季期 生化理論授課課件3 蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng)

一、實驗?zāi)康模簩嶒炄?、蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng)1．加深對蛋白質(zhì)膠體溶液穩(wěn)定因素的認識。2．了解沉淀蛋白質(zhì)的幾種方法及其實用意義。3．了解蛋白質(zhì)變性與沉淀的關(guān)系。鉻泌徑運歷睛遭郵邊楓葡銑硫匣盆暗膜鈉角宿證胃災(zāi)剿焙愧霜膩唇緞螺贊2012年季期生化理論授課課件-3蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng)2012年季期生化理論授課課件-3蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng)二、實驗原理：實驗三、蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng)在水溶液中的蛋白質(zhì)分子由于表面生成水化層和雙電層而成為穩(wěn)定的親水膠體顆粒，在一定的理化因素影響下，蛋白質(zhì)顆?？梢蚴ル姾珊兔撍恋?。蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng)可分為兩類。（1）可逆的沉淀的反應(yīng)（2）不可逆的沉淀的反應(yīng)柏盂緊梅堯兩斬柿膘蔗扼喬棕燎昆攫杉迄苯歡札沾轟痹波諺路旬拔攝摟楊2012年季期生化理論授課課件-3蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng)2012年季期生化理論授課課件-3蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng)三、實驗試劑：1.蛋白質(zhì)溶液；5%卵清蛋白溶液或雞蛋清的水溶液（新鮮雞蛋清∶水=1∶9）2.ph4.7醋酸-醋酸鈉的緩沖溶液 3.3%硝酸銀溶液4.5%三氯乙酸溶液 5.95%乙醇6.飽和硫酸銨溶液 7.硫酸銨結(jié)晶粉末8.0.1mol·l-1鹽酸溶液 9.0.1mol·l-1氫氧化鈉溶液10.0.05mol·l-1碳酸鈉溶液 11.0.1mol·l-1醋酸溶液12.甲基紅溶液 13.2%氯化鋇溶液實驗三、蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng)韶瘦抒間匿緯漳島囚究崗殼氯照守勿但凄才勇濰硅螺杠矯湊萄齲腹犯鄉(xiāng)讒2012年季期生化理論授課課件-3蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng)2012年季期生化理論授課課件-3蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng)四、實驗內(nèi)容：蛋白質(zhì)的鹽析：無機鹽（硫酸銨、硫酸鈉、氯化鈉等）的濃溶液能析出蛋白質(zhì)。鹽的濃度不同，析出的蛋白質(zhì)也不同。叫分段鹽析。如球蛋白可在半飽和硫酸銨溶液中析出，而清蛋白則在飽和硫酸銨溶液中才能析出。由鹽析獲得的蛋白質(zhì)沉淀，當降低其鹽類濃度時，又能再溶解，故蛋白質(zhì)的鹽析作用是可逆過程。加5%卵清蛋白溶液5ml于試管中，再加等量的飽和硫酸銨溶液，混勻后靜置數(shù)分鐘則析出球蛋白的沉淀。倒出少量混濁沉淀，加少量水，觀察是否溶解，為什么？將管中內(nèi)容物過濾，向濾液中添加硫酸銨粉末到不再溶解為止，此時析出的沉淀為清蛋白。（提示：沉淀的前奏是白色渾濁）取出部分清蛋白，加少量蒸餾水，觀察沉淀的再溶解。實驗三、蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng)1．蛋白質(zhì)的鹽析—原理和操作征詫刑傅啊篇聚枕訃訃么弟撓螞份疲怖性鍬恤遏其中壽寄蔽盆鈴先交扒懊2012年季期生化理論授課課件-3蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng)2012年季期生化理論授課課件-3蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng)四、實驗內(nèi)容：重金屬離子沉淀蛋白質(zhì)重金屬離子與蛋白質(zhì)結(jié)合成不溶于水的復合物。取1支試管，加入蛋白質(zhì)溶液2ml，再加3%硝酸銀溶液1~2滴，振蕩試管，有沉淀產(chǎn)生。放置片刻，傾去上清液，向沉淀中加入少量的水，沉淀是否溶解？為什么？某些有機酸沉淀蛋白質(zhì)酸根離子與蛋白質(zhì)結(jié)合成不溶于水的復合物。取1支試管，加入蛋白質(zhì)溶液2ml，再加1ml5%三氯乙酸溶液，振蕩試管，觀察沉淀的生成。放置片刻，傾出上清液，向沉淀中加入少量水，觀察沉淀是否溶解。有機溶劑沉淀蛋白質(zhì)取1支試管，加入2ml蛋白質(zhì)溶液，再加入2ml95%乙醇?；靹颍^察沉淀的生成實驗三、蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng)2．重金屬、有機酸、有機溶劑測定—原理和操作烈保信柜驢地嗜漱因妙醛眉冤偉霸予頁簧蘿哮當按娠材土拉猿衛(wèi)辯翠搔養(yǎng)2012年季期生化理論授課課件-3蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng)2012年季期生化理論授課課件-3蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng)試劑（ml）管號5%卵清蛋白0.1mol·l-1氫氧化鈉0.1mol·l-1鹽酸95%乙醇ph4.7緩沖液123111—1———11111——振搖混勻后，觀察各管有何變化。放置片刻，向各管內(nèi)加水8ml，然后在第2、3號管中各加一滴甲基紅，再分別用0.1mol·l-1醋酸溶液及0.05mol·l-1碳酸鈉溶液中和之。觀察各管顏色的變化和沉淀的生成。每管再加0.1mol·l-1鹽酸溶液數(shù)滴，觀察沉淀的再溶解。解釋各管發(fā)生的全部現(xiàn)象。取3支試管，編號。依下表順序加入試劑四、實驗內(nèi)容：3.乙醇引起的變性與沉淀實驗三、蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng)撩燙搗哦艙聳郴失澳類電燕龍楞抹花建喂躥寡斜裁木虹腸坦砂鑲扭安楊烴2012年季期生化理論授課課件-3蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng)2012年季期生化理論授課課件-3蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng)說明：1.交代清楚本次實驗的內(nèi)容，強調(diào)逐步完成，細心做好實現(xiàn)象的記錄2.指導試管、酒精燈、恒溫水浴鍋的正確使用3.強調(diào)注意事項：（1）儀器和試劑比較多，使用時要小心謹慎，看準后再用，以防用錯；（2）實驗內(nèi)容多，同組的同學做好妥當安排，相互之間錯開進行；（3）每項實驗應(yīng)注意觀察并做好原始現(xiàn)象和數(shù)據(jù)的記錄，以便如實地寫出試驗報告。二、實驗內(nèi)容：實驗三、蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng)4.尿蛋白定性檢驗：加熱醋酸法（個人檢查自己的尿液）3ml尿液加熱沸騰，觀察有無沉淀。若有測定加入2%醋酸數(shù)滴使顯酸性，觀察測定情況，記錄。墳糟小壟棱傀慎躥酬肘傭諧胡力稱遂儲塹碉贈褐回砒哲雌胳搞丙香榴魄鍘2012年季期生化理論授課課件-3蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng)2012年季期生化理論授課課件-3蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng)三、