溶貧+骨髓課件

第二節(jié)溶血性貧血的實(shí)驗(yàn)室檢查內(nèi)容：掌握溶血性貧血的概念掌握溶血性貧血的篩查方法掌握常用的確證實(shí)驗(yàn)及臨床意義

第二節(jié)溶血性貧血的實(shí)驗(yàn)室檢查內(nèi)容：1溶血性貧血（hemolyticanemia)：紅細(xì)胞生存時(shí)間縮短、破壞增多或加速，骨髓的造血功能不能相應(yīng)代償。溶血性貧血的分類溶血性貧血（hemolyticanemia)：紅細(xì)21.按發(fā)病速度：急性和慢性。2.按溶血場所：血管內(nèi)和血管外。1.按發(fā)病速度：急性和慢性。2.按溶血場所：血管內(nèi)和血管外。33.按病因和發(fā)病機(jī)制：遺傳性和獲得性。3.按病因和發(fā)病機(jī)制：遺傳性和獲得性。4溶血性貧血的實(shí)驗(yàn)室診斷1.確定溶血性貧血的存在2.確定主要的溶血部位3.確定溶血的病因溶血性貧血的實(shí)驗(yàn)室診斷1.確定溶血性貧血的存在5紅細(xì)胞的起源、發(fā)育及衰亡

原紅早幼紅中幼紅晚幼紅網(wǎng)織紅RBC衰亡72h48h120d衰亡的RBC珠蛋白鐵膽色素參與再造血參與膽紅素代謝紅細(xì)胞的起源、發(fā)育及衰亡原紅早幼紅6多數(shù)與血漿中結(jié)合珠蛋白結(jié)合運(yùn)至肝臟小部分與血漿中的血結(jié)素結(jié)合

血紅蛋白的去向小部分轉(zhuǎn)變?yōu)楦哞F血紅蛋白與血漿中清蛋白結(jié)合，形成高鐵血紅素清蛋白

剩余的在腎臟轉(zhuǎn)變?yōu)楦哞F血黃素,隨尿排出多數(shù)與血漿中結(jié)合珠蛋白結(jié)合運(yùn)至肝臟小部分與血漿中的血結(jié)素結(jié)合7溶貧的篩查檢測

1.血漿中游離血紅蛋白增高的檢驗(yàn)（1）血漿游離血紅蛋白測定：增高。（2）血清結(jié)合珠蛋白測定：減低。（3）血漿高鐵血紅素清蛋白測定：陽性。（4）含鐵血黃素尿試驗(yàn)（Rous試驗(yàn)）：陽性。2.紅細(xì)胞壽命測定：是確診最可靠的依據(jù)（＜15天）溶貧的篩查檢測8確定主要的溶血部位血管內(nèi)、外溶血的鑒別確定主要的溶血部位9確定溶血病因的檢查1.紅細(xì)胞膜缺陷的檢驗(yàn)RBC滲透脆性試驗(yàn)(erythrocyteosmoticfragilitytest)。原理：紅細(xì)胞在低滲鹽溶液中逐漸膨脹甚至破裂而

溶血。

RBC表面積/RBC容積比值與RBC脆性成反比。

確定溶血病因的檢查1.紅細(xì)胞膜缺陷的檢驗(yàn)10方法：NaCl方法：NaCl11參考值：開始溶血：0.42%~0.46%（NaCL液）完全溶血：0.28%~0.34%（NaCL

液）臨床意義

（1）脆性增高遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥、遺傳橢圓形紅細(xì)胞增多癥、自身免疫性溶血性貧血（2）脆性減低小細(xì)胞低色素性貧血如海洋性貧血、缺鐵性貧血等。參考值：臨床意義12

2紅細(xì)胞酶缺陷的檢驗(yàn)----

高鐵血紅蛋白還原試驗(yàn)原理：在有足量的NADPH存在下，高鐵血紅蛋白能被酶還原成亞鐵血紅蛋白。當(dāng)G-6PD正常時(shí)，上述還原反應(yīng)能夠正常進(jìn)行，反之，速度減慢甚至不能進(jìn)行。

13高鐵血紅蛋白還原試驗(yàn)G-6PD缺乏癥篩選試驗(yàn)

高鐵血紅蛋白還原試驗(yàn)

G-6PD缺乏癥篩選試驗(yàn)

高鐵血紅蛋白還原試驗(yàn)G-6PD缺乏癥篩選試驗(yàn)高鐵血紅14

3珠蛋白生成異常的檢測

血紅蛋白電泳

原理:同血清蛋白電泳參考值：4條區(qū)帶：最靠陽極端的HbA(最多)HbA2(較少)，余2條更少臨床意義：（1）HbA2↑：β輕型地中海貧血、惡性貧血、巨幼貧。（2）HbA2↓：缺鐵及鐵粒幼貧血。3珠蛋白生成異常的檢測15

4自身免疫性溶血性貧血檢測

抗人球蛋白試驗(yàn)（Coombs試驗(yàn)）

原理：AIHA血清中有抗自身紅細(xì)胞的不完全抗體，它與表面附有相應(yīng)抗原的紅細(xì)胞結(jié)合，成為致敏紅細(xì)胞，加入抗人球蛋白與紅細(xì)胞表面不完全抗體結(jié)合，使紅細(xì)胞相互連接起來出現(xiàn)凝集現(xiàn)象。4自身免疫性溶血性貧血檢測16抗人球蛋白IgG不完全抗體RBC抗人球蛋白IgG不完全抗體RBC17

直接試驗(yàn)：紅細(xì)胞表面有不完全抗體。間接試驗(yàn)：血清中有不完全抗體。

臨床意義：正常人直接試驗(yàn)間接試驗(yàn)均陰性。（1）直接試驗(yàn)陽性：新生兒溶血、AIHA（2）間接試驗(yàn)陽性：新生兒溶血母體血清中不完全抗體的檢測。直接試驗(yàn)：紅細(xì)胞表面有不完全抗體。185陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥檢測---

酸化溶血實(shí)驗(yàn)（Ham試驗(yàn)）

原理：正常人RBC對自身血清中的補(bǔ)體有一定耐受，在弱酸性條件下孵育不發(fā)生溶血，PNH患者RBC膜有缺陷，對補(bǔ)體的敏感性增強(qiáng),易發(fā)生溶血。臨床意義：正常人—陰性PNH—陽性

特異性高，是國內(nèi)外公認(rèn)的PNH確診試驗(yàn)

5陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥檢測---19

病例分析

患兒，10個(gè)月，以“咳嗽、發(fā)熱伴進(jìn)行性蒼白兩周”為代主訴入院?；純河谌朐呵皟芍軣o明顯誘因出現(xiàn)咳嗽，咯白色粘痰，伴發(fā)熱（體溫最高38度），不伴寒戰(zhàn)，抽搐，曾在當(dāng)?shù)蒯t(yī)院治療（具體不詳），咳嗽好轉(zhuǎn)，發(fā)熱仍不能控制。后家長發(fā)現(xiàn)患兒漸蒼白，乏力，懶動(dòng)，在當(dāng)?shù)夭檠Ｒ?guī)異常后急來我院求治。病程中患兒尿量正常，尿色呈濃茶水樣，大便正常。既往無特殊病史。入院查體：T39.1度，Bp86/50mmHg，P148次/分，發(fā)育正常，營養(yǎng)差，重度貧血貌。全身皮膚粘膜蒼白，無黃染及出血點(diǎn)，鞏膜無黃染。心肺（—），腹軟，肝肋下2cm，質(zhì)中，緣銳，無壓痛。余查體（—）。化驗(yàn)：RBC1.94×1012/L，Hb60g/L，

WBC12.4×109/L，N74.3%L18.4%，PLT217×109/L，Ret4.5%；血涂片可見2個(gè)晚幼紅細(xì)胞，可見嗜堿性點(diǎn)彩紅細(xì)胞。1.請給出初步診斷。2.診斷依據(jù)有哪些。3.根據(jù)您所學(xué)的知識(shí)還需要做哪些檢查。病例分析20第三節(jié)血細(xì)胞形態(tài)特征內(nèi)容：1.了解血細(xì)胞生成及發(fā)育過程中形態(tài)學(xué)演變的一般規(guī)律。2.掌握常用的細(xì)胞化學(xué)染色法及臨床意義。第三節(jié)血細(xì)胞形態(tài)特征21一、血細(xì)胞發(fā)育規(guī)律二、骨髓增生程度判定：一般直接在低倍鏡下觀察有核細(xì)胞與成熟紅細(xì)胞之間的比例作出判斷，采用五級法分級：一、血細(xì)胞發(fā)育規(guī)律221.增生極度活躍（有核細(xì)胞量顯著增多）：1∶1，反映骨髓造血功能亢進(jìn)，見于白血病，尤慢粒。2.增生明顯活躍（有核細(xì)胞量增多）：1∶10，反映骨髓造血功能旺盛，見于各種增生性貧血、白血病等。3.增生活躍（有核細(xì)胞中等量）：1∶20，反映骨髓造血功能基本正常，見于正常人、各種貧血。4.增生減低（有核細(xì)胞量減少）：1∶50，反映骨髓造血功能減低，見于再障（慢性型）。5.增生明顯減低（有核細(xì)胞量顯著減少）：1∶200，反映骨髓造血功能衰竭，見于再障（急性型）、骨髓壞死。1.增生極度活躍（有核細(xì)胞量顯著增多）：1∶1，反映骨髓造血23三、血細(xì)胞的細(xì)胞化學(xué)染色它是以細(xì)胞形態(tài)學(xué)為基礎(chǔ)，運(yùn)用化學(xué)或生物化學(xué)技術(shù)對血細(xì)胞內(nèi)各種生化成分、代謝產(chǎn)物進(jìn)行定性、定位和半定量的觀察，用以研究血細(xì)胞生理、病理、化學(xué)結(jié)構(gòu)，為某些血液病的診斷和鑒別診斷提供依據(jù)。多用新鮮血片或骨髓片染色三、血細(xì)胞的細(xì)胞化學(xué)染色241.過氧化物酶染色（POX）⑴POX定位：①各階段粒細(xì)胞胞漿中呈陽性②單核系幼單、成單呈陰性或弱陽性③淋巴、紅系、巨核系均呈陰性⑵臨床意義：鑒別急性白血?。杭绷?qiáng)陽性；急單弱陽性或陰性；急淋陰性。1.過氧化物酶染色（POX）252中性粒系胞堿性磷酸酶染色（NAP）臨床意義：⑴NAP陽性細(xì)胞僅見于成熟中性粒細(xì)胞

⑵用于鑒別：①急性化膿性感染增高，病毒感染降低或正常；②慢粒降低，類白血病反應(yīng)增高；③急粒明顯降低，急淋增高，急單正常或降低；④再障增高，PNH降低。2中性粒系胞堿性磷酸酶染色（NAP）263酸性磷酸酶（ACP）染色臨床意義：（1）診斷多毛細(xì)胞白血?。宏栃曰驈?qiáng)陽性；（2）有助于急性淋巴細(xì)胞性白血病的分型：T淋巴細(xì)胞（+），B淋巴細(xì)胞（–）；（3）有助診斷某些代謝障礙性疾?。篏aucher?。?），Niemann-Pick（-）；（4）單核細(xì)胞、組織細(xì)胞、網(wǎng)狀細(xì)胞、巨核細(xì)胞等均（-）。3酸性磷酸酶（ACP）染色274糖原染色（PAS反應(yīng)）臨床意義：（1）紅血病、紅白血病強(qiáng)陽性反應(yīng)。（2）急性白血病的鑒別有一定的參考價(jià)值：急粒陰性或弱陽性反應(yīng)；急淋常呈陽性反應(yīng)；急單多為陽性反應(yīng)；（3）其它。4糖原染色（PAS反應(yīng)）28

5.鐵染色原理：鐵在酸性條件下與低鐵氰化鉀溶液反應(yīng)，生成藍(lán)色的鐵氰化鉀(普魯士藍(lán))，定位與含鐵的部位。

5.鐵染色29臨床意義：1.缺鐵性貧血：其細(xì)胞外鐵陰性，細(xì)胞內(nèi)鐵陽性率明顯下降或?yàn)?；2.鐵粒幼細(xì)胞貧血：鐵粒幼紅細(xì)胞增多，細(xì)胞外鐵明顯增多；3.骨髓增生異常綜合征：鐵粒幼紅細(xì)胞增多，細(xì)胞外鐵明顯增多。臨床意義：30第二節(jié)溶血性貧血的實(shí)驗(yàn)室檢查內(nèi)容：掌握溶血性貧血的概念掌握溶血性貧血的篩查方法掌握常用的確證實(shí)驗(yàn)及臨床意義

第二節(jié)溶血性貧血的實(shí)驗(yàn)室檢查內(nèi)容：31溶血性貧血（hemolyticanemia)：紅細(xì)胞生存時(shí)間縮短、破壞增多或加速，骨髓的造血功能不能相應(yīng)代償。溶血性貧血的分類溶血性貧血（hemolyticanemia)：紅細(xì)321.按發(fā)病速度：急性和慢性。2.按溶血場所：血管內(nèi)和血管外。1.按發(fā)病速度：急性和慢性。2.按溶血場所：血管內(nèi)和血管外。333.按病因和發(fā)病機(jī)制：遺傳性和獲得性。3.按病因和發(fā)病機(jī)制：遺傳性和獲得性。34溶血性貧血的實(shí)驗(yàn)室診斷1.確定溶血性貧血的存在2.確定主要的溶血部位3.確定溶血的病因溶血性貧血的實(shí)驗(yàn)室診斷1.確定溶血性貧血的存在35紅細(xì)胞的起源、發(fā)育及衰亡

原紅早幼紅中幼紅晚幼紅網(wǎng)織紅RBC衰亡72h48h120d衰亡的RBC珠蛋白鐵膽色素參與再造血參與膽紅素代謝紅細(xì)胞的起源、發(fā)育及衰亡原紅早幼紅36多數(shù)與血漿中結(jié)合珠蛋白結(jié)合運(yùn)至肝臟小部分與血漿中的血結(jié)素結(jié)合

血紅蛋白的去向小部分轉(zhuǎn)變?yōu)楦哞F血紅蛋白與血漿中清蛋白結(jié)合，形成高鐵血紅素清蛋白

剩余的在腎臟轉(zhuǎn)變?yōu)楦哞F血黃素,隨尿排出多數(shù)與血漿中結(jié)合珠蛋白結(jié)合運(yùn)至肝臟小部分與血漿中的血結(jié)素結(jié)合37溶貧的篩查檢測

1.血漿中游離血紅蛋白增高的檢驗(yàn)（1）血漿游離血紅蛋白測定：增高。（2）血清結(jié)合珠蛋白測定：減低。（3）血漿高鐵血紅素清蛋白測定：陽性。（4）含鐵血黃素尿試驗(yàn)（Rous試驗(yàn)）：陽性。2.紅細(xì)胞壽命測定：是確診最可靠的依據(jù)（＜15天）溶貧的篩查檢測38確定主要的溶血部位血管內(nèi)、外溶血的鑒別確定主要的溶血部位39確定溶血病因的檢查1.紅細(xì)胞膜缺陷的檢驗(yàn)RBC滲透脆性試驗(yàn)(erythrocyteosmoticfragilitytest)。原理：紅細(xì)胞在低滲鹽溶液中逐漸膨脹甚至破裂而

溶血。

RBC表面積/RBC容積比值與RBC脆性成反比。

確定溶血病因的檢查1.紅細(xì)胞膜缺陷的檢驗(yàn)40方法：NaCl方法：NaCl41參考值：開始溶血：0.42%~0.46%（NaCL液）完全溶血：0.28%~0.34%（NaCL

液）臨床意義

（1）脆性增高遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥、遺傳橢圓形紅細(xì)胞增多癥、自身免疫性溶血性貧血（2）脆性減低小細(xì)胞低色素性貧血如海洋性貧血、缺鐵性貧血等。參考值：臨床意義42

2紅細(xì)胞酶缺陷的檢驗(yàn)----

高鐵血紅蛋白還原試驗(yàn)原理：在有足量的NADPH存在下，高鐵血紅蛋白能被酶還原成亞鐵血紅蛋白。當(dāng)G-6PD正常時(shí)，上述還原反應(yīng)能夠正常進(jìn)行，反之，速度減慢甚至不能進(jìn)行。

43高鐵血紅蛋白還原試驗(yàn)G-6PD缺乏癥篩選試驗(yàn)

高鐵血紅蛋白還原試驗(yàn)

G-6PD缺乏癥篩選試驗(yàn)

高鐵血紅蛋白還原試驗(yàn)G-6PD缺乏癥篩選試驗(yàn)高鐵血紅44

3珠蛋白生成異常的檢測

血紅蛋白電泳

原理:同血清蛋白電泳參考值：4條區(qū)帶：最靠陽極端的HbA(最多)HbA2(較少)，余2條更少臨床意義：（1）HbA2↑：β輕型地中海貧血、惡性貧血、巨幼貧。（2）HbA2↓：缺鐵及鐵粒幼貧血。3珠蛋白生成異常的檢測45

4自身免疫性溶血性貧血檢測

抗人球蛋白試驗(yàn)（Coombs試驗(yàn)）

原理：AIHA血清中有抗自身紅細(xì)胞的不完全抗體，它與表面附有相應(yīng)抗原的紅細(xì)胞結(jié)合，成為致敏紅細(xì)胞，加入抗人球蛋白與紅細(xì)胞表面不完全抗體結(jié)合，使紅細(xì)胞相互連接起來出現(xiàn)凝集現(xiàn)象。4自身免疫性溶血性貧血檢測46抗人球蛋白IgG不完全抗體RBC抗人球蛋白IgG不完全抗體RBC47

直接試驗(yàn)：紅細(xì)胞表面有不完全抗體。間接試驗(yàn)：血清中有不完全抗體。

臨床意義：正常人直接試驗(yàn)間接試驗(yàn)均陰性。（1）直接試驗(yàn)陽性：新生兒溶血、AIHA（2）間接試驗(yàn)陽性：新生兒溶血母體血清中不完全抗體的檢測。直接試驗(yàn)：紅細(xì)胞表面有不完全抗體。485陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥檢測---

酸化溶血實(shí)驗(yàn)（Ham試驗(yàn)）

原理：正常人RBC對自身血清中的補(bǔ)體有一定耐受，在弱酸性條件下孵育不發(fā)生溶血，PNH患者RBC膜有缺陷，對補(bǔ)體的敏感性增強(qiáng),易發(fā)生溶血。臨床意義：正常人—陰性PNH—陽性

特異性高，是國內(nèi)外公認(rèn)的PNH確診試驗(yàn)

5陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥檢測---49

病例分析

患兒，10個(gè)月，以“咳嗽、發(fā)熱伴進(jìn)行性蒼白兩周”為代主訴入院?；純河谌朐呵皟芍軣o明顯誘因出現(xiàn)咳嗽，咯白色粘痰，伴發(fā)熱（體溫最高38度），不伴寒戰(zhàn)，抽搐，曾在當(dāng)?shù)蒯t(yī)院治療（具體不詳），咳嗽好轉(zhuǎn)，發(fā)熱仍不能控制。后家長發(fā)現(xiàn)患兒漸蒼白，乏力，懶動(dòng)，在當(dāng)?shù)夭檠Ｒ?guī)異常后急來我院求治。病程中患兒尿量正常，尿色呈濃茶水樣，大便正常。既往無特殊病史。入院查體：T39.1度，Bp86/50mmHg，P148次/分，發(fā)育正常，營養(yǎng)差，重度貧血貌。全身皮膚粘膜蒼白，無黃染及出血點(diǎn)，鞏膜無黃染。心肺（—），腹軟，肝肋下2cm，質(zhì)中，緣銳，無壓痛。余查體（—）?；?yàn)：RBC1.94×1012/L，Hb60g/L，

WBC12.4×109/L，N74.3%L18.4%，PLT217×109/L，Ret4.5%；血涂片可見2個(gè)晚幼紅細(xì)胞，可見嗜堿性點(diǎn)彩紅細(xì)胞。1.請給出初步診斷。2.診斷依據(jù)有哪些。3.根據(jù)您所學(xué)的知識(shí)還需要做哪些檢查。病例分析50第三節(jié)血細(xì)胞形態(tài)特征內(nèi)容：1.了解血細(xì)胞生成及發(fā)育過程中形態(tài)學(xué)演變的一般規(guī)律。2.掌握常用的細(xì)胞化學(xué)染色法及臨床意義。第三節(jié)血細(xì)胞形態(tài)特征51一、血細(xì)胞發(fā)育規(guī)律二、骨髓增生程度判定：一般直接在低倍鏡下觀察有核細(xì)胞與成熟紅細(xì)胞之間的比例作出判斷，采用五級法分級：一、血細(xì)胞發(fā)育規(guī)律521.增生極度活躍（有核細(xì)胞量顯著增多）：1∶1，反映骨髓造血功能亢進(jìn)，見于白血病，尤慢粒。2.增生明顯活躍（有核細(xì)胞量增多）：1∶10，反映骨髓造血功能旺盛，見于各種增生性貧血、白血病等。3.增生活躍（有核細(xì)胞中等量）：1∶20，反映骨髓造血功能基本正常，見于正常人、各種貧血。4.增生減低（有核細(xì)胞量減少）：1∶50，反映骨髓造血功能減低，見于再障（慢性型）。5.增生明顯減低（有核細(xì)胞量顯著減少）：1∶200，反映骨髓造血功能衰竭，見于再障（急性型）、骨髓壞死。1.增生極度活躍（有核細(xì)胞量顯著增多）：1∶1，反映骨髓造血53三、血細(xì)胞的細(xì)胞化學(xué)染色它是以細(xì)胞形態(tài)學(xué)為基礎(chǔ)，運(yùn)用化學(xué)或生物化學(xué)技術(shù)對血細(xì)胞內(nèi)各種生化成分、代謝產(chǎn)物進(jìn)行定性、定位和半定量的觀察，用以研究血細(xì)胞生理、病理、化學(xué)結(jié)構(gòu)，為某些血液病的診斷和鑒別診斷提供依據(jù)。多用新鮮血片或骨髓片染色三、血細(xì)胞的細(xì)胞化學(xué)染色541.過氧化物酶染色（POX）⑴POX定位：①各階段粒細(xì)胞胞漿中呈陽性②單核系幼單、