cn.2a一種抗菌飼料添加劑制備方法

(19)中民國(guó)家知識(shí)(21)(22)(71)申請(qǐng)人高科聯(lián)合生物技術(shù)研發(fā)有限公地址201206市浦東新區(qū)金港路501B3申請(qǐng)人高科生物工程(72)發(fā)明人黃青山嘉A23K1/17

(10)申請(qǐng)公布號(hào) (43)1說明書4序列表4(57)A添加劑的方法。用本發(fā)明所的含有抗菌A 權(quán)利要求 1/1如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的抗菌肽為cecropinAl、buforinIImagaininGK-1GK-69中的一種或一種以上。數(shù)不少于2個(gè)。一種抗菌飼料添加劑的方 的抗菌飼料添加劑的方法。 藥藥 動(dòng)物的抗菌肽進(jìn)行了開發(fā)研究。實(shí)驗(yàn)表明蠶抗菌肽AD能抑制多種畜禽病病原，如豬水 [0008]本發(fā)明需要解決的技術(shù)問題之一是提供一種抗菌飼料添加劑的方法以克服[0009][0010]首先將抗菌肽序列用數(shù)個(gè)甘氨酸鉸鏈起來，串聯(lián)數(shù)個(gè)抗菌肽分子，在酵母菌中表[0011]去除工程菌后的發(fā)酵產(chǎn)物可作為飼料添加劑，由于發(fā)酵產(chǎn)物中就含有溶葡萄球菌 肽連接數(shù)不少于2個(gè)。MihaemBoh.hil995(3)551-554)ArgLysLeuPheLysLysIleGluLysValGlyArgAsnValArgAspLeuLysAlaGlyProAlaIleAlaValIleGlyGlnAlaLysSerII的序列(參見 218(1)408-ThrArgSerSerArgAlaGlyLeuGlnPheProValGlyArgValHisArgLeuArgGlyIleGlyLysPheLeuHisSerAlaLyslysPheGlylysAlaPheValGluIleMetAsn[0030]GK-1[0031]LysTrpLysLeuPheLysLysIleGlyIleGlyArgLeuLeuLysArgGlyLeuArgLysLeuLeuLys[0032]GK-69[0033]LysTrpLysSerPheIleLysLysLeuThrSerLysPheLeuHisSerAlaLysLysPhe[0035]用XhoI和EcoRI雙酶切將合成含3個(gè)gk1的多拷貝片段3gk1連入pPIC9得到重組質(zhì)粒pPIC9-3gk1；NO6[0037]aaatggaaattatttaaaaaaattggtattggtcgtttattaaaacgtggtttacgtaaattattaaaaggtggcggaggtggcg[0038]gaaaatggaaattatttaaaaaaattggtattggtcgtttattaaaacgtggtttacgtaaattattaaaaggtggcggaggtgg[0039]cggaaaatggaaattatttaaaaaaattggtattggtcgtttattaaaacgtggtttacgtaaattattaaaatga質(zhì)粒pPIC9K-3gk1。再將重組質(zhì)粒pPIC9K-3gk1電轉(zhuǎn)化GS115MD平板上篩選克隆。再通過G418篩選高拷貝轉(zhuǎn)化子。3000g離心收集BMMY重懸菌OD600＝1左右28～30℃培養(yǎng)24h養(yǎng)基中添100％的甲醇至終濃度0.572h，SDSGK1表達(dá)情況。[0042]2LYSOSTAPHIN 粒pPIC9-lysn； NO7 gctgcaacccatgaacattctgcacaatggctgaataattacaaaaaaggctatggttacggtccttatccactgggtatcaatg gcggtatgcactacggcgttgatttttttatgaatattggcaccccagtaaaagctatttctagcggtaaaatcgttgaagctgg ttggagcaattacggtggcggtaatcaaatcggtctgattgaaaatgatggtgtgcatcgtcaatggtatatgcatctgagcaaa tataatgttaaagtaggtgattatgtcaaagctggtcaaattatcggttggtctggcagcactggttattctaccgcaccacatc tgcacttccaacgtatggttaattctttttctcaatctactgcccaagatccaatgcctttcctgaagagcgcaggttatggcaa[0050]agcaggtggtaccgtaactccaacgccgaataccggttggaaaaccaacaaatatggcaccctgtataaactgagtctgctagct[0051]tcacccctaataccgatatcattacccgtacgactggtccatttcgtagcatgccgcagtctggtgtcctgaaagcaggtcaaac[0052]cattcattatgatgaagtgatgaaacaagacggtcatgtttgggtaggttcggtaacagcggccaacgtatttacctgcct[0053]gtacgtactggcaaaaatctactatctgggtgttctgtggggtactatcaagtga質(zhì)粒pPIC9K-lysn。再將重組質(zhì)粒pPIC9K-lysn電轉(zhuǎn)化GS115MD平板上篩選克隆。再