瓊脂糖凝膠電泳法鑒別肝素鈉中重硫化硫酸軟骨素?fù)郊傺芯空n件

專業(yè)動(dòng)物醫(yī)學(xué)

年級(jí)2005級(jí)

學(xué)號(hào)2229姓名鄭海燕指導(dǎo)教師張耕廖江波瓊脂糖凝膠電泳法鑒別

肝素鈉中重硫化硫酸軟骨素?fù)郊傺芯恐饕獌?nèi)容研究背景材料與方法結(jié)果與分析結(jié)論致謝研究背景

肝素是一種含有硫酸基的粘多糖，常以鈉鹽存在，因此稱之肝素鈉（Heparinsodiumsalt）。它除了作為臨床上最重要的抗凝劑外，隨著生化和藥理作用的深入研究，其潛在的作用不斷被發(fā)掘，如抗炎、抗癌、抗過敏、抗張冠脈、抑制單純皰疹病毒活性等等。在臨床上也顯示出了許多新的用途及功效。應(yīng)用日益廣泛，范圍擴(kuò)大到了美容、化妝等。肝素結(jié)構(gòu)復(fù)雜，天然不可替代性，至今不可用人工方法合成，有其較高的價(jià)值。

去年2月美國報(bào)道，造成四名患者死亡，300多人出現(xiàn)過敏反應(yīng)的美國百特醫(yī)療公司所產(chǎn)肝素鈉中，檢出多硫酸軟骨素，中國食品藥品監(jiān)管局針對此事件于去年4月要求國內(nèi)肝素鈉藥品生產(chǎn)企業(yè)，必須在現(xiàn)行的肝素鈉藥品質(zhì)量檢測標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上，增加多硫酸軟骨素檢測項(xiàng)目，以確保產(chǎn)品質(zhì)量安全。目前美國FDA推薦檢檢重硫化硫酸軟骨素的方法是核磁共振和毛細(xì)管電泳法，兩種方法的檢測費(fèi)用很高，儀器也很昂貴，一般廠家難于完成。我們希望利用肝素和重硫化硫酸軟骨素的分子量和帶電荷不同，其電泳圖譜上的差異，尋找一種肝素?fù)郊俚某醪借b定方法，對肝素鈉生產(chǎn)具有重要的實(shí)際意義。材料與方法材料

豬肝素（重慶東華生物制品公司，效價(jià)157，藥用級(jí)）重硫化硫酸軟骨素(某生化制品公司提供，含量>99%)試驗(yàn)主要儀器：電子天平（上海恒平科學(xué)儀器有限公司）電泳儀（北京君意東方電泳設(shè)備有限公司）試驗(yàn)主要藥物瓊脂糖粉（成都市科龍化工試劑廠）四硼酸鈉、硼酸、甲苯胺藍(lán)染料均為分析純。方法1緩沖液的制備2鑒別樣品的準(zhǔn)備3瓊脂糖平板電泳膠灌注4電泳5染色6觀察結(jié)果照像

結(jié)果與分析試驗(yàn)結(jié)果

1分析討論

2

2.豬肝素和重硫化硫酸軟骨素標(biāo)準(zhǔn)品電泳圖譜

12345671（標(biāo)準(zhǔn)肝素）、2（0.5%）、3（1%）、4（5%）、5（10%）、6（15%）、7（重硫化硫酸軟骨素）結(jié)論通過對摻入不同濃度重硫化硫酸軟骨素的肝素進(jìn)行瓊脂糖電泳，電泳最佳的時(shí)間為45分鐘、凝膠濃度為2.5％,電壓300V，能檢測出重硫化硫酸軟骨素?fù)郊俑哂?%的肝素樣品，可以作為初步檢測的方法在生產(chǎn)中使用。