第五章 表達(dá)載體

第五章表達(dá)載體一、選擇題松弛型質(zhì)粒（）答案：AA在宿主細(xì)胞中拷貝數(shù)較多B可用氯霉素?cái)U(kuò)增C有一般沒有選擇標(biāo)記D上述A和B兩項(xiàng)正確同一種質(zhì)粒DNA,以三種不同的形式存在，電泳時(shí)他們的遷移速度是（）答案：BOCDNA>SCDNA>LDNASCDNA>LDNA>OCDNALDNA>OCDNA>SCDNASCDNA>OCDNA>LDNA關(guān)于質(zhì)粒的相容性，下面哪種說法不正確？（）答案：DA不相容群的質(zhì)粒能夠共存于一個(gè)細(xì)胞B質(zhì)粒可以分成若干個(gè)不相容群，但不能分成若干個(gè)相容群C如果ab兩種質(zhì)粒不相容，說明它們復(fù)制機(jī)制相同D屬于同一個(gè)不相容群中的質(zhì)粒，不僅復(fù)制機(jī)制相同，而且拷貝數(shù)和分子質(zhì)量也相同關(guān)于穿梭質(zhì)粒載體，下面哪一種說法是最正確的（）答案：BA在不同宿主中具有不同的復(fù)制機(jī)制B在不同的宿主細(xì)胞中使用不同的復(fù)制起點(diǎn)C在不同的宿主細(xì)胞中使用不同的復(fù)制酶D在不同的宿主細(xì)胞中具有不同的復(fù)制速度質(zhì)粒具有下列特征，因此適合作為克隆載體,除了（）答案：EA賦予宿主細(xì)胞某種可檢測(cè)的特性B可通過一定的純化步驟與宿主細(xì)胞基因組分離C獨(dú)立的復(fù)制能力D可復(fù)制自身DNA以及插入的外源DNAE甲基化防止宿主細(xì)胞的限制性內(nèi)切核酸酶對(duì)其降解下列對(duì)質(zhì)粒特征的描述中，不正確的是（）答案：AA既能以單鏈環(huán)狀又能以雙鏈環(huán)狀的形式存在B是獨(dú)立與細(xì)菌染色體DNA以外的復(fù)制子C有線性質(zhì)粒DNAD能夠自我復(fù)制下列屬于置換型載體的是（）答案：BA入gt10載體BEMBL3C人gtllD人GEM-2/4載體中常用的標(biāo)簽蛋白有（）答案：BA谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶B蛋白質(zhì)CC纖維素結(jié)合位點(diǎn)D六聚組氨酸肽質(zhì)粒的轉(zhuǎn)移性需要的因子是那幾個(gè)（）答案：DA移動(dòng)基因mobB轉(zhuǎn)移基因traC順式因子bomD反式因子com下列屬于質(zhì)粒載體的篩選標(biāo)記的是（）答案：DA琥珀突變抑制基因B抗性基因C插入失活D藍(lán)白斑下列不屬于人噬菌體發(fā)育調(diào)節(jié)的是（）答案：BA吸附B轉(zhuǎn)入C延遲早期轉(zhuǎn)錄D溶源化下列不屬于入噬菌體的選擇標(biāo)記的是（）答案：C

AlacZ基因B基因cI失活C氨芐青霉素抗性基因粘粒載體的優(yōu)勢(shì)是（）可以裝進(jìn)100萬堿基以上的DNA片段可在單個(gè)重組體中克隆和增殖完整的真核基因可克隆與分析組成某一基因家族的真核DNA區(qū)段在構(gòu)建基因文庫時(shí)，可減少文庫中重組體的數(shù)目粘粒的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)是（）含有抗藥性標(biāo)記和質(zhì)粒復(fù)制起始位點(diǎn)；一個(gè)或多個(gè)單一限制酶切位點(diǎn)；帶有入噬菌體粘性末端；分子?。?-6kb），可容納大到40-50kb的外源DNA片段A、B、C、D、DSpi篩選答案：BCD答案：ABCD答案：ABCYAC的主要功能成份有（）AlacZ基因B基因cI失活C氨芐青霉素抗性基因粘粒載體的優(yōu)勢(shì)是（）可以裝進(jìn)100萬堿基以上的DNA片段可在單個(gè)重組體中克隆和增殖完整的真核基因可克隆與分析組成某一基因家族的真核DNA區(qū)段在構(gòu)建基因文庫時(shí)，可減少文庫中重組體的數(shù)目粘粒的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)是（）含有抗藥性標(biāo)記和質(zhì)粒復(fù)制起始位點(diǎn)；一個(gè)或多個(gè)單一限制酶切位點(diǎn)；帶有入噬菌體粘性末端；分子?。?-6kb），可容納大到40-50kb的外源DNA片段A、B、C、D、DSpi篩選答案：BCD答案：ABCD答案：ABC答案：ABCD）B.著絲粒。.自主復(fù)制序列）文庫，特別用來構(gòu)建高等真核生物的基因組文庫，并答案：BB.大片段DNAC.大片段RNAD.小片段RNAC.復(fù)制終止序列YAC載體主要是用來構(gòu)建（不用作常規(guī)的基因克隆。A.小片段DNA由于酵母的染色體是線狀的，因此其在工作狀態(tài)也是線狀的。但是，為了方便制備YAC載體，YAC載體以（）的方式存在，并增加了普通大腸桿菌質(zhì)粒載體的復(fù)制元件和選擇標(biāo)記，以便保存和增殖。答案：BA.線狀B.環(huán)狀C.半開環(huán)D.螺旋（）是基于大腸桿菌的F質(zhì)粒構(gòu)建的，高通量低拷貝的質(zhì)粒載體。答案：AA.細(xì)菌人工染色體B.酵母人工染色體C.P1人工染色體載體D.P1噬菌體載體釀酒酵母的形態(tài)為（）和卵形，生長的代時(shí)為90分鐘。答案：BA圓形B扁圓形C柱形D菱形釀酒酵母含（）條染色體，其大小為225-1900kb，總計(jì)有14x106bp。答案：CA20B18C16D14YAC載體的選擇標(biāo)記主要采用（）基因。答案：AA營養(yǎng)缺陷型B組氨酸缺陷型C抗藥性D色氨酸缺陷型YAC載體裝載了外源DNA片段的重組子導(dǎo)致抑制基因（）插入失活，從而形成紅色菌落。答案：DAsup1Bsup2Csup3Dsup4YAC載體功能強(qiáng)大，但有一些弊端。這主要表現(xiàn)在3個(gè)方面：首先，在YAC載體的插入片段會(huì)出現(xiàn)缺失和（），形成嵌合體。答案：BA基因插入B基因重排C基因添加D移碼突變BAC載體空載時(shí)大小約7.5kb，在大腸桿菌中以質(zhì)粒的形式復(fù)制，具有一個(gè)（）抗性基因。答案：CA青霉素B紅霉素C氯霉素D鏈霉素大腸桿菌-釀酒酵母穿梭質(zhì)粒載體，含有分別來自大腸桿菌和釀酒酵母的復(fù)制起點(diǎn)與選擇標(biāo)記，另有一個(gè)（）。答案：BA復(fù)制終止序列B多克隆位點(diǎn)區(qū)C自主復(fù)制序列D端粒重復(fù)序列同源重組整合載體是最常用的整合載體，該載體一方面含有大腸桿菌克隆載體的骨架，更主要的是含有一段便于同源重組的（）答案：AA重組DNA片段B大分子DNA片段C小分子DNA片段D單鏈RNA片段下面載體中不屬于質(zhì)粒載體的是。答案：CA.pBR322B.pUC18/19C.M13mp18/19D.pUC118/119入噬菌體載體分為插入型載體和置換型載體，其中屬于常見的置換型載體是。答案：BA.入gt10B.入gem-11C.入gtllD.XExcellYAC是基于染色體生物學(xué)性質(zhì)構(gòu)建的載體。答案：CA.噬菌體B.大腸桿菌C.酵母菌D.細(xì)菌通常一個(gè)質(zhì)粒含有一個(gè)與相應(yīng)的結(jié)合在一起的復(fù)制起始區(qū)。答案：BA.順反子B.順式作用元件C.增強(qiáng)子D.反式作用因子質(zhì)粒在復(fù)制時(shí)，首先合成前引物，并與DNA形成雜交體；而后RNaseH切割前引物，使之成為成熟的引物，該引物是。答案：BA.RNAIB.RNAIIC.rRNAD.mRNApUC系列載體含有基因，在特定的受體細(xì)胞中可表現(xiàn)a-互補(bǔ)作用。因此在多克隆位點(diǎn)中插入了外源片段后，可通過a-互補(bǔ)作用形成的藍(lán)色和白色菌落篩選重組質(zhì)粒。答案：CA.tetrB.amprC.lacZD.lacC二、填空基因工程中有三種主要類型的載體答案：質(zhì)粒DNA，病毒DNA，質(zhì)粒和病毒DNAAsup1Bsup2Csup3Dsup4答案：復(fù)制區(qū)（含有復(fù)制起點(diǎn)）、選擇標(biāo)記（主要是抗性基因）、克隆位點(diǎn)（便于外源DNA的插入）如果兩個(gè)質(zhì)粒不能穩(wěn)定的存在已同一個(gè)宿主細(xì)胞中，則屬于群，這是因?yàn)樗麄兊乃?。答案：同一個(gè)不親和、復(fù)制機(jī)制相同pBR322是一種改造型質(zhì)粒，它的復(fù)制子來源于，它的四環(huán)素抗性基因來源于，它的氨芐青霉素抗性基因來源于。答案：pMB1、pSC101、pSF2124Puc18質(zhì)粒是目前使用較為廣泛的載體。pUC系列的載體是通過和兩種質(zhì)粒改造而來。它的復(fù)制子來源于，Amp抗性基因則是來源于。答案：5pBR322、M13、pMB1、轉(zhuǎn)座子當(dāng)人噬菌體DNA進(jìn)入宿主細(xì)胞以后是靠宿主細(xì)胞的和形成封閉的環(huán)狀的DNA分子的。答案：DNA連接酶人噬菌體是感染大腸桿菌的噬菌體。答案：溶源性a-互補(bǔ)是指lacZ基因上缺失近操縱基因區(qū)段的突變體與帶有完整的近操縱基因區(qū)段的陰性的突變體之間實(shí)現(xiàn)互補(bǔ)。答案：0-半乳糖苷酶溶源化的頻率和與有關(guān)。答案：感染復(fù)數(shù)，營養(yǎng)狀態(tài)噬菌體DNA通過其上唯一的整合位點(diǎn)與宿主染色體DNA上的唯一整合位點(diǎn)發(fā)生重組，從而整合到染色體中。答案：attP、attB通過分析大量缺陷型入噬菌體的DNA，發(fā)現(xiàn)J基因與Cro基因之間的DNA被或替換后，不影響入噬菌體裂解生長。答案：ga1基因、bio基因?qū)σ吧痛竽c桿菌來說，向溶源和裂解方向的轉(zhuǎn)變是由和決定的。答案：感染復(fù)數(shù)和細(xì)胞的營養(yǎng)狀態(tài)代表性入噬菌體載體有和。答案：插入型載體、置換型載體粘粒的組成包括、、。答案：質(zhì)粒復(fù)制起點(diǎn)(colE1)、抗性標(biāo)記(ampr)、cos位點(diǎn)柯斯質(zhì)粒(Cosmid)載體：一種由和cos尾巴構(gòu)建的復(fù)合載體。答案：質(zhì)粒、A噬菌體pcos1EMBL是設(shè)計(jì)用于篩選體內(nèi)重組的重組粘粒文庫，通過同源重組過程達(dá)到篩選目標(biāo)克隆的目的。該載體的復(fù)制起點(diǎn)來源于粒，含和抗性基因。答案：R6K、卡那霉素四環(huán)素酵母人工染色體由酵母染色體的、和等功能性DNA序列組成。答案：著絲粒(cen4)、自主復(fù)制序列(ARS1)、來自四膜蟲的端粒(Tel)裝載了外源DNA片段的重組子導(dǎo)致抑制基因sup4插入失活，從而形成；而載體自身連接后轉(zhuǎn)入到酵母細(xì)胞后形成。答案：紅色菌落，白色菌落YAC的一個(gè)突出優(yōu)點(diǎn)是，酵母細(xì)胞比大腸桿菌對(duì)、重復(fù)的和極端的DNA有更強(qiáng)的容忍性。答案：不穩(wěn)定的細(xì)菌人工染色體是基于大腸桿菌的構(gòu)建的，高通量低拷貝的質(zhì)粒載體。答案：F質(zhì)粒BAC載體的可以避免嵌合體的產(chǎn)生，減小外源基因的表達(dá)產(chǎn)物對(duì)宿主細(xì)胞的毒副作用。

答案：低拷貝性整合載體(integrationvector),根據(jù)整合方式的不同可分為和隨機(jī)整合，按其作用來分可歸為目標(biāo)基因的插入或敲除以及隨機(jī)突變體庫的構(gòu)建。答案：定點(diǎn)整合YAC載體的復(fù)制元件是其核心組成成分，其在酵母中復(fù)制的必需元件包括復(fù)制起點(diǎn)序列即、用于有絲分裂和減數(shù)分裂功能的著絲粒(centromere,CEN)和兩個(gè)。答案：自主復(fù)制序列，端粒將谷胱甘肽固定在瓊脂糖樹脂上形成親和層析柱，當(dāng)表達(dá)融合蛋白的全細(xì)胞提取物通過層析柱時(shí)，將吸附在樹脂內(nèi)，其它細(xì)胞蛋白就被洗脫出來。答案：融合蛋白在YAC載體中最常用的是答案：PYAC4，特別用來構(gòu)建高等真核生物的基因組文庫，YAC載體主要是用來構(gòu)建并不用作常規(guī)的基因克隆。，特別用來構(gòu)建高等真核生物的基因組文庫，答案：大片段DNA文庫對(duì)于BamHI切割后形成的微型酵母染色體，當(dāng)用或切割抑制基因sup4內(nèi)部的位點(diǎn)后形成染色體的兩條臂。答案：EcoRI，SmaIYAC載體功能強(qiáng)大，但有一些弊端。這主要表現(xiàn)在3個(gè)方面：首先，在YAC載體的插入片段會(huì)出現(xiàn)和和。答案：缺失，基因重排，嵌合體攜帶F因子的細(xì)胞，或以或以表達(dá)三根發(fā)樣狀的F菌毛。答案：離狀態(tài)，整合狀態(tài)13.第一代BAC載體(Shizuyaetal.1992)不含那些能夠用于區(qū)分?jǐn)y帶抗生素抗性細(xì)菌菌落與攜帶的細(xì)菌菌落的標(biāo)記物。答案：重組子，空載體13.第一代BAC載體(Shizuyaetal.1992)不含那些能夠用于區(qū)分?jǐn)y帶抗生素抗性細(xì)菌菌落與攜帶的細(xì)菌菌落的標(biāo)記物。答案：重組子，空載體大腸桿菌表達(dá)載體都是質(zhì)粒載體。作為表達(dá)載體首先必須滿足即能將外源基因運(yùn)載到大腸桿菌細(xì)胞中。答案：克隆載體GST表達(dá)載體在啟動(dòng)子tac和多克隆位點(diǎn)之間加入了兩個(gè)與分離純化有關(guān)的編碼序列，其一是，其二是切割位點(diǎn)的編碼序列。答案：谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶基因，凝血蛋白酶大腸桿菌表達(dá)載體是最常見的表達(dá)載體，可分為表達(dá)表達(dá)載體。答案：融合蛋白非融合蛋白不相容群指那些具有不相容性的質(zhì)粒組成的一個(gè)群體的。答案：復(fù)制子按其用途可將標(biāo)記基因分為因。答案：選擇標(biāo)記篩選標(biāo)記通過插入失活進(jìn)行篩選的質(zhì)粒主要有pBR322，該質(zhì)粒具有和抗性基因兩種抗性標(biāo)記。的基本要求，表達(dá)載體和一般具有相同標(biāo)記基因和標(biāo)記基抗性基因答案：強(qiáng)啟動(dòng)子除了具有質(zhì)粒載體基本要素外，也具有多克隆位點(diǎn)、a-互補(bǔ)、噬菌體啟動(dòng)子和單鏈?zhǔn)删w的復(fù)制與包裝信號(hào)等要素的質(zhì)粒載體稱為。答案：多功能載體的質(zhì)粒一般都利用同一復(fù)制系統(tǒng)，從而導(dǎo)致不能共存于同一宿主中。答案：不相容性質(zhì)粒按拷貝數(shù)分為與質(zhì)粒。答案：嚴(yán)謹(jǐn)型松馳型三、改錯(cuò)題（正確的打寸，錯(cuò)誤的打x,并加以改正）TOC\o"1-5"\h\z迄今發(fā)現(xiàn)的質(zhì)粒DNA都是環(huán)狀的（）答案：（X，質(zhì)粒也有線性的）能夠在不同宿主細(xì)胞中復(fù)制的質(zhì)粒叫做穿梭質(zhì)粒（）答案：（V）ColEl是唯一的用作基因工程的自然質(zhì)粒載體，它具有四環(huán)素抗性標(biāo)記，因而很容易選擇（）答案：（X，ColEl上沒有四環(huán)素抗性基因，不能通過抗性篩選）基因克隆中，低拷貝的質(zhì)粒載體是沒有用的（）答案：（X，對(duì)于那些有劑量限制的基因克隆需要使用低拷貝數(shù)的質(zhì)粒載體）人噬菌體是感染大腸桿菌的溶源性噬菌體，在感染宿主后可進(jìn)入溶源狀態(tài)，也可進(jìn)入裂解循環(huán)。（）答案：（V）整合酶Int是II型拓?fù)洚悩?gòu)酶，可同時(shí)切割和連接DNA，對(duì)含負(fù)超螺旋的閉合環(huán)狀DNA的作用效果更好。（）答案：（X，Int是II型拓?fù)洚悩?gòu)酶）在感染早期，在宿主的復(fù)制蛋白和應(yīng)激蛋白的作用下，噬菌體DNA通過滾環(huán)方式進(jìn)行復(fù)制。（）答案：（X，噬菌體DNA通過0方式進(jìn)行復(fù)制）由于入噬菌體對(duì)所包裝的DNA有大小的限制，因此一般插入型載體設(shè)計(jì)為可插入6kb外源DNA片段，最大13kb。（）答案：（X，最大llkb）它用于構(gòu)建cDNA文庫、基因組文庫和表達(dá)融合蛋白。該載體最大的特點(diǎn)是在最左側(cè)可替代區(qū)置換了一段lac5基因，可編碼0-半乳糖苷酶，在IPTG/X-gal平板上形成蘭色噬菌斑。（）答案：（V）一般情況下，置換型載體克隆外源片段的大小范圍是9-23kb，故而該載體主要用來構(gòu)建基因組文庫。（）答案：（V）構(gòu)建粘粒文庫時(shí)，載體分子會(huì)自身連接，從而導(dǎo)致效率大大降低甚至失敗。通過對(duì)載體作去磷酸化處理、使用雙cos位點(diǎn)載體或?qū)d體的酶切產(chǎn)物進(jìn)行部分補(bǔ)平，可解決這一問題。（）答案：（V）柯斯質(zhì)粒（Cosmid）載體一般可插入35~40kb的外源基因。（答案：（V）外源片段克隆在粘粒載體中是以噬菌斑的形式表現(xiàn)出來的。（）答案:（x,外源片段克隆在粘粒載體中是以大腸桿菌菌落的形式表現(xiàn)出來的，而不是噬菌斑。）YAC載體以環(huán)狀的方式存在，并增加了普通大腸桿菌質(zhì)粒載體的復(fù)制元件和選擇標(biāo)記，以便保存和增殖。（）答案：（V）F菌毛不是供體與受體細(xì)胞之間產(chǎn)生性接觸所必需。（）答案：（x,F菌毛不是供體與受體細(xì)胞之間產(chǎn)生性接觸所必需）YAC人工染色體載體具原核mRNA的加工活性。（）答案：（x,YAC人工染色體載體具真核mRNA的加工活性）YAC載體的復(fù)制元件是其核心組成成分，其在酵母中復(fù)制的必需元件包括復(fù)制起點(diǎn)序列即自主復(fù)制序列、用于有絲分裂功能的著絲粒和兩個(gè)端粒。（）答案：（x，YAC載體的復(fù)制元件是其核心組成成分，其在酵母中復(fù)制的必需元件包括復(fù)制起點(diǎn)序列即自主復(fù)制序列、用于有絲分裂和減數(shù)分裂功能的著絲粒和兩個(gè)端粒。）與YAC載體配套工作的宿主酵母菌（如AB1380）的胸腺嘧啶合成基因帶有一個(gè)赭石突變ade2-1。帶有這個(gè)突變的酵母菌在基本培養(yǎng)基上形成白色菌落，當(dāng)帶有赭石突變抑制基因sup4的載體存在于細(xì)胞中時(shí)，可抑制ade2-1基因的突變效應(yīng)，形成正常的紅色菌落。（）答案：（x，與YAC載體配套工作的宿主酵母菌（如AB1380）的胸腺嘧啶合成基因帶有一個(gè)赭石突變ade2-1。帶有這個(gè)突變的酵母菌在基本培養(yǎng)基上形成紅色菌落，當(dāng)帶有赭石突變抑制基因sup4的載體存在于細(xì)胞中時(shí)，可抑制ade2-1基因的突變效應(yīng)，形成正常的白色菌落。）TOC\o"1-5"\h\zF因子通常以單鏈閉環(huán)DNA（1-2個(gè)拷貝/細(xì)胞）的形式存在。（）答案：（x，F(xiàn)因子通常以雙鏈閉環(huán)DNA（1-2個(gè)拷貝/細(xì)胞）的形式存在。）BAC載體的低拷貝性可以避免基因重排的產(chǎn)生，減小外源基因的表達(dá)產(chǎn)物對(duì)宿主細(xì)胞的毒副作用。（）答案：（x，BAC載體的低拷貝性可以避免嵌合體的產(chǎn)生，減小外源基因的表達(dá)產(chǎn)物對(duì)宿主細(xì)胞的毒副作用。）在P1噬菌體載體系統(tǒng)中，含有基因組和載體序列的環(huán)狀重組分子在體外被組裝到P1噬菌體顆粒中，后者總?cè)萘靠蛇_(dá)115kb。（）答案：（x，在P1噬菌體載體系統(tǒng)中，含有基因組和載體序列的線狀重組分子在體外被組裝到P1噬菌體顆粒中，后者總?cè)萘靠蛇_(dá)115kb。）P1人工染色體結(jié)合了P1載體和YAC載體的最佳特性，包括陽性選擇標(biāo)記sacB及噬菌體P1的質(zhì)粒復(fù)制子和裂解性復(fù)制子。（）、答案：（x，P1人工染色體結(jié)合了P1載體和BAC載體的最佳特性，包括陽性選擇標(biāo)記sacB及噬菌體P1的質(zhì)粒復(fù)制子和裂解性復(fù)制子。）表達(dá)載體pET-5a是典型的pET載體，其組成是在載體的基本結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上加入了T7噬菌體終止子序列及其下游的幾個(gè)酶切位點(diǎn)。（）答案：（x，表達(dá)載體pET-5a是典型的pET載體，其組成是在載體的基本結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上加入了T7噬菌體啟動(dòng)子序列及其下游的幾個(gè)酶切位點(diǎn)。）篩選標(biāo)記用于鑒別目標(biāo)DNA（載體）的存在，將成功轉(zhuǎn)化了載體的宿主挑選出來。（）答案：（x，選擇標(biāo)記用于鑒別目標(biāo)DNA（載體）的存在，將成功轉(zhuǎn)化了載體的宿主挑選出來。）lacA基因是乳糖lac操縱子中編碼0-半乳糖苷酶的基因。（）答案：（x,lacZ基因是乳糖lac操縱子中編碼0-半乳糖苷酶的基因。）在lacZ'編碼區(qū)上游插入一小段DNA片段（如51個(gè)堿基對(duì)的多克隆位點(diǎn)），不影響0-半乳糖苷酶的功能內(nèi)互補(bǔ)。（）答案：（V）含有氨芐青霉素抗性基因和四環(huán)素抗性基因的載體插入外源DNA后，轉(zhuǎn)入宿主細(xì)菌，如宿主細(xì)菌在含有四環(huán)素培養(yǎng)基中能存活，則說明重組載體一定轉(zhuǎn)入到宿主細(xì)菌中。（）答案：（V）四環(huán)素可抑制細(xì)胞壁肽聚糖的合成，與有關(guān)的酶結(jié)合并抑制其活性，抑制轉(zhuǎn)肽反應(yīng)。（）答案：（x，氨芐青霉素可抑制細(xì)胞壁肽聚糖的合成，與有關(guān)的酶結(jié)合并抑制其活性，抑制轉(zhuǎn)肽反應(yīng)。）如果在某一宿主中含有琥珀突變的tetr基因和ampr基因，只有當(dāng)宿主含有supF基因時(shí)對(duì)Amp和Tet具有抗性。（）答案：（V）四、名詞解釋質(zhì)粒溶源化端粒重復(fù)序列質(zhì)?？截悢?shù)載體細(xì)菌人工染色體質(zhì)粒的不相容性粘粒怎osmid）標(biāo)簽蛋白質(zhì)粒的轉(zhuǎn)移性柯斯質(zhì)粒（Cosmid）載體隨機(jī)突變體庫穿梭質(zhì)粒pcoslEMBL載體轉(zhuǎn)移性a-互補(bǔ)F因子琥珀突變溫和噬菌體穿梭載體克隆載體溶源性細(xì)菌整合載體插入失活整合酵母人工染色體答案：質(zhì)粒：是染色體外的遺傳因子，能進(jìn)行自我復(fù)制（但依賴于宿主編碼的酶和蛋白質(zhì)）；大多數(shù)為超螺旋的雙鏈共價(jià)閉合環(huán)狀DNA分子（covalentlyclosedcircle,cccDNA），少數(shù)為線性;大小一般為1?200Kb，有的更大。質(zhì)?？截悢?shù)：（plasmidcopynumbers）是指細(xì)胞中單一質(zhì)粒的份數(shù)同染色體數(shù)之比值常用質(zhì)粒數(shù)/每染色體來表示。不同的質(zhì)粒在宿主細(xì)胞中的拷貝數(shù)不同。質(zhì)粒的不相容性：兩個(gè)質(zhì)粒在同一宿主中不能共存的現(xiàn)象稱質(zhì)粒的不相容性，它是指在第二個(gè)質(zhì)粒導(dǎo)入后，在不涉及DNA限制系統(tǒng)時(shí)出現(xiàn)的現(xiàn)象。不相容的質(zhì)粒一般都利用同一復(fù)制系統(tǒng)，從而導(dǎo)致不能共存于同一宿主中。質(zhì)粒具轉(zhuǎn)移性:是指在自然條件下，很多質(zhì)?？梢酝ㄟ^稱為細(xì)菌接合的作用轉(zhuǎn)移到新宿主內(nèi)。它需要移動(dòng)基因mob，轉(zhuǎn)移基因tra，順式因子bom及其內(nèi)部的轉(zhuǎn)移缺口位點(diǎn)nic。穿梭質(zhì)粒：既能在真核細(xì)胞中繁殖又能在原核細(xì)胞中繁殖的載體。這類載體必須既有細(xì)菌的復(fù)制原點(diǎn)或質(zhì)粒的復(fù)制原點(diǎn)，又含有真核生物的復(fù)制原點(diǎn)，還具備酶切位點(diǎn)和合適的篩選指標(biāo)。它用來轉(zhuǎn)化細(xì)菌，又可以用于轉(zhuǎn)化真核細(xì)胞a-互補(bǔ)：是指lacZ基因上缺失近操縱基因區(qū)段的突變體與帶有完整的近操縱基因區(qū)段的0-半乳糖苷酶（0-galactosidase，由1024個(gè)氨基酸組成）陰性的突變體之間實(shí)現(xiàn)互補(bǔ)。a-互補(bǔ)是基于在兩個(gè)不同的缺陷0-半乳糖苷酶之間可實(shí)現(xiàn)功能互補(bǔ)而建立的溫和噬菌體：既能進(jìn)入溶菌生命周期又能進(jìn)入溶源生命周期的噬菌體。溶源性細(xì)菌：具有一套完整的噬菌體基因組的細(xì)菌叫溶源性細(xì)菌。整合：如果噬菌體的DNA是被包容在寄主細(xì)菌染色體DNA中，便叫做已整合的噬菌體DNA。這中細(xì)菌提DNA組入細(xì)菌染色體DNA的過程，叫做噬菌體DNA的整合或插入。溶源化：用溫和的噬菌體感染細(xì)菌培養(yǎng)物使之形成溶源性細(xì)菌的過程叫做溶源化。載體：將外源DNA或基因攜帶入宿主細(xì)胞(hostcell)的工具稱為載體，載體是基因操作的核心工具。粘粒(cosmid)：實(shí)際是質(zhì)粒的衍生物，是帶有cos序列的質(zhì)粒。cos序列是人噬菌體DNA中將DNA包裝到噬菌體顆粒中所需的DNA序列。粘粒的組成包括質(zhì)粒復(fù)制起點(diǎn)(colEl)，抗性標(biāo)記(ampr)，cos位點(diǎn)，因而能象質(zhì)粒一樣轉(zhuǎn)化和增殖。它的大小一般5-7kb左右，用來克隆大片段DNA，克隆的最大DNA片段可達(dá)45kb。柯斯質(zhì)粒(Cosmid)載體一種由質(zhì)粒和A噬菌體cos尾巴構(gòu)建的復(fù)合載體?？滤官|(zhì)粒載體又叫粘粒載體，這是一種由人工構(gòu)建的含有DNA的cos序列和質(zhì)粒復(fù)制子的特殊類型的質(zhì)粒載體。柯斯質(zhì)粒在結(jié)構(gòu)組成上具有人噬菌體的特性、也具有質(zhì)粒載體的特性和高容量的克隆能力，一般可插入35?40kb的外源基因pcos1EMBL：是設(shè)計(jì)用于篩選體內(nèi)重組的重組粘粒文庫，通過同源重組過程達(dá)到篩選目標(biāo)克隆的目的。該載體的復(fù)制起點(diǎn)來源于R6K質(zhì)粒，與ColE1復(fù)制起點(diǎn)無同源性，屬于不同的不相容群，含卡那霉素和四環(huán)素抗性基因。F因子：大腸桿菌的F因子是一個(gè)約100kb的質(zhì)粒。它編碼60多種參與復(fù)制、分配和接合過程的蛋白質(zhì)(WillettsandSkurray，1987)。雖然F因子通常以雙鏈閉環(huán)DNA(1-2個(gè)拷貝/細(xì)胞)的形式存在，但它可以在大腸桿菌染色體中至少30個(gè)位點(diǎn)處進(jìn)行隨機(jī)整合(Low，1987)。穿梭載體：(Shuttlevector)是能夠在兩類不同宿主中復(fù)制、增殖和選擇的載體。整合載體：在生物學(xué)研究和基因工程應(yīng)用中，會(huì)涉及將某個(gè)基因或某些基因插入到染色體中去的工作，承擔(dān)這部分工作的載體，可稱為整合載體酵母人工染色體：YAC人工染色體載體是利用釀酒酵母(Saccharomycescerevisiae)的染色體的復(fù)制元件構(gòu)建的載體，其工作環(huán)境也是在釀酒酵母中。端粒重復(fù)序列：是定位于染色體末端一段序列，用于保護(hù)線狀的DNA不被胞內(nèi)的核酸酶降解，以形成穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)。細(xì)菌人工染色體：是基于大腸桿菌的F質(zhì)粒構(gòu)建的，高通量低拷貝的質(zhì)粒載體。標(biāo)簽蛋白：用作分離的載體蛋白被稱為標(biāo)簽蛋白或標(biāo)簽多肽(Tag)，常用的有谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶(glutathioneS-transferase,GST)、六聚組氨酸肽(polyHis-6)、蛋白質(zhì)A(proteinA)和纖維素結(jié)合位點(diǎn)(cellulosebindingdomain)等。隨機(jī)突變體庫：是指標(biāo)記基因在載體的攜帶下通過DNA重組事件隨機(jī)插入基因組中而形成的突變體的集合。轉(zhuǎn)移性：指在自然條件下，很多質(zhì)?？梢酝ㄟ^稱為細(xì)菌接合的作用轉(zhuǎn)移到新宿主內(nèi)。琥珀突變：在基因的編碼區(qū)中，若某個(gè)密碼子發(fā)生突變后變成終止密碼子，則這種突變稱為琥珀突變。克隆載體：用于擴(kuò)增或保存DNA片段的載體稱為克隆載體。插入失活：指當(dāng)外源DNA片段插入某一基因后，導(dǎo)致該基因失活。五、簡答題簡述烈性噬菌體的溶菌生長周期的基本過程?簡述lacZ基因功能選擇法？簡述選擇標(biāo)記和篩選標(biāo)記的區(qū)別。簡述質(zhì)粒的基本特性簡述利用a-互補(bǔ)作為篩選標(biāo)記的原理。答案：答：烈性噬菌體的溶菌生長周期的基本過程包括：吸附：噬菌體顆粒吸附到位于感染細(xì)胞表面的特殊接收器上。注入：噬菌體DNA穿過細(xì)胞壁注入寄主細(xì)胞轉(zhuǎn)變：被感染的細(xì)菌細(xì)胞的功能發(fā)生變化，成為制造噬菌體的場(chǎng)所。合成：功能發(fā)生了轉(zhuǎn)變的寄主細(xì)胞大量合成噬菌體特有的核酸和蛋白質(zhì)。組裝：包裝了DNA的頭部和尾部組裝成噬菌體的顆粒，這個(gè)過程也叫噬菌體的形態(tài)建成。釋放：新合成的自帶噬菌體顆粒從寄主細(xì)胞內(nèi)釋放出來。答：根據(jù)lacZ基因編碼產(chǎn)物0-半乳糖苷酶在Xgal-IPTG培養(yǎng)基平板上顯色反應(yīng)的原理，已經(jīng)在某些插入型的人噬菌體載體的lacZ基因中，引入了若干常用的核酸內(nèi)切限制酶識(shí)別位點(diǎn)。當(dāng)外源的DNA片段插入到這些克隆位點(diǎn)時(shí)，形成的是無功能活性的0-半乳糖苷酶。于是被感染的大腸桿菌寄主細(xì)胞，就將在含有Xgal-IPTG培養(yǎng)基平板上形成無色的噬菌斑；而相反的，沒有插入外源序列的人噬菌體載體則會(huì)形成藍(lán)色的噬菌體斑。同樣的方法也可用于替換型載體的重組體分子的選擇，當(dāng)然其先決條件是在可取代的區(qū)段中應(yīng)帶有l(wèi)acZ基因的相應(yīng)序列。由此可見，我們可以利用lacZ基因編碼的0-半乳糖苷酶的功能活性，作為選擇人重組分子的一種簡便有效的生化指標(biāo)。答：選擇標(biāo)記用于鑒別目標(biāo)目標(biāo)DNA（載體）的存在，將成功轉(zhuǎn)化了載體的宿主挑選出來，而篩選標(biāo)記可用于將特殊表型的重組子挑選出來。答：（1）.質(zhì)粒的復(fù)制：通常一個(gè)質(zhì)粒含有一個(gè)與相應(yīng)的順式作用控制要素結(jié)合在一起的復(fù)制起始區(qū)。在不同的質(zhì)粒中，復(fù)制起始區(qū)的組成方式是不同的。（2）.質(zhì)粒的拷貝數(shù)：質(zhì)粒拷貝數(shù)分為嚴(yán)謹(jǐn)型與松馳型。嚴(yán)謹(jǐn)型質(zhì)粒每個(gè)細(xì)胞中拷貝數(shù)有限，大約1?幾個(gè)；松馳型質(zhì)粒拷貝數(shù)較多，可達(dá)幾百。（3）.質(zhì)粒的不相容性：不相容的質(zhì)粒一般都利用同一復(fù)制系統(tǒng)，從而導(dǎo)致不能共存于同一宿主中。（4）.轉(zhuǎn)移性：在自然條件下，很多質(zhì)粒可以通過稱為細(xì)菌接合的作用轉(zhuǎn)移到新宿主內(nèi)。答:a-互補(bǔ)是指基因上缺失近操縱基因區(qū)段的突變體與帶有完整的近操縱基因區(qū)段的0-半乳糖苷酶（0-galactosidase，由1024個(gè)氨基酸組成）陰性的突變體之間實(shí)現(xiàn)互補(bǔ)。例如，lacZ△M15基因是缺失了編碼0-半乳糖苷酶中第11-41個(gè)氨基酸的lacZ基因，無酶學(xué)活性。對(duì)于只編碼N-端140個(gè)氨基酸的lacZ基因（稱為lacZ'），其產(chǎn)物也沒有酶學(xué)活性。但這兩個(gè)無酶學(xué)活性的產(chǎn)物混合在一起時(shí)，可恢復(fù)0-半乳糖苷酶的活性，能將培養(yǎng)基中的5-漠-4-氯-3』引哚-0-D-半乳糖苷（X-gal）分解產(chǎn)生藍(lán)色產(chǎn)物。利用這一互補(bǔ)性質(zhì)，在相應(yīng)的載體系統(tǒng)中l(wèi)acZAM15放在F質(zhì)粒上，隨宿主傳代；lacZ'放在含有某抗生素抗性基因載體上，作為篩選標(biāo)記，即在lacZ'基因上插入外源DNA片段，lacZ'基因失活，不能形成a-互補(bǔ)。轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞后，在含5-漠-4-氯-3-引哚-0-D-半乳糖苷（X-gal）和該抗生素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，含有重組子的菌落或噬菌斑呈白色，即可篩選在載體上插入了外源片段的重組質(zhì)粒。六、問答題什么是質(zhì)粒的相容性？什么是不相容群？機(jī)制是什么？引起質(zhì)粒不相容性的主要原因是什么？常見質(zhì)粒有哪些其拷貝數(shù)是多少？常用的選擇標(biāo)記有哪些？舉例說明常用的篩選標(biāo)記有哪些？舉例說明噬菌體有哪些常見用途？比較入噬菌體載體和粘粒載體的結(jié)構(gòu)和功能，并分別說出其優(yōu)缺點(diǎn)？YAC載體具有什么樣的功能性DNA序列？為什么它在克隆大片段時(shí)具有很大的優(yōu)越性？YAC載體功能強(qiáng)大，但有一些弊端。這主要表現(xiàn)在幾個(gè)方面，它們分別是什么？YAC載體的工作原理是什么？YAC的突出優(yōu)點(diǎn)是什么？P1噬菌體載體pAd10sacBII的遺傳結(jié)構(gòu)是什么？答案：答：質(zhì)粒的相容性是指兩種質(zhì)粒是否可以共存于同一個(gè)細(xì)胞，如果能夠共存則叫相容，不能共存則稱不相容。從本質(zhì)上說，能夠共存于同一個(gè)細(xì)胞中的質(zhì)粒具有不同的復(fù)制機(jī)制，因而復(fù)制時(shí)互不干涉，并保持穩(wěn)定。根據(jù)質(zhì)粒的這一特性將質(zhì)粒分為若干個(gè)不相容群。同一個(gè)不相容群里的質(zhì)粒不能共存于同一個(gè)細(xì)胞，因?yàn)樗麄兊膹?fù)制機(jī)制相同，因此凡能共存于同一個(gè)細(xì)胞中的質(zhì)粒屬于不同的不相容群，因?yàn)樗鼈兊膹?fù)制機(jī)制不同。答：質(zhì)粒的不相容性主要有兩方面引起的：第一，由于復(fù)制控制而產(chǎn)生的不相容性。復(fù)制控制系統(tǒng)不能將它們作為兩個(gè)質(zhì)粒來識(shí)別，因而只能隨機(jī)選擇進(jìn)行復(fù)制。第二，由于分離引起的不相容性。有時(shí)一個(gè)子細(xì)胞只能得到一種類型的質(zhì)粒，而另一個(gè)細(xì)胞得到另外一種類型的質(zhì)粒，這樣得到的子細(xì)胞都是丟失了一種質(zhì)粒的細(xì)胞。質(zhì)粒復(fù)制子拷貝數(shù)pBR322及其衍生質(zhì)粒pMB115?20pUC系列質(zhì)粒及其衍生質(zhì)粒突變的pMB1500?700pACYC及其衍生質(zhì)粒p15A10?212pSC101及其衍生質(zhì)粒pSC101?5ColE1ColE115?20答：選擇標(biāo)記用于鑒別目標(biāo)DNA（載體）的存在，將成功轉(zhuǎn)化了載體的宿主挑選出來，篩選標(biāo)記可用于將特殊表型的重組子挑選出來?？股乜剐曰蚴悄壳笆褂米顝V泛的選擇標(biāo)記，如1.氨芐青霉素抗性基因2.四環(huán)素抗性基因3.氯霉素抗性基因4.卡那霉素和新霉素抗性基因5.琥珀突變抑制基因還有其他的選擇標(biāo)記如一些正向選擇標(biāo)記，表達(dá)一種使某些宿主菌致死的基因產(chǎn)物，而含有外源基因片段插入后，該基因便失活。如蔗糖致死基因SacB，來自淀粉水解芽胞桿菌（Bacillusamyloliquefaciens），編碼果聚糖蔗糖酶。在含蔗糖的培養(yǎng)基上sacB基因的表達(dá)對(duì)大腸桿菌來說是致死的，因此該基因可用于插入失活篩選重組子。答：篩選標(biāo)記主要用來區(qū)別重組質(zhì)粒與非重組質(zhì)粒，當(dāng)一個(gè)外源DNA片段插入到一個(gè)質(zhì)粒載體上時(shí)，可通過該標(biāo)記來篩選插入了外源片段的質(zhì)粒，即重組質(zhì)粒。a-互補(bǔ)（a-complementation）a-互補(bǔ)是指lacZ基因上缺失近操縱基因區(qū)段的突變體與帶有完整的近操縱基因區(qū)段的P-半乳糖苷酶（。-galactosidase，由1024個(gè)氨基酸組成）陰性的突變體之間實(shí)現(xiàn)互補(bǔ)。a-互補(bǔ)是基于在兩個(gè)不同的缺陷P-半乳糖苷酶之間可實(shí)現(xiàn)功能互補(bǔ)而建立的插入失活通過插入失活進(jìn)行篩選的質(zhì)粒主要有pBR322，該質(zhì)粒具有四環(huán)素抗性基因（tetr）和氨芐青霉素抗性基因（ampr）兩種抗性標(biāo)記。當(dāng)外源DNA片段插入tetr基因后，導(dǎo)致tetr基因失活，變成只對(duì)氨芐青霉素有抗性。這樣就可通過對(duì)抗生素是雙抗還是單抗來篩選是否有外源片段插入到載體中。答：細(xì)菌的鑒定與分型噬菌體與宿主菌的關(guān)系具有高度特異性，即一種噬菌體只能裂解一種和它相應(yīng)的細(xì)菌，故可用于未知細(xì)菌的鑒定和分型。例如用傷寒沙門菌Vi噬菌體可將有Vi抗原的傷寒沙門菌分為96個(gè)噬菌體型。這對(duì)流行病學(xué)調(diào)查、追查傳染源等具有重要意義。分子生物學(xué)研究的重要工具噬菌體對(duì)基因工程理論與技術(shù)的發(fā)展已經(jīng)發(fā)揮了重要作用。噬菌體基因數(shù)量少，結(jié)構(gòu)比細(xì)菌和高等細(xì)胞簡單得多，而且容易獲得大量的突變體，因此成為研究基因復(fù)制、轉(zhuǎn)錄、重組、表達(dá)調(diào)控機(jī)制等的重要工具；成為研究DNA、RNA和蛋白質(zhì)相互作用的良好模型系統(tǒng)。近年來，利用人噬菌體作為載體構(gòu)建基因文庫；利用絲形噬菌體表面表達(dá)技術(shù)構(gòu)建肽文庫、抗體文庫和蛋白質(zhì)文庫等，又使噬菌體成為分子生物學(xué)研究中的重要載體。細(xì)菌感染的診斷與治療應(yīng)用噬菌體效價(jià)增長試驗(yàn)可檢測(cè)標(biāo)本中的相應(yīng)細(xì)菌。即在疑有某種細(xì)菌存在的標(biāo)本中，加入一定數(shù)量的已知的相應(yīng)噬菌體，37^孵育6?8h，再進(jìn)行該噬菌體的效價(jià)測(cè)定。若其效價(jià)有明顯增長，則表明標(biāo)本中有某種細(xì)菌的存在。若在一標(biāo)本中檢出某種噬菌體，且數(shù)量較多，也表明有相應(yīng)細(xì)菌的存在。在有些局部感染時(shí)可用噬菌體作為一種輔助治療，如應(yīng)用銅綠假單胞菌噬菌體治療創(chuàng)口感染。但由于噬菌體的特異性過于專一，限制了噬菌體在臨床上的廣泛應(yīng)用。答：比較入噬菌體載體和粘粒載體的結(jié)構(gòu)和功能，并分別說出其優(yōu)缺點(diǎn)？入噬菌體結(jié)構(gòu)：COS、左臂、可替代區(qū)、右臂、COS入噬菌體功能：插入型克隆11Kb，置換型克隆23Kb；用于構(gòu)建CDNA文庫和基因組文庫，也可用于亞克隆在大容量載體（粘粒）中增殖的外源片段。入噬菌體優(yōu)點(diǎn)：?基因組中有1/3的非必需區(qū)，可以被置換，改造成載體后，克隆較大（可達(dá)20Kb），而質(zhì)粒載體的克隆片段只有幾個(gè)Kb用噬菌體DNA作為載體，即使不進(jìn)行體外包裝，轉(zhuǎn)染的頻率也比質(zhì)粒轉(zhuǎn)化的效率高，包裝后的效率就更高了入可通過溶源化反應(yīng)整合到寄主染色體上，當(dāng)不需要外源基因大量表達(dá)時(shí)可讓它以溶源性存在，若要表達(dá)，可通過誘導(dǎo)即可進(jìn)入裂解途徑，釋放出大量的噬菌體，得到的重組DNA的拷貝數(shù)就會(huì)很多。入噬菌體缺點(diǎn)：①需要包裝比較麻煩，包裝率又不穩(wěn)定，購買包裝蛋白的費(fèi)用又高。②沒有質(zhì)粒的用途廣泛。粘粒結(jié)構(gòu)：質(zhì)粒復(fù)制起點(diǎn)（ColE1）、抗性標(biāo)記（ampr）、COS位點(diǎn)粘粒功能：