植物病原線蟲(chóng)的檢驗(yàn)檢測(cè)

關(guān)于植物病原線蟲(chóng)的檢驗(yàn)檢測(cè)第一頁(yè)，共三十一頁(yè)，2022年，8月28日

一、植物寄生線蟲(chóng)概述線蟲(chóng)是一類低等的無(wú)脊椎動(dòng)物．地球上約１０萬(wàn)種，但目前只記載約260屬5700多種包括自由生活線蟲(chóng)（海洋、淡水和土壤中）危害植物的病原線蟲(chóng)。幾乎所有的農(nóng)作物都受到植物線蟲(chóng)的寄生。人類最早發(fā)現(xiàn)的是小麥粒線蟲(chóng)（1743年）第二頁(yè)，共三十一頁(yè)，2022年，8月28日植物線蟲(chóng)病癥狀：以畸形為主1.頂芽和花芽的壞死，莖葉的卷曲或組織的壞死，形成葉癭或種癭等。2.根部停止生長(zhǎng)或卷曲，根上形成瘤腫或過(guò)度分枝，根部組織的壞死和腐爛等。因此，表現(xiàn)為植株矮小，色澤失常和早衰等癥狀，嚴(yán)重時(shí)整株枯死。第三頁(yè)，共三十一頁(yè)，2022年，8月28日松材線蟲(chóng)病及其媒介昆蟲(chóng)第四頁(yè)，共三十一頁(yè)，2022年，8月28日重要植物病害致病線蟲(chóng)粒線蟲(chóng)屬；根結(jié)線蟲(chóng)屬；異皮線蟲(chóng)屬；滑忍線蟲(chóng)屬；莖線蟲(chóng)屬；劍線蟲(chóng)屬；長(zhǎng)針線蟲(chóng)屬。第五頁(yè)，共三十一頁(yè)，2022年，8月28日危害方式：口針穿刺寄主，通過(guò)分泌有毒物質(zhì)和吸收營(yíng)養(yǎng)破壞寄主的細(xì)胞和組織，植物受到為害后，表現(xiàn)的癥狀與一般病害的癥狀相似植物線蟲(chóng)還能作為其他病原物的自然傳播介體．據(jù)FAO保守估計(jì)，因?yàn)榫€蟲(chóng)為害，糧食和纖維作物損失約為12%；蔬菜、花生、煙草和某些果樹(shù)，損失超過(guò)20%；近年來(lái)國(guó)內(nèi)蔬菜根結(jié)線蟲(chóng)危害嚴(yán)重．第六頁(yè)，共三十一頁(yè)，2022年，8月28日

美國(guó)著名線蟲(chóng)學(xué)家JNSasser認(rèn)為，全美每年因線蟲(chóng)病害造成的農(nóng)產(chǎn)品損失為58億美元，全世界超過(guò)1000億美元；在我國(guó)，僅大豆孢囊線蟲(chóng)病，造成的年損失大1億美元；各種蔬菜損失達(dá)到30億美元；水稻因潛根線蟲(chóng)危害，造成7%~15％的產(chǎn)量損失，這類線蟲(chóng)廣泛分布在我國(guó)水稻產(chǎn)區(qū)，但迄今在國(guó)內(nèi)尚未引起注意；許多作物的根腐病或“爛根”，是生產(chǎn)中一個(gè)比較突出和復(fù)雜的問(wèn)題，但人們很少去考慮線蟲(chóng)的因素，“作物的爛根，其中30％左右與線蟲(chóng)相關(guān)”。

第七頁(yè)，共三十一頁(yè)，2022年，8月28日植物線蟲(chóng)危害的特點(diǎn)：主動(dòng)侵襲、隱蔽性。植物線蟲(chóng)對(duì)寄主致病性表現(xiàn)為：（1）機(jī)械損傷（2）分泌有毒物質(zhì)破壞寄主的細(xì)胞和組織（3）與其它病原物對(duì)寄主復(fù)合侵染第八頁(yè)，共三十一頁(yè)，2022年，8月28日二、植物病原線蟲(chóng)的生態(tài)水----線蟲(chóng)是一類水生動(dòng)物，植物病原線蟲(chóng)仍然保持水生習(xí)性；除了休眠狀態(tài)的幼蟲(chóng)、卵和胞囊，線蟲(chóng)都需要在適當(dāng)?shù)乃谢蛲寥李w粒表面有水膜時(shí)才能正常活動(dòng)和存活，或寄生在寄主植物的活細(xì)胞和組織內(nèi)。

溫度----不同線蟲(chóng)種類其發(fā)育最適溫度不同、但一般在15—30℃之間均能發(fā)育。在40℃-50℃的熱水中10分鐘，即可殺死。在實(shí)驗(yàn)室，常用60℃-65℃，3-5分鐘殺死線蟲(chóng)。第九頁(yè)，共三十一頁(yè)，2022年，8月28日

土壤----土壤的溫度和濕度(水分)是影響線蟲(chóng)的重要因素。土壤的溫、濕度高，線蟲(chóng)活躍，體內(nèi)的養(yǎng)分消耗快，存活時(shí)間較短；反之則存活時(shí)間就較長(zhǎng)。土壤長(zhǎng)期淹水或通氣不良也影響它的存活。許多線蟲(chóng)可以休眠的狀態(tài)在植物體外長(zhǎng)期存活，如土壤中未孵化的卵，特別是卵囊和胞囊中的卵存活期更長(zhǎng)。第十頁(yè)，共三十一頁(yè)，2022年，8月28日線蟲(chóng)分布在從土表以下5cm到15cm土層，尤其是植物根際土壤中更多。線蟲(chóng)在土壤中的蠕動(dòng)沒(méi)有方向性。線蟲(chóng)在土壤中移動(dòng)的范圍很少超過(guò)30~100cm。線蟲(chóng)的傳播途徑：以被動(dòng)傳播為主，包括人為傳播：種子苗木調(diào)運(yùn)及包裝物自然力傳播：水流（灌溉水）及風(fēng)、農(nóng)具的攜帶等；昆蟲(chóng)（松墨天牛、棕櫚象甲）D第十一頁(yè)，共三十一頁(yè)，2022年，8月28日植物病原線蟲(chóng)的形態(tài)與解剖外部形態(tài)

一般長(zhǎng)管狀兩側(cè)對(duì)稱；尾部略尖；體形細(xì)小（長(zhǎng)１mm以下）

部分種類雌雄異形，雄蟲(chóng)線形，雌蟲(chóng)為檸檬形、洋梨形、腎形、球形和長(zhǎng)囊形.第十二頁(yè)，共三十一頁(yè)，2022年，8月28日三、線蟲(chóng)蟲(chóng)體結(jié)構(gòu)

體壁:角質(zhì)層;下皮層;肌肉層；體腔；體腔液（血液）。內(nèi)部結(jié)構(gòu)----消化系統(tǒng)生殖系統(tǒng)神經(jīng)系統(tǒng)排泄系統(tǒng)等第十三頁(yè)，共三十一頁(yè)，2022年，8月28日體壁（角質(zhì)層、下皮層、肌肉層）A．外表皮層B．內(nèi)表皮層C．絲狀層D．基質(zhì)層E．邊界層F．外纖維層G．中纖維層H．內(nèi)纖維層I．基底膜

D排泄孔側(cè)區(qū)側(cè)帶第十四頁(yè)，共三十一頁(yè)，2022年，8月28日體腔----體腔液背面腹面肌肉側(cè)區(qū)食道生殖腺第十五頁(yè)，共三十一頁(yè)，2022年，8月28日消化系統(tǒng)口食道腸直腸肛門(mén)體部峽部食道腺第十六頁(yè)，共三十一頁(yè)，2022年，8月28日生殖系統(tǒng)雌性生殖系統(tǒng)卵巢輸卵管受精囊子宮陰道陰門(mén)后陰子宮囊第十七頁(yè)，共三十一頁(yè)，2022年，8月28日雄性生殖系統(tǒng)精巢(睪丸)精囊輸精管泄殖腔附屬交配器官第十八頁(yè)，共三十一頁(yè)，2022年，8月28日神經(jīng)系統(tǒng)----由數(shù)百個(gè)神經(jīng)細(xì)胞組成:神經(jīng)環(huán)是最顯著的的結(jié)構(gòu);側(cè)神經(jīng);亞腹神經(jīng);亞背神經(jīng);側(cè)器神經(jīng).C第十九頁(yè)，共三十一頁(yè)，2022年，8月28日四.進(jìn)境木包裝松材線蟲(chóng)的檢疫方法

為了防止國(guó)外的松材線蟲(chóng)隨木包裝傳入,近幾年來(lái),我們結(jié)合口岸木包裝的檢疫經(jīng)驗(yàn)以及實(shí)驗(yàn)室分離檢驗(yàn)鑒定松材線蟲(chóng)的實(shí)踐,探索出了一套進(jìn)境木包裝松材線蟲(chóng)的檢疫分離方法,該方法與目前文獻(xiàn)中報(bào)道的一些松材線蟲(chóng)檢驗(yàn)方法相比,具有檢驗(yàn)樣品量大,技術(shù)簡(jiǎn)單容易掌握,檢驗(yàn)過(guò)程快速準(zhǔn)確和檢出率高等特點(diǎn)。現(xiàn)將該檢疫方法介紹如下。第二十頁(yè)，共三十一頁(yè)，2022年，8月28日1、松材的辨別

松材線蟲(chóng)的寄主為針葉樹(shù),尤以松樹(shù)為主,因此現(xiàn)場(chǎng)檢疫首先要識(shí)別檢驗(yàn)的木包裝(墊木、卡板、包裝箱等)是否是松材。松樹(shù)的樹(shù)皮紅褐色、粗糙、鱗片狀,材質(zhì)厚實(shí),較重,木紋清晰帶油脂,褐色至深褐色,尚未干透的松材可散發(fā)出一陣幽幽的松脂香味,經(jīng)過(guò)辨皮色、看材質(zhì)木紋、聞香味等幾個(gè)方面的檢查可將松材與其他雜木區(qū)別開(kāi)來(lái)。第二十一頁(yè)，共三十一頁(yè)，2022年，8月28日2、松材樣品的選取2.1多點(diǎn)取樣,增加取樣覆蓋率

為了取樣的代表性和發(fā)現(xiàn)松材線蟲(chóng)的機(jī)率,不能圖省事,在一批貨物中同一個(gè)點(diǎn)抽取足量的松材,而應(yīng)多點(diǎn)取樣,每點(diǎn)取2~4塊長(zhǎng)40cm的松材,增加取樣的覆蓋率。第二十二頁(yè)，共三十一頁(yè)，2022年，8月28日2.2選帶有藍(lán)變癥狀的松材

松材線蟲(chóng)危害過(guò)的木材往往附有引致松材發(fā)生藍(lán)變的真菌,在現(xiàn)場(chǎng)檢查時(shí),需要挑取有淺顯藍(lán)變的松材做樣品。對(duì)于藍(lán)變的木材,如果藍(lán)變過(guò)于嚴(yán)重且材質(zhì)又較輕時(shí),也不適宜作為樣品,因?yàn)檫@些木材往往是砍伐過(guò)久,經(jīng)過(guò)長(zhǎng)時(shí)間的貯藏或運(yùn)輸?shù)哪静?松材線蟲(chóng)會(huì)因環(huán)境條件、溫度、濕度、水分的變化,尤其是高溫和失水而死亡,從這些樣品中分離出來(lái)的線蟲(chóng)往往是在木板表面上生活的小桿線蟲(chóng)或其他滑刃類線蟲(chóng)。因此要選取材質(zhì)內(nèi)部有藍(lán)變的木材做樣品。第二十三頁(yè)，共三十一頁(yè)，2022年，8月28日2.3選有蟲(chóng)蛀癥狀的松材松材線蟲(chóng)是一種蟲(chóng)媒線蟲(chóng),在自然生態(tài)中,它主要由天牛、象甲和吉丁蟲(chóng)作為媒介進(jìn)行自然傳播,因此被天牛等甲蟲(chóng)鉆蛀過(guò)的松材帶有松材線蟲(chóng)的可能性也較大,所以選取有蟲(chóng)蛀癥狀的松材做樣品就會(huì)增加分離線蟲(chóng)的可能性。另外,作為蟲(chóng)媒本身也會(huì)攜帶大量的線蟲(chóng),因此,如在樣品中發(fā)現(xiàn)天牛、象甲和吉丁蟲(chóng),也可拿來(lái)分離是否有松材線蟲(chóng)。第二十四頁(yè)，共三十一頁(yè)，2022年，8月28日2.4選水分含量高、有松脂香味的松材

松樹(shù)被砍伐后,松材線蟲(chóng)依靠松材內(nèi)的水分和養(yǎng)分繼續(xù)存活一段時(shí)間,當(dāng)松材內(nèi)的水分和養(yǎng)分消耗完畢后,松材線蟲(chóng)也會(huì)自然死亡。松材的水分含量高,有松脂香味從一個(gè)側(cè)面反映出這些松材被砍伐的時(shí)間相對(duì)較短,還有能保持線蟲(chóng)賴于存活的必要條件,因此選這樣的松材做樣品就可增加檢出線蟲(chóng)的可能性。第二十五頁(yè)，共三十一頁(yè)，2022年，8月28日2.5選取邊材和材質(zhì)較厚的松材

松材線蟲(chóng)為害的部位主要在邊材,很少有松材線蟲(chóng)在心材內(nèi)(樹(shù)木的中心部位材質(zhì))生活,在現(xiàn)場(chǎng)檢疫中需要選取邊材做樣品,通常邊材的年輪輪紋距離較疏,輪紋顏色淡褐色,木質(zhì)密度相對(duì)疏松(不是很硬);而心材的年輪輪紋距離較密,顏色深褐色至黑褐色,木質(zhì)很緊密(相對(duì)較硬),取邊材做樣品分離出線蟲(chóng)的可能性較大。第二十六頁(yè)，共三十一頁(yè)，2022年，8月28日材質(zhì)較厚的松材可抵抗不良環(huán)境的影響,相應(yīng)地延長(zhǎng)線蟲(chóng)在松材內(nèi)的存活時(shí)間,厚度少于1cm的松材,容易失水干枯,影響線蟲(chóng)的存活或容易受到外界高溫的直接影響而死亡。因此,在現(xiàn)場(chǎng)檢疫中應(yīng)選取厚度115cm以上的木板或木方、墊木做樣品。第二十七頁(yè)，共三十一頁(yè)，2022年，8月28日3.樣品的處理

樣品取回實(shí)驗(yàn)室后,選取需要分離的樣品,首先將樣品鋸成15~20cm長(zhǎng),少于1cm厚的木條或木片,將木條或木片放入塑料桶中,加水浸過(guò)松材浸泡6~24h。然后將松材浸出液倒進(jìn)線蟲(chóng)分離套篩內(nèi)過(guò)濾線蟲(chóng),其方法是100目篩在上方,400目篩在下方,用自來(lái)水沖洗上篩,將篩上物沖洗到下篩,取去上篩,再用水小心地從篩旁和篩的后邊把留在400目篩的篩內(nèi)物沖洗到培養(yǎng)皿中,將培養(yǎng)皿移至解剖鏡(立體鏡)下觀察有無(wú)線蟲(chóng)。第二十八頁(yè)，共三十一頁(yè)，2022年，8月28日

過(guò)篩沖洗的篩內(nèi)物,可通過(guò)漏斗法除去雜質(zhì),其方法是先在漏斗中鋪上雙層面巾紙,用止水夾夾住漏斗下方的膠管(也可用小試管直接套在膠管中),將分離液體倒進(jìn)漏斗里,然后小心地從漏斗旁邊把水加至漏斗1/2或2/3處(應(yīng)避免水流沖破面巾紙),靜置6h以上,讓線蟲(chóng)通過(guò)紙巾游動(dòng)到下方的膠管里,而雜質(zhì)則隔離在紙巾上,需要檢驗(yàn)線蟲(chóng)時(shí),打開(kāi)漏斗的止水夾,取出適量的液體放進(jìn)培養(yǎng)皿中,移至解剖鏡下檢驗(yàn),此時(shí)液體中的雜質(zhì)已經(jīng)隔掉,在解剖鏡下就很容易找到線蟲(chóng)。采取同樣方法,在沒(méi)有線蟲(chóng)分離套篩的情況下,也可在塑料桶中浸泡了松材樣品后,取出松材,將浸出液靜置2h,然后慢慢倒掉上層液體,只留下桶底的液體,把此液體移至漏斗中按以上方法過(guò)濾,也可分離非常干凈的線蟲(chóng)液體,便于在解剖鏡下觀察。第二十九頁(yè)，共三十一頁(yè)，2022年，8月28日4.線蟲(chóng)的保存4.1短期保存將分離出來(lái)的線蟲(chóng)液體用吸管吸到盤(pán)尼西林瓶中,封好蓋子,放在冰箱冷藏的