基因毒性雜質(zhì)控制-課件

關(guān)于基因毒性雜質(zhì)的控制華海藥業(yè)原料藥研發(fā)部王鵬關(guān)于基因毒性雜質(zhì)的控制華海藥業(yè)原料藥研發(fā)部1目錄一、基因毒性雜質(zhì)的相關(guān)概念——什么是基因毒性雜質(zhì)——基因毒性雜質(zhì)的風(fēng)險(xiǎn)——可接受風(fēng)險(xiǎn)的攝入量（TTC）二、TTC值的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估——有實(shí)驗(yàn)依據(jù)的TTC值的確認(rèn)——無(wú)實(shí)驗(yàn)依據(jù)的TTC值的確認(rèn)——含有多個(gè)基因毒性雜質(zhì)的評(píng)估——藥學(xué)評(píng)估——毒理學(xué)評(píng)估——風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估流程——TTC值的應(yīng)用目錄一、基因毒性雜質(zhì)的相關(guān)概念2什么是基因毒性雜質(zhì)？

對(duì)于基因毒性雜質(zhì)的定義主要是指：在以DNA反應(yīng)物質(zhì)為主要研究對(duì)象的體內(nèi)/體外試驗(yàn)中，如果發(fā)現(xiàn)它們對(duì)DNA有潛在的破壞性，那可稱之為基因毒性。對(duì)沒(méi)有進(jìn)行體內(nèi)實(shí)驗(yàn)的情況下，也可以根據(jù)關(guān)聯(lián)系做一些相關(guān)的體外實(shí)驗(yàn)去評(píng)估該物質(zhì)在體內(nèi)的毒性。如果沒(méi)有關(guān)聯(lián)評(píng)估的，體外基因毒性物質(zhì)經(jīng)常被考慮為假定的體內(nèi)誘變劑和致癌劑。GUIDELINEONTHELIMITSOFGENOTOXICIMPURITIES（EMEA/CHMP/QWP/251344/2019）

什么是基因毒性雜質(zhì)？ 對(duì)于基因毒性雜質(zhì)的定義主要是指：在以D3基因毒性雜質(zhì)的風(fēng)險(xiǎn)按照目前的法規(guī)來(lái)說(shuō)，（體內(nèi)）基因毒性物質(zhì)在任何攝入量水平上對(duì)DNA都有潛在的破壞性，這種破壞可能導(dǎo)致腫瘤的產(chǎn)生。因此，對(duì)于基因毒性致癌物，不能說(shuō)“不存在明顯的閥值，或是任何的攝入水平都具有致癌的風(fēng)險(xiǎn)”?；蚨拘噪s質(zhì)的風(fēng)險(xiǎn)按照目前的法規(guī)來(lái)說(shuō)，（體內(nèi)）基因毒性物質(zhì)在4可接受風(fēng)險(xiǎn)的攝入量對(duì)于那些可以與DNA進(jìn)行反應(yīng)的化合物，由于在較低的劑量時(shí)機(jī)體保護(hù)機(jī)制可以有效的運(yùn)行，按照攝入量由高到低所造成的影響進(jìn)行線性推斷是很困難的。目前，對(duì)于一個(gè)給定誘變劑，我們很難從實(shí)驗(yàn)方面證明它的基因毒性存在一個(gè)閥值。特別是對(duì)某些化合物，它們可以與非DNA靶點(diǎn)進(jìn)行反應(yīng)，或一些潛在的突變劑，在與關(guān)鍵靶位結(jié)合之前就迅速失去了毒性。由于缺乏支持基因毒性閥值存在的有力證據(jù)，而使得我們很難界定一個(gè)安全的服用量。所以有必要采取一個(gè)新觀點(diǎn)：確定一個(gè)可接受其風(fēng)險(xiǎn)的攝入量?？山邮茱L(fēng)險(xiǎn)的攝入量對(duì)于那些可以與DNA進(jìn)行反應(yīng)的化合物，由于5可接受風(fēng)險(xiǎn)的攝入量可接受其風(fēng)險(xiǎn)的攝入量一般通用的被定義為T(mén)hresholdofToxicologicalConcern(TTC)。具體含義為：一個(gè)“1.5ug/day”的TTC值，即相當(dāng)于每天攝入1.5ug的基因毒性雜質(zhì)，被認(rèn)為對(duì)于大多數(shù)藥品來(lái)說(shuō)是可以接受的風(fēng)險(xiǎn)（一生中致癌的風(fēng)險(xiǎn)小于100000分之1）。按照這個(gè)閥值，可以根據(jù)預(yù)期的每日攝入量計(jì)算出活性藥物中可接受的雜質(zhì)水平。在特定的條件下一些基因毒性雜質(zhì)也可以有較高的閾值。如接觸時(shí)間比較短等，這個(gè)需要根據(jù)實(shí)際情況再進(jìn)行推算?？山邮茱L(fēng)險(xiǎn)的攝入量可接受其風(fēng)險(xiǎn)的攝入量一般通用的被定義為T(mén)6必須要強(qiáng)調(diào)的是TTC是一個(gè)風(fēng)險(xiǎn)管理工具，它使用的是概率方法，意思為：假如有一個(gè)基因毒性雜質(zhì)，并且我們對(duì)它的毒性大小不太了解，如果它的每日攝入量低于TTC值，那么它的致癌的風(fēng)險(xiǎn)將不會(huì)高于1×10-5的概率。所以TTC不能被理解為絕對(duì)無(wú)風(fēng)險(xiǎn)的保障。必須要強(qiáng)調(diào)的是TTC是一個(gè)風(fēng)險(xiǎn)管理工具，它使用的是概率方法，7有實(shí)驗(yàn)依據(jù)的TTC值的確認(rèn)

有足夠的（實(shí)驗(yàn)性的）證據(jù)來(lái)支持閥值界定的基因毒性雜質(zhì)對(duì)于這類有足夠的證據(jù)來(lái)表明其基因毒性閥值的化合物，可以參考“Q3CNoteforGuidanceonImpurities:ResidualSolvents.”中2級(jí)溶劑的規(guī)定，計(jì)算出了一個(gè)“允許的日攝入量”（PDE）。有實(shí)驗(yàn)依據(jù)的TTC值的確認(rèn) 有足夠的（實(shí)驗(yàn)性的）證據(jù)來(lái)支持閥8無(wú)實(shí)驗(yàn)依據(jù)的TTC值的確認(rèn)

沒(méi)有足夠的（試驗(yàn)性的）證據(jù)來(lái)支持閥值界定的基因毒性雜質(zhì)不能進(jìn)行閥值鑒定的基因毒性雜質(zhì)的可接受劑量評(píng)價(jià)應(yīng)該包括藥學(xué)的和毒理學(xué)的評(píng)價(jià)。一般來(lái)說(shuō)，如果避免毒性是不可能的，那么藥學(xué)的評(píng)價(jià)措施應(yīng)該以ALARP的（aslowasreasonablypracticable）控制水平為指導(dǎo)原則。無(wú)實(shí)驗(yàn)依據(jù)的TTC值的確認(rèn) 沒(méi)有足夠的（試驗(yàn)性的）證據(jù)來(lái)支持9含有多個(gè)基因毒性雜質(zhì)的評(píng)估EMEACHMP結(jié)構(gòu)不同的——單個(gè)雜質(zhì)的限度應(yīng)該小于1.5ug/day結(jié)構(gòu)相似的——雜質(zhì)總和的限度應(yīng)該小于1.5ug/dayFDA（和EMEA類似）單個(gè)雜質(zhì)造成的癌癥風(fēng)險(xiǎn)機(jī)率應(yīng)該小于10-5有相同作用機(jī)制的結(jié)構(gòu)相似的雜質(zhì)，其含量總和應(yīng)該參考1.5ug/day的限量進(jìn)行評(píng)估。含有多個(gè)基因毒性雜質(zhì)的評(píng)估EMEACHMP10含有多個(gè)基因毒性雜質(zhì)的評(píng)估單個(gè)基因毒性雜質(zhì)可以參考文獻(xiàn)來(lái)確定。多個(gè)基因毒性雜質(zhì)（3個(gè)以下）積累的風(fēng)險(xiǎn)相對(duì)于單個(gè)雜質(zhì)的風(fēng)險(xiǎn)上升不大，可以忽略。藥物中含有3個(gè)基因毒性雜質(zhì)，不管結(jié)構(gòu)是否相似，在法規(guī)中是允許的（只要有充分的數(shù)據(jù)）。存在四個(gè)以及以上的基因毒性雜質(zhì)的時(shí)候，需要根據(jù)實(shí)際情況考慮。含有多個(gè)基因毒性雜質(zhì)的評(píng)估單個(gè)基因毒性雜質(zhì)可以參考文獻(xiàn)來(lái)確定11藥學(xué)評(píng)價(jià)應(yīng)該根據(jù)現(xiàn)有的配方選擇和生產(chǎn)技術(shù)，提供生產(chǎn)方法的合理性。申請(qǐng)人應(yīng)該指明涉及到的所有具有基因毒性或有致癌性的化學(xué)物質(zhì)，如所用試劑、中間體、副產(chǎn)品等。更進(jìn)一步，在藥物活性物質(zhì)中沒(méi)有出現(xiàn)的基因毒性反應(yīng)物和有基因毒性結(jié)構(gòu)（alertingstructure）的物質(zhì)，都應(yīng)該被考慮。實(shí)際生產(chǎn)中盡量避免使用該類物質(zhì)。藥學(xué)評(píng)價(jià)應(yīng)該根據(jù)現(xiàn)有的配方選擇和生產(chǎn)技術(shù)，提供生產(chǎn)方法的合12藥學(xué)評(píng)價(jià)如果在合成路線、起始物料方面沒(méi)有更好選擇，則需要提供一個(gè)正當(dāng)?shù)睦碛?。就是物質(zhì)中能引起基因毒性和致癌性的結(jié)構(gòu)部分在化學(xué)合成是不可避免的。假如基因毒性雜質(zhì)被認(rèn)為是不可避免的，那么應(yīng)該采取技術(shù)手段盡可能的減少基因毒性雜質(zhì)在產(chǎn)品中的含量，使其符合安全的需要或使其降低到一個(gè)合理的水平。對(duì)于活性中間體、反應(yīng)物、以及其它化合物的化學(xué)穩(wěn)定性都應(yīng)該進(jìn)行評(píng)估。應(yīng)該有合理的分析方法去檢測(cè)和量化這些雜質(zhì)的殘留量。藥學(xué)評(píng)價(jià)如果在合成路線、起始物料方面沒(méi)有更好選擇，則需要提供13——基因毒性雜質(zhì)磺酸鹽的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估

臨床研究發(fā)現(xiàn)甲磺酸酯的DNA烷基化作用會(huì)導(dǎo)致誘變效應(yīng)，其中甲磺酸甲酯和甲磺酸乙酯已有這方面報(bào)導(dǎo)，因此有理由懷疑其它低分子量磺酸（如對(duì)甲苯磺酸）的烷基酯可能也存在著類似的毒性影響。盡管無(wú)數(shù)據(jù)表明這些酯對(duì)人的毒性影響，然后依然有上述基因毒性物質(zhì)以雜質(zhì)的形式存在于含磺酸酯類藥物活性成分的藥品中的潛在風(fēng)險(xiǎn)。EMEA/44714/2019——基因毒性雜質(zhì)磺酸鹽的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估臨床研究發(fā)現(xiàn)甲磺酸酯的DN14——基因毒性雜質(zhì)磺酸鹽的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估甲磺酸烷基酯，如甲磺酸甲酯（MMS）和甲磺酸乙酯（EMS），是甲磺酸與甲醇，乙醇，或其它低級(jí)醇形成的酯。特別是在以甲磺酸鹽或甲磺酸酯形式存在的藥物活性成分中或其合成過(guò)程中用到了甲磺酸的藥物活性成分中，甲磺酸烷基酯會(huì)被視為潛在雜質(zhì)。在以羥乙基磺酸鹽，苯磺酸鹽和對(duì)甲苯磺酸鹽形式存在的藥物活性成分中也會(huì)發(fā)現(xiàn)類似的磺酸烷基酯或芳基酯污染。需說(shuō)明出現(xiàn)這些污染的風(fēng)險(xiǎn)?！蚨拘噪s質(zhì)磺酸鹽的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估甲磺酸烷基酯，如甲磺酸甲酯（15藥物活性成分的生產(chǎn)是否涉及到在甲磺酸（或羥乙基磺酸，苯磺酸，對(duì)甲苯磺酸）或相應(yīng)的酰氯存在的情況下，使用了低級(jí)脂肪酯，如甲醇，乙醇，正丙醇或異丙醇的情況？如果是這種情況的話，甲磺酸烷基酯或類似苯磺酯烷基酯和對(duì)甲苯磺酸烷基酯的形成可能性是否已被降至最低？是否存在有效的精制步驟？

設(shè)備（特別是接觸到磺酸試劑的設(shè)備）的清洗程序是否涉及到低級(jí)脂肪醇的使用？

是否有適宜的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和已驗(yàn)證的分析方法可以證實(shí)藥物活性成分中的磺酸烷酯或磺酸芳基酯雜質(zhì)處于TTC以下？

藥物活性成分的生產(chǎn)是否涉及到在甲磺酸（或羥乙基磺酸，16是否檢查了起始物料，如甲磺酸鹽（苯磺酸鹽，對(duì)甲苯磺酸鹽，羥乙基磺酸），中的烷基磺酸酯或芳基磺酸酯雜質(zhì)（如甲磺酸中的EMS和MMS）及相應(yīng)的酰氯？是否有這些雜質(zhì)的適宜標(biāo)準(zhǔn)和驗(yàn)證過(guò)的方法？當(dāng)被磺酸酯或相關(guān)物質(zhì)所污染了的磺酸作為起始物料用于藥物活性成分時(shí)，是否能保證藥物活性成分中潛在基因毒性雜質(zhì)不超過(guò)其TTC值？應(yīng)當(dāng)要考慮各種烷基或芳基取代磺酸酯雜質(zhì)的累加風(fēng)險(xiǎn)。是否檢查了起始物料，如甲磺酸鹽（苯磺酸鹽，對(duì)甲苯磺酸鹽，羥乙17

如在藥物活性成分生產(chǎn)的最后一步合成步驟用到了磺酸衍生物，應(yīng)將其納入風(fēng)險(xiǎn)分析。

是否對(duì)回收溶劑中磺酸酯類雜質(zhì)（如，乙醇中的EMS，甲醇中的MMS，異丙醇中的IMS）的富集和殘留進(jìn)行了控制？

是否能排除以甲磺酸鹽，羥乙基磺酸鹽，對(duì)甲苯磺酸鹽或苯磺酸鹽形式存在的藥物的活性成分，或其相關(guān)制劑，在儲(chǔ)存過(guò)程中形成烷基或芳基磺酸酯？

是否能排除以甲磺酸鹽，羥乙基磺酸鹽，對(duì)甲苯磺酸鹽或苯磺酸鹽形式存在的藥物活性成分在制成最終制劑的過(guò)程中形成烷基或芳基磺酸酯，如在制粒過(guò)程中使用了醇？是否有足夠靈敏的的方法可以檢測(cè)到制劑中的（處于TTC水平的）這些雜質(zhì)？

如在藥物活性成分生產(chǎn)的最后一步合成步驟用到了磺酸衍生物，18——基因毒性雜質(zhì)鹵代烴的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估有數(shù)據(jù)表明氯乙烷、氯甲烷為基因毒性雜質(zhì)，因此有理由懷疑其他低分子鹵代烴類也有類似的作用。在生產(chǎn)中應(yīng)該對(duì)其進(jìn)行相應(yīng)的控制?！蚨拘噪s質(zhì)鹵代烴的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估有數(shù)據(jù)表明氯乙烷、氯甲烷為基19在氨基物鹽酸鹽使用醇類溶劑精制的時(shí)候，基本都會(huì)產(chǎn)生鹵代烴。產(chǎn)生的條件和溫度、水分、濃度、時(shí)間等有關(guān)系。對(duì)于控制低級(jí)鹵代烴的方法可以參考控制甲磺酸酯的相關(guān)建議?！蚨拘噪s質(zhì)鹵代烴的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估在氨基物鹽酸鹽使用醇類溶劑精制的時(shí)候，基本都會(huì)產(chǎn)生鹵代烴?！?0毒理學(xué)評(píng)價(jià)為一個(gè)不存在閥值的基因毒性致癌物定義一個(gè)安全的攝入量水平（零風(fēng)險(xiǎn)觀點(diǎn)）是不可能的，并且從活性藥物成分中完全的除去基因毒性雜質(zhì)經(jīng)常是很難做到。這樣就要求我們建立一個(gè)可接受的風(fēng)險(xiǎn)水平，例如對(duì)一個(gè)低于可忽略風(fēng)險(xiǎn)的每日攝入量進(jìn)行評(píng)價(jià)。但是這些方法都需要有足夠的長(zhǎng)期致癌性研究數(shù)據(jù)。毒理學(xué)評(píng)價(jià)為一個(gè)不存在閥值的基因毒性致癌物定義一個(gè)安全的攝21毒理學(xué)評(píng)價(jià)對(duì)于可接受風(fēng)險(xiǎn)水平的推導(dǎo)過(guò)程參見(jiàn)Q3CNoteforGuidanceonImpurities:ResidualSolventsforClass1solvents。附件三。毒理學(xué)評(píng)價(jià)對(duì)于可接受風(fēng)險(xiǎn)水平的推導(dǎo)過(guò)程參見(jiàn)Q3CNote22DecisionTreeDecisionTree23TTC的應(yīng)用有幾個(gè)結(jié)構(gòu)基團(tuán)被認(rèn)定為具有非常高的基因毒性，它們即使被攝入低于TTC值的量也會(huì)面臨非常高的基因毒性風(fēng)險(xiǎn)。這一類高基因毒性的致癌物由黃曲霉毒素類,N-亞硝基物類,偶氮苯類等化合物構(gòu)成，它們不能用TTC值的方法來(lái)進(jìn)行評(píng)價(jià)。對(duì)這些種類的物質(zhì)需要進(jìn)行特殊的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)。TTC的應(yīng)用有幾個(gè)結(jié)構(gòu)基團(tuán)被認(rèn)定為具有非常高的基因毒性，它們24TTC的應(yīng)用在某些特定情況下，TTC值高于1.5μg/day也是可以接受的，比如藥品的短期接觸，即治療某些生命預(yù)期在5年以下的某些嚴(yán)重疾病，或者這種雜質(zhì)是一種已知物質(zhì)，人類在其他方式上對(duì)它的攝入會(huì)更高（比如在食品上）。有些基因毒性雜質(zhì)同時(shí)也是一種體內(nèi)代謝產(chǎn)物，對(duì)它的評(píng)價(jià)也要以對(duì)代謝產(chǎn)物的接受性為基礎(chǔ)?；螂s質(zhì)的濃度限度以ppm為單位，公式如下：Concentrationlimit(ppm)=1.5μg/dailydoseTTC的應(yīng)用在某些特定情況下，TTC值高于1.5μg/da25基因毒性雜質(zhì)控制-課件26原料藥質(zhì)量研究部2019～2019年度基因毒性雜質(zhì)限度驗(yàn)證列表：序號(hào)基因毒性雜質(zhì)名稱雜質(zhì)限度產(chǎn)品名稱1保護(hù)基溴化物15ppm氯沙坦鉀2鄰氨基甲苯7.5ppm托拉塞米3間氨基甲苯7.5ppm托拉塞米4對(duì)氨基甲苯7.5ppm托拉塞米5鄰硝基甲苯7.5ppm托拉塞米6疊氮酸10ppm坎地沙坦酯7疊氮酸10ppm纈沙坦8溴代異丙烷15ppm氯吡格雷氫溴酸鹽9聯(lián)苯溴化物3.4ppm纈沙坦10聯(lián)苯溴化物四氮唑4ppm纈沙坦115-氰基苯酞25ppm西酞普蘭氫溴酸鹽125-氨基苯酞25ppm西酞普蘭氫溴酸鹽13硝基化合物25ppm西酞普蘭氫溴酸鹽14氨基化合物25ppm西酞普蘭氫溴酸鹽15硫脲30ppm鹽酸吡格列酮16對(duì)氟硝基苯30ppm鹽酸吡格列酮17硝基吡格30ppm鹽酸吡格列酮原料藥質(zhì)量研究部2019～2019年度基因毒性雜質(zhì)限度驗(yàn)證列27原料藥質(zhì)量研究部2019～2019年度基因毒性雜質(zhì)限度驗(yàn)證列表：18酞嗪二酮0.04%RP-氯沙坦鉀19聯(lián)苯溴化物10ppmRP-氯沙坦鉀20二甲海因0.05%RP-氯沙坦鉀21保護(hù)基二溴物15ppmRP-氯沙坦鉀22氯沙坦鉀二氯物15ppmRP-氯沙坦鉀23二溴二甲海因15ppm氯沙坦鉀保護(hù)基溴化物24聯(lián)苯溴化物10ppm氯沙坦鉀25聯(lián)苯溴化物四氮唑12ppm氯沙坦鉀26游離肼10ppmRP-氯沙坦鉀27疊氮酸15ppm氯沙坦鉀28四丁基溴化銨25ppm鹽酸帕羅西汀29疊氮酸10ppm厄貝沙坦30對(duì)甲苯磺酸異丙酯8ppm氯沙坦鉀31溴離子229ppm艾他培南32對(duì)甲苯磺酸乙酯25ppm西酞普蘭33氟苯15ppm西酞普蘭34氯丙胺鹽酸鹽120ppm西酞普蘭35對(duì)氟溴苯50ppm西酞普蘭36甲磺酸乙酯75ppmS-西酞普蘭原料藥質(zhì)量研究部2019～2019年度基因毒性雜質(zhì)限度驗(yàn)證列28原料藥質(zhì)量研究部2019～2019年度基因毒性雜質(zhì)限度驗(yàn)證列表：38N-甲基吡咯烷酮53ppm厄貝沙坦39N，N-二甲基苯胺2ppm奎硫平40對(duì)甲苯磺酸乙酯37.5ppm奎那普利41對(duì)甲苯磺酸乙酯150ppm雷米普利42對(duì)甲苯磺酸乙酯37.5ppm依那普利43異亞丙基丙酮100ppm羅匹尼羅44間氯苯胺15ppm氫氯噻嗪45甲磺酸甲酯2ppm依普洛沙坦甲磺酸鹽46甲磺酸乙酯2ppm依普洛沙坦甲磺酸鹽473-硝基-2-叔丁氧甲酰氨基苯甲酸乙酯47ppm坎地沙坦酯482-氰基-4-溴甲基聯(lián)苯47ppm坎地沙坦酯492-[[(2-氰基聯(lián)苯基)-4-基]甲基]氧基-3-硝基苯甲酸乙酯47ppm坎地沙坦酯503-硝基鄰苯二甲酸47ppm坎地沙坦酯51鄰苯二胺鹽酸鹽5ppm替米沙坦52鄰氨硝基苯5ppm替米沙坦53鄰氟苯胺5ppm替米沙坦54氯沙坦鉀二氯代物15ppmRP-氯沙坦鉀55保護(hù)基溴化物15ppmRP-氯沙坦鉀原料藥質(zhì)量研究部2019～2019年度基因毒性雜質(zhì)限度驗(yàn)證列29基因毒性物質(zhì)列表Goldcarcinogenicitydatabase().里面有1574種致癌物質(zhì)的列表，結(jié)構(gòu)式，CAS號(hào)，作用部位，TTC值等等一系列信息。近30年的關(guān)于基因毒性方面研究的出版物（PDF版）用不同分類方法統(tǒng)計(jì)的致癌物質(zhì)列表。不用注冊(cè)，可以直接點(diǎn)擊查看、下載全文?；蚨拘晕镔|(zhì)列表Goldcarcinogenicityd30謝謝！謝謝！31關(guān)于基因毒性雜質(zhì)的控制華海藥業(yè)原料藥研發(fā)部王鵬關(guān)于基因毒性雜質(zhì)的控制華海藥業(yè)原料藥研發(fā)部32目錄一、基因毒性雜質(zhì)的相關(guān)概念——什么是基因毒性雜質(zhì)——基因毒性雜質(zhì)的風(fēng)險(xiǎn)——可接受風(fēng)險(xiǎn)的攝入量（TTC）二、TTC值的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估——有實(shí)驗(yàn)依據(jù)的TTC值的確認(rèn)——無(wú)實(shí)驗(yàn)依據(jù)的TTC值的確認(rèn)——含有多個(gè)基因毒性雜質(zhì)的評(píng)估——藥學(xué)評(píng)估——毒理學(xué)評(píng)估——風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估流程——TTC值的應(yīng)用目錄一、基因毒性雜質(zhì)的相關(guān)概念33什么是基因毒性雜質(zhì)？

對(duì)于基因毒性雜質(zhì)的定義主要是指：在以DNA反應(yīng)物質(zhì)為主要研究對(duì)象的體內(nèi)/體外試驗(yàn)中，如果發(fā)現(xiàn)它們對(duì)DNA有潛在的破壞性，那可稱之為基因毒性。對(duì)沒(méi)有進(jìn)行體內(nèi)實(shí)驗(yàn)的情況下，也可以根據(jù)關(guān)聯(lián)系做一些相關(guān)的體外實(shí)驗(yàn)去評(píng)估該物質(zhì)在體內(nèi)的毒性。如果沒(méi)有關(guān)聯(lián)評(píng)估的，體外基因毒性物質(zhì)經(jīng)常被考慮為假定的體內(nèi)誘變劑和致癌劑。GUIDELINEONTHELIMITSOFGENOTOXICIMPURITIES（EMEA/CHMP/QWP/251344/2019）

什么是基因毒性雜質(zhì)？ 對(duì)于基因毒性雜質(zhì)的定義主要是指：在以D34基因毒性雜質(zhì)的風(fēng)險(xiǎn)按照目前的法規(guī)來(lái)說(shuō)，（體內(nèi)）基因毒性物質(zhì)在任何攝入量水平上對(duì)DNA都有潛在的破壞性，這種破壞可能導(dǎo)致腫瘤的產(chǎn)生。因此，對(duì)于基因毒性致癌物，不能說(shuō)“不存在明顯的閥值，或是任何的攝入水平都具有致癌的風(fēng)險(xiǎn)”?；蚨拘噪s質(zhì)的風(fēng)險(xiǎn)按照目前的法規(guī)來(lái)說(shuō)，（體內(nèi)）基因毒性物質(zhì)在35可接受風(fēng)險(xiǎn)的攝入量對(duì)于那些可以與DNA進(jìn)行反應(yīng)的化合物，由于在較低的劑量時(shí)機(jī)體保護(hù)機(jī)制可以有效的運(yùn)行，按照攝入量由高到低所造成的影響進(jìn)行線性推斷是很困難的。目前，對(duì)于一個(gè)給定誘變劑，我們很難從實(shí)驗(yàn)方面證明它的基因毒性存在一個(gè)閥值。特別是對(duì)某些化合物，它們可以與非DNA靶點(diǎn)進(jìn)行反應(yīng)，或一些潛在的突變劑，在與關(guān)鍵靶位結(jié)合之前就迅速失去了毒性。由于缺乏支持基因毒性閥值存在的有力證據(jù)，而使得我們很難界定一個(gè)安全的服用量。所以有必要采取一個(gè)新觀點(diǎn)：確定一個(gè)可接受其風(fēng)險(xiǎn)的攝入量。可接受風(fēng)險(xiǎn)的攝入量對(duì)于那些可以與DNA進(jìn)行反應(yīng)的化合物，由于36可接受風(fēng)險(xiǎn)的攝入量可接受其風(fēng)險(xiǎn)的攝入量一般通用的被定義為T(mén)hresholdofToxicologicalConcern(TTC)。具體含義為：一個(gè)“1.5ug/day”的TTC值，即相當(dāng)于每天攝入1.5ug的基因毒性雜質(zhì)，被認(rèn)為對(duì)于大多數(shù)藥品來(lái)說(shuō)是可以接受的風(fēng)險(xiǎn)（一生中致癌的風(fēng)險(xiǎn)小于100000分之1）。按照這個(gè)閥值，可以根據(jù)預(yù)期的每日攝入量計(jì)算出活性藥物中可接受的雜質(zhì)水平。在特定的條件下一些基因毒性雜質(zhì)也可以有較高的閾值。如接觸時(shí)間比較短等，這個(gè)需要根據(jù)實(shí)際情況再進(jìn)行推算。可接受風(fēng)險(xiǎn)的攝入量可接受其風(fēng)險(xiǎn)的攝入量一般通用的被定義為T(mén)37必須要強(qiáng)調(diào)的是TTC是一個(gè)風(fēng)險(xiǎn)管理工具，它使用的是概率方法，意思為：假如有一個(gè)基因毒性雜質(zhì)，并且我們對(duì)它的毒性大小不太了解，如果它的每日攝入量低于TTC值，那么它的致癌的風(fēng)險(xiǎn)將不會(huì)高于1×10-5的概率。所以TTC不能被理解為絕對(duì)無(wú)風(fēng)險(xiǎn)的保障。必須要強(qiáng)調(diào)的是TTC是一個(gè)風(fēng)險(xiǎn)管理工具，它使用的是概率方法，38有實(shí)驗(yàn)依據(jù)的TTC值的確認(rèn)

有足夠的（實(shí)驗(yàn)性的）證據(jù)來(lái)支持閥值界定的基因毒性雜質(zhì)對(duì)于這類有足夠的證據(jù)來(lái)表明其基因毒性閥值的化合物，可以參考“Q3CNoteforGuidanceonImpurities:ResidualSolvents.”中2級(jí)溶劑的規(guī)定，計(jì)算出了一個(gè)“允許的日攝入量”（PDE）。有實(shí)驗(yàn)依據(jù)的TTC值的確認(rèn) 有足夠的（實(shí)驗(yàn)性的）證據(jù)來(lái)支持閥39無(wú)實(shí)驗(yàn)依據(jù)的TTC值的確認(rèn)

沒(méi)有足夠的（試驗(yàn)性的）證據(jù)來(lái)支持閥值界定的基因毒性雜質(zhì)不能進(jìn)行閥值鑒定的基因毒性雜質(zhì)的可接受劑量評(píng)價(jià)應(yīng)該包括藥學(xué)的和毒理學(xué)的評(píng)價(jià)。一般來(lái)說(shuō)，如果避免毒性是不可能的，那么藥學(xué)的評(píng)價(jià)措施應(yīng)該以ALARP的（aslowasreasonablypracticable）控制水平為指導(dǎo)原則。無(wú)實(shí)驗(yàn)依據(jù)的TTC值的確認(rèn) 沒(méi)有足夠的（試驗(yàn)性的）證據(jù)來(lái)支持40含有多個(gè)基因毒性雜質(zhì)的評(píng)估EMEACHMP結(jié)構(gòu)不同的——單個(gè)雜質(zhì)的限度應(yīng)該小于1.5ug/day結(jié)構(gòu)相似的——雜質(zhì)總和的限度應(yīng)該小于1.5ug/dayFDA（和EMEA類似）單個(gè)雜質(zhì)造成的癌癥風(fēng)險(xiǎn)機(jī)率應(yīng)該小于10-5有相同作用機(jī)制的結(jié)構(gòu)相似的雜質(zhì)，其含量總和應(yīng)該參考1.5ug/day的限量進(jìn)行評(píng)估。含有多個(gè)基因毒性雜質(zhì)的評(píng)估EMEACHMP41含有多個(gè)基因毒性雜質(zhì)的評(píng)估單個(gè)基因毒性雜質(zhì)可以參考文獻(xiàn)來(lái)確定。多個(gè)基因毒性雜質(zhì)（3個(gè)以下）積累的風(fēng)險(xiǎn)相對(duì)于單個(gè)雜質(zhì)的風(fēng)險(xiǎn)上升不大，可以忽略。藥物中含有3個(gè)基因毒性雜質(zhì)，不管結(jié)構(gòu)是否相似，在法規(guī)中是允許的（只要有充分的數(shù)據(jù)）。存在四個(gè)以及以上的基因毒性雜質(zhì)的時(shí)候，需要根據(jù)實(shí)際情況考慮。含有多個(gè)基因毒性雜質(zhì)的評(píng)估單個(gè)基因毒性雜質(zhì)可以參考文獻(xiàn)來(lái)確定42藥學(xué)評(píng)價(jià)應(yīng)該根據(jù)現(xiàn)有的配方選擇和生產(chǎn)技術(shù)，提供生產(chǎn)方法的合理性。申請(qǐng)人應(yīng)該指明涉及到的所有具有基因毒性或有致癌性的化學(xué)物質(zhì)，如所用試劑、中間體、副產(chǎn)品等。更進(jìn)一步，在藥物活性物質(zhì)中沒(méi)有出現(xiàn)的基因毒性反應(yīng)物和有基因毒性結(jié)構(gòu)（alertingstructure）的物質(zhì)，都應(yīng)該被考慮。實(shí)際生產(chǎn)中盡量避免使用該類物質(zhì)。藥學(xué)評(píng)價(jià)應(yīng)該根據(jù)現(xiàn)有的配方選擇和生產(chǎn)技術(shù)，提供生產(chǎn)方法的合43藥學(xué)評(píng)價(jià)如果在合成路線、起始物料方面沒(méi)有更好選擇，則需要提供一個(gè)正當(dāng)?shù)睦碛?。就是物質(zhì)中能引起基因毒性和致癌性的結(jié)構(gòu)部分在化學(xué)合成是不可避免的。假如基因毒性雜質(zhì)被認(rèn)為是不可避免的，那么應(yīng)該采取技術(shù)手段盡可能的減少基因毒性雜質(zhì)在產(chǎn)品中的含量，使其符合安全的需要或使其降低到一個(gè)合理的水平。對(duì)于活性中間體、反應(yīng)物、以及其它化合物的化學(xué)穩(wěn)定性都應(yīng)該進(jìn)行評(píng)估。應(yīng)該有合理的分析方法去檢測(cè)和量化這些雜質(zhì)的殘留量。藥學(xué)評(píng)價(jià)如果在合成路線、起始物料方面沒(méi)有更好選擇，則需要提供44——基因毒性雜質(zhì)磺酸鹽的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估

臨床研究發(fā)現(xiàn)甲磺酸酯的DNA烷基化作用會(huì)導(dǎo)致誘變效應(yīng)，其中甲磺酸甲酯和甲磺酸乙酯已有這方面報(bào)導(dǎo)，因此有理由懷疑其它低分子量磺酸（如對(duì)甲苯磺酸）的烷基酯可能也存在著類似的毒性影響。盡管無(wú)數(shù)據(jù)表明這些酯對(duì)人的毒性影響，然后依然有上述基因毒性物質(zhì)以雜質(zhì)的形式存在于含磺酸酯類藥物活性成分的藥品中的潛在風(fēng)險(xiǎn)。EMEA/44714/2019——基因毒性雜質(zhì)磺酸鹽的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估臨床研究發(fā)現(xiàn)甲磺酸酯的DN45——基因毒性雜質(zhì)磺酸鹽的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估甲磺酸烷基酯，如甲磺酸甲酯（MMS）和甲磺酸乙酯（EMS），是甲磺酸與甲醇，乙醇，或其它低級(jí)醇形成的酯。特別是在以甲磺酸鹽或甲磺酸酯形式存在的藥物活性成分中或其合成過(guò)程中用到了甲磺酸的藥物活性成分中，甲磺酸烷基酯會(huì)被視為潛在雜質(zhì)。在以羥乙基磺酸鹽，苯磺酸鹽和對(duì)甲苯磺酸鹽形式存在的藥物活性成分中也會(huì)發(fā)現(xiàn)類似的磺酸烷基酯或芳基酯污染。需說(shuō)明出現(xiàn)這些污染的風(fēng)險(xiǎn)?！蚨拘噪s質(zhì)磺酸鹽的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估甲磺酸烷基酯，如甲磺酸甲酯（46藥物活性成分的生產(chǎn)是否涉及到在甲磺酸（或羥乙基磺酸，苯磺酸，對(duì)甲苯磺酸）或相應(yīng)的酰氯存在的情況下，使用了低級(jí)脂肪酯，如甲醇，乙醇，正丙醇或異丙醇的情況？如果是這種情況的話，甲磺酸烷基酯或類似苯磺酯烷基酯和對(duì)甲苯磺酸烷基酯的形成可能性是否已被降至最低？是否存在有效的精制步驟？

設(shè)備（特別是接觸到磺酸試劑的設(shè)備）的清洗程序是否涉及到低級(jí)脂肪醇的使用？

是否有適宜的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和已驗(yàn)證的分析方法可以證實(shí)藥物活性成分中的磺酸烷酯或磺酸芳基酯雜質(zhì)處于TTC以下？

藥物活性成分的生產(chǎn)是否涉及到在甲磺酸（或羥乙基磺酸，47是否檢查了起始物料，如甲磺酸鹽（苯磺酸鹽，對(duì)甲苯磺酸鹽，羥乙基磺酸），中的烷基磺酸酯或芳基磺酸酯雜質(zhì)（如甲磺酸中的EMS和MMS）及相應(yīng)的酰氯？是否有這些雜質(zhì)的適宜標(biāo)準(zhǔn)和驗(yàn)證過(guò)的方法？當(dāng)被磺酸酯或相關(guān)物質(zhì)所污染了的磺酸作為起始物料用于藥物活性成分時(shí)，是否能保證藥物活性成分中潛在基因毒性雜質(zhì)不超過(guò)其TTC值？應(yīng)當(dāng)要考慮各種烷基或芳基取代磺酸酯雜質(zhì)的累加風(fēng)險(xiǎn)。是否檢查了起始物料，如甲磺酸鹽（苯磺酸鹽，對(duì)甲苯磺酸鹽，羥乙48

如在藥物活性成分生產(chǎn)的最后一步合成步驟用到了磺酸衍生物，應(yīng)將其納入風(fēng)險(xiǎn)分析。

是否對(duì)回收溶劑中磺酸酯類雜質(zhì)（如，乙醇中的EMS，甲醇中的MMS，異丙醇中的IMS）的富集和殘留進(jìn)行了控制？

是否能排除以甲磺酸鹽，羥乙基磺酸鹽，對(duì)甲苯磺酸鹽或苯磺酸鹽形式存在的藥物的活性成分，或其相關(guān)制劑，在儲(chǔ)存過(guò)程中形成烷基或芳基磺酸酯？

是否能排除以甲磺酸鹽，羥乙基磺酸鹽，對(duì)甲苯磺酸鹽或苯磺酸鹽形式存在的藥物活性成分在制成最終制劑的過(guò)程中形成烷基或芳基磺酸酯，如在制粒過(guò)程中使用了醇？是否有足夠靈敏的的方法可以檢測(cè)到制劑中的（處于TTC水平的）這些雜質(zhì)？

如在藥物活性成分生產(chǎn)的最后一步合成步驟用到了磺酸衍生物，49——基因毒性雜質(zhì)鹵代烴的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估有數(shù)據(jù)表明氯乙烷、氯甲烷為基因毒性雜質(zhì)，因此有理由懷疑其他低分子鹵代烴類也有類似的作用。在生產(chǎn)中應(yīng)該對(duì)其進(jìn)行相應(yīng)的控制?！蚨拘噪s質(zhì)鹵代烴的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估有數(shù)據(jù)表明氯乙烷、氯甲烷為基50在氨基物鹽酸鹽使用醇類溶劑精制的時(shí)候，基本都會(huì)產(chǎn)生鹵代烴。產(chǎn)生的條件和溫度、水分、濃度、時(shí)間等有關(guān)系。對(duì)于控制低級(jí)鹵代烴的方法可以參考控制甲磺酸酯的相關(guān)建議。——基因毒性雜質(zhì)鹵代烴的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估在氨基物鹽酸鹽使用醇類溶劑精制的時(shí)候，基本都會(huì)產(chǎn)生鹵代烴。—51毒理學(xué)評(píng)價(jià)為一個(gè)不存在閥值的基因毒性致癌物定義一個(gè)安全的攝入量水平（零風(fēng)險(xiǎn)觀點(diǎn)）是不可能的，并且從活性藥物成分中完全的除去基因毒性雜質(zhì)經(jīng)常是很難做到。這樣就要求我們建立一個(gè)可接受的風(fēng)險(xiǎn)水平，例如對(duì)一個(gè)低于可忽略風(fēng)險(xiǎn)的每日攝入量進(jìn)行評(píng)價(jià)。但是這些方法都需要有足夠的長(zhǎng)期致癌性研究數(shù)據(jù)。毒理學(xué)評(píng)價(jià)為一個(gè)不存在閥值的基因毒性致癌物定義一個(gè)安全的攝52毒理學(xué)評(píng)價(jià)對(duì)于可接受風(fēng)險(xiǎn)水平的推導(dǎo)過(guò)程參見(jiàn)Q3CNoteforGuidanceonImpurities:ResidualSolventsforClass1solvents。附件三。毒理學(xué)評(píng)價(jià)對(duì)于可接受風(fēng)險(xiǎn)水平的推導(dǎo)過(guò)程參見(jiàn)Q3CNote53DecisionTreeDecisionTree54TTC的應(yīng)用有幾個(gè)結(jié)構(gòu)基團(tuán)被認(rèn)定為具有非常高的基因毒性，它們即使被攝入低于TTC值的量也會(huì)面臨非常高的基因毒性風(fēng)險(xiǎn)。這一類高基因毒性的致癌物由黃曲霉毒素類,N-亞硝基物類,偶氮苯類等化合物構(gòu)成，它們不能用TTC值的方法來(lái)進(jìn)行評(píng)價(jià)。對(duì)這些種類的物質(zhì)需要進(jìn)行特殊的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)。TTC的應(yīng)用有幾個(gè)結(jié)構(gòu)基團(tuán)被認(rèn)定為具有非常高的基因毒性，它們55TTC的應(yīng)用在某些特定情況下，TTC值高于1.5μg/day也是可以接受的，比如藥品的短期接觸，即治療某些生命預(yù)期在5年以下的某些嚴(yán)重疾病，或者這種雜質(zhì)是一種已知物質(zhì)，人類在其他方式上對(duì)它的攝入會(huì)更高（比如在食品上）。有些基因毒性雜質(zhì)同時(shí)也是一種體內(nèi)代謝產(chǎn)物，對(duì)它的評(píng)價(jià)也要以對(duì)代謝產(chǎn)物的接受性為基礎(chǔ)?；螂s質(zhì)的濃度限度以ppm為單位，公式如下：Concentrationlimit(ppm)=1.5μg/dailydoseTTC的應(yīng)用在某些特定情況下，TTC值高于1.5μg/da56基因毒性雜質(zhì)控制-課件57原料藥質(zhì)量研究部2019～2019年度基因毒性雜質(zhì)限度驗(yàn)證列表：序號(hào)基因毒性雜質(zhì)名稱雜質(zhì)限度產(chǎn)品名稱1保護(hù)基溴化物15ppm氯沙坦鉀2鄰氨基甲苯7.5ppm托拉塞米3間氨基甲苯7.5ppm托拉塞米4對(duì)氨基甲苯7.5ppm托拉塞米5鄰硝基甲苯7.5ppm托拉塞米6疊氮酸10ppm坎地沙坦酯7疊氮酸10ppm纈沙坦8溴代異丙烷15ppm氯吡格雷氫溴酸鹽9聯(lián)苯溴化物3.4ppm纈沙坦10聯(lián)苯溴化物四氮唑4ppm纈沙坦115-氰基苯酞25ppm西酞普蘭氫溴酸鹽125-氨基苯酞25ppm西酞普蘭氫溴酸鹽13硝基化合物25ppm西酞普蘭氫溴酸鹽14氨基化合物25ppm西酞普蘭氫溴酸鹽15硫脲3