人類染色體分析外周血培養(yǎng)制備染色體標(biāo)本

十六人類染色體分析：外周血培養(yǎng)制備染色體標(biāo)本一、實驗?zāi)康膶W(xué)習(xí)外周血淋巴細(xì)胞懸浮培養(yǎng)的原理和方法，利用培養(yǎng)后進(jìn)行分裂的細(xì)胞制備人類染色體標(biāo)本。了解人類染色體的基本形態(tài)特點(diǎn)，為核型分析和原位雜交實驗提供良好的染色體標(biāo)本。二、實驗原理外周血中的淋巴細(xì)胞幾乎都是處在G0期或G1期，一般情況下是不分裂的。當(dāng)在培養(yǎng)基中加入植物血凝素（phytohemagglutininPHA）時，這種小淋巴細(xì)胞受到刺激后轉(zhuǎn)化為淋巴母細(xì)胞，并開始進(jìn)行有絲分裂。經(jīng)過短期培養(yǎng)后，用秋水仙素處理、低滲、固定、滴片和染色，就可獲得大量中期分裂相的細(xì)胞，制片后可以清楚地對染色體進(jìn)行觀察。這種培養(yǎng)方法是Moorhead于1960年建立的。在人類遺傳分析中普遍采用外周血培養(yǎng)的方法獲取分裂的細(xì)胞，進(jìn)而開展臨床和基礎(chǔ)遺傳學(xué)的研究，這對于遺傳疾病的檢出以及遺傳咨詢等工作發(fā)揮了重要作用。三、實驗用具及材料培養(yǎng)瓶、注射器、移液管、量筒、G6漏斗、抽濾器、恒溫水浴箱、錐形瓶、離心機(jī)、分液器、RPMI1640、小牛血清、植物血凝素（PHA）、NaHCO3、g/LMKCl）、g/L酚紅、鏈霉素、卡那霉素四、實驗方法及步驟1.實驗用具的滅菌玻璃器皿的滅菌G6漏斗的滅菌橡皮塞的滅菌包裝物的滅菌2.各種試劑的配制、稀釋過程3.培養(yǎng)基的配制RPMI1640體積分?jǐn)?shù)80%小牛血清體積分?jǐn)?shù)20%PHA40ug/mL青霉素100單位/L培養(yǎng)基鏈霉素100單位/mL培養(yǎng)基卡那霉素100單位/mL培養(yǎng)基操作流程操作人中期細(xì)胞染色體（染色體數(shù)目2N=46）

人五、實驗注意事項

。2.培養(yǎng)中成敗的關(guān)鍵,除了至為重要的PHA的效價外。培養(yǎng)的溫度和培養(yǎng)液的酸堿度也十分重要。

3.培養(yǎng)過程中，如發(fā)現(xiàn)血樣凝集，可將培養(yǎng)瓶輕輕振蕩，使凝塊散開，繼續(xù)放回37℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)。4.制片過程中，如發(fā)現(xiàn)細(xì)胞膨脹得不大，細(xì)胞膜沒有破裂，染色體聚集一團(tuán)伸展不開,可將固定時間延長。

六、作業(yè)及思考題

1.將分散良好的標(biāo)本進(jìn)行顯微鏡照相。2.觀察人類染色體的形態(tài)