微生物純培養(yǎng)的分離方法課件

微生物純種分離將多種混雜微生物，經(jīng)某種技術(shù)或方法分離成純種的過程純培養(yǎng)（pureculture）將在實(shí)驗(yàn)室條件下從一個細(xì)胞或一種細(xì)胞群繁殖得到的后代稱為純培養(yǎng)。微生物純種分離將多種混雜微生物，經(jīng)某種技術(shù)或方法分離成純種的1微生物樣品多種混雜某種方法分散成單個微生物平板培養(yǎng)單菌落每個菌落為純種（純培養(yǎng)）單菌落轉(zhuǎn)接培養(yǎng)純種（純培養(yǎng)）微生物純種分離的原理和方法微生物樣品多種混雜某種方法分散成單個微生物平板培養(yǎng)單菌落每個2單個微生物在適宜的固體培養(yǎng)基表面或內(nèi)部生長、繁殖到一定程度可以形成肉眼可見的、有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞群體，稱為菌落。菌落單個微生物在適宜的固體培養(yǎng)基表面或內(nèi)部生長、繁殖到一定程度可3一個菌落是一個純種，也是一個純培養(yǎng)；單個微生物只在固體培養(yǎng)基上形成菌落；在液體培養(yǎng)基中不會形成菌落一個菌落是一個純種，也是一個純培養(yǎng)；4同一細(xì)菌在不同的培養(yǎng)平板上形成不同的特征菌落同一細(xì)菌在不同的培養(yǎng)平板上形成不同的特征菌落5分區(qū)劃線法（蛇形線法）操作圖第一區(qū)劃線第二區(qū)劃線第三區(qū)劃線一、劃線法分區(qū)劃線法（蛇形線法）操作圖第一區(qū)劃線第二區(qū)劃線第三區(qū)劃線一6分區(qū)劃線法適用范圍：

適用于濃度較大的樣品分區(qū)劃線法適用范圍：7連續(xù)劃線法操作圖連續(xù)劃線法適用范圍：適用于濃度較小的樣品連續(xù)劃線法操作圖8二、稀釋平板法從土壤中分離純微生物104/ml103/ml102/ml101/ml二、稀釋平板法從土壤中分離純微生物104/ml103/ml191、稀釋傾注分離法1、稀釋傾注分離法10涂布平板法稀釋倒平板法2、稀釋涂布分離法涂布平板法稀釋倒平板法2、稀釋涂布分離法11采用顯微分離法從混雜群體中直接分離單個細(xì)胞或單個個體進(jìn)行培養(yǎng)以得到純培養(yǎng)，稱為單細(xì)胞（單孢子）分離法。采用顯微分離法從混雜群體中直接分離單個細(xì)胞或單個個體進(jìn)行培養(yǎng)12個體較小的微生物需采用顯微操作儀分離難度與細(xì)胞或個體的大小成反比營養(yǎng)瓊脂平板上不能形成菌落較大的微生物可使用毛細(xì)管提取三、單細(xì)胞挑取法五、小滴分離法個體較小的微生物需采用顯微操作儀分離難度與細(xì)胞或個體的大小成13EachcolonywasexaminedmicroscopicallyEachcolonywasexaminedmicro14四、選擇培養(yǎng)基分離法創(chuàng)造適于目的微生物生長條件原理促使目的微生物快速生長呈優(yōu)勢菌抑制非目的微生物生長從混雜微生物中分離目的微生物四、選擇培養(yǎng)基分離法原理151、利用選擇培養(yǎng)基進(jìn)行直接分離選擇培養(yǎng)基只允許特定微生物生長，而同時抑制或阻止其他微生物生長的培養(yǎng)基1、利用選擇培養(yǎng)基進(jìn)行直接分離選擇培養(yǎng)基16土壤目的菌優(yōu)勢非目的菌選擇培養(yǎng)基直接分離單細(xì)胞選擇培養(yǎng)基平板（含牛奶或酪蛋白唯一C、N源）37℃培養(yǎng)目的菌落菌落周圍有透明蛋白水解圈1、利用選擇培養(yǎng)基進(jìn)行直接分離例一：分離篩選蛋白酶產(chǎn)生細(xì)菌土壤目的菌優(yōu)勢非目的菌選擇培養(yǎng)基單細(xì)胞選擇培養(yǎng)基平板37℃目17含牛奶選擇培養(yǎng)基目的菌生長平板營養(yǎng)選擇因子：牛奶或酪蛋白只允許分解利用蛋白質(zhì)的目的菌生長，淘汰非目的菌長出的目的菌并不一定是同種細(xì)菌，但皆產(chǎn)蛋白酶例一：分離篩選蛋白酶產(chǎn)生細(xì)菌含牛奶選擇培養(yǎng)基目的菌生長平板營養(yǎng)選擇因子：牛奶或酪蛋白只允18例二：分離篩選產(chǎn)高溫淀粉酶（65℃）細(xì)菌單細(xì)胞選擇培養(yǎng)基平板（淀粉為唯一C源）65℃培養(yǎng)淀粉水解透明圈目的菌菌落選擇因子：營養(yǎng)選擇因子淀粉環(huán)境選擇因子65℃高溫例二：分離篩選產(chǎn)高溫淀粉酶（65℃）細(xì)菌單細(xì)胞選擇培養(yǎng)基平板19人為創(chuàng)造一些條件只讓所需的微生物生長，在這些條件下，所需要的微生物能有效地與其他微生物進(jìn)行競爭，在生長能力方面遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過其他微生物。2、富集培養(yǎng)法富集培養(yǎng)是分離微生物菌種最強(qiáng)有力的技術(shù)之一營養(yǎng)選擇因子和生理?xiàng)l件選擇因子可無窮盡組合，可從自然界選擇分離各類特異微生物人為創(chuàng)造一些條件只讓所需的微生物生長，在這些條件下，所需要的20例：從土壤中分離能產(chǎn)生?－半乳糖苷酶的微生物富集培養(yǎng)選擇培養(yǎng)基分離目的菌驗(yàn)證例：從土壤中分離能產(chǎn)生?－半乳糖苷酶的微生物富集培養(yǎng)選擇培養(yǎng)211.接種針2.接種環(huán)3.接種鉤4.接種鋤5.接種鏟6.接種匙7.接種刀8.接種刀9.剪刀10.鋼鉤11.鑷子12.彈簧接種槍13.接種、槍（日本式）涂布棒彈簧接種槍1.接種針2.接種環(huán)3.接種鉤4.接種鋤5.接種鏟22接種環(huán)的滅菌接種環(huán)燒紅接種環(huán)稍冷卻接種工具接種環(huán)的滅菌接種環(huán)燒紅接種環(huán)稍冷卻接種工具23挑選單個菌落劃線挑選單個菌落劃線241、實(shí)驗(yàn)臺2、空氣環(huán)境條件1、實(shí)驗(yàn)臺環(huán)境條件25微生物純種分離將多種混雜微生物，經(jīng)某種技術(shù)或方法分離成純種的過程純培養(yǎng)（pureculture）將在實(shí)驗(yàn)室條件下從一個細(xì)胞或一種細(xì)胞群繁殖得到的后代稱為純培養(yǎng)。微生物純種分離將多種混雜微生物，經(jīng)某種技術(shù)或方法分離成純種的26微生物樣品多種混雜某種方法分散成單個微生物平板培養(yǎng)單菌落每個菌落為純種（純培養(yǎng)）單菌落轉(zhuǎn)接培養(yǎng)純種（純培養(yǎng)）微生物純種分離的原理和方法微生物樣品多種混雜某種方法分散成單個微生物平板培養(yǎng)單菌落每個27單個微生物在適宜的固體培養(yǎng)基表面或內(nèi)部生長、繁殖到一定程度可以形成肉眼可見的、有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞群體，稱為菌落。菌落單個微生物在適宜的固體培養(yǎng)基表面或內(nèi)部生長、繁殖到一定程度可28一個菌落是一個純種，也是一個純培養(yǎng)；單個微生物只在固體培養(yǎng)基上形成菌落；在液體培養(yǎng)基中不會形成菌落一個菌落是一個純種，也是一個純培養(yǎng)；29同一細(xì)菌在不同的培養(yǎng)平板上形成不同的特征菌落同一細(xì)菌在不同的培養(yǎng)平板上形成不同的特征菌落30分區(qū)劃線法（蛇形線法）操作圖第一區(qū)劃線第二區(qū)劃線第三區(qū)劃線一、劃線法分區(qū)劃線法（蛇形線法）操作圖第一區(qū)劃線第二區(qū)劃線第三區(qū)劃線一31分區(qū)劃線法適用范圍：

適用于濃度較大的樣品分區(qū)劃線法適用范圍：32連續(xù)劃線法操作圖連續(xù)劃線法適用范圍：適用于濃度較小的樣品連續(xù)劃線法操作圖33二、稀釋平板法從土壤中分離純微生物104/ml103/ml102/ml101/ml二、稀釋平板法從土壤中分離純微生物104/ml103/ml1341、稀釋傾注分離法1、稀釋傾注分離法35涂布平板法稀釋倒平板法2、稀釋涂布分離法涂布平板法稀釋倒平板法2、稀釋涂布分離法36采用顯微分離法從混雜群體中直接分離單個細(xì)胞或單個個體進(jìn)行培養(yǎng)以得到純培養(yǎng)，稱為單細(xì)胞（單孢子）分離法。采用顯微分離法從混雜群體中直接分離單個細(xì)胞或單個個體進(jìn)行培養(yǎng)37個體較小的微生物需采用顯微操作儀分離難度與細(xì)胞或個體的大小成反比營養(yǎng)瓊脂平板上不能形成菌落較大的微生物可使用毛細(xì)管提取三、單細(xì)胞挑取法五、小滴分離法個體較小的微生物需采用顯微操作儀分離難度與細(xì)胞或個體的大小成38EachcolonywasexaminedmicroscopicallyEachcolonywasexaminedmicro39四、選擇培養(yǎng)基分離法創(chuàng)造適于目的微生物生長條件原理促使目的微生物快速生長呈優(yōu)勢菌抑制非目的微生物生長從混雜微生物中分離目的微生物四、選擇培養(yǎng)基分離法原理401、利用選擇培養(yǎng)基進(jìn)行直接分離選擇培養(yǎng)基只允許特定微生物生長，而同時抑制或阻止其他微生物生長的培養(yǎng)基1、利用選擇培養(yǎng)基進(jìn)行直接分離選擇培養(yǎng)基41土壤目的菌優(yōu)勢非目的菌選擇培養(yǎng)基直接分離單細(xì)胞選擇培養(yǎng)基平板（含牛奶或酪蛋白唯一C、N源）37℃培養(yǎng)目的菌落菌落周圍有透明蛋白水解圈1、利用選擇培養(yǎng)基進(jìn)行直接分離例一：分離篩選蛋白酶產(chǎn)生細(xì)菌土壤目的菌優(yōu)勢非目的菌選擇培養(yǎng)基單細(xì)胞選擇培養(yǎng)基平板37℃目42含牛奶選擇培養(yǎng)基目的菌生長平板營養(yǎng)選擇因子：牛奶或酪蛋白只允許分解利用蛋白質(zhì)的目的菌生長，淘汰非目的菌長出的目的菌并不一定是同種細(xì)菌，但皆產(chǎn)蛋白酶例一：分離篩選蛋白酶產(chǎn)生細(xì)菌含牛奶選擇培養(yǎng)基目的菌生長平板營養(yǎng)選擇因子：牛奶或酪蛋白只允43例二：分離篩選產(chǎn)高溫淀粉酶（65℃）細(xì)菌單細(xì)胞選擇培養(yǎng)基平板（淀粉為唯一C源）65℃培養(yǎng)淀粉水解透明圈目的菌菌落選擇因子：營養(yǎng)選擇因子淀粉環(huán)境選擇因子65℃高溫例二：分離篩選產(chǎn)高溫淀粉酶（65℃）細(xì)菌單細(xì)胞選擇培養(yǎng)基平板44人為創(chuàng)造一些條件只讓所需的微生物生長，在這些條件下，所需要的微生物能有效地與其他微生物進(jìn)行競爭，在生長能力方面遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過其他微生物。2、富集培養(yǎng)法富集培養(yǎng)是分離微生物菌種最強(qiáng)有力的技術(shù)之一營養(yǎng)選擇因子和生理?xiàng)l件選擇因子可無窮盡組合，可從自然界選擇分離各類特異微生物人為創(chuàng)造一些條件只讓所需的微生物生長，在這些條件下，所需要的45例：從土壤中分離能產(chǎn)生?－半乳糖苷酶的微生物富集培養(yǎng)選擇培養(yǎng)基分離目的菌驗(yàn)證例：從土壤中分離能產(chǎn)生?－半乳糖苷酶的微生物富集培養(yǎng)選擇培養(yǎng)461.接種針2.接種環(huán)3.接種鉤4.接種鋤