sh2b1對(duì)壓力超負(fù)荷心肌肥厚調(diào)節(jié)效應(yīng)及通路研究

國(guó)家自然科學(xué)基金（2015資助類(lèi)別：亞類(lèi)說(shuō)明附注說(shuō)明：項(xiàng)目名稱(chēng)：SH2B1申請(qǐng)人：吳鋼 電話：省市武昌區(qū)解放路238通訊省市武昌區(qū)解放路238： 單位電子郵箱申報(bào)日期 月姓名男1972年06學(xué)位9電話傳真工作單位名稱(chēng)聯(lián)系人電話htheegulationeffectsandpathwaysofSH2B1onmyocardiualhypertrophyinresponsetopressureoverload.2016年012019年12SH2B1;pressureoverload;cardiomyocyteremodeling;myocardialhypertrophy;geneknockoutMyocardialhypertrophyisoneofthemajorpathologicalprocessesduringthedevelopmentofchronicheartfailure(CHF)withundeterminedmechanism. animportantproteininmetabolismandbodyweightregulation.TheeffectsofSH2B1onmyocardiumwerenotreportedyetthoughitdistributeswidespreadinheart.WehavefoundthattherewasapossiblerelationshipbetweenSH2B1andmyocardialhypertrophyinhypertrophiccardiomyopathy(HCM),dilatedcardiomyopathy(DCM)inhumanandoverloadpressureCHFmice.Basedontheseresults,thisfurtherstudywasdesignedtoinvestigatetheregulationeffectsofSH2B1onoverloadpressureinducedmyocardialhypertophyandfindoutitsregulationpathways.WeplantodoexperimentsnvitroinvivoandbuildSH2B1knockoutratstotestourhypothesis.WewillknowdownoroverexpressSH2B1inculturedNRCMstoobservetheeffectsofSH2B1onAngIIinducedmyocardialhypertrophy.WewilluseSH2B1knockoutmiceandtransgenicoverexpressmicetomanufactureaorticbanding(AB)overloadpressureinducedCHFanimalmodeltostudytheeffectsofSH2B1.WeplantoexloretheupstreamanddownstreamfactorsthatSH2B1mediatedtoregulatemyocardiahypertrophy.WeexploretoestablishSH2B1geneknockoutratmodeltoverifyourexperimentresultsandprovideatoolforsequentialstudies.WetrytopromptanewinsightandnewtargetforCHFstudybyrevealtheregulationeffectsandpathwaysofSH2B1onmyocardial 201511979-07-男921979-09-女931980-02-男7941982-10-男851979-09-男61983-12-男71975-09-女681990-01-女91990-12-男生生161011第3 版本國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目預(yù)算表（項(xiàng)目名稱(chēng)：SH2B1項(xiàng)目：吳 1一、項(xiàng)目支/23145607283等94、動(dòng)力567892800/41011預(yù)算說(shuō)明科業(yè),要及下個(gè)面用，年計(jì)費(fèi)1萬(wàn)。（）計(jì)算分費(fèi)本題及的量的通DNA ，時(shí)光量 析（AI700H）行 達(dá)檢，光聚顯鏡察等,計(jì)4 ：用于支付國(guó) 種試劑盒：BCAproteinassaykit、mMessagemMachineT7UltraKit(Ambion,AM1345)、RNeasyMiniKit(Qiagen,74104)等，共計(jì)12.4萬(wàn)元；（2）實(shí)驗(yàn)中用到的普通引物,熒光引物、各種抗體、相關(guān)質(zhì)粒載體構(gòu)建用到的限制性?xún)?nèi) 元;（4）常用的分子生物學(xué)及生化試劑盒耗材，包括常規(guī)PCR試劑、96孔384孔PCR板（ABI原裝）、Westernblot相關(guān)試劑、免疫組化相關(guān)試劑、大量的各種型號(hào)的離心管等，共計(jì)8.57萬(wàn)元；（5）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：Sh2b1tm1Ayos轉(zhuǎn) 勞務(wù)費(fèi)：涉及到參與本課題的2 勞務(wù)費(fèi)，4年共計(jì)7.68萬(wàn)元報(bào)告正（一）立項(xiàng)依據(jù)與研究?jī)?nèi)容（4000- 字項(xiàng)目的立項(xiàng)依據(jù)（研究意義、國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀及發(fā)展動(dòng)態(tài)分；也是心血管疾病導(dǎo)致的最主要原因之一。CHF具有高、高率、高醫(yī)療費(fèi)用的特點(diǎn)。每年新發(fā)CHF人數(shù)在65萬(wàn)以上，40歲以上人群罹患CHF的高達(dá)20%，總計(jì)有510萬(wàn)以上的人存在明顯臨床癥狀的CHF。患CHF。雖然治療CHF的不斷發(fā)展，但患者的5年的絕對(duì)率仍然接近50%。在ARIC研究中，入院患者30天、1年和5年率分別為10.4%、22%和42.3%。另有，A、B、C、D各階段CHF患者5年率分別為20%、者因此住院；1993年，醫(yī)保支付的1000名患者中，有90人是CHF患者，到2003年，這個(gè)數(shù)字已經(jīng)上升到121人；2013年，用于CHF總的治療費(fèi)CHF0.9%CHF發(fā)生機(jī)制及治療的研究一直是心血管領(lǐng)域CHF的發(fā)病機(jī)制非常復(fù)雜，目前認(rèn)為，導(dǎo)致的心肌肥厚、心室重分泌系統(tǒng)的疾患，如肥厚型心肌病（HypertrophicCardiomyopathy,HCM、擴(kuò)張型心肌病（DialatedCardiomyopathy,DCM、高血壓病（EssentialHypertension,EH、冠心病(CoranaryAtreryDiseaseCAD)等，都可導(dǎo)致心室重構(gòu)。在這些疾病導(dǎo)致CHF的過(guò)程中，壓力超負(fù)荷（PressureOverload）是重要的啟動(dòng)因素。持factorsCHF。因此研調(diào)控因素對(duì)于CHF的防治十分重要。SH2（Srchomology2）B銜接蛋1(SH2B1)LianyouRui首先發(fā)現(xiàn)，2007年2月在JournalofClinicalInvestigation并命名。SH2B1是SH2B的成衡和免疫調(diào)節(jié)等諸多方面發(fā)揮著重要的調(diào)控作用SH2B1長(zhǎng)約6.1kh，它編蛋白，主要介導(dǎo)含有酪氨酸磷酸化的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。SH2B1系采酵母雜交臟、胰臟、肌肉、脂肪組織等SH2B1mRNA選擇性剪切形成四種不同形式的亞基(α，β，γδ亞基)NPHSH2C端結(jié)構(gòu)卻不同。β和γ亞型主要在和心臟中表達(dá)，β亞型的表達(dá)量大于γ亞脾、肺、及發(fā)育初期的胚胎組織中，心臟和組織中量表達(dá)，其中除組織外，其它組織中δ亞型的表達(dá)量均大于α亞型。對(duì)于SH2B1的生物學(xué)功能，目前主要集中在其對(duì)代謝的調(diào)節(jié)，如調(diào)控性和血糖平衡的調(diào)節(jié)，是調(diào)節(jié)能量代謝和體重的主要蛋白之一，SH2B1敲除小鼠可以導(dǎo)致肥胖和2型；2）SH2B1可以通過(guò)與胰島素樣生長(zhǎng)因子1(IGF-1)受體結(jié)合，在IGF1介導(dǎo)的生殖通路中發(fā)揮作用；3）表達(dá)于腦組織中的SH2B1還可增強(qiáng)神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)誘導(dǎo)的神經(jīng)分還有研究表明SH2B1數(shù)。Sabrina等于2011年發(fā)現(xiàn)，SH2B1肥胖位點(diǎn)的變異性與患者心肌梗死發(fā)生相關(guān)并降低內(nèi)皮細(xì)胞一氧化氮合酶活性。這些初步發(fā)現(xiàn)暗示SH21可能存在與心臟相關(guān)的功能，所以我們這里科學(xué)問(wèn)題是：SH21是否影響心臟的病理生理變化，是否對(duì)心肌細(xì)胞重構(gòu)存在調(diào)控作用？為了回答這個(gè)問(wèn)題，我們進(jìn)行了初步研究。我們獲取了DM及HM患者移植心臟標(biāo)本，對(duì)心DCM和HM患者心室肌的S21（因的正常人心臟，同時(shí)也檢測(cè)到βMC和P表達(dá)也增高（圖1，未4周、8SH2B1、β-MHC和組，且有時(shí)間相關(guān)性，8周顯著4周，β-MHCANP的表（圖圖 壓力超負(fù)荷心衰大鼠4周、8周心室肌表達(dá)SH2B1、β-HCM和ANP的比

1.從我們初步的實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，SH2B1與心肌肥厚有著明確的關(guān)系，但這種關(guān)系是否是因果關(guān)系？即SH2B1 是否對(duì)壓力超負(fù)荷心肌重構(gòu)存在調(diào)節(jié)作用？這另外，如果SH2B1對(duì)壓力超負(fù)荷心肌重構(gòu)存在調(diào)節(jié)作用，那么，這種作用是向調(diào)節(jié)（促進(jìn)）還是負(fù)向調(diào)節(jié)（抑制）？其介導(dǎo)心肌肥厚的路徑是什么？這也是我們需要探討的問(wèn)題對(duì)心肌肥厚發(fā)生機(jī)制的研究前人已經(jīng)做了大量工作，雖然調(diào)節(jié)通路十分紛繁復(fù)雜，但已有很多成果，圖3簡(jiǎn)要提示導(dǎo)致心肌肥厚的一些調(diào)節(jié)通路。作為上游調(diào)控因子，細(xì)胞應(yīng)激相關(guān)蛋白：Ras,,d4和ho等均參與心肌肥厚的調(diào)節(jié)；作為下游調(diào)控因子，Stt3、C-un、TF-2、Elk-1、Smd4、p53、T4、IS、Pdx1等參與調(diào)節(jié)。關(guān)于SH21參與的調(diào)節(jié)通路，根據(jù)文獻(xiàn)可通過(guò)JAK2/ST3JAK2/IRS1 JAK2/IRS2JAK2/Pdx1等路徑調(diào)節(jié)能量平衡體重糖代謝細(xì)胞增殖據(jù)我們認(rèn)為JAK2可能是SH2調(diào)節(jié)心肌肥厚的一個(gè)關(guān)鍵環(huán)節(jié)，因此提出假說(shuō)，SH21也通過(guò)JAK2為主的路徑介導(dǎo)心肌肥厚。我們據(jù)此對(duì)其上游和下游的相關(guān)蛋白進(jìn)行檢測(cè)，尋找SH2調(diào)節(jié)心肌肥厚的路徑，這也是本課題研究的重點(diǎn)問(wèn)題。3導(dǎo)致總之，綜合國(guó)內(nèi)外研究和我們自己的初步試驗(yàn)，我們提出假說(shuō)認(rèn)在壓力超負(fù)荷心肌肥厚中起著重要作用，可能通JAK2為中心的路徑介導(dǎo)這種作用。我們通過(guò)主動(dòng)脈縮窄壓力超負(fù)荷大鼠模型、乳鼠心肌細(xì)胞、SH2B1敲除大鼠模型對(duì)上述假說(shuō)進(jìn)行驗(yàn)證。本研究對(duì)明確SH2B1的生物學(xué)效應(yīng)、CHF的發(fā)生、發(fā)展機(jī)制有切實(shí)幫助；從遠(yuǎn)期看，可能為CHF的干預(yù)提供新的靶點(diǎn)。參考文獻(xiàn)DjousseL,DriverJA,GazianoJM.Relationbetweenmodifiablelifestylefactorsandlifetimeriskofheartfailure.JAMA.2009,302:394–400.GoAS,MozaffarianD,RogerVL,etal.Heartdiseaseandstrokestatistics–2013update:areportfromtheAmericanHeartAssociation.Circulation.2013,127:e6–245.CurtisLH,WanDJ,HammillBG,etal.Incidenceandprevalenceofheartfailureinelderly 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缺失對(duì)壓力超負(fù)荷所致的心肌肥厚的影使用SH2B1敲除小鼠建立主動(dòng)脈縮窄（AB）壓力超負(fù)荷心衰模型EF%,dP/dtmax,dP/dtmin）；小鼠處死后，獲取心肌，測(cè)量心重(HW/BW),肺重/體重比(LW/BW),和心重/脛骨長(zhǎng)度比（HWTL)，心臟截面面積（cardiomyocytecross-sectionalarea，CSA）等；檢測(cè)心肌纖維化：PSRIIIImRNA、 過(guò)表達(dá)對(duì)壓力超負(fù)荷所致的心肌肥厚的影用westernblot檢測(cè)各TG生殖系的轉(zhuǎn)水平，選擇表達(dá)最強(qiáng)者檢測(cè)HW/BW，HW/TL，LW/BW檢測(cè)心功能（LVEDDLVESDFSEFdP/dtmax,dP/dtmin檢測(cè)心肌纖維化：PSR染色、IIII、 介導(dǎo)心肌肥厚通路的研SH2B1-/-SH2B1+/+Ras、Rac、Cdc4Rho的表體外實(shí)驗(yàn)，SH2B1介導(dǎo)AngII誘導(dǎo)心肌肥厚的可能通路乳鼠心肌細(xì)胞（NRCMs）培檢測(cè)JAK2、Stat3、C-Jun、ATF-2、Elk-1,Smad4//p53、NFAT4、IRS、檢測(cè)JAK2、Stat3、C-Jun、ATF-2、Elk-1,Smad4//p53、NFAT4、IRS、、建立SH2B1敲除大鼠模型，驗(yàn)證SH2B1對(duì)壓力超負(fù)荷心肌肥厚的調(diào)使用TALEN技術(shù)建立一種新的SH2B1敲除大鼠模型AB心功能檢測(cè)（LVEDDLVESDFSEFdP/dtmax,dP/dtmin1、明確SH2B1對(duì)壓力超負(fù)荷心肌重構(gòu)的具體調(diào)節(jié)作用2、明確SH2B1對(duì)壓力超負(fù)荷心肌重構(gòu)調(diào)節(jié)過(guò)程中的信號(hào)通路續(xù)研究SH2B1提供穩(wěn)定可靠的敲除動(dòng)物。擬解決的關(guān)鍵科學(xué)問(wèn)題1、SH2B1是否對(duì)壓力超負(fù)荷導(dǎo)致的心肌肥厚具有調(diào)節(jié)作2、SH2B1對(duì)壓力超負(fù)荷所致心肌肥厚具有哪種的調(diào)節(jié)作3、SH2B1對(duì)壓力超負(fù)荷所致心肌肥厚調(diào)節(jié)的通路是什么4、建立新的SH2B1敲除大鼠品系，驗(yàn)證研究結(jié)果，為后續(xù)研究提供模型擬采取的研究方案及可行性分析（實(shí)驗(yàn)、關(guān)鍵技術(shù)等說(shuō)明；技術(shù)路研究方法及實(shí)驗(yàn)SantaCruzBiotechnologyDallasTXUSA)ANP(sc20158)β-MHC(sc53090)和TG101348(sc-364740)?？笿AK2（3230phospho-JAK23776)phospho-STAT39145)GAPDH2118)可從CellSignaling（AF6915(MinneapolisMNUSA)STAT3抗體可從BioworldTechnologyHarrogate,UK)購(gòu)置。BCAproteinassaykit可從Pierce(Rockford,IL,USA)購(gòu)置。胎牛可從HyClone(Waltham,MA,USA)Sigma(St.Louis,MO,USA)購(gòu)置。心肌細(xì)胞的培養(yǎng)與鑒定（已完成，見(jiàn)工作基礎(chǔ)菌條件下開(kāi)胸取心臟并剪碎心肌，加入0.08％胰酶及0.1％Ⅲ型膠原酶消化。收集20%FBSDMEM/F12終止消化，輕微吹打，混勻，1000rmp10mi棄上清收集細(xì)胞沉淀，加入含20%FBSDF122×106個(gè)／ml37℃，5％C02培養(yǎng)箱4×105個(gè)／ml96孔板或覆有多聚賴(lài)氨酸包被的蓋玻片的24孔板中，放入CO2培養(yǎng)箱中37℃培養(yǎng)。在培養(yǎng)的前48h，加入0.0lmmol／L的BrdU以抑制非心肌細(xì)胞生長(zhǎng)。5天的心肌細(xì)胞，小鼠抗人肌節(jié)性肌動(dòng)蛋白（ericactin）SH2B1過(guò)表巨細(xì)胞（CMV）啟動(dòng)子控制的全長(zhǎng)大鼠SH2B1cDNA，亞克隆到缺SABiosciences（KR45212G）shSH2B1，以此為基礎(chǔ)構(gòu)建AdshSH2B1腺，選取SH2B1表達(dá)水平降低最顯著者用于試驗(yàn)。采用AdshRNA作為對(duì)照。（MOI：100于DMEM/F12培養(yǎng)基（含20%FCS，0.1mMBrdU和青霉素/鏈霉素，不含）24小時(shí)。繼而以AngII(1μM)48小時(shí)。SH2B1敲除小鼠(Sh2b1tm1Ayos)購(gòu)自RIKENBioResourceCenter(RBRC00994)。對(duì)鼠尾DNA進(jìn)行檢測(cè)確認(rèn)敲除是否成功，引物1：25’-引物35’-CAGGATCTCCTGTCATCTCACCTT-3’.引物2和引物3用于表達(dá)心臟特異性SH2B1的轉(zhuǎn)（TG）小鼠(C57BL/6background)的制造：微注射法給已的小鼠胚胎注入α-myosinheavychain(α-MHC)-SH2B1，然后將胚胎移植入假孕母鼠，篩選并獲取符合需要的TG小鼠。使用PCR技術(shù)對(duì)小鼠尾組DNA分析鑒定TG小鼠，所用引物序列如下：5’-GAGCTTTGGCTTTGAGGATG-3’SH2B1敲除大鼠模型的建立（已完成部分工作應(yīng)用transcriptionactivator-likeeffectornuclease(TALEN技術(shù)制作新SH2B1敲除大鼠模型，簡(jiǎn)要步驟如下（圖Exon2SH2B1DNA的Ntac:SD大鼠胚胎；* E3E4 E6E7 *圖 SD大鼠SH2B1(E2,100bp)圖解.翻譯起始位（ATG位于E2劃線的為20％烏拉坦（4ml/kg體重）腹腔麻醉，腹中段沿腹正中線縱向切口約2cm，鈍性分離腹主動(dòng)脈，以直徑為0.8cm的不銹頭于腎動(dòng)術(shù)后予青霉素10萬(wàn)單位。術(shù)后2d后大鼠逐漸出現(xiàn)呼吸、心跳加快、怕冷倦怠、食欲減退、、皮下水腫等癥狀，提示造模成功。假手術(shù)組僅分離腹主動(dòng)脈TG101348(N-tert-butyl-3-(5-methyl-2-(4-(2-(pyrrolidin-1-o)pyrimidin-4-ylamino)benzenesulfonamide)JAK2抑制劑，antaCruzBiotechnologyDallasTXUSA)購(gòu)置。給SH2B1TGTGTG1013482120mg/kg4周。動(dòng)物予1.5-2%異氟烷吸入麻醉超聲檢測(cè)采用Mylab30CV超聲系統(tǒng)(BiosoundEsaoteInc.)和15-MHz傳感器。測(cè)量LV(LVESDLV舒張末期直徑(LVEDD)LV射血分?jǐn)?shù)（LVFS。血流動(dòng)力學(xué)檢測(cè)，1.4Fmicromanometer導(dǎo)管(SPR-839MillarInstruments,Houston,(MPVS-300SignalConditioner,MillarInstruments,Inc.)和PowerLab/4SPA/D動(dòng)物心臟在1MKCl的10%福爾溶液內(nèi)固定24h以上。脫水，石蠟包埋，5-μmHE染色，PSR染色檢測(cè)膠原沉積，F(xiàn)ITCWGA染色觀察心肌截面面積。光鏡檢查心肌細(xì)胞，每組測(cè)量心肌細(xì)100個(gè)。使用定量數(shù)字影像分析系統(tǒng)(Image-ProPlus6.0)檢測(cè)單個(gè)心肌實(shí)時(shí)定量PCRWestern按照文獻(xiàn)的方法實(shí)施實(shí)時(shí)定量PCR和WesternBlotting。使用(Invitrogen)從動(dòng)物心臟和細(xì)胞中提取總RNATranscriptorFirstStrandcDNASynthesisKit(Roche)cDNA。SYBRGreenPCRMasterMix(Roche)行實(shí)時(shí)定量PCR，以確定表達(dá)程度，以GAPDH作為內(nèi)對(duì)照。對(duì)心肌和培養(yǎng)的細(xì)胞Westernblotting。Pierce?BCAProteinAssayKit(Pierce)測(cè)量蛋白質(zhì)濃度。蛋白質(zhì)提取物（50μgSDSInvitrogen)PVDF膜。蛋白印跡和一級(jí)抗體4°C孵育過(guò)夜，繼而與過(guò)氧化物酶耦合的次級(jí)抗體(Jackson可行性分析期研究中，我們通過(guò)對(duì)人類(lèi)HCM、DCM心臟移植患者的心肌研究SH2B1CHF模型驗(yàn)證了這一點(diǎn)。本課題是基于我們前期研究發(fā)現(xiàn)新研究方向，具有很好的理論我們已成功建立并完成乳鼠心肌細(xì)胞的培養(yǎng)與鑒定。已熟練掌握主動(dòng)脈CHF依托單位的設(shè)備齊全，可保障實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行本項(xiàng)目的特色與創(chuàng)新之處；2、探索SH2B1介導(dǎo)心肌肥厚的調(diào)節(jié)通3、首次探索建立SH2B1敲除大鼠品系，驗(yàn)證SH2B1對(duì)壓力超負(fù)荷心肌重構(gòu)的調(diào)節(jié)作用，并為SH2B1的后續(xù)研究提供支持，使SH2B1的研究具有可持續(xù)年度研究計(jì)劃及預(yù)期研究結(jié)果（包括擬組織的重要學(xué)術(shù)交流活動(dòng)、國(guó)際合作與交流計(jì)劃等。年度研究計(jì)劃轉(zhuǎn)染心肌細(xì)胞，AngII干預(yù)，心肌細(xì)胞JAK2和STAT3磷酸化程度檢測(cè)等。購(gòu)置SH2B1敲除小鼠。用α-MHCpromoter制造轉(zhuǎn)（TG）小鼠，篩選表達(dá)最強(qiáng)TG生殖系。SH2B1-/-小鼠、TGAB導(dǎo)致的壓力超HW/BWHW/TL，LW/BWCSA檢測(cè)心肌肥厚標(biāo)志mRNA（VEDD心肌JAK2和STAT3磷酸化程度。完成SH2B1敲除大鼠模型的建立，傳代形成穩(wěn)定的品系。預(yù)期結(jié)1、不論體外實(shí)驗(yàn)還是在體實(shí)驗(yàn)，SH2B1表達(dá)增加是心肌肥厚的促進(jìn)因素4、成功制造SH2B1敲除大鼠模型，為后續(xù)研究提供穩(wěn)定可靠的工具5、預(yù)計(jì)可以培養(yǎng)3-4名，2-3篇SCI，4-8，有1-2篇到國(guó)際會(huì)議上交流，2-4篇在國(guó)內(nèi)會(huì)議上交流。（二）研究基礎(chǔ)與工作條件工作基礎(chǔ)（；已經(jīng)研究了HCM、DCM患者心肌SH2B1的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)其表達(dá)增高；我們還建立AB致壓力超負(fù)荷心衰模型，發(fā)現(xiàn)心肌肥厚時(shí)，SH2B1表達(dá)增加；同時(shí)，心衰標(biāo)志物β-HCMANP表達(dá)也增加。具體見(jiàn)前文（12。這模型。圖5顯示的是體外培養(yǎng)的乳鼠心肌細(xì)胞；圖6為培養(yǎng)的乳鼠細(xì)胞，用免疫化學(xué)法檢測(cè)，顯示胞漿中α ericactin抗原染色陽(yáng)性。表1為正常培養(yǎng) ×200）A：乳鼠心肌細(xì)胞原代培養(yǎng)第3、4天，相鄰細(xì)胞通過(guò)伸出的偽足相連接，部分細(xì)胞相 ericactin抗原染色陽(yáng)性，呈棕1各組心肌細(xì)胞搏動(dòng)頻率、蛋白含量與表面積的比較 AngII組 117.5±30.11*82顯示的是假手術(shù)組及模型組血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)的檢測(cè)結(jié)果，上述 圖7各組腹主動(dòng)脈縮窄8周肌組織病理學(xué)變化（HE,×200 表 各組大鼠血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果比較（x±sn-工作條件（包括已具備的實(shí)驗(yàn)條件，尚缺少的實(shí)驗(yàn)條件和擬解決的利用國(guó)家國(guó)家和部門(mén)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室等研究的計(jì)劃與情況；大學(xué)人民醫(yī)院心內(nèi)科是國(guó)家211工程，腦血管病防治中心，大學(xué)醫(yī)學(xué)院心血管病，已建有動(dòng)物、流體力學(xué)、基礎(chǔ)電生理、形態(tài)學(xué)、分子生物學(xué)、生物化學(xué)、細(xì)胞培養(yǎng)，擁有相關(guān)的電生理和分子生物學(xué)所需設(shè)備。建有SPF級(jí)動(dòng)物房，動(dòng)物有手術(shù)臺(tái)、64導(dǎo)電生理儀、心電圖機(jī)、超低溫冰箱、超速離心機(jī)、細(xì)胞膜片鉗檢測(cè)系統(tǒng)、PCR儀、色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀、蛋白質(zhì)大學(xué)人民醫(yī)院模式動(dòng)物中心是國(guó)內(nèi)先進(jìn)的研究、制造敲除動(dòng)物的實(shí)驗(yàn)中心。目前已經(jīng)形成了成研究機(jī)制，已經(jīng)能夠熟練完成各項(xiàng)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)，在制造敲除大鼠模型方面，已經(jīng)成功制造敲除大鼠品系40余承擔(dān)科研項(xiàng)目情況（；項(xiàng)目申請(qǐng)人主家自然科學(xué)基金1項(xiàng)，名稱(chēng)“肌球蛋白調(diào)節(jié)性輕鏈在慢性心力衰竭發(fā)生機(jī)制中的生物學(xué)效應(yīng)研究”；編號(hào)：；來(lái)源：國(guó)家自然科學(xué)基金；起止年月：2013.1-2016.12。本人為。MYL2對(duì)心SH2B1對(duì)同一類(lèi)型心衰時(shí)心肌重構(gòu)的調(diào)節(jié)作用。兩個(gè)課題針對(duì)的都是壓力超負(fù)荷導(dǎo)致CHF發(fā)生過(guò)程中的心完成國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目情況（對(duì)申請(qǐng)人負(fù)責(zé)的前一個(gè)已結(jié)題科學(xué)基金項(xiàng)目（項(xiàng)目名稱(chēng)及批準(zhǔn)號(hào)完成情況、后續(xù)研究進(jìn)展及要（限500字）和相關(guān)成果的詳細(xì)。無(wú)（三）預(yù)算說(shuō)購(gòu)置單項(xiàng)經(jīng)費(fèi)5萬(wàn)元以上固定資產(chǎn)及須逐項(xiàng)說(shuō)明與項(xiàng)目研請(qǐng) （四）其他需要說(shuō)明的問(wèn)題無(wú)大學(xué)，人民醫(yī)院，醫(yī)教育經(jīng)歷（按時(shí)間倒排序）：2001/9-2004/7，大學(xué)第一臨床學(xué)院，內(nèi)科學(xué)，博士，導(dǎo)師：從1998/9-2001/7，大學(xué)第一臨床學(xué)院，內(nèi)科學(xué)，，導(dǎo)師：從1989/91994/62014/12-至今，mayoClinic圣瑪麗醫(yī)院，心內(nèi)科，fellow2004/7-2014/12，大學(xué)，人民醫(yī)院心內(nèi)科，醫(yī)師1994/71998/8，核工業(yè)部，415曾使用證件信息（限3個(gè)無(wú)主持或參加科研項(xiàng)目及人才計(jì)劃項(xiàng)目情況（按時(shí)間倒序排序）： 崔博簡(jiǎn)歷(申請(qǐng)者/參加者教育經(jīng)歷（從大學(xué)本科開(kāi)始，按時(shí)間倒排序2005/09– 1997/09 工作經(jīng)歷（科研與學(xué)術(shù)工作經(jīng)歷，按時(shí)間倒排序曾使用證件信息（3個(gè)無(wú)主持或參加科研項(xiàng)目及人才計(jì)劃項(xiàng)目情況（按時(shí)間倒排序 、心臟自主神經(jīng)節(jié)消融的安全性研究2011/01-2014/1223姚園簡(jiǎn)歷(參加者教育經(jīng)歷（從大學(xué)本科開(kāi)始，按時(shí)間倒排序2007/09-大學(xué)第一臨床學(xué)院，心血管內(nèi)科，博士；導(dǎo)師:從新教2003/09-2006/06大學(xué)第一臨床學(xué)院，心血管內(nèi)科，；導(dǎo)師:江洪教1998/09-2003/06大學(xué)醫(yī)學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)，學(xué)士工作經(jīng)歷（科研與學(xué)術(shù)工作經(jīng)歷，按時(shí)間倒排序2009/12至今大學(xué)人民醫(yī)院心內(nèi)科，主治醫(yī)師2006/07-2009/12大學(xué)人民醫(yī)院心內(nèi)科，住院醫(yī)師曾使用證件信息（3個(gè)無(wú)主持或參加科研項(xiàng)目及人才計(jì)劃項(xiàng)目情況（按時(shí)間倒排序1Notch信號(hào)通路調(diào)控胚胎干細(xì)胞向心肌細(xì)胞分化的分子機(jī)制研究、2008/01-2010/12、7萬(wàn)元、已結(jié)題、參與。學(xué)效應(yīng)研究，2013/01-2016/12、0萬(wàn)元、進(jìn)行中、參與。宋濤簡(jiǎn)歷（參加者所在單位及：大人民醫(yī)院，心內(nèi)科，主治醫(yī)師 研究工作經(jīng)歷（按時(shí)間倒排序2011/07至今大學(xué)人民醫(yī)院心內(nèi)科主治醫(yī)師曾使用證件信息（3個(gè)無(wú)主持或參加科研項(xiàng)目及人才計(jì)劃項(xiàng)目情況（按時(shí)間倒排序高?；究蒲袠I(yè)務(wù)費(fèi)專(zhuān)項(xiàng)項(xiàng)目，項(xiàng)目編號(hào)：，Notch信號(hào)通路調(diào)控胚胎干細(xì)胞向心肌細(xì)胞分化的分子機(jī)制研究、RGS2在心肌梗死肌重構(gòu)中的作用和機(jī)制研究，2013/01-2013/12、3.5萬(wàn)元已結(jié)題、主持。鄧偉簡(jiǎn)歷(參加者受教 2005/07－2006/08，備 大學(xué)2000/09－2005/06，大學(xué)醫(yī)學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)專(zhuān)業(yè)，本科研究工作經(jīng) 2008/07-2009/08，華技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬荊州醫(yī)院心內(nèi)科，醫(yī)師曾使用證件信息（3個(gè)無(wú)主持或參加科研項(xiàng)目及人才計(jì)劃項(xiàng)目情況（按時(shí)間倒排序從事心肌重構(gòu)和心力衰竭的基礎(chǔ)和臨床研究工作，主家自然科學(xué)基金青年項(xiàng)目一項(xiàng)（Toll樣受體7對(duì)心肌肥厚的影響及機(jī)制，項(xiàng)目編號(hào)：萬(wàn)為國(guó)簡(jiǎn)歷(參加者教育經(jīng)歷（從大學(xué)本科開(kāi)始，按時(shí)間倒排序2011年9月-2014年6月大學(xué)第一臨床學(xué)院博士導(dǎo)師：蔣學(xué)2003年9月-2006年6月大學(xué)第一臨床學(xué)院導(dǎo)師：蔣學(xué)1998年9月-2003年6月大學(xué)第一臨床學(xué)院本工作經(jīng)歷（科研與學(xué)術(shù)工作經(jīng)歷，按時(shí)間倒排序2006年8月-2010年7月就職于科技大學(xué)附屬天佑醫(yī)院心血管內(nèi)曾使用證件信息（3個(gè)無(wú)主持或參加科研項(xiàng)目及人才計(jì)劃項(xiàng)目情況（按時(shí)間倒排序呂永楠簡(jiǎn)歷(參與者教育經(jīng)歷（從大學(xué)本科開(kāi)始，按時(shí)間倒排序2012/09-至今大學(xué)內(nèi)科學(xué)博士在 2003/09－2010/07大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)（七年制）導(dǎo)師：蔣學(xué)工作經(jīng)歷（科研與學(xué)術(shù)工作經(jīng)歷，按時(shí)間倒排序曾使用證件信息（3個(gè)無(wú)主持或參加科研項(xiàng)目及人才計(jì)劃項(xiàng)目