jié)構(gòu)預(yù)測SjCaβ中GK區(qū)（Arg265~Trp439）的三級結(jié)構(gòu)預(yù)87討論SjCaβ具有其他VDCCβ亞基共有的SH3區(qū)，GK區(qū)以及BID區(qū)其他物種BID區(qū)中高度保守的序列PSMRP在SjCaβ中變成了PTIRP-------這段保守序列中重要的氨基酸是PKC磷酸化位點(diǎn)SMR中的絲氨酸，而TIR中的蘇氨酸也同樣是PKC磷酸化位點(diǎn)，且二者都是中性氨基酸，因此推測這種變化并不會造成SjCaβ與其他物種的VDCCβ亞基在功能的差異。曼森血吸蟲（Schistosomamansoni）、日本血吸蟲（Schistosomajaponicum）和長槍烏賊（Loligobleekeri）等無脊椎動物亦有此現(xiàn)象。討論SjCaβ具有其他VDCCβ亞基共有的SH3區(qū)，88結(jié)論首次從海參中克隆了電壓依賴性鈣離子通道β亞基基因的全長cDNA序列，并由此推測出相應(yīng)的氨基酸序列。所獲得基因的cDNA全長1867bp，包含一個開放閱讀框1614bp，編碼537個氨基酸。SjCaβ的分子量為59.8kD，理論等電點(diǎn)為8.77，分子式為C2583H4151N771O834S13。親水性蛋白。結(jié)論首次從海參中克隆了電壓依賴性鈣離子通道β亞基基因的89SjCaβ具有其他