實(shí)驗(yàn)二 紅細(xì)胞比容、血紅蛋白及滲透脆性測定課件

實(shí)驗(yàn)二紅細(xì)胞比容測定

紅細(xì)胞脆性的測定

血紅蛋白測定

一、紅細(xì)胞比容測定

目的

掌握紅細(xì)胞比容的測定方法。原理將定量的抗凝血灌注于帶刻度玻璃管中，定時(shí)、定速離心后,有形成分和血漿分離，上層呈淡黃色的液體是血漿，中間很薄一層為灰白色，即白細(xì)胞和血小板（或栓細(xì)胞），下層為暗紅色的紅細(xì)胞，彼此壓緊而不改變細(xì)胞的正常形態(tài)。根據(jù)紅細(xì)胞柱及全血高度，可計(jì)算出紅細(xì)胞在全血中的容積比值，即為紅細(xì)胞比容（壓積）

。方法與步驟溫氏分血管比容法用帶有長注針頭的注射器，取抗凝血將其插入分血管的底部，緩慢放入，邊放邊抽出注射針頭，使血液精確到10cm刻度處。離心：將分血管以3000r/min離心30min，取出分血管，讀取紅細(xì)胞柱的高度，再以同樣的轉(zhuǎn)速離心5min，再讀取紅細(xì)胞柱的高度，如果記錄相同，該讀數(shù)的10倍即為紅細(xì)胞比容（容積百分比）。[注意事項(xiàng)]選擇抗凝劑必須考慮到不能使紅細(xì)胞變形、溶解。本實(shí)驗(yàn)采用檸檬酸鈉抗凝。血液與抗凝劑混合、注血時(shí)應(yīng)避免動作劇烈引起紅細(xì)胞破裂。溫氏分血管內(nèi)壁要充分干燥。血液進(jìn)入毛細(xì)管內(nèi)的刻度讀數(shù)要精確，血柱中不得有氣泡。紅細(xì)胞膜對低滲溶液的抵抗力越大，紅細(xì)胞在低滲溶液中越不容易發(fā)生溶血，即紅細(xì)胞滲透脆性越小。將血液滴入不同的低滲溶液中，可檢查紅細(xì)胞膜對于低滲溶液抵抗力的大小。開始出現(xiàn)溶血現(xiàn)象的低滲溶液濃度，為該血液紅細(xì)胞的最小抵抗力；出現(xiàn)完全溶血時(shí)的低滲溶液濃度，則為該血液紅細(xì)胞的最大抵抗力。方法與步驟1、溶液配制：取10個(gè)小試管，配制出10種不同濃度的氯化鈉低滲溶液（0.25%，0.3%，0.35%，0.4%，0.45%，0.5%，0.55%，0.6%，0.65%，0.9%）。2、加抗凝血：用滴管吸取抗凝血，在各試管中各加一滴，輕輕搖勻，靜置1～2h。3、觀察結(jié)果：根據(jù)各管中液體顏色和渾濁度的不同，判斷紅細(xì)胞脆性。①未發(fā)生溶血的試管：液體下層為大量紅細(xì)胞沉淀，上層為無色透明，表明無紅細(xì)胞破裂。②部分紅細(xì)胞溶血的試管：液體下層為紅細(xì)胞沉淀，上層出現(xiàn)透明淡紅（淡紅棕）色，表明部分紅細(xì)胞已經(jīng)破裂，稱為不完全溶血。③紅細(xì)胞全部溶血的試管：液體完全變成透明紅色，管底無紅細(xì)胞沉淀，表明紅細(xì)胞完全破裂，稱為完全溶血。1%NaCl稀釋成不同濃度的低滲溶液試管號123456789101%NaCl(ml)1.501.401.301.201.101.000.900.800.700.60蒸餾水(ml)0.500.600.700.800.901.001.101.201.301.40NaCl濃度(ml)0.750.700.650.600.550.500.450.400.350.30[注意事項(xiàng)]小試管要干燥，加抗凝血的量要一致，只加一滴?；靹驎r(shí)，輕輕傾倒1～2次，減少機(jī)械震動，避免人為溶血。配制不同濃度的NaCl溶液時(shí)應(yīng)力求準(zhǔn)確、無誤。方法與步驟沙里氏血紅蛋白計(jì)測定沙里氏比色法是用HCl使血紅蛋白酸化形成棕色的高鐵血紅蛋白，然后和標(biāo)準(zhǔn)比色板進(jìn)行比色。沙里血紅蛋白計(jì)主要具有標(biāo)準(zhǔn)褐色玻璃比色箱和1只方形刻度測定管組成。比色管兩側(cè)通常有兩行刻度；一側(cè)為血紅蛋白量的絕對值，以g·dl-1(每100ml血液中所含血紅蛋白的克數(shù))表示，從2～22g；另一側(cè)為血紅蛋白相對值，以%（即相當(dāng)于正常平均值的百分?jǐn)?shù)）來表示，從10%～160%。為避免所使用的平均值不一致，因此一般采用絕對值來表示。④把比色管插入標(biāo)準(zhǔn)比色箱兩色柱中央的空格中。⑤使無刻度的兩面位于空格的前后方向，便于透光和比色。用滴管向比色管內(nèi)逐滴加入蒸餾水，并不斷攪勻，邊滴，邊觀察、邊對著自然光進(jìn)行比色，直到溶液的顏色與標(biāo)準(zhǔn)比色板的顏色一致為止。⑥讀出管內(nèi)液體面所在的克數(shù)，即