培養(yǎng)基滅菌及滅菌設(shè)備

培養(yǎng)基滅菌與空氣凈化

第一節(jié)培養(yǎng)基滅菌一、滅菌的原理和方法消毒（disinfection）與滅菌（sterilization）的區(qū)別？用物理或化學(xué)方法殺死物料、容器、器具內(nèi)外的病原微生物。一般只能殺死營養(yǎng)細(xì)胞而不能殺死細(xì)菌芽孢。

例如，巴氏消毒法，是將物料加熱至60℃維持30min，以殺死不耐高溫的微生物營養(yǎng)細(xì)胞。

消毒

用物理或化學(xué)方法殺死或除去環(huán)境中所有微生物，包括營養(yǎng)細(xì)胞、細(xì)菌芽孢和孢子。滅菌條件：121℃，20-30min。＊消毒不一定能達(dá)到滅菌要求，而滅菌則可達(dá)到消毒的目的。

滅菌關(guān)于滅菌和消毒的不正確的理解是（）A．滅菌是指殺滅環(huán)境中的一切微生物的細(xì)胞、芽孢和孢子B．消毒和滅菌實(shí)質(zhì)上是相同的C．接種環(huán)用灼燒法滅菌D．常用滅菌的方法有加熱法、過濾法、紫外線法、化學(xué)藥品法防腐（antisepsis）利用某種理化因素完全抑制霉腐微生物的生長繁殖，從而達(dá)到防止食品等發(fā)生霉腐的措施。（1）低溫（4）高滲（2）缺氧（5）高酸度（3）干燥（6）防腐劑

除菌的方法

培養(yǎng)基的加熱滅菌空氣的過濾除菌紫外線或電離輻射化學(xué)藥物滅菌1.化學(xué)試劑滅菌法

甲醛、乙醇或新潔爾滅、高錳酸鉀等適用范圍：環(huán)境、皮膚及器械的表面消毒2.射線滅菌法3.干熱滅菌法

電磁波、紫外線或放射性物質(zhì)適用范圍：無菌室、接種箱常用烘箱，滅菌條件：160℃下保溫1h適用范圍：金屬或玻璃器皿4.濕熱滅菌法

利用飽和蒸汽滅菌，條件：121℃，30min適用范圍：生產(chǎn)設(shè)備及培養(yǎng)基滅菌5.過濾除菌法

利用過濾方法阻留微生物適用范圍：制備無菌空氣

6.火焰滅菌法

火焰適用范圍：接種針、玻璃棒、三角瓶口

谷氨酸棒狀桿菌的培養(yǎng)液常采用的滅菌方法是（）A．高壓蒸汽滅菌B．高溫滅菌C．加入抗生素滅菌D．酒精滅菌培養(yǎng)基的濕熱滅菌

蒸汽具有很強(qiáng)的穿透能力，而且在冷凝時會放出大量的冷凝熱，很容易使蛋白質(zhì)凝固而殺死各種微生物。

濕熱滅菌原理滅菌條件滅菌不利方面121℃，20-30min。

同時會破壞培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分，甚至產(chǎn)生不利于菌體生長的物質(zhì)。將配制好的的培養(yǎng)基同時放在發(fā)酵罐或其其他裝置中中，通入蒸蒸汽將培養(yǎng)養(yǎng)基和所用用設(shè)備一起起進(jìn)行加熱熱滅菌的過過程，也稱稱實(shí)罐滅菌菌。（一）間歇歇滅菌（常用）24016012080時間（min)050100150溫度升溫冷卻保溫培養(yǎng)基間歇歇滅菌過程程中的溫度度變化情況況過程包括：：升溫、保溫溫和冷卻三三階段。各階段對滅滅菌的貢獻(xiàn)獻(xiàn)：20%、75%、5%。發(fā)酵罐蒸汽蒸汽冷卻水無菌培養(yǎng)基基配料罐泵加熱塔維持罐冷卻管（二）連續(xù)續(xù)滅菌（又又稱連消））將培養(yǎng)基在發(fā)發(fā)酵罐外通過過連續(xù)滅菌裝裝置進(jìn)行加熱、保溫和和冷卻而進(jìn)行行滅菌。連續(xù)滅菌的基基本設(shè)備有哪哪些？問題連續(xù)滅菌的流流程與設(shè)備（1）配料預(yù)預(yù)熱罐，將配制好的料料液預(yù)熱到6070°C，以免連續(xù)滅菌菌時由于料液液與蒸汽溫度度相差過大而而產(chǎn)生水汽撞撞擊聲；（2）連消塔塔，用高溫蒸汽使使料液溫度很快升高高到滅菌溫度度（126132°C）；（3）維持罐罐，使料液在滅菌菌溫度下保持持10min。因?yàn)椋哼B消塔加熱的的時間很短，，光靠這段時時間的滅菌是是不夠的；（4）冷卻管管，使料液冷卻到4050°C后（冷水噴淋淋），輸送送到預(yù)先滅菌菌過的罐內(nèi)。。連續(xù)滅菌過程程中溫度的變變化(虛線)優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)連續(xù)滅菌1.高溫短時滅菌，培養(yǎng)基營養(yǎng)成分損失少。2.發(fā)酵罐占用時間縮短，利用率高。

1.設(shè)備復(fù)雜，操作麻煩,染菌機(jī)會多。2.不適合含大量固體物料的滅菌。間歇滅菌1.設(shè)備要求低，不需另外加熱、冷卻裝置。2.操作要求低，適合小批量生產(chǎn)規(guī)模3.適合含大量固體物料的滅菌1.培養(yǎng)基的營養(yǎng)物質(zhì)損失大，滅菌后培養(yǎng)基質(zhì)量下降2.發(fā)酵罐的利用率較低3.不適合大規(guī)模生產(chǎn)的滅菌＊間歇滅菌與連連續(xù)滅菌的比比較空氣凈化（除除菌）發(fā)酵對空氣無無菌程度的要要求一般要求1000次使用用周期中只允允許有一個菌菌通過，即經(jīng)經(jīng)過濾后空氣氣的無菌程度度為N=10-3?？諝獬諝庵形⑸镂?包括細(xì)菌菌、酵母、霉霉菌和病毒)含量一般般為103~／米。一般附附著在空氣中中的灰塵上或或霧滴上。灰灰塵粒子的平平均大小約0.6μm左左右，空氣除除菌主要去除除空氣中的微微粒(0.6~1μm）。104空氣除菌的方方法過濾除菌熱殺菌試劑滅菌輻射滅菌無菌室、培養(yǎng)養(yǎng)室、倉庫空氣過濾除菌菌的原理與介介質(zhì)過濾除菌的種種類絕對過濾：過濾介質(zhì)的濾濾孔小于細(xì)胞胞和孢子。如聚乙烯醇縮縮甲醛樹脂（（PVF）制成成的0.3m的微孔濾膜。深層介質(zhì)過濾濾：介質(zhì)的孔隙一一般大于微生生物細(xì)胞。如用棉花、玻玻璃纖維和顆顆?；钚蕴刻钐畛涞倪^濾器器。深層介質(zhì)過濾濾的原理1、慣性沖擊擊作用：2、攔截滯留留作用：3、布朗擴(kuò)散散：＜1um慢慢氣流不規(guī)規(guī)則直線運(yùn)運(yùn)動4、重力沉降降：重力>氣流拖帶帶力5、靜電引力力作用深層介質(zhì)過濾濾的原理微粒隨氣流通通過濾層時，，由于濾層纖纖維的層層阻阻礙，使氣流流出現(xiàn)無數(shù)次次改變運(yùn)動速速度和方向的的繞流運(yùn)動，，引起微粒與與濾層纖維間間產(chǎn)生慣性沖擊、攔攔截、布朗擴(kuò)擴(kuò)散、重力沉沉降、靜電引引力等作用把微微粒滯留在在纖維表面面上，實(shí)現(xiàn)現(xiàn)過濾的目目的。空氣過濾除除菌介質(zhì)（１）纖維維狀或顆粒粒狀過濾介介質(zhì)棉花：有彈彈性，纖維維長度適中中（常用））玻璃纖維：：直徑小，，不易折斷斷，過濾效效果好?；钚蕴浚阂筚|(zhì)地堅(jiān)堅(jiān)硬，顆粒粒均勻。缺點(diǎn)：體積大，裝裝填費(fèi)時費(fèi)費(fèi)力，松緊緊度不易掌掌握，空氣氣壓降大。。（２）紙類類過濾介質(zhì)質(zhì)超細(xì)玻璃纖纖維紙：36張疊在一一起使用，，過濾效率率高，壓降降小。缺點(diǎn)：強(qiáng)度不大（（特別是受受潮后）。。發(fā)酵生產(chǎn)中中制備無菌菌空氣的大大致過程程空氣空空壓機(jī)貯貯氣罐罐冷卻卻除油油水加加熱空氣預(yù)處理理總過濾器分分過濾濾器無無菌菌空氣空氣過濾空氣過濾除除菌流程高空取氣為遠(yuǎn)離地面面幾十米的的管子。每升高10米，空氣氣中雜菌降降低一個數(shù)數(shù)量級。因因此從高空空取氣要比比從低空取取氣有利得得多。粗過濾器作用：捕集集較大的灰灰塵顆粒，，并保護(hù)空空壓機(jī)要求：過濾濾效率高、、阻力小。。前兩步目的的：提高壓壓縮前空氣氣的潔凈度度。空氣壓縮克服輸送過過程中過濾濾介質(zhì)的阻阻力并維持持一定的氣氣流速度。。空氣貯罐緊接空壓機(jī)機(jī)安裝消除壓縮機(jī)機(jī)排出空氣氣量的脈沖沖，維持穩(wěn)穩(wěn)定的空氣氣壓力。利用重力沉沉降作用除除去部分油油霧。壓縮空氣的的冷卻壓縮后空氣氣溫度顯著著上升，能能引起過濾濾介質(zhì)的炭炭化或燃燒燒，增大發(fā)發(fā)酵罐的降降溫負(fù)荷，，增加培養(yǎng)養(yǎng)液水分的的蒸發(fā)，需需冷卻。壓縮空氣的的除油除水水冷卻降溫后后的空氣濕濕度增大，，會使過濾濾介質(zhì)受潮潮失效。旋風(fēng)分離器器——利用離離心力進(jìn)行行沉降，對對于10m以上的微微粒分離效效率較高。。絲網(wǎng)分離器器——利用慣慣性進(jìn)行攔攔截，分離離效率較高高，能除去去2～5m的細(xì)小顆顆粒。旋風(fēng)分離器器采用慣性攔攔截等機(jī)理理，有效去去除空氣中中的水、油油霧、塵埃埃，不銹鋼鋼絲網(wǎng)可清清洗，使用用壽命長。?？諝獾募訜釤釋⒊退牡目諝饧訜釤幔夭钤谠?0～15°C左右），降降低相對濕濕度（達(dá)50%～60%）后后，輸入過過濾器。發(fā)酵生產(chǎn)中中制備無菌菌空氣的大大致過程程空氣空空壓機(jī)貯貯氣罐罐冷卻卻除油油水加加熱空氣預(yù)處理理總過濾器分分過濾濾器無無菌菌空氣空氣過濾為什么要進(jìn)進(jìn)行空氣的的預(yù)處理？？提高壓縮前前空氣的潔潔凈度去除壓縮后后空氣中的的油和水空氣過濾器器過濾除菌的的關(guān)鍵設(shè)備備發(fā)酵車間的的空氣過濾濾器空氣凈化的的流程吸氣口吸入入的空氣先先經(jīng)過壓縮縮前的過濾濾進(jìn)入空氣壓壓縮機(jī)（120150°C）冷卻（2025°C），除去油油、水，再再加熱至3035°C。最后通過總總過濾器和和分過濾器器，獲得潔潔凈度、壓壓力、溫度度和流量都都符合要求求的無菌空空氣。180M3發(fā)酵罐車間間大型空氣壓壓縮機(jī)發(fā)酵設(shè)備———發(fā)酵罐罐發(fā)酵罐的特特點(diǎn)軸封嚴(yán)密，，泄漏少能承受一定定壓力、溫溫度攪拌通風(fēng)裝裝置保證氣氣液充分混混合具有足夠的的冷卻面積積死角少，滅滅菌徹底適宜的徑高高比（高與與直徑的比比值為2.5—4））發(fā)酵罐的類類型攪拌釜反應(yīng)應(yīng)器鼓泡式反應(yīng)應(yīng)器氣升式反應(yīng)應(yīng)器鼓泡式反應(yīng)應(yīng)器氣氣升式式反應(yīng)器發(fā)酵控控制Fermentationcontrol實(shí)驗(yàn)一產(chǎn)酶菌株的的篩選定方案：首先要查閱閱資料，了了解所需菌菌種的生長長培養(yǎng)特性性。采樣：有針對性地地采集樣品品。增殖：人為地通過過控制養(yǎng)分分或培條件件，使所需需菌種增殖殖培養(yǎng)后，，在數(shù)量上上占優(yōu)勢。。分離：利用分離技技術(shù)得到純純種。發(fā)酵性能測測定：進(jìn)行生產(chǎn)性性能測定。。這些特性性包括形態(tài)態(tài)、培養(yǎng)特特征、營養(yǎng)養(yǎng)要求、生生理生化特特性、發(fā)酵酵周期、產(chǎn)產(chǎn)品品種和和產(chǎn)量、耐耐受最高溫溫度、生長長和發(fā)酵最最適溫度、、最適pH值、提取工工藝等。新種分離與與篩選的步步驟（一）采樣1、采樣對對象以采集土壤壤為主。一一般園田土土和耕作過過的沼澤土土中，以細(xì)細(xì)菌和放線線菌為主，，富含碳水水化合物的的土壤和沼沼澤地中，，酵母和霉霉菌較多，，如一些野野果生長區(qū)區(qū)和果園內(nèi)內(nèi)。采樣的的對象也可可以是植物物，腐敗物物品，某些些水域等。。從自然界篩篩選2、采樣季季節(jié)：以溫溫度適中，，雨量不多多的秋初為為好。3、采土方方式：在選選好適當(dāng)?shù)氐攸c(diǎn)后，用用小薩子除除去表土，，取離地面面5-15cm處的的土約10g，盛入入清潔的牛牛皮紙袋或或塑料袋中中，扎好，，標(biāo)記，記記錄采樣時時間、地點(diǎn)點(diǎn)、環(huán)境條條件等，以以備查考。。為了使土土樣中微生生物的數(shù)量量和類型盡盡少變化，，宜將樣品品逐步分批批寄回，以以便及時分分離。（二）增殖殖培養(yǎng)為了容易分分離到所需需的菌種，，讓無關(guān)的的微生物至至少是在數(shù)數(shù)量上不要要增加，可可以通過配配制選擇性性培養(yǎng)基，，選擇一定定的培養(yǎng)條條件來控制制。例如碳源利利用的控制制，可選定定糖，淀粉粉、纖維素素，或者石石油等，以以其中的一一種為唯一一碳源，那那么只有利利用這一碳碳源的微生生物才能大大量正常生生長，而其其它微生物物就可能死死亡或淘汰汰。這樣對對下階段的的純種分離離就會順利利得多。（三）培養(yǎng)養(yǎng)分離盡管通過增增殖培養(yǎng)效效果顯著，，但還是處處于微生物物的混雜生生長狀態(tài)。。因此還必必須分離，，純化。在在這—步，，增殖培養(yǎng)養(yǎng)的選擇性性控制條件件還應(yīng)進(jìn)一一步應(yīng)用，，而且控制制得細(xì)一點(diǎn)點(diǎn)，好一點(diǎn)點(diǎn)。純種分分離的方法法有劃線分分離法、稀稀釋分離法法。（四）篩選選這一步是采采用與生產(chǎn)產(chǎn)相近的培培養(yǎng)基和培培養(yǎng)條件，，通過三角角瓶的容量量進(jìn)行小型型發(fā)酵試驗(yàn)驗(yàn)，以求得得適合于工工業(yè)生產(chǎn)用用菌種。（五）毒性性試驗(yàn)自然界的一一些微生物物是在一定定條件下產(chǎn)產(chǎn)毒的，將將其作為生生產(chǎn)菌種應(yīng)應(yīng)當(dāng)十分當(dāng)當(dāng)心，尤其其與食品工工業(yè)有關(guān)的的菌種，更更應(yīng)慎重。。據(jù)有的國國家規(guī)定，，微生物中中除啤酒酵酵母、脆壁壁酵母、黑黑曲霉、米米曲霉和枯枯草桿菌作作為食用無無須作毒性性試驗(yàn)外，，其他微生生物作為食食用，均需需通過兩年年以上的毒毒性試驗(yàn)。。9、靜夜四無無鄰，荒居居舊業(yè)貧。。。12月-2212月-22Thursday,December29,202210、雨中黃葉葉樹，燈下下白頭人。。。11:15:3111:15:3111:1512/29/202211:15:31AM11、以我獨(dú)沈久久，愧君相見見頻。。12月-2211:15:3111:15Dec-2229-Dec-2212、故人江海海別，幾度度隔山川。。。11:15:3111:15:3111:15Thursday,December29,202213、乍見翻疑夢夢，相悲各問問年。。12月-2212月-2211:15:3111:15:31December29,202214、他鄉(xiāng)生白白發(fā)，舊國國見青山。。。29十二二月202211:15:31上上午11:15:3112月-2215、比不了得就就不比，得不不到的就不要要。。。十二月2211:15上上午12月-2211:15December29,202216、行動出成成果，工作作出財富。。。2022/12/2911:15:3111:15:3129December202217、做前，能夠夠環(huán)視四周；；做時，你只只能或者最好好沿著以腳為為起點(diǎn)的射線線向前。。11:15:31上午午11:15上上午11:15:3112月-229、沒有失敗敗，只有暫暫時停止成成功！。12月-2212月-22Thursday,December29,202210、很多事情努努力了未必有有結(jié)果，但是是不努力卻什什么改變也沒沒有。。11:15:3111:15:3111:1512/29/202211:15:31AM11、成功就是是日復(fù)一日日那一點(diǎn)點(diǎn)點(diǎn)小小努力力的積累。。。12月-2211:15:3111:15Dec-2229-Dec-2212、世間成事事，不求其其絕對圓滿滿，留一份份不足，可可得無限完完美。。11:15:3111:15:3111:15Thursday,December29,202213、不知香積寺寺，數(shù)里入云云峰。。12月-2212月-2211:15:3111:15:31December29,202214、意志堅(jiān)強(qiáng)的的人能把世界界放在手中像像泥塊一樣任任意揉捏。29十二月月202211:15:31上午午11:15:3112月-2215、楚塞三湘接接，荊門九派派通。。。十二月2211:15上上午12月-2211:15December29,202216、少年十五二二十時，步行行奪得胡馬騎騎。。2022/12/2911:15:3111:15:3129December202217、空山新雨后后，天氣晚來來秋。。11:15:31上午午11:15上上午11:15:3112月-229、楊柳散和風(fēng)風(fēng)，青山澹吾吾慮。。12月-2212月-