微生物大小與數(shù)量測定

關(guān)于微生物大小與數(shù)量測定第一頁，共二十一頁，2022年，8月28日一、目的要求1．明確血細(xì)胞計數(shù)板計數(shù)的原理2．掌握使用血細(xì)胞計數(shù)板進行微生物計數(shù)的方法。第二頁，共二十一頁，2022年，8月28日二、基本原理

微生物個體生長的時間較短，很快進入分裂繁殖階段，個體生長難以測定。它們的生長一般以繁殖即群體生長作為微生物生長的指標(biāo)。群體生長表現(xiàn)為細(xì)胞數(shù)目的增加或細(xì)胞物質(zhì)的增加。測定數(shù)目的方法有顯微鏡直接計數(shù)法、平板計數(shù)法、光電比濁法等。顯微鏡直接計數(shù)法是將小量待測樣品的懸浮液置于一種特別的具有確定面積和容積的載玻片上，于顯微鏡下直接計數(shù)的一種簡便、快速、直觀的方法。

第三頁，共二十一頁，2022年，8月28日三、實驗材料酵母菌液顯微鏡、血球計數(shù)器3.蓋玻片、毛細(xì)管等第四頁，共二十一頁，2022年，8月28日4-2血球計數(shù)板是一塊特制的載玻片，有四條豎槽和一條橫槽。橫槽兩邊的平臺上各有一個有九個大方格的方格網(wǎng)，中間大方格為計數(shù)室：邊長為１mm，深為0.1mm，容積為0.1mm3(10-4ml)。計數(shù)室有兩種規(guī)格：一是分為16個中方格，每中方格中有25個小方格；另一種是分為25個中方格，每中方格有16個小方格。兩種都共有400個小方格。第五頁，共二十一頁，2022年，8月28日第六頁，共二十一頁，2022年，8月28日4-2第七頁，共二十一頁，2022年，8月28日16小格×25大格計數(shù)室

25小格×16大格計數(shù)室

計數(shù)室的兩種刻度形式第八頁，共二十一頁，2022年，8月28日四、實驗內(nèi)容一.酵母菌數(shù)量的檢測（顯微鏡直接計數(shù)法）注意事項:

取樣時先要搖勻菌液;加樣時計數(shù)室不可有氣泡產(chǎn)生。B.調(diào)節(jié)顯微鏡光線的強弱適當(dāng)。第九頁，共二十一頁，2022年，8月28日

1.取清潔無油的血球計數(shù)板，在計數(shù)室上面加蓋玻片。

2.取酵母菌液，搖勻，用滴管由蓋玻片邊緣滴一小滴，使菌液自行滲入，計數(shù)室內(nèi)不得有氣泡。

3.靜止5min后，用低倍鏡觀察并將計數(shù)室移至視野中央。

4.在高倍鏡下計數(shù)：隨機計數(shù)五個中格的平均值，然后求得每個中格的平均值。乘上16（或25）就得出一大格中的總菌數(shù)，最后再換算到每mL菌液中的含菌數(shù)。四、實驗內(nèi)容第十頁，共二十一頁，2022年，8月28日

5.計算方法：

6.注意事項：壓在方格線上的菌體，以壓在底線和右側(cè)線上的菌體計入本格內(nèi)；遇到有芽體的酵母時，若芽體和母體同等大，就按單個酵母計數(shù)。

7.計數(shù)完畢后，血球計數(shù)板要立即清洗干凈，并用吸水紙吸干，最后用擦鏡紙擦干凈，并放回盒內(nèi)。

（X1+X2+X3+X4+X5）5X25（或16）X10X1000x稀釋倍數(shù)

酵母菌細(xì)胞數(shù)/mL=四、實驗內(nèi)容第十一頁，共二十一頁，2022年，8月28日五、實驗報告1、結(jié)果記錄：將計數(shù)結(jié)果記錄下表。A表示五個中方格中的總菌數(shù)。B稀釋倍數(shù)為102。注:1mL菌液總數(shù)=A/5×25×104×B=5×107×A第十二頁，共二十一頁，2022年，8月28日細(xì)菌大小的測定

第十三頁，共二十一頁，2022年，8月28日一、目的要求學(xué)習(xí)測微尺的使用和計算方法利用測微尺測量微生物的大小第十四頁，共二十一頁，2022年，8月28日二、基本原理

微生物個體生長的時間較短，很快進入分裂繁殖階段，個體生長難以測定。它們的生長一般以繁殖即群體生長作為微生物生長的指標(biāo)。群體生長表現(xiàn)為細(xì)胞數(shù)目的增加或細(xì)胞物質(zhì)的增加。測定數(shù)目的方法有顯微鏡直接計數(shù)法、平板計數(shù)法、光電比濁法等。微生物細(xì)胞的大小是微生物基本的形態(tài)特征，也是分類鑒定的依據(jù)之一。微生物大小的測定，需要在顯微鏡下，借助于特殊的測量工具即測微尺，包括目鏡測微尺和鏡臺測微尺。第十五頁，共二十一頁，2022年，8月28日三、實驗材料酵母菌液顯微鏡、目鏡測微尺、鏡臺測微尺3.載玻片、蓋玻片、接種環(huán)、膠頭吸管等第十六頁，共二十一頁，2022年，8月28日四、實驗內(nèi)容注意事項：觀察時光線不宜過強,否則難以找到鏡臺測微尺的刻度;換高倍鏡和油鏡校正時,務(wù)必十分小心,防止接物鏡壓壞鏡臺測微尺和損壞鏡頭。1.測微尺的校正（標(biāo)定）：兩重合線間鏡臺測微尺格數(shù)Ⅹ10目鏡測微尺每格長度(μm)=

兩重合線間目鏡測微尺格數(shù)2．酵母菌大小的測定：利用制好的血球器浸片，用高倍鏡測出寬和長各占目鏡測微尺的格數(shù)，再將測到的格數(shù)乘以目鏡測微尺（用高倍鏡時標(biāo)定的）每格所代表的長度，即為酵母菌的實際大小。第十七頁，共二十一頁，2022年，8月28日五、實驗報告（1）將目鏡測微尺校正結(jié)果填入下表:

接目鏡放大倍數(shù)：-10×-第十八頁，共二十一頁，2022年，8月28日五、實驗報告(2)將酵母菌大小測定結(jié)果填入下表：第十九頁，共二十一頁，2022年，8月28日五、實驗報告2.思考題：在不改變目鏡和目鏡測微尺，而改用不同放大倍數(shù)的物鏡來測