LCMS原理及圖譜分析GCMS原理及圖譜分析分析制備方法-米莉莉

色譜分析課程

AnalysisDept.分析部提供色譜分析和分離純化服務(wù)

◆色譜分析項目包括以下:LC-MSHPLCGC-MSChiralHPLC◆分離純化項目包括以下:PREP-HPLCChiralPREP-HPLCLC-MS◆一.送樣注意事項1.均勻取樣:將樣品混合好再取樣。2.送樣量：固體約為1mg、液體約為10ul。3.要求樣品必須澄清透明，以免損壞色譜柱；若樣品混濁,請用濾頭過濾后再測樣.4.請使用甲醇、乙腈、水、THF、DMSO、DMF等極性溶劑溶解樣品，盡量避免使用正己烷等非極性、弱極性溶劑溶樣.5.設(shè)樣時請自己記住樣品報告的Datafile,以便快速查找報告.6.正在進樣時不能往樣品盤放樣品.◆二.儀器的配置LC/MS(Agilent1100LC,VLMS;Shimadzu2010A)ESLD(SEDEX75;PL1000)→ESLDHPLC→DAD→→MSD樣品先經(jīng)過色譜柱的分離后進行DAD測試，再分流兩路進入ELSD和MS檢測器測試?！?檢測器的說明

二極管陣列檢測器(Diode-ArrayDetector,DAD)分析整個波長范圍(190nm-800nm)有吸收的組分,提供三維信息(T--A),確定最大吸收波長.其中在我們的報告提取波長為214nm的色譜圖.

蒸發(fā)光散射檢測器(Evaporationlight-scatterDetector,ELSD)是一種質(zhì)量型檢測器，對所有固體物質(zhì)均有幾乎相等的響應(yīng)，與待測物的光學(xué)性質(zhì)或電化學(xué)性質(zhì)無關(guān),故對于沒有光學(xué)吸收特征的物質(zhì)可獲得檢測.液質(zhì)聯(lián)用(liquidChromatagraphy-MassSpectrometry)可提供色譜,光譜,質(zhì)譜等多種信息,其中在我們的報告中打印有總離子色譜圖(Totalioncurrentchromatogram,TIC),提取離子色譜圖(extractionchromatogram,EIC),質(zhì)譜棒狀圖(Massspectrum)

總離子色譜圖TIC---分析時間內(nèi)所有掃描獲得的離子流強度對時間作圖所得的色譜圖.提取離子色譜圖EIC—根據(jù)監(jiān)測化合物分子量提取其產(chǎn)生的離子流強度對時間作圖所得的色譜圖.質(zhì)譜棒狀圖---不同質(zhì)量的離子質(zhì)荷比與其相對的離子強度所形成的譜圖三.色譜條件:◆酸性條件:0.05%-0.01%TFAinACNandH2O;gradient10%to90%;

酸法

1-L-P

常規(guī)酸法正離子

1-L-P-S

短柱酸法正離子

1-L-P-CN

CN基柱酸法正離子

◆堿性條件:ACN/10mMNH4HCO3inH2O;gradient10%to90%;堿法

2-L-P

堿法正離子

2-L-N

堿法負子

4.圖譜分析

分析報告的格式與解釋圖1：ADCELSD：蒸發(fā)光散射檢測器檢測的色譜圖。圖2：DAD214nm紫外波長為214nm的色譜圖.對于較純的樣品，色譜峰在1000mAu范圍內(nèi)表明樣品濃度較適宜,若色譜峰過高，表明樣品濃度較高，所檢測出的雜質(zhì)百分含量校高。圖3：MSDTIC總離子色譜圖圖4：EIC提取離子色譜圖;正離子模式（pos,positive+H，+Na）或負離子模式（neg，negative-H）。圖5：質(zhì)譜棒狀圖。積分結(jié)果表：分別表示ELSD、DAD214nm色譜峰的面積百分比,其中MSBase項提供的數(shù)據(jù)因軟件問題有所出入，該項數(shù)據(jù)不作參考?！痢痢痢痢痢痢痢痢痢痢痢痢?/p>

三.圖譜的特殊說明

1.無機鹽在ELSD上有信號,而MS,UV無信號.2.樣品的分子量小,易揮發(fā),ELSD出現(xiàn)無信號3.不易電離的化合物，MS出現(xiàn)無信號,需外送做EI；極性弱，易揮發(fā)樣品,需外送做GC-MS

4.溶劑（DMSO、THF、ETAC等）在UV214有信號，而在MS、ELSD上無信號。

四.關(guān)于分子量的解釋和注意事項

在畫分子結(jié)構(gòu)的過程中，我們發(fā)現(xiàn)含Cl、Br、S等有同位素且豐度較高的化合物使用CHEMDRAW和ISISDRAW計算出的分子量有出入，后者計算出的分子量往往是錯誤的，所以統(tǒng)一規(guī)定大家都用CHEMDRAW計算分子量。以C6H6NCl為例舉例說明幾個概念準(zhǔn)確分子量（Exactmass)：是用較輕同位素35Cl計算出的分子量平均分子量：是用同位素35Cl和37Cl自然豐度加權(quán)平均算出的分子量我們質(zhì)譜棒狀圖最前面的線的質(zhì)荷比就是準(zhǔn)確分子量用CHEMDRAW計算分子量如下用ISISDRAW計算分子量如下五.Easy-Access使用說明

Easy-Access界面一按Submit鍵提交樣品界面三輸入樣品相關(guān)信息后Loadsamples界面四按照提示放好樣品按OK確認后回到界面一查看數(shù)據(jù)編號

PREP-HPLC

◆一.PREP-HPLC反相體系

通常為水-有機相(甲醇、乙腈);為獲得良好的色譜分離效果，有時會加入后處理可除去的酸、堿、鹽?！舳?分離純化體系的選擇應(yīng)與化合物的性質(zhì)相關(guān)。1.正相分離手段應(yīng)作為首選純化的辦法2.在正相系統(tǒng)不能分離及其極性在中等或較大的化合物才適合用反相PREP-HPLC體系.3.在甲醇、乙腈、DMF、DMSO或THF中有良好的溶解性樣品適合用反相PREP-HPLC體系.◆三.送樣要求:1.樣品中不應(yīng)含有強酸及強堿以及其它對色譜柱產(chǎn)生損害的物質(zhì)

2.樣品中不應(yīng)含有較大量的無機鹽，防止堵塞柱子及流路。

3.目標(biāo)化合物含量應(yīng)盡可能大于20%，樣品顏色深含量低的可先過柱（薄板）后再送制備。4.送樣時請附上制備前的分析圖譜，5.樣品溶解性差、穩(wěn)定性差的要對制備人員說清楚。

ChiralHPLC

◆送樣要求送樣量：固體約為1mg、液體約為10ul。請注明所用溶劑及樣品濃度。送手性分析的樣品，HPLC純度必須在90%以上。GC-MS

◆送樣要求１.GC-MS適合于做揮發(fā)性及熱穩(wěn)定的樣品，送樣時請注意樣品的性質(zhì)（無機鹽不能做）。２．送樣人員送樣時應(yīng)附有送樣單并在分析人員提供的樣品登記單上登記。３．均勻取樣。４.送樣量：固體約為0.1mg、液體約為1ul。若使用特殊溶劑需注明。５.樣品請使用離心管或樣品瓶送樣。若樣品不穩(wěn)定，請使用棕色送樣瓶。６.請按送樣單的要求逐項正確完