豬的常見寄生蟲病課件

第七章

寄生蟲病診斷

第七章

寄生蟲病診斷

1第一節(jié)病原學(xué)診斷方法第一節(jié)2一、糞便蟲卵檢查法一、糞便蟲卵檢查法31.直接涂片法directsmearmethod2.漂浮集卵法flotationmethod3.沉淀集卵法sedimentationmethod4.麥?zhǔn)嫌?jì)數(shù)法MacMastermethod1.直接涂片法45.毛蚴孵化法是診斷日本血吸蟲及東畢吸蟲的方法之一5.毛蚴孵化法5取被檢糞便30~100g(牛100g)經(jīng)沉淀集卵法處理，將沉淀倒入500ml三角燒瓶?jī)?nèi)，加溫清水(自來水需脫氯處理)至瓶口，置22~26℃孵化，第1、3、5h，用肉眼或放大鏡觀察并記錄一次。取被檢糞便30~100g(牛6如見水面下有白色點(diǎn)狀物做直線來往運(yùn)動(dòng)，即是毛蚴，但需與水中一些原蟲如草履蟲、輪蟲等相區(qū)別。必要時(shí)吸出在顯微鏡下觀察。氣溫高時(shí)，毛蚴孵出迅速，因此，在沉淀處理時(shí)應(yīng)嚴(yán)格掌握換水時(shí)間，以免換水時(shí)傾去毛蚴造成假陰性結(jié)果。如見水面下有白色點(diǎn)狀物做7也可用1.0%~1.2%食鹽水沖洗糞便,以防止毛蚴過早孵出，但孵化時(shí)應(yīng)用清水也可用1.0%~1.2%食鹽水沖洗糞便,以防止毛蚴過早孵出，86.糞便培養(yǎng)與幼蟲分離法圓線蟲目所屬線蟲種類很多，其蟲卵在形態(tài)上非常相似，很難區(qū)別。有時(shí)為了區(qū)別這些線蟲的種類，常將含有蟲卵的糞便加以培養(yǎng)，待其中蟲卵發(fā)育成為幼蟲時(shí)，再檢查幼蟲，根據(jù)幼蟲形態(tài)上的差異，加以鑒別6.糞便培養(yǎng)與幼蟲分離法9有些寄生蟲（如網(wǎng)尾科線蟲），其蟲卵在新排出的糞便中已變?yōu)橛紫x；類圓屬線蟲的卵隨糞便排出后，在外界溫度較高時(shí)，經(jīng)5-12小時(shí)后，即孵出幼蟲。為了提高檢出率，常將幼蟲從糞便中分離出來進(jìn)行檢查有些寄生蟲（如網(wǎng)尾科線10常用的方法為漏斗幼蟲分離法亦稱貝爾曼法(Baermann'stechnique)常用的方法為漏斗幼蟲11最常用的方法是在培養(yǎng)皿底部加草紙或?yàn)V紙一張，而后將欲培養(yǎng)的糞便加水調(diào)成硬糊狀，塑成半球形，放于皿內(nèi)的紙上，并使半球形糞球的頂部略高出平皿邊沿，使加蓋時(shí)與皿蓋相接觸。最常用的方法是在培養(yǎng)12將此皿置25℃溫箱中，注意保持皿內(nèi)濕度（應(yīng)使底部的墊紙保持潮濕狀態(tài)）。經(jīng)7天后，多數(shù)蟲卵即可發(fā)育成第三期幼蟲，并集中于皿蓋上的水滴中。將幼蟲吸出置載玻片上，放顯微鏡下檢查將此皿置25℃溫箱中，注意137.測(cè)微技術(shù)各種蟲卵和幼蟲，常有恒定的大小，測(cè)量蟲卵或幼蟲的大小，可作為確定某一蟲卵或幼蟲的依據(jù)。蟲卵和幼蟲的測(cè)量需用測(cè)微器7.測(cè)微技術(shù)14二、體表蟲體檢查法二、體表蟲體檢查法15寄生于動(dòng)物體表的寄生蟲主要有蜱、螨、虱等。對(duì)于它們的檢查，可采用肉眼觀察和顯微鏡觀察相結(jié)合的方法寄生于動(dòng)物體表的寄生蟲16蜱寄生于動(dòng)物體表，個(gè)體較大，通過肉眼觀察即可發(fā)現(xiàn)螨和虱有些個(gè)體較小，常需刮取皮屑，于微鏡下尋找蟲體或卵蜱寄生于動(dòng)物體表，個(gè)體17三、生殖道蟲體檢查三、生殖道蟲體檢查18寄生于生殖道的蟲體主要有牛胎兒三毛滴蟲和馬媾疫錐蟲寄生于生殖道的蟲體主要19牛胎兒毛滴蟲存在于病母牛的陰道與子宮的分泌物、流產(chǎn)胎兒的羊水、羊膜或其第四胃內(nèi)容物中，也存在于公牛的包皮鞘內(nèi)，應(yīng)采取以上各處的病料尋找蟲體牛胎兒毛滴蟲存在于病20由于蟲體的檢定，常以見到運(yùn)動(dòng)活潑的蟲體為準(zhǔn)，故在采集病料時(shí)必需盡可能地避免污染，以免其它鞭毛蟲混入病料造成誤診。采集用的器皿和沖洗液等應(yīng)加熱使接近體溫，否則蟲體驟然遇冷會(huì)失去活動(dòng)力或死亡。由于蟲體的檢定，常以見21沖洗液應(yīng)采用以玻璃蒸餾裝置制備的蒸餾水配制生理鹽水，以保證沖洗液中不含金屬離子，減少金屬離子對(duì)蟲體的影響。病料采集后應(yīng)盡快地進(jìn)行檢查沖洗液應(yīng)采用以玻璃蒸餾裝置制備的蒸餾水配制生理鹽水，以保證沖22由母畜采集病料，是取陰道分泌的透明粘液，以直接自陰道內(nèi)采取為良好，建議用一根長(zhǎng)45厘米，直徑1.0厘米的玻璃管，在距一端的12厘米處，彎成150°角，而后消毒備用。由母畜采集病料，是取陰23使用時(shí)將管的“短臂”插入受檢畜的陰道，另端接一橡皮管并抽吸，少量陰道粘液即可吸入管內(nèi)。取出玻管，兩端塞以棉球，帶回實(shí)驗(yàn)室檢查使用時(shí)將管的“短臂”插入受檢畜的陰道，另端接一橡皮管并抽吸，24收集公牛包皮沖洗液，應(yīng)先準(zhǔn)備100—150毫升加溫到30—35℃的生理鹽水，用針筒注入包皮腔。用手指將包皮口捏緊，用另一手按摩包皮后部，而后放松手指，將液體收集于廣口瓶中待查收集公牛包皮沖洗液，應(yīng)25流產(chǎn)胎兒，可取其第四胃內(nèi)容物，胸水或腹水檢查流產(chǎn)胎兒，可取其第四26檢查時(shí)應(yīng)將收集到的病料，立即放于載玻片上，并防止材料干燥。對(duì)濃稠的陰道粘液，檢查前最好以生理鹽水稀釋2-3倍，羊水或包皮洗滌物最好先以每分鐘2000轉(zhuǎn)的速度離心沉淀5分鐘，而后以沉淀物制片檢查。檢查時(shí)應(yīng)將收集到的病料，27未染色的標(biāo)本主要檢查活動(dòng)的蟲體，在顯微鏡下可見其長(zhǎng)度略大于一般的白細(xì)胞，能清楚地見到波動(dòng)膜，有時(shí)尚可見到鞭毛，在蟲體內(nèi)部可見含有一個(gè)圓形或橢圓形的有強(qiáng)折光性的核。未染色的標(biāo)本主要檢查活動(dòng)的蟲體，在顯微鏡下可見其長(zhǎng)度略大于一28波動(dòng)膜的發(fā)現(xiàn)，常作為本蟲與其它一些非致病性鞭毛蟲和纖毛蟲在形態(tài)上相區(qū)別的依據(jù)。也可將標(biāo)本固定，用姬氏染液或蘇木素染色后檢查波動(dòng)膜的發(fā)現(xiàn)，常作為本蟲與其它一些非致病性鞭毛蟲和纖毛蟲在形29馬媾疫錐蟲在末梢血液中很少出現(xiàn)，因此血液學(xué)檢查在馬媾疫診斷上的用處不大。檢查材料主要應(yīng)采取浮腫部皮膚或丘疹的抽出液，尿道及陰道的粘膜刮取物，特別在粘膜刮取物中最易發(fā)現(xiàn)蟲體馬媾疫錐蟲在末梢血液中30采取病料時(shí)，浮腫液和皮膚丘疹液用消毒的注射器抽取，為了防止吸入血液發(fā)生凝固，可于注射器內(nèi)先吸入適量的2%檸檬酸鈉生理鹽水。采取病料時(shí)，浮腫液和皮31馬陰道粘膜刮取物的采取，先用陰道擴(kuò)張器擴(kuò)張陰道，再用長(zhǎng)柄銳匙在其粘膜有炎癥的部位刮取，刮時(shí)應(yīng)稍用力，使刮取物微帶血液，則其中容易檢到錐蟲。馬陰道粘膜刮取物的采取，先用陰道擴(kuò)張器擴(kuò)張陰道，再用長(zhǎng)柄銳匙32采取公馬尿道刮取物時(shí)，應(yīng)先將馬保定，左手伸入包皮內(nèi)，以食指插入龜頭窩中，徐徐用力以牽出陰莖，用消毒的長(zhǎng)柄銳匙插入尿道內(nèi)，刮取病料采取公馬尿道刮取物時(shí)，應(yīng)先將馬保定，左手伸入包皮內(nèi)，以食指插33以上所采的病料，均可加適當(dāng)量的生理鹽水，置載玻片上，覆以蓋玻片，制成壓滴標(biāo)本檢查；也可制成抹片，用姬氏液染色后檢查以上所采的病料，均可加34也可用滅菌紗布，以生理鹽水浸濕，用敷料鉗夾持，插入公馬尿道或母馬陰道，擦洗后，取出紗布，洗入無菌生理鹽水中，將鹽水離心沉淀，取沉淀物檢查，方法同上也可用滅菌紗布，以生理35四、血液和組織內(nèi)蟲體檢查法四、血液和組織內(nèi)蟲體361.鮮血壓滴標(biāo)本檢查2.涂片染色標(biāo)本檢查3.蟲體濃集法1.鮮血壓滴標(biāo)本檢查37涂片法雖然可以查到血液中的原蟲，但血液中的蟲體較少時(shí)，則不易查出蟲體。為此，常先進(jìn)行集蟲，再制片檢查。其操作過程是采病畜抗凝血6-7毫升，以每分鐘500轉(zhuǎn)的速度，離心5分鐘，使其中大部分紅細(xì)胞沉降；涂片法雖然可以查到血液38而后將含有少量紅細(xì)胞，白細(xì)胞和蟲體的上層血漿移入另一離心管中，補(bǔ)加一些生理鹽水，以每分鐘2500轉(zhuǎn)的速度離心10分鐘。取沉淀物制成抹片，按上述染色法染色檢查。此法適用于伊氏錐蟲病和梨形蟲病。而后將含有少量紅細(xì)胞，白細(xì)胞和蟲體的上層血漿移入另一離心管中39其原理是錐蟲和感染有梨形蟲的紅細(xì)胞較正常紅細(xì)胞的比重為輕，所以在第一次沉淀時(shí)，正常紅細(xì)胞下降，而錐蟲和感染有梨形蟲的紅細(xì)胞尚懸浮在血漿中。第二次離心沉淀時(shí)，則將其濃集于管底。其原理是錐蟲和感染有梨40對(duì)于血液中的微絲蚴，也可用蟲體濃集法。方法是采血于離心管中。加入5%醋酸溶液以溶血。待溶血完成后，離心并吸取沉淀檢查對(duì)于血液中的微絲蚴，也可用蟲體濃集法。方法是采血于離心管中。414.組織內(nèi)蟲體檢查法有些原蟲可以在動(dòng)物身體的不同組織內(nèi)寄生。一般在死后剖檢時(shí)，取一小塊組織，以其切面在載玻片上做成抹片、觸片，或?qū)⑿K組織固定后制成組織切片，染色檢查。抹片或觸片可用瑞氏染色法或姬氏染液染色4.組織內(nèi)蟲體檢查法42泰勒蟲的病畜，常呈現(xiàn)局部體表淋巴結(jié)腫大，取淋巴結(jié)穿刺物，進(jìn)行顯微鏡檢查以尋找病原體，對(duì)本病的早期診斷很有幫助。其方法是，首先將病畜保定，用右手將腫大的淋巴結(jié)稍向上方推移，并用左手固定淋巴結(jié)；泰勒蟲的病畜，常呈現(xiàn)局43局部剪毛，消毒，以10毫升注射器和較粗的針頭刺入淋巴結(jié)，抽取淋巴組織；拔出針頭，將針頭內(nèi)容物推擠到載玻片上，涂成抹片，固定，染色，鏡檢，可以找到柯赫氏藍(lán)體局部剪毛，消毒，以10毫44家畜患弓漿蟲病時(shí)，除死后可在一些組織中找到包囊和速殖子外，生前診斷可取腹水，檢查其中滋養(yǎng)體的存在。收集腹水，豬只可采取側(cè)臥保定，穿刺部在白線下側(cè)臍的后方（公畜）或前方（母畜）1-2厘米處。家畜患弓漿蟲病時(shí)，除死45穿刺時(shí)先局部消毒，將皮膚推向一側(cè)，針頭以略傾斜的方向向下刺入，深度約2-4厘米，針頭刺入腹腔后會(huì)感到阻力驟減，而后有腹水流出。取得的腹水可在載玻片上抹片，以瑞氏液或姬氏液染色后檢查穿刺時(shí)先局部消毒，將皮膚推向一側(cè)，針頭以略傾斜的方向向下刺入46旋毛蟲的幼蟲寄生于橫紋肌中肌肉中旋毛蟲的檢查，是肉品衛(wèi)生檢驗(yàn)的重要項(xiàng)目，世界各國(guó)使用的方法大同小異。傳統(tǒng)的方法為鏡檢法，但目前歐、美等國(guó)多用消化法旋毛蟲的幼蟲寄生于橫紋47鏡檢法為取隔肌肉樣0.5~1g剪成3×10mm的小塊，用厚玻片壓緊，放顯微鏡下檢查或投放到屏幕上觀察鏡檢法為取隔肌肉樣0.5~48消化法為取100g肉樣，攪碎或剪碎，放入3L的燒瓶?jī)?nèi)。加入10g胃蛋白酶，溶于2L自來水。加入16ml鹽酸（25%），放入一磁力攪拌棒。置于可加熱的磁力攪拌器上，設(shè)溫于44~46℃。消化法為取100g肉樣，攪碎4930min后,將消化液用180μm的濾篩濾入一2L的分離漏斗,靜置30min,放出40ml液體于一50ml的量筒內(nèi),靜置10min,吸去30ml上清夜。30min后,將消化液用180μm的濾篩濾入一2L的分離漏50加入30ml水，搖勻。10min后，再吸去30ml上清液。剩下的液體到入一帶有格線的平皿內(nèi)，用20-50X顯微鏡觀察加入30ml水，搖勻。10min后，再吸去30ml上清液。剩51五、動(dòng)物接種法五、動(dòng)物接種法52伊氏錐蟲試驗(yàn)動(dòng)物可用小鼠、大鼠、豚鼠、兔或犬。其中尤以小鼠最適用。接種材料用可疑病畜的抗凝血液，血液采取后應(yīng)在2-4小時(shí)內(nèi)接種完畢。接種量0.5-1.0毫升，可接種于腹腔或皮下。伊氏錐蟲53接種后的動(dòng)物應(yīng)隔離并經(jīng)常檢查。當(dāng)病料中含蟲較多時(shí)，小鼠在接種后1-3日即可在其外周血液中查到錐蟲，當(dāng)病料內(nèi)含蟲量少時(shí)，發(fā)病時(shí)間可能延長(zhǎng)，接種后的動(dòng)物應(yīng)隔離并經(jīng)常檢查。當(dāng)病料中含蟲較多時(shí)，小鼠在接種54因此接種后至少觀察一個(gè)月，也可于接種的第3天采接種小鼠的血液0.5~1.0毫升，接種于另一只小鼠，如此盲傳3代，即可在接種小鼠外周血內(nèi)發(fā)現(xiàn)蟲體因此接種后至少觀察一個(gè)月，也可于接種的第3天552.馬媾疫馬媾疫錐蟲不能接種于多數(shù)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，但可將病畜的陰道或尿道刮取物與無菌生理鹽水混合，接種于公家兔的睪丸實(shí)質(zhì)中，每個(gè)睪丸的接種量為0.2毫升。2.馬媾疫56如有媾疫錐蟲存在，經(jīng)1-2周后，即可見家兔的陰囊、陰莖、睪丸以及耳、唇周圍的皮膚發(fā)生水腫，并可在水腫液內(nèi)檢出蟲體如有媾疫錐蟲存在，經(jīng)1-2573.胎兒毛滴蟲取病牛陰道分泌物或包皮沖洗液為病料，接種于妊娠豚鼠的腹腔內(nèi)，在接種后1-20天可以使妊娠豚鼠發(fā)生流產(chǎn)，在其流產(chǎn)胎兒的消化道和胎盤里可查出大量的毛滴蟲3.胎兒毛滴蟲584.弓形蟲弓形蟲是多宿主病原原蟲，多種家畜和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均具有易感性，但小鼠對(duì)之特別敏感，常常僅數(shù)十個(gè)蟲體即可使小鼠感染發(fā)病。4.弓形蟲59一般取急性死亡的可疑動(dòng)物的肺、淋巴結(jié)、脾、肝或腦組織，以1∶5的比例加入生理鹽水，制成乳劑，并加少量青霉素和鏈霉素以控制雜菌感染。一般取急性死亡的可疑動(dòng)物60吸取乳劑0.2毫升接種于小鼠腹腔，一般急性者在4-5天后發(fā)病，病鼠被毛粗亂，食欲消失，腹部膨大，有大量腹水，病程4-5天，最后死亡。抽取病鼠或病死鼠的腹水作涂片，染色檢查，可見大量游離的滋養(yǎng)體吸取乳劑0.2毫升接種于小鼠腹腔，一般急性者在4-5天后發(fā)病61六、動(dòng)物剖檢法六、動(dòng)物剖檢法621.全身剖檢法在動(dòng)物死亡（或捕殺）后，首先制作血片，染色檢查，觀察血液中有無寄生蟲，而后仔細(xì)檢查體表，觀察有無體表寄生蟲1.全身剖檢法63而后剝皮，觀察皮下組織中有無蟲體寄生而后剝皮，觀察皮下組織64將各內(nèi)部臟器依次取出，先收集胸水，腹水，沉淀后觀察其中有無寄生蟲。而后取出全部消化器官及其所附的肝、胰等腺體。取出呼吸系統(tǒng)、泌尿系統(tǒng)和生殖系統(tǒng)、心臟和大的動(dòng)脈和靜脈血管，分別進(jìn)行檢查將各內(nèi)部臟器依次取出，65消化系統(tǒng)先將附著其上的肝、胰取下，再將食道，胃（反芻獸應(yīng)將四個(gè)胃分開）、小腸、大腸、盲腸分別結(jié)扎后分離消化系統(tǒng)66呼吸器官用剪刀將鼻、喉、氣管、支氣管切開，尋找蟲體。用小刀刮氣管粘膜，刮下物在解剖鏡下檢查。肺組織按肝臟處理方法呼吸器官67泌尿器官切開腎，先對(duì)腎盂作肉眼檢查，再刮取腎盂粘膜檢查。最后將腎實(shí)質(zhì)切成薄片，壓于兩玻片間，在放大鏡或解剖鏡下檢查。剪開輸尿管，膀胱和尿道，檢查其粘膜，并注意粘膜下有無包囊。收集尿液，用反復(fù)沉淀法處理泌尿器官68生殖器官切開并刮下粘膜，壓片檢查。懷疑為馬媾疫和牛胎兒毛滴蟲病時(shí)，應(yīng)涂片染色后油鏡檢查生殖器官69腦先肉眼檢查有無多頭蚴，再切成薄片，壓片檢查眼結(jié)膜和結(jié)膜腔以括搔法處理檢查。剖開眼球，將前房水收集于皿中，在放大鏡下檢查腦70心和主要血管剖開將內(nèi)容物洗于生理鹽水中，反復(fù)用沉淀法檢查（對(duì)血管內(nèi)分體吸蟲的收集見后）膈腳特別是豬，應(yīng)用鏡檢法和消化法進(jìn)行檢查心和主要血管712.個(gè)別器官和個(gè)別寄生蟲剖檢法2.個(gè)別器官和個(gè)別寄生蟲72有時(shí)為了特定的目的，僅對(duì)某一器官或某一器官中的某種寄生蟲進(jìn)行檢查，如調(diào)查某一地某一器官中寄生蟲寄生的情況，或調(diào)查某一地區(qū)某種寄生蟲的流行情況，或考核某一藥品對(duì)某種寄生蟲的驅(qū)蟲效果。有時(shí)為了特定的目的，僅對(duì)73其剖檢方法同全身剖檢法。但日本分體吸蟲的剖檢需采用專門的方法，介紹如下其剖檢方法同全身剖檢法。但日本分體吸蟲的74動(dòng)物經(jīng)宰殺停止掙扎后，為防止發(fā)生血液凝固，影響蟲體收集，應(yīng)有四個(gè)人分別從四條腿開始從速進(jìn)和剝皮。事畢，將牛頭彎轉(zhuǎn)至牛體左側(cè)，使牛仰臥呈偏左傾斜姿勢(shì)，剖開胸腔及腹腔，除去胸骨。動(dòng)物經(jīng)宰殺停止掙扎后，為防止發(fā)生血液凝固，影75首先分開左右肺找出暗紅色的后腔靜脈進(jìn)行結(jié)扎。接著，在胸腔緊靠脊柱的部位找到白色的胸主動(dòng)脈，術(shù)者左手將其托起，右手用尖頭剪刀取與血管平行的方向剪一開口，首先分開左右肺找出暗紅76然后將帶有橡皮管的玻璃管以離心方向插入，并以棉線結(jié)扎固定。橡皮管的一端與壓縮式噴霧器相接，以備進(jìn)水。然后將帶有橡皮管的玻璃77第三，從腎臟后方緊貼脊柱處，同時(shí)結(jié)扎并列的腹主動(dòng)脈與后腔靜脈，以避免沖洗液流向后軀其它部分。第三，從腎臟后方緊貼78第四，在膽囊附近，肝門淋巴結(jié)背面，分離出門靜脈，向肝的一端緊靠肝臟處先用棉線扎緊，離肝的一端取與血管平行的方向剪一開口（應(yīng)盡可能靠近肝臟，以免接管進(jìn)入門靜脈的腸支，而影響胃支中蟲體的收集），插入帶有橡皮管的玻璃接管，并固定之。第四，在膽囊附近，肝門淋巴結(jié)背面，分離出門靜脈，向肝的一端緊79橡皮管的一端接以銅絲篩，以備出水收集蟲體。手術(shù)結(jié)束后，即可啟動(dòng)噴霧器注入0.9%加溫至37—40℃的食鹽水進(jìn)行沖洗，蟲體即隨血水落入銅絲篩中，直至水液變清無蟲體沖出為止橡皮管的一端接以銅絲篩，以備出水收集蟲體。手術(shù)結(jié)束后，即可啟80第七章

寄生蟲病診斷

第七章

寄生蟲病診斷

81第一節(jié)病原學(xué)診斷方法第一節(jié)82一、糞便蟲卵檢查法一、糞便蟲卵檢查法831.直接涂片法directsmearmethod2.漂浮集卵法flotationmethod3.沉淀集卵法sedimentationmethod4.麥?zhǔn)嫌?jì)數(shù)法MacMastermethod1.直接涂片法845.毛蚴孵化法是診斷日本血吸蟲及東畢吸蟲的方法之一5.毛蚴孵化法85取被檢糞便30~100g(牛100g)經(jīng)沉淀集卵法處理，將沉淀倒入500ml三角燒瓶?jī)?nèi)，加溫清水(自來水需脫氯處理)至瓶口，置22~26℃孵化，第1、3、5h，用肉眼或放大鏡觀察并記錄一次。取被檢糞便30~100g(牛86如見水面下有白色點(diǎn)狀物做直線來往運(yùn)動(dòng)，即是毛蚴，但需與水中一些原蟲如草履蟲、輪蟲等相區(qū)別。必要時(shí)吸出在顯微鏡下觀察。氣溫高時(shí)，毛蚴孵出迅速，因此，在沉淀處理時(shí)應(yīng)嚴(yán)格掌握換水時(shí)間，以免換水時(shí)傾去毛蚴造成假陰性結(jié)果。如見水面下有白色點(diǎn)狀物做87也可用1.0%~1.2%食鹽水沖洗糞便,以防止毛蚴過早孵出，但孵化時(shí)應(yīng)用清水也可用1.0%~1.2%食鹽水沖洗糞便,以防止毛蚴過早孵出，886.糞便培養(yǎng)與幼蟲分離法圓線蟲目所屬線蟲種類很多，其蟲卵在形態(tài)上非常相似，很難區(qū)別。有時(shí)為了區(qū)別這些線蟲的種類，常將含有蟲卵的糞便加以培養(yǎng)，待其中蟲卵發(fā)育成為幼蟲時(shí)，再檢查幼蟲，根據(jù)幼蟲形態(tài)上的差異，加以鑒別6.糞便培養(yǎng)與幼蟲分離法89有些寄生蟲（如網(wǎng)尾科線蟲），其蟲卵在新排出的糞便中已變?yōu)橛紫x；類圓屬線蟲的卵隨糞便排出后，在外界溫度較高時(shí)，經(jīng)5-12小時(shí)后，即孵出幼蟲。為了提高檢出率，常將幼蟲從糞便中分離出來進(jìn)行檢查有些寄生蟲（如網(wǎng)尾科線90常用的方法為漏斗幼蟲分離法亦稱貝爾曼法(Baermann'stechnique)常用的方法為漏斗幼蟲91最常用的方法是在培養(yǎng)皿底部加草紙或?yàn)V紙一張，而后將欲培養(yǎng)的糞便加水調(diào)成硬糊狀，塑成半球形，放于皿內(nèi)的紙上，并使半球形糞球的頂部略高出平皿邊沿，使加蓋時(shí)與皿蓋相接觸。最常用的方法是在培養(yǎng)92將此皿置25℃溫箱中，注意保持皿內(nèi)濕度（應(yīng)使底部的墊紙保持潮濕狀態(tài)）。經(jīng)7天后，多數(shù)蟲卵即可發(fā)育成第三期幼蟲，并集中于皿蓋上的水滴中。將幼蟲吸出置載玻片上，放顯微鏡下檢查將此皿置25℃溫箱中，注意937.測(cè)微技術(shù)各種蟲卵和幼蟲，常有恒定的大小，測(cè)量蟲卵或幼蟲的大小，可作為確定某一蟲卵或幼蟲的依據(jù)。蟲卵和幼蟲的測(cè)量需用測(cè)微器7.測(cè)微技術(shù)94二、體表蟲體檢查法二、體表蟲體檢查法95寄生于動(dòng)物體表的寄生蟲主要有蜱、螨、虱等。對(duì)于它們的檢查，可采用肉眼觀察和顯微鏡觀察相結(jié)合的方法寄生于動(dòng)物體表的寄生蟲96蜱寄生于動(dòng)物體表，個(gè)體較大，通過肉眼觀察即可發(fā)現(xiàn)螨和虱有些個(gè)體較小，常需刮取皮屑，于微鏡下尋找蟲體或卵蜱寄生于動(dòng)物體表，個(gè)體97三、生殖道蟲體檢查三、生殖道蟲體檢查98寄生于生殖道的蟲體主要有牛胎兒三毛滴蟲和馬媾疫錐蟲寄生于生殖道的蟲體主要99牛胎兒毛滴蟲存在于病母牛的陰道與子宮的分泌物、流產(chǎn)胎兒的羊水、羊膜或其第四胃內(nèi)容物中，也存在于公牛的包皮鞘內(nèi)，應(yīng)采取以上各處的病料尋找蟲體牛胎兒毛滴蟲存在于病100由于蟲體的檢定，常以見到運(yùn)動(dòng)活潑的蟲體為準(zhǔn)，故在采集病料時(shí)必需盡可能地避免污染，以免其它鞭毛蟲混入病料造成誤診。采集用的器皿和沖洗液等應(yīng)加熱使接近體溫，否則蟲體驟然遇冷會(huì)失去活動(dòng)力或死亡。由于蟲體的檢定，常以見101沖洗液應(yīng)采用以玻璃蒸餾裝置制備的蒸餾水配制生理鹽水，以保證沖洗液中不含金屬離子，減少金屬離子對(duì)蟲體的影響。病料采集后應(yīng)盡快地進(jìn)行檢查沖洗液應(yīng)采用以玻璃蒸餾裝置制備的蒸餾水配制生理鹽水，以保證沖102由母畜采集病料，是取陰道分泌的透明粘液，以直接自陰道內(nèi)采取為良好，建議用一根長(zhǎng)45厘米，直徑1.0厘米的玻璃管，在距一端的12厘米處，彎成150°角，而后消毒備用。由母畜采集病料，是取陰103使用時(shí)將管的“短臂”插入受檢畜的陰道，另端接一橡皮管并抽吸，少量陰道粘液即可吸入管內(nèi)。取出玻管，兩端塞以棉球，帶回實(shí)驗(yàn)室檢查使用時(shí)將管的“短臂”插入受檢畜的陰道，另端接一橡皮管并抽吸，104收集公牛包皮沖洗液，應(yīng)先準(zhǔn)備100—150毫升加溫到30—35℃的生理鹽水，用針筒注入包皮腔。用手指將包皮口捏緊，用另一手按摩包皮后部，而后放松手指，將液體收集于廣口瓶中待查收集公牛包皮沖洗液，應(yīng)105流產(chǎn)胎兒，可取其第四胃內(nèi)容物，胸水或腹水檢查流產(chǎn)胎兒，可取其第四106檢查時(shí)應(yīng)將收集到的病料，立即放于載玻片上，并防止材料干燥。對(duì)濃稠的陰道粘液，檢查前最好以生理鹽水稀釋2-3倍，羊水或包皮洗滌物最好先以每分鐘2000轉(zhuǎn)的速度離心沉淀5分鐘，而后以沉淀物制片檢查。檢查時(shí)應(yīng)將收集到的病料，107未染色的標(biāo)本主要檢查活動(dòng)的蟲體，在顯微鏡下可見其長(zhǎng)度略大于一般的白細(xì)胞，能清楚地見到波動(dòng)膜，有時(shí)尚可見到鞭毛，在蟲體內(nèi)部可見含有一個(gè)圓形或橢圓形的有強(qiáng)折光性的核。未染色的標(biāo)本主要檢查活動(dòng)的蟲體，在顯微鏡下可見其長(zhǎng)度略大于一108波動(dòng)膜的發(fā)現(xiàn)，常作為本蟲與其它一些非致病性鞭毛蟲和纖毛蟲在形態(tài)上相區(qū)別的依據(jù)。也可將標(biāo)本固定，用姬氏染液或蘇木素染色后檢查波動(dòng)膜的發(fā)現(xiàn)，常作為本蟲與其它一些非致病性鞭毛蟲和纖毛蟲在形109馬媾疫錐蟲在末梢血液中很少出現(xiàn)，因此血液學(xué)檢查在馬媾疫診斷上的用處不大。檢查材料主要應(yīng)采取浮腫部皮膚或丘疹的抽出液，尿道及陰道的粘膜刮取物，特別在粘膜刮取物中最易發(fā)現(xiàn)蟲體馬媾疫錐蟲在末梢血液中110采取病料時(shí)，浮腫液和皮膚丘疹液用消毒的注射器抽取，為了防止吸入血液發(fā)生凝固，可于注射器內(nèi)先吸入適量的2%檸檬酸鈉生理鹽水。采取病料時(shí)，浮腫液和皮111馬陰道粘膜刮取物的采取，先用陰道擴(kuò)張器擴(kuò)張陰道，再用長(zhǎng)柄銳匙在其粘膜有炎癥的部位刮取，刮時(shí)應(yīng)稍用力，使刮取物微帶血液，則其中容易檢到錐蟲。馬陰道粘膜刮取物的采取，先用陰道擴(kuò)張器擴(kuò)張陰道，再用長(zhǎng)柄銳匙112采取公馬尿道刮取物時(shí)，應(yīng)先將馬保定，左手伸入包皮內(nèi)，以食指插入龜頭窩中，徐徐用力以牽出陰莖，用消毒的長(zhǎng)柄銳匙插入尿道內(nèi)，刮取病料采取公馬尿道刮取物時(shí)，應(yīng)先將馬保定，左手伸入包皮內(nèi)，以食指插113以上所采的病料，均可加適當(dāng)量的生理鹽水，置載玻片上，覆以蓋玻片，制成壓滴標(biāo)本檢查；也可制成抹片，用姬氏液染色后檢查以上所采的病料，均可加114也可用滅菌紗布，以生理鹽水浸濕，用敷料鉗夾持，插入公馬尿道或母馬陰道，擦洗后，取出紗布，洗入無菌生理鹽水中，將鹽水離心沉淀，取沉淀物檢查，方法同上也可用滅菌紗布，以生理115四、血液和組織內(nèi)蟲體檢查法四、血液和組織內(nèi)蟲體1161.鮮血壓滴標(biāo)本檢查2.涂片染色標(biāo)本檢查3.蟲體濃集法1.鮮血壓滴標(biāo)本檢查117涂片法雖然可以查到血液中的原蟲，但血液中的蟲體較少時(shí)，則不易查出蟲體。為此，常先進(jìn)行集蟲，再制片檢查。其操作過程是采病畜抗凝血6-7毫升，以每分鐘500轉(zhuǎn)的速度，離心5分鐘，使其中大部分紅細(xì)胞沉降；涂片法雖然可以查到血液118而后將含有少量紅細(xì)胞，白細(xì)胞和蟲體的上層血漿移入另一離心管中，補(bǔ)加一些生理鹽水，以每分鐘2500轉(zhuǎn)的速度離心10分鐘。取沉淀物制成抹片，按上述染色法染色檢查。此法適用于伊氏錐蟲病和梨形蟲病。而后將含有少量紅細(xì)胞，白細(xì)胞和蟲體的上層血漿移入另一離心管中119其原理是錐蟲和感染有梨形蟲的紅細(xì)胞較正常紅細(xì)胞的比重為輕，所以在第一次沉淀時(shí)，正常紅細(xì)胞下降，而錐蟲和感染有梨形蟲的紅細(xì)胞尚懸浮在血漿中。第二次離心沉淀時(shí)，則將其濃集于管底。其原理是錐蟲和感染有梨120對(duì)于血液中的微絲蚴，也可用蟲體濃集法。方法是采血于離心管中。加入5%醋酸溶液以溶血。待溶血完成后，離心并吸取沉淀檢查對(duì)于血液中的微絲蚴，也可用蟲體濃集法。方法是采血于離心管中。1214.組織內(nèi)蟲體檢查法有些原蟲可以在動(dòng)物身體的不同組織內(nèi)寄生。一般在死后剖檢時(shí)，取一小塊組織，以其切面在載玻片上做成抹片、觸片，或?qū)⑿K組織固定后制成組織切片，染色檢查。抹片或觸片可用瑞氏染色法或姬氏染液染色4.組織內(nèi)蟲體檢查法122泰勒蟲的病畜，常呈現(xiàn)局部體表淋巴結(jié)腫大，取淋巴結(jié)穿刺物，進(jìn)行顯微鏡檢查以尋找病原體，對(duì)本病的早期診斷很有幫助。其方法是，首先將病畜保定，用右手將腫大的淋巴結(jié)稍向上方推移，并用左手固定淋巴結(jié)；泰勒蟲的病畜，常呈現(xiàn)局123局部剪毛，消毒，以10毫升注射器和較粗的針頭刺入淋巴結(jié)，抽取淋巴組織；拔出針頭，將針頭內(nèi)容物推擠到載玻片上，涂成抹片，固定，染色，鏡檢，可以找到柯赫氏藍(lán)體局部剪毛，消毒，以10毫124家畜患弓漿蟲病時(shí)，除死后可在一些組織中找到包囊和速殖子外，生前診斷可取腹水，檢查其中滋養(yǎng)體的存在。收集腹水，豬只可采取側(cè)臥保定，穿刺部在白線下側(cè)臍的后方（公畜）或前方（母畜）1-2厘米處。家畜患弓漿蟲病時(shí)，除死125穿刺時(shí)先局部消毒，將皮膚推向一側(cè)，針頭以略傾斜的方向向下刺入，深度約2-4厘米，針頭刺入腹腔后會(huì)感到阻力驟減，而后有腹水流出。取得的腹水可在載玻片上抹片，以瑞氏液或姬氏液染色后檢查穿刺時(shí)先局部消毒，將皮膚推向一側(cè)，針頭以略傾斜的方向向下刺入126旋毛蟲的幼蟲寄生于橫紋肌中肌肉中旋毛蟲的檢查，是肉品衛(wèi)生檢驗(yàn)的重要項(xiàng)目，世界各國(guó)使用的方法大同小異。傳統(tǒng)的方法為鏡檢法，但目前歐、美等國(guó)多用消化法旋毛蟲的幼蟲寄生于橫紋127鏡檢法為取隔肌肉樣0.5~1g剪成3×10mm的小塊，用厚玻片壓緊，放顯微鏡下檢查或投放到屏幕上觀察鏡檢法為取隔肌肉樣0.5~128消化法為取100g肉樣，攪碎或剪碎，放入3L的燒瓶?jī)?nèi)。加入10g胃蛋白酶，溶于2L自來水。加入16ml鹽酸（25%），放入一磁力攪拌棒。置于可加熱的磁力攪拌器上，設(shè)溫于44~46℃。消化法為取100g肉樣，攪碎12930min后,將消化液用180μm的濾篩濾入一2L的分離漏斗,靜置30min,放出40ml液體于一50ml的量筒內(nèi),靜置10min,吸去30ml上清夜。30min后,將消化液用180μm的濾篩濾入一2L的分離漏130加入30ml水，搖勻。10min后，再吸去30ml上清液。剩下的液體到入一帶有格線的平皿內(nèi)，用20-50X顯微鏡觀察加入30ml水，搖勻。10min后，再吸去30ml上清液。剩131五、動(dòng)物接種法五、動(dòng)物接種法132伊氏錐蟲試驗(yàn)動(dòng)物可用小鼠、大鼠、豚鼠、兔或犬。其中尤以小鼠最適用。接種材料用可疑病畜的抗凝血液，血液采取后應(yīng)在2-4小時(shí)內(nèi)接種完畢。接種量0.5-1.0毫升，可接種于腹腔或皮下。伊氏錐蟲133接種后的動(dòng)物應(yīng)隔離并經(jīng)常檢查。當(dāng)病料中含蟲較多時(shí)，小鼠在接種后1-3日即可在其外周血液中查到錐蟲，當(dāng)病料內(nèi)含蟲量少時(shí)，發(fā)病時(shí)間可能延長(zhǎng)，接種后的動(dòng)物應(yīng)隔離并經(jīng)常檢查。當(dāng)病料中含蟲較多時(shí)，小鼠在接種134因此接種后至少觀察一個(gè)月，也可于接種的第3天采接種小鼠的血液0.5~1.0毫升，接種于另一只小鼠，如此盲傳3代，即可在接種小鼠外周血內(nèi)發(fā)現(xiàn)蟲體因此接種后至少觀察一個(gè)月，也可于接種的第3天1352.馬媾疫馬媾疫錐蟲不能接種于多數(shù)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，但可將病畜的陰道或尿道刮取物與無菌生理鹽水混合，接種于公家兔的睪丸實(shí)質(zhì)中，每個(gè)睪丸的接種量為0.2毫升。2.馬媾疫136如有媾疫錐蟲存在，經(jīng)1-2周后，即可見家兔的陰囊、陰莖、睪丸以及耳、唇周圍的皮膚發(fā)生水腫，并可在水腫液內(nèi)檢出蟲體如有媾疫錐蟲存在，經(jīng)1-21373.胎兒毛滴蟲取病牛陰道分泌物或包皮沖洗液為病料，接種于妊娠豚鼠的腹腔內(nèi)，在接種后1-20天可以使妊娠豚鼠發(fā)生流產(chǎn)，在其流產(chǎn)胎兒的消化道和胎盤里可查出大量的毛滴蟲3.胎兒毛滴蟲1384.弓形蟲弓形蟲是多宿主病原原蟲，多種家畜和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均具有易感性，但小鼠對(duì)之特別敏感，常常僅數(shù)十個(gè)蟲體即可使小鼠感染發(fā)病。4.弓形蟲139一般取急性死亡的可疑動(dòng)物的肺、淋巴結(jié)、脾、肝或腦組織，以1∶5的比例加入生理鹽水，制成乳劑，并加少量青霉素和鏈霉素以控制雜菌感染。一般取急性死亡的可疑動(dòng)物140吸取乳劑0.2毫升接種于小鼠腹腔，一般急性者在4-5天后發(fā)病，病鼠被毛粗亂，食欲消失，腹部膨大，有大量腹水，病程4-5天，最后死亡。抽取病鼠或病死鼠的腹水作涂片，染色檢查，可見大量游離的滋養(yǎng)體吸取乳劑0.2毫升接種于小鼠腹腔，一般急性者在4-5天后發(fā)病141六、動(dòng)物剖檢法六、動(dòng)物剖檢法1421.全身剖檢法在動(dòng)物死亡（或捕殺）后，首先制作血片，染色檢查，觀察血液中有無寄生蟲，而后仔細(xì)檢查體表，觀察有無體表寄生蟲1.全身剖檢法143而后剝皮，觀察皮下組織中有無蟲體寄生