安捷倫HLC操作流程

安捷倫1260型HPLC操作流程主要內(nèi)容儀器的組成操作前準(zhǔn)備開機(jī)及關(guān)機(jī)工作站使用數(shù)據(jù)分析注意事項(xiàng)儀器的組成主體

安捷倫1260HPLC

流動(dòng)相瓶、四元泵、自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱、二極管陣列檢測(cè)器附件

電腦、顯示器、打印機(jī)等儀器的組成安捷倫1260HPLC流動(dòng)相瓶四元泵自動(dòng)進(jìn)樣器柱溫箱二極管陣列檢測(cè)器儀器的組成四元泵自動(dòng)進(jìn)樣器柱溫箱二極管陣列檢測(cè)器排氣閥流動(dòng)相瓶電源開關(guān)指示燈色譜柱操作前準(zhǔn)備流動(dòng)相選擇流動(dòng)相過(guò)濾流動(dòng)相超聲與脫氣流動(dòng)相冷卻操作前準(zhǔn)備流動(dòng)相選擇分類：組成分-單組分和多組分

極性-極性、弱極性、非極性常用溶劑：甲醇、水、乙腈、乙醇、乙酸乙酯、四氯化碳等

（溶劑最好為HPLC級(jí)，水為超純水）

其中多采用二元或多元組合溶劑作為流動(dòng)相，通過(guò)調(diào)節(jié)各組分的比例改變流動(dòng)相的極性，已達(dá)到最佳的分離效果，對(duì)于部分情況還可以加入緩沖鹽，調(diào)節(jié)出峰時(shí)間和達(dá)到改善峰型的效果。操作前準(zhǔn)備流動(dòng)相過(guò)濾為了除去流動(dòng)相中的雜質(zhì),保護(hù)系統(tǒng)和色譜柱，在流動(dòng)相使用完后，裝入新的溶劑前應(yīng)使用抽濾瓶對(duì)溶劑進(jìn)行過(guò)濾。濾膜濾膜：有機(jī)膜和水系膜，二者不能混用。一般HPLC流動(dòng)相過(guò)濾使用孔徑為0.45m的濾膜。針對(duì)混合溶劑首選有機(jī)濾膜過(guò)濾。操作前準(zhǔn)備流動(dòng)相超聲與脫氣

為了除去溶解在流動(dòng)相中得氣泡,降低基線噪音，在HPLC開機(jī)前應(yīng)把各溶劑瓶在超聲機(jī)中超聲30min左右。

對(duì)于溶解在流動(dòng)相中的極微氣體，安捷倫1260HPLC四元泵中集合了脫氣機(jī)，可以進(jìn)一步對(duì)混合后的流動(dòng)相進(jìn)行脫氣處理。操作前準(zhǔn)備流動(dòng)相冷卻

流動(dòng)相在超聲機(jī)中長(zhǎng)時(shí)間超聲后，由于水分子振動(dòng)摩擦，使水溫上升，因此流動(dòng)相瓶中的溶劑也會(huì)被加熱。加熱后的流動(dòng)相進(jìn)入液相系統(tǒng)和色譜柱后，會(huì)影響基線噪聲的增加，使平穩(wěn)時(shí)間延長(zhǎng)。開機(jī)及及關(guān)機(jī)機(jī)1260HPLC及化學(xué)工工作站站開機(jī)機(jī)使用與與關(guān)機(jī)機(jī)打開計(jì)計(jì)算機(jī)機(jī)打開主主機(jī)電電源點(diǎn)擊儀儀器1聯(lián)機(jī)進(jìn)進(jìn)入工工作站站排氣（（A/B/C/D）調(diào)節(jié)流流速與與流動(dòng)動(dòng)相比比例關(guān)閉排排氣閥閥打開柱柱溫箱箱逐步增增大流流速檢檢查壓壓力穩(wěn)定后后打開開檢測(cè)測(cè)器跑基線線穩(wěn)定后后清洗洗針與與管路路樣品命命名進(jìn)樣檢檢測(cè)保存數(shù)數(shù)據(jù)沖洗管管路及及關(guān)機(jī)機(jī)開機(jī)及及關(guān)機(jī)機(jī)關(guān)機(jī)前前，用用90%水水沖洗洗柱子子和系系統(tǒng)0.5-1小時(shí)時(shí)，流流量1.0mL/min，再再用100%有有機(jī)溶溶劑（（甲醇醇）沖沖0.5小小時(shí)，，然后后保存存方法法和儀儀器設(shè)設(shè)置。。退出化化學(xué)工工作站站，及及其它它窗口口，關(guān)關(guān)閉計(jì)計(jì)算機(jī)機(jī)。關(guān)掉液液相主主機(jī)各各模塊塊電源源開關(guān)關(guān)，拔拔掉電電源插插頭。。做好儀儀器使使用登登記。。工作站站使用用進(jìn)入工工作站站主界面面方法和和各模模塊參參數(shù)設(shè)設(shè)置跑基線線樣品命命名與與進(jìn)樣樣檢測(cè)測(cè)工作站站使用用進(jìn)入工工作站站工作站站使用用主界面面工作站站使用用方法和和各模模塊參參數(shù)設(shè)設(shè)置在各模模塊中中空白白處點(diǎn)點(diǎn)擊右右鍵，，選擇擇“方方法””編輯輯參數(shù)數(shù)。儀器方方法設(shè)設(shè)置儀器方方法設(shè)設(shè)置1bar≈≈14.5psi≈≈0.1MPa=100kPa不同儀儀器單單位不不同儀器方方法設(shè)設(shè)置儀器方方法設(shè)設(shè)置工作站站使用用視圖→→在線線信號(hào)號(hào)→信信號(hào)窗窗口1工作站站使用用跑基線線至少平平穩(wěn)30min工作站站使用用單次樣樣品：：樣品品命名名工作站站使用用序列樣樣品：：命名名與序序列表表設(shè)置置工作站站使用用進(jìn)樣檢檢測(cè)樣品色色譜圖圖數(shù)據(jù)分分析進(jìn)入儀儀器1脫機(jī)機(jī)打開數(shù)數(shù)據(jù)文文件夾夾打開樣樣品色色譜圖圖色譜峰峰編輯輯色譜峰峰數(shù)據(jù)據(jù)打印報(bào)報(bào)告色譜峰峰實(shí)例例數(shù)據(jù)分分析打開儀儀器1脫機(jī)數(shù)據(jù)分分析數(shù)據(jù)文文件夾夾序列樣樣品數(shù)數(shù)據(jù)單次樣樣品數(shù)數(shù)據(jù)樣品數(shù)數(shù)據(jù)色譜圖圖色譜圖圖編輯輯色譜峰峰數(shù)據(jù)據(jù)數(shù)據(jù)分分析色譜峰峰手動(dòng)動(dòng)積分分?jǐn)?shù)據(jù)分分析報(bào)告→→打印印報(bào)告告主峰數(shù)數(shù)據(jù)主峰要要求：：分離度度﹥1.50.95≤≤對(duì)稱因因子≤1.05塔板數(shù)數(shù)8000以上數(shù)據(jù)分分析患者丙戊酸酸鈉血血藥濃濃度檢檢測(cè)色譜圖圖環(huán)己烷烷羧酸酸丙戊酸酸鈉空白標(biāo)準(zhǔn)品品色譜峰峰實(shí)例例注意事事項(xiàng)氘燈是是易耗耗品，，分析析前應(yīng)應(yīng)最后后開燈燈，不不分析析樣品品應(yīng)及及時(shí)關(guān)關(guān)閉氘氘燈；；注意事事項(xiàng)流動(dòng)相相不要要使用用多日日存放放的蒸蒸餾水水，一一般不不易超超過(guò)三三天（（易長(zhǎng)長(zhǎng)菌）），影影響基基線平平衡；；儀器使使用后后，應(yīng)應(yīng)用90%水沖沖洗柱柱子和和系統(tǒng)統(tǒng)0.5-1h，流流量1.0mL/min，再再用100甲醇醇沖洗洗0.5h；注意事事項(xiàng)開機(jī)時(shí)時(shí)，打打開排排氣閥閥，設(shè)置流流動(dòng)相相為100%水，泵泵流量量5.0mL/min，若此此時(shí)顯顯示壓壓力＞＞10bar，則應(yīng)應(yīng)更換換排氣氣閥里里的過(guò)過(guò)濾白白頭。。注意事事項(xiàng)流速突突然變變大或或突然然變小小會(huì)導(dǎo)導(dǎo)致柱柱壓