食品整治辦(2009)29號

食品整治辦[2009]29號關(guān)于印發(fā)全國打擊違法添加非食用物質(zhì)和濫用食品添加劑專項整治抽檢工作指導原則和方案的通知各省、自治區(qū)、直轄市及新疆生產(chǎn)建設兵團打擊違法添加非食用物質(zhì)和濫用食品添加劑專項整治領(lǐng)導小組：根據(jù)《全國打擊違法添加非食用物質(zhì)和濫用食品添加劑專項整治方案》（衛(wèi)監(jiān)督發(fā)[2008]60號）規(guī)定和《全國打擊違法添加非食用物質(zhì)和濫用食品添加劑專項整治近期工作重點及要求》（衛(wèi)監(jiān)督發(fā)[2009]21號），全國專項整治領(lǐng)導小組組織制定了專項整治抽檢工作指導原則和專項整治國家專項抽檢工作方案，經(jīng)專項整治領(lǐng)導小組各成員部門同意，現(xiàn)印發(fā)給你們，請認真組織實施。有關(guān)要求如下：一、各?。ㄊ?、區(qū)）專項整治領(lǐng)導小組要根據(jù)抽檢工作指導原則的要求，結(jié)合本地區(qū)的實際情況，制定具體的抽檢計劃并組織實施。請各地專項整治領(lǐng)導小組負責，務必于4月15日前將抽檢結(jié)果及分析評估報告報送全國專項整治領(lǐng)導小組辦公室。二、承擔專項整治國家專項抽檢方案工作任務的各部門和檢驗機構(gòu)要加強協(xié)調(diào)配合，按要求采樣并將樣品送至指定檢驗機構(gòu)進行檢驗。檢驗機構(gòu)要按時限完成樣品檢驗工作并將檢驗結(jié)果通報監(jiān)督抽樣單位。三、對抽檢中發(fā)現(xiàn)的違法食品生產(chǎn)經(jīng)營行為，各地要依法予以查處，并將處理情況及時向社會公布。抽檢中發(fā)現(xiàn)的問題，請及時函報我辦。聯(lián)系人：李業(yè)鵬聯(lián)系電話真件：1.全國打擊違法添加非食用物質(zhì)和濫用食品添加劑專項整治抽檢工作指導原則2.全國打擊違法添加非食用物質(zhì)和濫用食品添加劑專項整治國家專項抽檢工作方案3.抽檢檢驗方法全國打擊違法添加非食用物質(zhì)和濫用食品添加劑專項整治領(lǐng)導小組（代章） 二○○九年三月二十三日（信息公開形式：主動公開）

附件1全國打擊違法添加非食用物質(zhì)和濫用食品添加劑專項整治抽檢工作指導原則為做好全國打擊違法添加非食用物質(zhì)和濫用食品添加劑專項整治（以下簡稱專項整治）抽檢工作，特制定本指導原則。一、職責分工各省專項整治領(lǐng)導小組負責組織各有關(guān)部門制定具體的抽檢計劃，落實各項工作任務，按時報送抽檢計劃和抽檢工作總結(jié)報告。各部門要加強對各地本系統(tǒng)抽檢工作的督導檢查和指導，及時組織培訓和質(zhì)量控制。二、重點食品乳及乳制品、米面制品、淀粉制品、豆谷制品、肉與肉制品、酒類、水產(chǎn)品、調(diào)味品。三、抽檢要求（一）重點抽檢項目。重點抽檢項目為衛(wèi)生部等九部門公布的違法添加到食品中的非食用物質(zhì)及易濫用的食品添加劑的名單（第一、二批）或在食品安全監(jiān)督、監(jiān)測和舉報投訴等渠道發(fā)現(xiàn)的非法食品添加物和濫用食品添加劑。（二）樣品采集的要求。1、樣品采集原則為樣品應具有代表性。應采集不同生產(chǎn)廠家的樣品，達不到要求數(shù)量的，可以采集同一廠家但不同品牌的產(chǎn)品，仍達不到的可以選擇不同口味的產(chǎn)品。2、如在銷售領(lǐng)域采集則本地生產(chǎn)的樣品數(shù)量不少于80%。3、采集的樣品應在保質(zhì)期內(nèi)，并考慮檢驗時樣品在保質(zhì)期內(nèi)。4、樣品采集地點應考慮“添加劑”可能用在的重點環(huán)節(jié)，即該類食品添加劑可能出現(xiàn)的各個監(jiān)管環(huán)節(jié)如食品原料、生產(chǎn)加工、銷售流通、餐飲等。5、樣品的代表性還表現(xiàn)在樣品來源于大、中、小企業(yè)。因此在不同監(jiān)管領(lǐng)域樣品采集時應考慮大中小三個層次（如大中小農(nóng)場；大中小食品生產(chǎn)企業(yè)；大中小商場超市或集貿(mào)市場；大中小餐飲業(yè)等），每個層次至少采集10個樣品，少于10個樣品的，全部采集。（三）依法進行樣品的采集和檢驗。包括采集程序、采集方法、封存、儲存、傳遞、檢驗等工作按照國家或地方各監(jiān)管部門頒布的監(jiān)督檢查規(guī)范、抽檢管理規(guī)定或辦法執(zhí)行。四、檢驗方法檢驗項目按附件指定的檢驗方法和有關(guān)國家標準檢驗方法執(zhí)行。附件2全國打擊違法添加非食用物質(zhì)和濫用食品添加劑專項整治國家專項抽檢工作方案為加強對重點食品的抽檢工作，全國專項整治領(lǐng)導小組決定組織部分省份相關(guān)部門和檢驗機構(gòu)開展國家專項抽檢工作，制定本工作方案。一、職責分工（一）全國專項整治領(lǐng)導小組辦公室負責監(jiān)督抽檢方案的組織實施及結(jié)果匯總。（二）各有關(guān)部門對國家專項抽檢工作進行督導檢查和指導。（三）各地專項整治領(lǐng)導小組負責抽檢工作組織協(xié)調(diào)及結(jié)果上報。（四）具體承擔抽檢任務的單位見附表1。二．樣品采集要求1.樣品采集地點見附表1。2.樣品采集的要求。（1）樣品采集原則為樣品應具有代表性。應采集不同生產(chǎn)廠家的樣品，達不到要求數(shù)量的，可以采集同一廠家但不同品牌的產(chǎn)品，仍達不到的可以選擇不同口味的產(chǎn)品。采樣地點覆蓋省市縣且不少于3家。水發(fā)水產(chǎn)品不少于5家。（2）在銷售流通領(lǐng)域采集樣品，本地生產(chǎn)的樣品數(shù)量不少于80%。（3）采集的樣品應在保質(zhì)期內(nèi)，并考慮檢驗時樣品在保質(zhì)期內(nèi)。（4）樣品采集量：每個食品樣品應采集2份，每份至少500g。其中一份送檢驗機構(gòu)用于檢驗，一份留存采樣機構(gòu)用于復檢（檢驗有異議時）。水發(fā)水產(chǎn)品中甲醛檢驗不復檢，可以不留樣。（5）樣品保存：原料奶散裝樣品應混勻后用滅菌容器分裝。水發(fā)產(chǎn)品用化學分析用容器分裝。取樣后在0-4℃條件下運輸，并于18h內(nèi)送到試驗室,如果無冷藏條件應于采樣后4h內(nèi)檢驗。樣品保存在-20（三）樣品傳遞：采樣機構(gòu)應派專人于4月1日前將樣品送到指定的檢驗機構(gòu)，并按照檢驗規(guī)定完成樣品的接收程序。（四）依法進行樣品的采集和檢驗，包括采集程序、采集方法、封存、儲存、傳遞、檢驗等工作按照國家或地方各監(jiān)管部門頒布的監(jiān)督檢查規(guī)范、抽檢管理規(guī)定或辦法執(zhí)行。（五）全國專項整治領(lǐng)導小組提供抽檢經(jīng)費。三、結(jié)果報送和判定（一）各地專項整治領(lǐng)導小組于2009年4月15日前將抽檢結(jié)果（不包括結(jié)果判定）報送全國專項整治領(lǐng)導小組辦公室。抽檢數(shù)據(jù)匯總表（格式）見附表2。（二）結(jié)果判定各地專項整治領(lǐng)導小組對于具有國家限量標準的檢驗結(jié)果進行判定，并對違法產(chǎn)品進行查處。對于沒有國家限量標準的項目，由全國專項整治領(lǐng)導小組專家委員會對結(jié)果進行判定。附表1：專項整治國家專項抽檢工作方案具體項目附表2：抽檢信息匯總表（格式）附表1：專項整治國家專項抽檢工作方案具體項目序號產(chǎn)品類別采樣地點每省數(shù)量抽檢項目檢驗依據(jù)采樣省份省級采樣單位檢測單位備注1.原料奶奶站10個β-內(nèi)酰胺酶本文件附3方法天津、河北、內(nèi)蒙、黑龍江、遼寧、山東、河南、陜西農(nóng)業(yè)（牧業(yè)、畜牧）廳局省級農(nóng)業(yè)（牧業(yè)、畜牧）廳局檢驗機構(gòu)三聚氰胺GB/T22388-20082.紅葡萄酒集貿(mào)市場10個環(huán)己基氨基磺酸鈉（甜蜜素）GB/T5009.97-2003河南、山東、吉林、河北、黑龍江、天津、北京、福建質(zhì)監(jiān)局省級質(zhì)監(jiān)部門檢驗機構(gòu)糖精鈉GB/T5009.28-2003胭脂紅、日落黃、莧菜紅、赤蘚紅GB/T5009.35-20033.面粉餐飲單位10個溴酸鉀GB/T20188-2006河南、山東、黑龍江、江蘇、河北、安徽、四川、陜西衛(wèi)生廳局省級CDC過氧化苯甲酰GB/T22325-2004.水發(fā)水產(chǎn)品集貿(mào)市場20個甲醛SC/T3025-2006福建、江西、浙江、廣東、重慶、山東工商局省級CDC5.熟肉制品大、中、小生產(chǎn)企業(yè)各5個氟苯尼考參考GB/T20756-2006北京、遼寧、河北、安徽、湖南質(zhì)監(jiān)局農(nóng)業(yè)部中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所聯(lián)系電/p>

附表2：抽檢信息匯總表（格式）產(chǎn)品類別： 行業(yè)類型：行業(yè)層次：上報單位（簽章）： ：依據(jù)檢驗方法鉛GB/T5009.12-2003,甜蜜素GB/T5009.97-2003……填報日期 年月日判定依據(jù)及判定標準GB2760甜蜜素：0.06mg/kg填表人：序號產(chǎn)品名稱商標規(guī)格生產(chǎn)日期或批號標示生產(chǎn)單位及屬地（縣級以上）被采樣單位檢驗值（或檢查情況）不合格項目是否確認備注鋁（mg/kg）甜蜜素（mg/kg）注：1.“檢驗項目及檢測值”欄目下的相應的列數(shù)設定及其欄目標題，應根據(jù)計劃中不同食品要求的檢驗項目而定（上表中相應標題僅是舉例）。2．行業(yè)類型：原料奶、生產(chǎn)企業(yè)、商場、集貿(mào)市場、餐飲單位。行業(yè)層次：大、中、小。3.明確填報信息，不能有空格，如無信息即填“無”。附件3.抽檢檢驗方法1、國家標準檢驗方法序號檢測項目檢驗方法1.

甲醛次硫酸鈉（吊白塊）GB/T21126-2007小麥粉與大米粉及其制品中甲醛次硫酸氫鈉含量的測定；2.

溴酸鉀GB/T20188-2006小麥粉中溴酸鹽的測定離子色譜法3.

胭脂紅GB/T5009.35-20034.

檸檬黃GB/T5009.35-20035.

日落黃GB/T5009.35-20036.

莧菜紅GB/T5009.35-20037.

亮藍GB/T5009.35-20038.

赤蘚紅GB/T5009.35-20039.

新紅GB/T5009.35-200310.

誘惑紅GB/T5009.141-2003食品中誘惑紅的測定11.

山梨酸GB/T5009.29-2003食品中山梨酸、苯甲酸的測定12.

苯甲酸GB/T5009.29-2003食品中山梨酸、苯甲酸的測定13.

環(huán)己基氨基磺酸鈉（甜蜜素）GB/T5009.97-2003食品中環(huán)己基氨基磺酸鈉的測定14.

糖精鈉GB/T5009.28-2003食品中糖精鈉的測定15.

蔗糖脂肪酸酯GB10617-2005食品添加劑蔗糖脂肪酸酯（丙二醇法）16.

過氧化苯甲酰GB/T22325-2008小麥粉中過氧化苯甲酰的測定高效液相色譜法17.

硼酸GB/T21918-2008食品中硼酸的測定18.

硼砂GB/T21918-2008食品中硼酸的測定19.

鋁GB/T5009.182-2003面制食品中鋁的測定20.

二氧化鈦GB/21912-2008食品中二氧化鈦的測定21.

亞硝酸鹽GB/T5009.33-2003食品中亞硝酸鹽、硝酸鹽的測定22.

三聚氰胺GB/T22388-2008原料乳與乳制品中三聚氰胺檢測方法GB/T22400-2008原料乳中三聚氰胺快速檢測液相色譜法23.

蘇丹紅ⅠGB/T19681-2005食品中蘇丹紅染料的檢測方法高效液相色譜法2、指定的檢驗方法序號檢測項目檢驗方法1硫氰酸鈉離子色譜法測定牛奶中硫氰酸根2富馬酸二甲酯食品中富馬酸二甲酯殘留量的測定3堿性橙ⅡBasicrangeⅡ辣椒粉中堿性橙、堿性玫瑰精、酸性橙Ⅱ及酸性黃的測定——液相色譜辣椒粉中堿性橙、堿性玫瑰精、酸性橙Ⅱ及酸性黃的測定——液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法4β-內(nèi)酰胺酶乳及乳制品中舒巴坦敏感β-內(nèi)酰胺酶類藥物檢驗方法杯碟法5甲醛SC/T3025-2006水產(chǎn)品中甲醛的測定

指定檢驗方法1.離子色譜法測定牛奶中硫氰酸根1原理液態(tài)奶樣品沉淀蛋白、去除脂肪后，用離子色譜分析，電導檢測器檢測，外標法定量。2實驗部分2.1試劑與材料2.1.1試驗用水均為超純水2.1.2乙腈（色譜純）2.1.3固相萃取小柱：OnGuardRP柱（2.5cc），或相當者（如C18），使用前依次用5ml甲醇和10ml水活化。2.1.4硫氰酸標準品：北京化工廠2.1.5硫氰酸標準儲備液將硫氰酸標準品于80度烘箱內(nèi)烘干2小時。準確稱取干燥后的硫氰化鉀1.6732g于1000ml容量瓶中，定容，混勻。即得1000ppm硫氰根標準儲備液。2.1.6硫氰酸標準中間液取硫氰酸標準儲備溶液1mL，置于100mL容量瓶中，加水至刻度。此溶液含硫氰酸10mg/L。2.1.7硫氰酸標準使用液移取0.1、0.2、0.5、1.0、2.0mL硫氰酸標準中間液，用水定容于10mL容量瓶中，濃度分別為0.1、0.2、0.5、1.0、2.0mg/L。2.2儀器2.2.1離子色譜儀：配備淋洗液發(fā)生器和電導檢測器；2.2.2離心機：冷凍離心機。2.3樣品處理取4mL液體奶樣品，加入5mL乙腈沉淀蛋白，取上清液稀釋10倍，過RP柱（或經(jīng)冷凍離心機）去除脂肪后上機。2.4離子色譜參考條件色譜柱：強親水性陰離子交換柱。IonPacAS16，4.0×250mm分析柱；IonPacAG16，4.0×50mm保護柱；或其他相當者。流動相：KOH溶液，梯度淋洗。淋洗液由淋洗液在線發(fā)生器在線產(chǎn)生。KOH梯度程序如下：時間（min）KOH濃度（mmol）045134513.170187018.1452345流速：1.0mL/min；抑制器：ASRS-300型抑制器，4mm；抑制器抑制模式：外接水模式，抑制電流175mA；柱溫：30℃；進樣體積：100μL。3結(jié)果計算X=c*9*10/4…………（1）式中：X——液態(tài)奶中硫氰酸的含量，單位為微克每毫升（μg/mL）；c——由標準曲線得到試樣溶液中硫氰酸的濃度，單位為微克每毫升（μg/mL）；9——液態(tài)奶的體積與乙腈體積之和，單位為毫升（mL）；4——液態(tài)奶的體積，單位為毫升（mL）；10——稀釋倍數(shù)；計算結(jié)果保留兩位有效數(shù)字。4精密度在重復性條件下，獲得的硫氰酸的兩次獨立測試結(jié)果的絕對差值不大于其算術(shù)平均值的5%。

指定檢驗方法2.食品中富馬酸二甲酯殘留量的測定1范圍本方法規(guī)定了食品中富馬酸二甲酯殘留量的GC測定方法。本方法適用于糧食、糕點、水果等食品中富馬酸二甲酯殘留量的測定。本方法的檢測限（LOD）為：25mg/kg。2規(guī)范性引用文件下列文件中的條款通過本標準的引用而成為本標準的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或修訂版均不適用于本標準，然而，鼓勵根據(jù)本標準達成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標準。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法。3原理樣品中富馬酸二甲酯（DMF）經(jīng)提取凈化后，用附氫火焰離子檢測器的氣相色譜儀進行分離測定，與標準系列比較定量。4試劑和材料4.1除非另有說明，所有試劑均為分析純，水：GB/T6682規(guī)定的一級水。4.2氯仿。4.3無水硫酸鈉。4.4中性氧化鋁（層析用60-80目）。4.5標準溶液貯備液：0.1g富馬酸二甲酯（含量99.9%），用少量氯仿溶解，轉(zhuǎn)移到100ml容量瓶中，用氯仿稀釋至刻度，該標準溶液含富馬酸二甲酯1mg/ml。4.6標準溶液使用液：分別吸取標準溶液5、10、15、20、25、30ml于100ml容量瓶中，用氯仿稀釋至刻度，富馬酸二甲酯濃度分別為50、100、150、200、250、300ug/ml。5儀器與設備5.1氣相色譜儀，附氫火焰離子檢測器。5.2勻漿機。5.3粉碎機。6分析步驟6.1樣品制備。6.1.1糧食、糕點、及含水分少低脂類的固體食品。稱取5.0g或10.0g粉碎樣品，置于250ml具塞三角燒瓶中，加30ml氯仿，振搖30min，用定性濾紙過濾，取10ml濾液，吹入氮氣使?jié)饪s至1ml,備用。6.1.2含脂肪較多的樣品稱取粉碎樣品10.0g，加中性氧化鋁5－10g（視脂肪多少而定），以下按6.1.1"加30ml氯仿…"起，依法操作。6.1.3水果類將水果去皮，切成碎片，加等量蒸餾水于勻漿機中勻漿后，稱取20.0g勻漿液（相當于10g樣品），加氯仿30ml，振搖30min，用定性濾紙過濾于125ml分液漏斗中，待分層后，用無水硫酸鈉過濾，取濾液10ml，吹入氮氣濃縮至1ml，待測。6.2測定6.2.1色譜參考條件a）色譜柱：玻璃柱（內(nèi)徑3mm，長2m），內(nèi)裝涂以2％OV-101和6％OV-210混合固定液的60－80目ChromosorbW.AWDMCS(HP);b）氣流速度：氮氣50ml/min；空氣500ml/min;氫氣35ml/min；。c）溫度：氣化室及檢測器200℃,柱溫155℃d)進樣量：1μL。6.3.2測定注入1uL標準系列中各濃度標準使用液于氣相色譜儀中，測得不同濃度富馬酸二甲酯的峰高，以濃度為橫坐標，相應的峰高值為縱坐標，繪制標準曲線。同時注射一定體積樣品溶液，測得峰高與標準曲線比較定量。6.2.3陽性樣品的確證按照上述條件測定試樣和標準工作溶液，如果試樣中的質(zhì)量色譜峰保留時間與標準工作溶液一致（變化范圍在±2.5%之內(nèi)）條件許可可以通過GC—MS定性6.2.4空白實驗除不稱取樣品外，均按上述測定條件和步驟進行。6.2.5允許差在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的20%。7.結(jié)果計算樣品中富馬酸二甲酯殘留量按照下式計算：X：樣品中富馬酸二甲酯殘留量，mg/kgA：測定樣品液中富馬酸二甲酯含量，ug/mlV1：濃縮用樣品提取液體積，mlV2：樣品氯仿提取液總體積，mlV3：樣品濃縮后的體積，mlV4：標準溶液進樣體積，ulV5：樣品溶液進樣體積，ulm：樣品重量，g8.相關(guān)技術(shù)參數(shù)方法最低檢出限：25mg/kg?；厥章试?8.9％～94.2%范圍內(nèi)，其相對標準偏差在4.32％～9.07％的范圍內(nèi)。

指定檢驗方法3-1.辣椒粉中堿性橙、堿性玫瑰精、酸性橙Ⅱ及酸性黃的測定——液相色譜1原理試樣中的目標化合物用乙腈-水（7－3）提取，用高效液相色譜C18柱分離，紫外檢測器檢測，外標法定量。2實驗部分2.1儀器與試劑高效液相色譜儀，配備有Waters-Allains2695泵控及自動進樣系統(tǒng)，以及Waters-2996二極管陣列檢測器；離心機；超聲震蕩器。甲醇（色譜純，迪馬公司）乙腈（色譜純，迪馬公司）試驗用水均為超純水乙酸銨（分析純）無水乙酸（分析純）標準儲備液的配制：準確稱取0.0100g酸性黃、酸性橙Ⅱ、堿性橙、堿性玫瑰精標準品于10mL棕色容量瓶中，用甲醇醇溶解并定容至體積。標準使用液：分別吸取1.0mL酸性黃、酸性橙Ⅱ、堿性橙、堿性玫瑰精的標準儲備液到10mL容量瓶中用水定容至刻度為中間使用液，再分別取0.1、0.5、1.0、2.0、5.0mL中間使用液到1mL容量瓶中用水定容至刻度，四種組分的標準系列為：1、5、10、20、50μg/mL.提取液：乙腈/水=7/32.2液相色譜參考條件色譜柱：InertsilODS-34.6×250mm，5μm；流動相：A:乙腈；B：10mM乙酸銨水溶液（乙酸0.12％）梯度洗脫：AB0min：307014min：821815min821816min3070波長：酸性黃、酸性橙Ⅱ、堿性橙450nm；堿性玫瑰精550nm流速：1.0mL/min；柱溫：35℃；進樣體積：20μ2.3樣品處理準確稱取2～5g樣品于50mL塑料離心管中，加入10mL提取液，超聲提取20min后，以1000轉(zhuǎn)/h離心10min，取20μL液相色譜測定。3結(jié)果計算分別取標準和樣品各20μL進樣，HPLC測定，外標法定量。C：樣品中待測組分的含量，μg/g；c：樣品中待測組分的測定濃度，μg/mL；W：樣品重量，g。

指定檢驗方法3-2.辣椒粉中堿性橙、堿性玫瑰精、酸性橙Ⅱ及酸性黃的測定——液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法1原理試樣中的目標化合物用甲醇-乙酸銨溶液提取，經(jīng)弱陰離子交換固相萃取柱凈化后，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定，基質(zhì)加標工作曲線外標法定量。2試劑與材料除另有規(guī)定外，所有試劑均為分析純，實驗用水為超純水。2.1甲醇：液相色譜純2.2乙酸銨2.3甲酸2.4氨水2.5提取溶液：稱取3.9克乙酸銨用水溶解，加入10.0mL甲酸，用水定容到500mL后，用甲醇定容到1000mL2.6固相萃取柱平衡溶液：稱取3.9克乙酸銨用水溶解，加10.0mL甲酸，用水定容到500mL。2.7淋洗溶液：稱取3.9克乙酸銨用水溶解，加10.0mL甲酸和25.0mL甲醇，用水定容到500mL2.8洗脫溶液：取5mL氨水用甲醇定容至100mL。2.9樣品稀釋液：稱取0.39克乙酸銨用水溶解，加0.50mL甲酸，用水定容到250mL后，用水定容到500mL2.10流動相A：稱取0.39克乙酸銨用水溶解，加0.50mL甲酸，用水定容到500mL2.11流動相B：乙腈，液相色譜純。2.12弱陰離子交換固相萃取柱：WAX，60mg/3mL，使用前依次用3mL甲醇、3mL水以及3mL固相萃取柱平衡溶液（2.5）活化。2.13標準品：堿性橙、堿性玫瑰精、酸性橙Ⅱ和酸性黃。2.14標準儲備液（1.0mg/mL）：準確稱取0.0100克堿性橙、玫瑰精、酸性橙Ⅱ和酸性黃標準品，用50%甲醇水溶液定容至10.0mL2.15標準系列：配制堿性橙、玫瑰精、酸性橙Ⅱ和酸性黃混合標準系列，堿性橙、酸性橙Ⅱ和酸性黃濃度為：0.4、0.8、2.0、3.2、4.0μg/mL；玫瑰精標濃度為：10.0、20.0、50.0、80.0、100.0ng/mL。3儀器和設備3.1液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀：配有電噴霧（ESI）離子源。3.2離心機。3.3超聲波水浴。3.4固相萃取裝置。3.5氮吹儀。4樣品及基質(zhì)加標工作曲線的制備4.1樣品的制備a）提取稱取1.0克試樣于50mL離心管中，加入10.0mL提取溶液，超聲提取30分鐘，10000r/min離心10分鐘，上清液轉(zhuǎn)移至另一50mL離心管中；殘渣中加入10.0mLb）凈化取5.0mL樣品提取液，用固相萃取柱平衡溶液（2.5）稀釋定容至50.0mL，過已活化好的弱陰離子固相萃取柱，用2mL淋洗液、2mL水淋洗，5mL洗脫液洗脫，收集洗脫液，用氮氣吹至近干，用樣品稀釋液定容至1.0mL，過0.22μm濾膜后液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定。4.2基質(zhì)加標工作曲線的制備稱取1.0克空白樣品基質(zhì)于50mL離心管中，稱取6份，分別加入標準系列溶液（2.15）100μL，按4.1進行操作，制備基質(zhì)加標工作曲線，堿性橙、酸性橙Ⅱ和酸性黃濃度為：10.0、20.0、50.0、80.0、100.0ng/mL；玫瑰精濃度為：0.25、0.5、1.25、2.0、2.5ng/mL。5測定5.1液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜參考條件色譜柱：BHT1.7μm×100mm流動相：A:含0.1%甲酸的5mmol/L乙酸銨水溶液；B:乙腈。梯度洗脫TimeFlow（mL/min）A（%）B（%）00.3901050.3109060.310906.50.39010100.39010進樣量：5μL。柱溫：40℃離子源：堿性橙、堿性玫瑰精，電噴霧ESI，正離子；酸性橙Ⅱ、酸性黃，電噴霧ESI，負離子。掃描方式：多反應監(jiān)測MRM。監(jiān)測離子對：組分錐孔電壓（v）碰撞能量（ev）母離子（m/z）子離子（m/z）堿性橙3820212.876.5、120.6堿性玫瑰精7040433.2399.2、355.1酸性橙Ⅱ4040327.0155.9、79.8酸性黃5030352155.9、79.75.2定性測定各檢測目標化合物以保留時間和兩對離子的（特征離子對/定量離子對）所對應的LC-MS/MS色譜峰面積相對豐度進行定性。要求被測試樣中目標化合物的保留時間與標準溶液中目標化合物的保留時間一致（一致的條件是偏差小于20%），同時要求被測試樣中目標化合物的兩對離子對應LC-MS/MS色譜峰面積比與標準溶液中目標化合物的面積比一致，相對豐度>50%、20-50%、10-20%、<10%時，容許偏差分別為20%、25%、30%和50%。5.3定量測定按照5.1液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜條件測定樣品及基質(zhì)加標標準溶液，以標準溶液濃度對定量離子峰面積繪制標準曲線，外標法定量。6結(jié)果計算式中：C——樣品中目標化合物含量，μg/kg;c——測定濃度，ng/mL；v——定容體積，mL；W——稱樣量，g。

指定檢驗方法4.乳及乳制品中舒巴坦敏感β-內(nèi)酰胺酶類藥物檢驗方法杯碟法1范圍本標準規(guī)定了乳及乳制品中舒巴坦敏感β-內(nèi)酰胺酶類藥物的檢驗方法。本標準適用于乳及乳制品中舒巴坦敏感β-內(nèi)酰胺酶類物質(zhì)的檢驗。本方法的檢出限為4U/mL。2原理該方法采用對青霉素類藥物絕對敏感的標準菌株，利用舒巴坦特異性抑制β-內(nèi)酰胺酶的活性，并加入青霉素作為對照，通過比對加入β-內(nèi)酰胺酶抑制劑與未加入抑制劑的樣品所產(chǎn)生的抑制圈的大小來間接測定樣品是否含有β-內(nèi)酰胺酶類藥物。3設備和材料除微生物實驗室常規(guī)滅菌及培養(yǎng)設備外，其他設備和材料如下：3.1抑菌圈測量儀或測量尺。3.2恒溫培養(yǎng)箱：36℃±13.3高壓滅菌器。3.4無菌培養(yǎng)皿:內(nèi)徑90mm，底部平整光滑的玻璃皿，具陶瓦蓋。3.5無菌牛津杯：外徑(8.0士0.1)mm，內(nèi)徑(6.0士0.1)mm，高度(10.0士0.1)mm。3.6麥氏比濁儀或標準比濁管。3.7pH計。3.8無菌吸管：1mL（0.01mL刻度值），10mL（0.1mL刻度值）。3.9加樣器:5μL～20μL，20μL-200μL及配套吸頭。4培養(yǎng)基和試劑除另有規(guī)定外，所用試劑均為分析純，水為GB/T6682中規(guī)定的三級水。4.1試驗菌種：藤黃微球菌(Micrococcusluteus)CMCC(B)28001，傳代次數(shù)不得超過14次。4.2磷酸鹽緩沖溶液：按附錄A中A.1規(guī)定。4.3生理鹽水（8.5g/L）：按附錄A中A.2規(guī)定。4.4青霉素標準溶液：按附錄A中A.3規(guī)定。4.5β-內(nèi)酰胺酶標準溶液：按附錄A中A.4規(guī)定。4.6舒巴坦標準溶液按附錄A中A.5規(guī)定。。4.7營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基：按附錄A中A.6規(guī)定。4.8抗生素檢測用培養(yǎng)基Ⅱ：按附錄A中A.7規(guī)定。5.操作步驟5.1菌懸液的制備將藤黃微球菌接種于營養(yǎng)瓊脂斜面上，經(jīng)36士1℃培養(yǎng)18h-24h，用生理鹽水洗下菌苔即為菌懸液，測定菌懸液濃度，終濃度應大于1×1010CFU/mL，5.2樣品的制備將待檢樣品充分混勻，取1mL待檢樣品于1.5mL離心管中共4管，分別標為：A、B、C、D，每個樣品做三個平行，共12管，同時每次檢驗應取純水1mL加入到1.5mL離心管中作為對照。如樣品為乳粉，則將乳粉按1:10的比例稀釋。如樣品為酸性乳制品，應調(diào)節(jié)pH值至6-7。5.3檢驗用平板的制備取90mm滅菌玻璃培養(yǎng)皿，底層加10mL滅菌的抗生素檢測用培養(yǎng)基Ⅱ,凝固后上層加入5mL含有濃度為1×108CFU/mL藤黃微球菌的抗生素檢測用培養(yǎng)基Ⅱ,凝固后備用。5.4樣品的測定按照下列順序分別將青霉素標準溶液、β-內(nèi)酰胺酶標準溶液、舒巴坦標準溶液加入到樣品及純水中：A青霉素5μL。B舒巴坦25μL、青霉素5μL。Cβ-內(nèi)酰胺酶25