動物實驗技術課件

1

動物實驗技術

動物實驗技術課件2醫(yī)學實驗動物學前言一個、兩個中心

主題動物實驗技術課件3一個中心標準化動物實驗技術課件4標準化動物標準化實驗標準化動物實驗技術課件5實驗動物動物實驗兩個主題動物實驗技術課件6動物標準化飼養(yǎng)管理（生產(chǎn)）營養(yǎng)基礎疾病預防根本選種,育種關鍵質(zhì)量控制遺傳控制微生物,寄生蟲控制環(huán)境控制營養(yǎng)控制動物實驗技術課件7實驗標準化實驗條件實驗技術動物實驗技術課件8動物實驗

通過生物學手段，研究動物實驗過程中的反應、表現(xiàn)、發(fā)生、發(fā)展規(guī)律以及有關的技術問題,并將結(jié)果推論到人的過程。動物實驗技術課件9動物實驗技術：

研究動物實驗所需的各種條件、方法、技術，以保證取得科學的、完整的、先進的實驗結(jié)果。動物實驗技術課件10動物實驗的要求..1、科學性2、經(jīng)濟性3、倫理性動物實驗技術課件11科學性要求

標準化的動物

標準化的實驗條件

標準化的操作規(guī)程動物實驗技術課件12經(jīng)濟性要求

動物的選擇實驗方法的選擇動物實驗技術課件13倫理性要求動物福利3R原則動物實驗技術課件14

第一講實驗前的準備內(nèi)容:1、實驗條件的準備2、實驗技術的準備3、實驗動物的準備動物實驗技術課件15第一節(jié)動物實驗條件的準備一．

動物飼養(yǎng)條件的準備動物實驗過程中，需要一個觀察動物反應的飼養(yǎng)場所，既動物觀察室。不同等級的動物實驗，需要不同環(huán)境條件的動物觀察室。

動物實驗技術課件16（一）普通動物實驗觀察室環(huán)境設施條件要求

環(huán)境特點:1、開放系統(tǒng)2、環(huán)境和微生物控等級較低3、不能完全控制傳染因子。動物實驗技術課件17（二）清潔動物實驗觀察室環(huán)境設施條件要求環(huán)境特點：

1、屏障或半屏障系統(tǒng)

2、所有實驗用品經(jīng)滅菌處理

3、實驗人員進出要嚴格按屏障系統(tǒng)操作規(guī)程操作必需設備：超凈工作臺動物實驗技術課件18

(三）SPF級以上動物實驗觀察室環(huán)境設施條件要求環(huán)境特點：

1、屏障系統(tǒng)或隔離系統(tǒng)。2、所有實驗用品經(jīng)嚴格滅菌處理。

3、實驗人員要嚴格按隔離系統(tǒng)操作規(guī)程操作。動物實驗技術課件19清潔級和SPF級動物實驗飼養(yǎng)設施1、屏障系統(tǒng)飼養(yǎng)室2、空氣層流架和IVC系統(tǒng)3、有過濾帽的飼養(yǎng)盒動物實驗技術課件20二、實驗場地的準備實驗操作室動物手術室細胞培養(yǎng)室其他特殊觀察室……動物實驗技術課件21三、實驗藥品、試劑的準備動物實驗技術課件22四、實驗器械的準備實驗器械準備得充分、適當，有助于實驗的順利完成。不同類型、部位的實驗使用的實驗器械種類、數(shù)量不盡一致。實驗器械包括完成實驗所需要的檢測儀器、實驗時動物的固定器械、動物外科手術器械.動物實驗技術課件23

（一）實驗儀器設備根據(jù)實驗的目的、要求、內(nèi)容不同而不同。實驗前應檢查是否準備就緒。動物實驗技術課件24(二)

常用動物外科手術器械（三）手術器械的消毒

1、煮沸滅菌法、

2、高壓蒸氣滅菌法

3、化學藥品滅菌法。動物實驗技術課件25（四）敷料、手術巾、手術衣、帽、口罩的消毒動物實驗技術課件26

五.

手術人員的準備為了保證無菌手術的進行,手術人員應作一系列的無菌的準備。不管做什么等級動物的手術，都應該遵循無菌手術的基本原則。（一）手術所需人數(shù)（二）

更衣（三）

手、臂的清潔和消毒動物實驗技術課件27第二節(jié)動物實驗技術的準備一．

動物實驗理論知識的準備（一）了解實驗用動物的基礎知識實驗用動物包括實驗動物、家畜家禽及部分野生動物。特別是要熟悉動物的生物學特性，解剖生理結(jié)構(gòu)，這對開展動物實驗研究是十分有益的。動物實驗技術課件28（二）掌握動物實驗的基礎知識和基本技能

動物實驗是一項系統(tǒng)的工作，涉及各種實驗技術、實驗方法、實驗手段、以及相關的技術標準。動物實驗技術課件29二、實驗技能的準備全程預試驗：演習整個實驗過程局部預試驗：訓練技術難點預試驗..動物實驗技術課件30

第三節(jié)實驗動物的選擇實驗動物的選擇是醫(yī)學研究中首要考慮的問題。選擇恰當與否關系到課題的質(zhì)量，經(jīng)費開支，研究途徑及方法的簡繁，甚至影響到課題的成敗及研究結(jié)果的正確性。動物實驗技術課件31一．

選擇原則（一）相似性原則在醫(yī)學研究中選用那些生物學特性和解剖生理特點與人類相似的實驗動物更具有實際意義。動物實驗技術課件321、結(jié)構(gòu)和功能的相似性在可能的情況下，盡量選用那些生物學特性和解剖生理特點與人類相似的實驗動物。一般說來，實驗動物愈高等，進化程度愈高，其機能、代謝、結(jié)構(gòu)愈復雜，反應就愈接近人類。動物實驗技術課件332、年齡狀態(tài)的相似性實驗動物的壽命與人具有很大的差異，但都可以找到與人的生長發(fā)育階段相對應的時期。動物實驗技術課件343、群體分布的相似性人類群體屬于自然分布群體類型。在以群體為研究對象的課題中，要考慮選擇與人類群體基因型及表現(xiàn)型分布類型相似的動物。動物實驗技術課件35生態(tài)或健康狀況的相似性在動物的遺傳、環(huán)境和營養(yǎng)控制相同的情況下，其微生物控制和健康狀況對實驗的影響就非常重要。

一般無菌動物是飼養(yǎng)在超常生態(tài)環(huán)境條件的動物，用于一些特殊的研究。

SPF動物和清潔動物是飼養(yǎng)在健康生態(tài)環(huán)境條件下的動物，用于多數(shù)科學研究。

動物實驗技術課件365.疾病特點的相似性實驗動物有許多自發(fā)或誘發(fā)性疾病能局部或全部地反映與人類類似的疾病過程和特點，可用于研究相關的人類疾病。

動物實驗技術課件37操作實感的相似性體型大的動物用于外科手術或教學示教中比體型小的動物在操作實感更接近人類。小香豬動物實驗技術課件38（二）特殊性原則

1、動物解剖、生理的特殊性

不同種系的動物的解剖生理特征既有共性又存在差異，充分利用這些共性和差異，并符合實驗目的要求，是保證實驗成功的關鍵。動物實驗技術課件392、對刺激反應的特殊性不同種系的實驗動物對相同因素的刺激反應既有共同性的一面，也存在一些特殊反應，同樣的刺激對一些動物敏感，但對另外一些動物可能不敏感。因此在實驗研究中選用那些有特殊反應、對實驗研究敏感的動物作為實驗對象，也是保證實驗成功的重要因素。動物實驗技術課件40（三）標準化原則標準化原則是指動物實驗中選擇與課題研究的目的、內(nèi)容、水平相匹配的標準化的實驗動物。只有選用經(jīng)微生物、寄生蟲學、遺傳學、環(huán)境及營養(yǎng)控制的標準化實驗動物，才能排除生物因素、遺傳因素、環(huán)境及營養(yǎng)因素對實驗結(jié)果的干擾。動物實驗技術課件41（四）規(guī)格化原則規(guī)格化原則是指選擇與實驗要求一致的動物規(guī)格。動物的規(guī)格是指對動物在年齡、體重、性別、生理及健康狀況等量和質(zhì)的規(guī)定。同種動物不同的規(guī)格對外界刺激的反應存在差異。動物實驗技術課件421、不同的動物年齡，有不同的生物學特性，對實驗刺激的反應也隨著年齡的不同而有明顯變化。2．

標準化的健康實驗動物的體重與年齡一般呈正相關，選擇動物時，可按體重選擇。年齡體重動物實驗技術課件433．

同種動物不同性別對外界刺激的反應不一致。因此，一般而言，實驗若對動物性別無特殊要求，則宜選用雌雄各半。以避免由性別差異造成的差異。4、動物不同的生理狀態(tài)，機體對某些刺激的反應有較大的差異。性別

生理和健康狀況

動物實驗技術課件44（五）

經(jīng)濟性原則

經(jīng)濟原則是指在不影響實驗質(zhì)量的前提下，盡量選用容易獲得、價格便宜和飼養(yǎng)經(jīng)濟的動物。動物實驗技術課件45二．

常用試驗中動物的選擇動物實驗技術課件46毒理學研究中的選擇在試驗品毒性試驗研究中，選擇何種實驗動物取決于該動物對試驗品的反應，以及試驗品在該動物體內(nèi)的吸收、分布、代謝和排泄與人類的異同程度。因此，作動物實驗時，選擇動物應當注意以下幾個方面的問題。動物實驗技術課件471、不同種屬的動物對試驗品的毒性反應有質(zhì)與量的區(qū)別。同一試驗品對不同種屬動物的毒性反應是有差異的，甚至有本質(zhì)的不同。因此在毒理研究中，選擇動物時，應至少選擇兩種動物進行實驗且種屬差異越大越好。一般應選擇一種嚙齒類動物和一種大動物。動物實驗技術課件482、通常情況下，動物的進化程度愈高，對試驗品毒性反應愈敏感。動物實驗技術課件493、在選擇動物規(guī)格方面，選擇未成年的動物、雌雄各半較為合適（對年齡有特殊要求的除外）。生長期動物對毒性反應比老年動物敏感。動物的性別不同對試驗品的毒性反應存在差異。動物實驗技術課件50二．

實驗動物的購入

在動物實驗的各項準備工作中，動物的購入是一個重要的環(huán)節(jié)。在購入動物前，應確定購入動物的種類、品系、規(guī)格、數(shù)量及動物微生物控制等級等。購入動物時應注意以下幾個方面的問題。動物實驗技術課件511、購入或領取動物前，應檢查各項準備工作是否就緒，如飼養(yǎng)動物的器具、器材是否準備好，飼養(yǎng)室的衛(wèi)生和消毒情況；此外，還應檢查動物的籠卡、實驗記錄本、墊料、飼料、秤等實驗必須品是否準備好。動物實驗技術課件52

2、購入動物時，應向供應單位及時索取動物的遺傳背景、微生物背景、質(zhì)量合格證、動物的年齡、體重等資料。動物實驗技術課件533、購入動物時，無論運輸距離的遠近，都應考慮運輸環(huán)境的溫度、濕度、飲食以及途中污染和窒息死亡等問題。動物實驗技術課件544、購入清潔級以上的動物，應采用帶有空氣過濾膜的無菌運輸罐或帶過濾帽的籠盒運輸，嚴格檢查其密封狀況。動物實驗技術課件555、新購進的動物不能直接進入動物實驗室，應將動物雌雄分開，并分籠在隔離區(qū)飼養(yǎng)一段時間，以便動物得以恢復體能并適應新的環(huán)境。動物實驗技術課件566、無論購入何種實驗動物，都應同時購入相應數(shù)量的飼料和墊料。動物實驗技術課件57三、動物模型準備動物實驗技術課件58（一）

概念

人類疾病動物模型是指醫(yī)學研究中建立的具有人類疾病表現(xiàn)的動物實驗對象和相關材料。

使用動物模型是當代生物學、醫(yī)學、藥學研究中一種便于認識客觀事物的實驗方法和手段。通過模型的研究可以有意識地改變那些在自然條件下不可能或不容易排除的因素，以觀察模型的反應。動物實驗技術課件59

（二）使用動物模型的意義

1、避免在人身上進行實驗所帶來的

風險。如：外傷、中毒、腫瘤和輻射病等。

動物實驗技術課件602、應用動物模型可以隨時復制的特點，得到平時臨床上不易見到的疾病。

如：放射病、毒氣中毒、烈性傳染病、戰(zhàn)傷等。動物實驗技術課件613、用動物提供的模型可以克服人類某些疾病的潛伏期長，病程長和發(fā)病率低的缺點。潛伏期長的疾?。耗[瘤、慢性氣管炎、動脈粥樣硬化、遺傳病等。發(fā)病率低的疾病：免疫性、代謝性、內(nèi)分泌和血液病等。動物實驗技術課件624、

可以嚴格控制實驗條件，排除各種干擾。

臨床上疾病較復雜，影響因素多，如：身患多種疾病、病人的年齡、性別、體重、遺傳、生活地區(qū)和規(guī)律，營養(yǎng)狀況等各不相同。動物復制的疾病模型，可以選擇相同品種、品系、性別、年齡、體重，以及相同的質(zhì)量控制和飼養(yǎng)條件等。動物實驗技術課件635、

樣品收集方便。

收集動物疾病模型的樣品不受時間和條件的限制，可根據(jù)實驗需要隨時采集。動物實驗技術課件64

（三）

動物模型的分類1、

按產(chǎn)生的原因分類..（1）誘發(fā)性或?qū)嶒炐詣游锬Ｐ?/p>

（ExperimentalAnimalModels）（2）自發(fā)性動物模型（SpontaneousAnimalModels）（3）轉(zhuǎn)基因和基因敲除動物模型(Transgenicanimal,geneknock-outanimal)動物實驗技術課件65誘發(fā)性或?qū)嶒炐詣游锬Ｐ停菏侵笇嶒炚呤褂梦锢淼摹⒒瘜W的和生物的致病因素作用于動物造成動物組織、器官或全身一定的損害，出現(xiàn)某些類似人類疾病時的功能、代謝障礙或形態(tài)結(jié)構(gòu)方面的病變。動物實驗技術課件

..機械損傷、放射線損傷、氣壓、手術等

化學藥致癌、化學毒物中毒、強酸強堿燒傷、某種有機成分的增加或減少導致營養(yǎng)性疾病等。細菌、病毒、寄生蟲、生物毒素等。

物理因素

:化學因素：生物因素：復合因素：

多種因素誘導.動物實驗技術課件67自發(fā)性動物模型：是指在自然情況下所形成的疾病模型或者經(jīng)有意識的人工處置發(fā)生的疾病，并能穩(wěn)定遺傳給后代的疾病模型。包括人工培育的突變系和近交系的各種疾病模型。如：無胸腺裸鼠、高血壓大鼠、肥胖癥小鼠等。動物實驗技術課件68

需要指出：1、以上兩種動物模型各有其優(yōu)缺點。其優(yōu)缺點只是相對的。2、很多疾病模型可用不同方式獲得。動物實驗技術課件693、不同方法復制的動物模型在發(fā)病機理和疾病內(nèi)在特征方面存在著各自的特點。4、大部分自發(fā)性動物模型是通過人為定向培育而成的，與人類自然發(fā)生的疾病在很多方面有差異。動物實驗技術課件70轉(zhuǎn)基因和基因敲除動物模型：轉(zhuǎn)基因動物：是指用基因工程技術將外源目的基因通過生殖細胞或早期胚胎導入胚胎染色體基因組內(nèi)，使之穩(wěn)定整合并能傳給后代的一類動物?；蚯贸齽游铮菏侵赣孟鄳姆肿由飳W技術將結(jié)構(gòu)已知但功能未知的基因去除，或用其他序列相近的基因?qū)⑵淙〈囊活悇游铩游飳嶒灱夹g課件712、

按實驗所用對象分類..（1）整體動物模型（2）

離體器官，組織動物模型（3）細胞株動物模型動物實驗技術課件72

（四）

動物模型的設計原則

1、

相似形人類疾病動物模型應盡可能地相似于人類疾病。如：大鼠的自發(fā)性高血壓。

復制動物模型時，應注意動物的選擇動物實驗技術課件732、

重復性理想的動物模型應該是可以重復的。保證動物模型具有重復性的措施..

（1）選用標準化的實驗動物（2）選用標準化的實驗設施（3）保證復制因素的一致性動物實驗技術課件743、

可靠性復制的動物模型應可靠地反映人類疾病，疾病的主要癥狀和體征明顯，不能出現(xiàn)與實驗無關的疾病。

注意動物的選擇和動物的質(zhì)量動物實驗技術課件754、

適用性和可控性

疾病模型應盡量考慮在今后臨床上的應用和便于控制其發(fā)展，以利于研究。如：雌激素終止大、小鼠早期妊娠的模型無實用性。動物+制模因子=結(jié)果散發(fā)或死亡無法控制模型的發(fā)展方向和速度，無價值。

動物實驗技術課件765、

易行性和經(jīng)濟性復制動物模型應盡量做到方法簡單、容易，合乎經(jīng)濟的原則。動物實驗技術課件77（五

）影響動物模型制作的因素動物實驗技術課件78

1、致模因素對動物模型復制的影響：致摸因素的劑量及在相關動物上的反應影響動物模型的復制。

因此造模時應注意..（1）致模因素的選擇（2）致模因素的劑量（3）致模因素與模型的相關信息動物實驗技術課件792、動物因素對動物模型復制的影響（1）動物種類的影響（2）

動物品系的影響（3）年齡和體重的影響（4）性別因素的影響（5）生理狀態(tài)和健康因素影響動物實驗技術課件80動物種類的影響：不同種的動物存在許多不同的特點，動物種類選擇不當將影響動物模型的復制。

動物實驗技術課件81動物品系的影響：同種不同品系的動物對致模因素的反應不一致。動物實驗技術課件82年齡和體重的影響：動物的壽命差異較大，解剖生理特征和反應隨年齡而明顯變化，一般幼齡動物比成年動物敏感，應根據(jù)實驗要求，選擇相應年齡的動物復制模型（健康動物年齡與體重有相關性）。動物實驗技術課件83性別因素的影響：同種、同品系，不同性別的動物，對某些反應不一致。動物實驗技術課件84生理狀態(tài)和健康因素影響:

動物處在不同的生理狀態(tài)和不同的健康狀況對致模因素的反應差異很大。如：肝功能衰竭動物模型，不能選用患嚴重球蟲病的家兔，因球蟲病影響肝功能。動物實驗技術課件85

3、實驗技術因素對動物模型復制的影

響（1）實驗季節(jié)不同季節(jié)，動物對某些反應可能不一致，對跨季節(jié)的動物模型實驗可能產(chǎn)生影響。

動物實驗技術課件86（2）晝夜不同的影響實驗動物的體溫、血糖、基礎代謝的、內(nèi)分泌等隨晝夜的不同呈有節(jié)律的變化，在復制模型時要注意晝夜不同對模型的影響。動物實驗技術課件87（3）麻醉深度的影響不同的麻醉藥、劑量對動物麻醉效果有差異，這種差異會影響模型的復制。動物實驗技術課件88（4）手術技巧的影響手術熟練，將減少對動物的刺激，損傷和出血能提高模型的成功率。動物實驗技術課件89（5）實驗給藥的影響給藥途徑、劑量和熟練程度不同會對造模產(chǎn)生影響。動物實驗技術課件90（6）對照組對造模的影響對照是檢測模型是否成功的重要手段。動物實驗技術課件914、環(huán)境、營養(yǎng)因素對復制動物模型的影響環(huán)境因素是影響造模及其實驗結(jié)果的重要因素，居住條件、光照、噪聲、氨濃度、溫度、濕度、氣流速度等任何一項都不容忽視.營養(yǎng)因素對復制動物模型，特別是長期實驗，影響顯著，應予以重視。造模過程中應注意給水量充分和給予符合衛(wèi)生標準的飲水。動物實驗技術課件92（六）動物模型的制作1、制模前的準備工作。2、制模動物的選擇。3、制模材料的選擇。4、制模方法的確定。5、制模環(huán)境的確定。準備就緒，開始制模。動物實驗技術課件93

實驗準備工作就緒，接下來開始作動物實驗，下堂課講實驗過程中的基本技術和方法。動物實驗技術課件94第三講動物實驗中的基本技術和方法動物實驗技術課件95

第一節(jié)實驗動物的抓取與固定抓取與固定是動物實驗的一項基本技術，其目的是使動物保持在安靜的狀態(tài)下，順利地進行各項實驗。不同種類的動物的抓取與固定方法不盡一致。同種動物不同實驗目的、實驗內(nèi)容，抓取與固定方法也可以不同。不同實驗者的操作習慣上也存在差異。動物實驗技術課件96一、小鼠（一）、抓取用右手拇指和食指的指腹抓住尾部中央提起或用兩手捧起。動物實驗技術課件97（二）、固定1、徒手固定（1）將小鼠提起放在飼養(yǎng)盒蓋子上，輕輕向后拉住。（2）用左手拇指和食指抓住頸、背部中央皮膚。

動物實驗技術課件98（3）翻轉(zhuǎn)抓住頸背部的左手，右手拉住鼠尾再用左手的小指壓住尾根部，使整個小鼠呈一條直線。動物實驗技術課件992、固定板（器）固定

（1）將小鼠麻醉后，用細繩捆住小鼠四肢。（2）準備一個15-20cm，邊緣釘有5個釘子的方木板。（3）將四肢用細繩固定在木版兩側(cè)的釘子上，在上顎切齒處用細繩固定在木版前方的釘子上。動物實驗技術課件100

固定板固定適用于大多數(shù)動物手術。小鼠固定器適用于尾靜脈注射。動物實驗技術課件101二、大鼠和地鼠（一）抓取

1、

周齡較小的大鼠和地鼠，可以像小鼠一樣抓住尾部提起。

動物實驗技術課件1022、周齡較大的大鼠可張開左手虎口，迅速將拇、食指插入大鼠的腋下，虎口向前，其余三指及掌心握住大鼠身體中段，并將其保持仰臥位，然后調(diào)整左手拇指的位置，緊抵在下頜骨上即可進行實驗操作。動物實驗技術課件103注意：操作者第一次抓取大鼠時，最好戴防護手套；不能捉提尾尖，也不能長時間將大鼠懸在空中。

動物實驗技術課件104（二）固定1、徒手固定：對體重較小的大鼠可用拇指、食指捏住大鼠耳部及頸部皮膚，余下三指緊捏住背部皮膚，置于掌心，調(diào)整好大鼠在手中的姿勢即可進行實驗操作。如：灌胃、腹腔注射、肌肉注射、皮下注射等實驗。動物實驗技術課件1052、固定板固定：方法與小鼠固定板固定相同，只是需選擇更大一些的固定板。3、

固定器（盒）固定：方法與小鼠固定器（盒）固定相同，只是固定器較小鼠的大。同樣適用于大鼠尾靜脈注射。

動物實驗技術課件106三、豚鼠（一）抓取抓取幼齡豚鼠時，用兩手捧起；成熟豚鼠可以用左手大把抓起。動物實驗技術課件107

注意：

豚鼠性情溫和，一般不傷人，但膽小易驚，易造成自傷。抓取時，不能太粗野，更不能抓腰腹部，在操作過程中，如果豚鼠掙扎，手不要越握越緊，否則會造成豚鼠呼吸困難，甚至死亡。動物實驗技術課件108（二）固定1、徒手固定：用左手的食指和中指放在豚鼠頸背部兩側(cè)，拇指和無名指放在肋部，分別用手指挾住左右前肢抓起，然后反轉(zhuǎn)左手，用右手的拇指和無名指挾住右后肢，用中指和無名指挾住左后肢，使鼠體成為一條直線。動物實驗技術課件1092、固定板（器）固定：與大、小鼠，豚鼠固定板固定基本一致。

動物實驗技術課件110四、實驗兔（一）抓取抓住頸背部皮膚及兩耳提起，并用左手托住兔腹部或臀部，使其重量主要落在左手上。

動物實驗技術課件111

注意：

家兔溫順，一般不會咬人，但腳爪較銳利，要防止被抓傷。另外抓取時不能只提兔耳或四肢，也不能用單手只抓頸背部皮膚。動物實驗技術課件112（二）固定1、徒手固定：用一只手抓住兔的頸背部皮膚，另一只手抓住兔的兩后肢，固定在實驗臺上。動物實驗技術課件113

也可以坐在椅子上用一手抓住兔頸背皮膚和兩耳，大腿挾住兔的后半身，用另一只手抓住兩前肢將兔固定。此固定方法適用于腹腔、肌肉注射，及經(jīng)口給藥。動物實驗技術課件1142、固定盒固定：此固定方法適用于頭、耳部位實驗。動物實驗技術課件1153、固定板（臺）固定：此固定方法可使兔俯臥、仰臥或側(cè)臥固定，適宜于兔頭、頸、軀干手術及其它實驗操作。動物實驗技術課件116五、實驗犬（一）抓取對未經(jīng)馴服和調(diào)教的外購犬抓取時，可用特制的長柄鐵鉗夾住犬的頸部，由另一人用布帶或粗繩縛其嘴，并將布帶、繩固定在狗耳后頸部，防止脫落。

注意：狗性情兇惡、咬人，特別是對陌生人有攻擊性。對剛購入的狗要特別小心，避免被其咬傷。在縛嘴時，動作要迅速，捆綁松緊要適中。

動物實驗技術課件117（二）固定實驗臺固定：用特制的長柄鐵鉗夾住犬的頸部后，麻醉動物。將麻醉的犬放在實驗臺上，再用粗棉帶（繩）固定四肢于實驗臺上。并將犬舌拉出。此固定方法仰臥位適用于口腔、頸、胸、腹、四肢等部位的實驗，俯臥位適用于腦、背部位的實驗。

動物實驗技術課件118動物實驗技術課件119

不管采用哪種抓取與固定方法，都應遵守的基本原則是：1.保證實驗人員的安全。2.防止動物意外損傷，禁止采取粗暴的動作。因此在抓取與固定動物時，應了解動物的生活習性，生理解剖結(jié)構(gòu)，體重、體型，實驗內(nèi)容確定動物的抓取與固定方法。動物實驗技術課件120第二節(jié)

實驗動物的編號與標記動物實驗時，當使用的動物數(shù)或?qū)嶒灧纸M數(shù)大于1時，需要對動物個體間或組間區(qū)別開來，就需進行編號與標記。因此編號與標記的目的就是動物個體與組別的識別。SD大鼠動物實驗技術課件121

標記的方法很多，良好的標記方法應滿足：號碼清楚、持久、簡便易認和適用，不影響實驗結(jié)果，對動物的刺激小，標記物對動物無毒性。編號方法無定法，原則是使實驗者能夠識別動物個體和組別。現(xiàn)介紹幾種常用的標記和編號方法。動物實驗技術課件122染色法（一）染色法：是用化學試劑在動物身體明顯部位如被毛、四肢等處進行涂染，以涂染的部位或顏色來區(qū)別不同個體、組別，是動物實驗中最常用、最容易掌握的方法。動物實驗技術課件123家兔針刺法（二）針刺法：用人工針刺的方法，在動物無體毛或明顯部位，如耳、面鼻和四肢部位，拔去被毛，人工針刺號碼，刺后涂以酒精黑墨即可。此方法適用于兔及大、中型動物。動物實驗技術課件124（三）打耳孔法：用動物編號的耳孔機直接在動物耳朵上打孔或打成缺口編號，也可用剪刀將耳緣成缺口，根據(jù)孔或缺口的位置、數(shù)量來標記動物個體的方法。常用于實驗豬的標記。動物實驗技術課件125（四）標簽號牌法：用塑料、金屬或木等材料制成號牌固定在動物身體某一部位或飼養(yǎng)圈、籠上，以標識動物個體、組別的方法。如耳標簽、戴項圈、戴腳圈等。常用于大動物的標記。動物實驗技術課件126第三節(jié)實驗動物的給藥途徑與方法實驗動物的給藥方法主要有：注射法和胃腸給藥法兩種，此外還有用于皮膚的涂布給藥法和用于呼吸道的吸入給藥法。

裸鼠動物實驗技術課件127一.注射分為：皮內(nèi)注射、皮下注射、肌肉注射、腹腔注射、靜脈注射、腦膜下注射、腦內(nèi)注射、胸腔內(nèi)注射、腰椎內(nèi)注射、關節(jié)腔注射和心內(nèi)注射。

在實驗過程中，應根據(jù)實驗目的、動物種類、藥物類型選擇給藥途徑和方法，若是臨床前藥物的動物實驗，給藥方法應與人的給藥途徑一致。動物實驗技術課件128動物實驗技術課件129動物實驗技術課件130動物實驗技術課件131二.胃腸給藥法分為：自動口服給藥灌胃給藥直腸給藥。動物實驗技術課件132

表常用動物一次灌胃能耐受的最大容積*動物種類體重（g）最大容積小鼠>301.025-300.820-240.5大鼠>3008.0250-3006.0200-2494.0-5.0100-1993.0豚鼠>3006.0.250-3004.0-5.0家兔>35002002500-35001502000-2400100貓>3000100-1502500-300050-80犬10,000-15,000200-500動物實驗技術課件133動物實驗技術課件134第四節(jié)實驗動物血液和尿液的采集一．

動物血液的采集方法實驗動物血液的采集方法有很多。（一）按采血部位不同可分為：眼部采血、耳部采血、心臟采血、大血管采血及尾部采血等。

小香豬動物實驗技術課件135（二）按采血使用的手段不同可分為：鼠尾刺血、剪尾采血、眼眶靜脈叢采血、心臟采血、斷頭采血、頸靜（動）脈采血、腹主動（靜）脈采血、耳緣剪口采血、耳靜脈采血、后肢外側(cè)小隱靜脈、前肢內(nèi)側(cè)皮下頭靜脈采血、翼下采血等。采血時，應根據(jù)動物的種類，檢驗項目、方法及需采血量確定采血的部位和方法。動物實驗技術課件136動物實驗技術課件137動物實驗技術課件138動物實驗技術課件139動物實驗技術課件140表常用動物的最大安全采血量動物種類最大安全采血量（ml）最小致死采血量（ml）小鼠0.10.3

大鼠12

豚鼠510

家兔1040

狗50300

猴1560動物實驗技術課件141

二、

尿液采集（一）、代謝籠采集代謝籠的特點是能將動物排泄的大小便分開，達到采集尿液的目的。此法常用于大鼠、小鼠、豚鼠、兔等中小型動物的尿液采集。（二）、導尿法采集在動物的尿道或輸尿管內(nèi)插一根塑料導管采集尿液。此法適用于兔、犬、貓等。動物實驗技術課件142第五節(jié)實驗動物的麻醉方法實驗動物的麻醉就是用物理或化學的方法，使動物全身或局部暫時痛覺消失或遲鈍，以利于實驗操作。比格犬動物實驗技術課件143（一）全身麻醉：指麻醉藥通過呼吸道吸入，靜脈、肌肉或腹腔注射，使動物產(chǎn)生短時間的意識喪失，痛覺消失，肌肉松弛和反射抑制等中樞神經(jīng)系統(tǒng)抑制現(xiàn)象。分為吸入麻醉和注射麻醉。1．吸入麻醉指揮發(fā)性麻醉劑經(jīng)動物呼吸道吸入體內(nèi)從而產(chǎn)生麻醉效果的方法。常見的吸入麻醉劑有乙醚。一．麻醉類型及方法實驗動物的麻醉分為全身麻醉和局部麻醉兩種類型。動物實驗技術課件144（1）步驟與方法：

1）

準備容器:小型實驗動物:5000ml標本瓶1個,10ml試管或離心

管1個.如鼠類中型實驗動物:適當大小的玻璃箱1個,試管或離心管1個如貓、兔大體形動物:麻醉口罩.如犬

動物實驗技術課件1452）操作步驟:

放入揮發(fā)性麻醉劑----放入動物---密閉4-6分鐘---麻醉---實驗---小容器追加麻醉.

動物實驗技術課件146(2)吸入麻醉的注意事項：A、容器密封性。B、防止麻醉窒息和過量。C、適時追加麻醉。動物實驗技術課件1472.注射麻醉：通過注射的方法，將麻醉劑注入動物的體內(nèi)，使動物進入麻醉狀態(tài)的方法。常用的注射方法有靜脈注射、肌肉注射和腹腔注射等。動物實驗技術課件1481）準備器械:注射器（1）步驟與方法：動物實驗技術課件1492).注射麻醉方法：腹腔注射：固定動物---頭下位---腹部后1/3

處靠外側(cè)。靜脈注射：固定動物---血管---注射

肌肉注射：固定動物---肌肉發(fā)達---注射動物實驗技術課件150(2).注射麻醉的注意事項：

A、腹腔注射時使動物的頭處于低位，使內(nèi)臟向上腹移動，可避免注射時傷及內(nèi)臟。

B、靜脈注射必須緩慢，過快會引起麻醉意外。

C、肌肉注射應在肌肉較發(fā)達的部位注射，有利于麻醉劑的吸收。腹腔注射、肌肉注射和靜脈注射麻醉動物各有優(yōu)缺點，應根據(jù)麻醉劑的特性，動物解剖特點選擇方法簡單，麻醉效果好的注射方法。動物實驗技術課件151常用實驗動物全身麻醉藥及用法和劑量藥物適用動物給藥途徑給藥劑量（mg/kg）給藥體積（ml/kg）配制濃度（%）麻醉維持時間

戊巴比妥鈉大、小鼠腹腔453.8-7.51.2-0.62-4h，中途加1/5量，可延長麻醉時間1h以上。靜脈30

1.2-0.6豚鼠腹腔40-502.0-2.52靜脈30

犬、貓、兔腹腔40-501.4-1.73靜脈301.03綿羊靜脈30

3山羊靜脈30

3豬靜脈15

3猴靜脈35

3

動物實驗技術課件152速眠新ml/kg大、小鼠肌肉

0.3-0.8

1h-2h兔肌肉

0.2-0.3

雜種犬肌肉

0.1-0.15

純種犬肌肉

0.04-0.08

豬肌肉

0.1-0.15

羊肌肉

0.1-0.15

硫噴妥鈉小鼠腹腔50

115-30min靜脈25

1大鼠、地鼠腹腔405-101靜脈205-101豚鼠腹腔55

靜脈20

犬靜脈20-251.3-2.52貓靜脈281.3-2.52兔靜脈201.3-2.52豬〈45kg靜脈9-10

2豬〉45kg靜脈5

2猴靜脈25

腹腔60

動物實驗技術課件153鹽酸氯胺酮大、小鼠肌肉、腹腔22-44

10-20min貓、犬、猴肌肉10-40

豬肌肉10-15

氨基甲酸乙脂（烏拉坦大、小鼠肌肉、腹腔13507．020-252-4h兔、貓、犬靜脈750-10003-425直腸15006．025乙醚各種動物吸入

動物實驗技術課件154第六節(jié)動物實驗外科操作技術兔動物實驗技術課件155一．術前準備術前準備是否充分、周到是手術是否能夠順利完成的關鍵。術前準備工作很多，但主要包括手術動物的準備；手術器械的準備、手術時所用藥品的準備；手術室的準備。動物實驗技術課件156二．術中基本操作技術(一）

術部被毛的去除在實驗外科操作技術中，對已麻醉、固定就緒的動物首先要作的就是對術部被毛的去除，以免影響術部的消毒、手術操作和創(chuàng)口術后愈合。常用的被毛去除方法有剪毛法、剃毛法和脫毛法。動物實驗技術課件157

常用的脫毛劑配方：⑴配方1：硫化鈉8g溶于100ml水中。⑵配方2：硫化鈉∶肥皂粉∶淀粉的比例為

3∶1∶7，加水調(diào)成糊狀。⑶配方3：硫化鈉10g加生石灰15g溶于100ml

水中。⑷配方4：硫化鈉8g、淀粉7g、糖4g、甘油

5g、硼紗1g、水75g，共100g，調(diào)成糊狀。動物實驗技術課件158一．

術后護理影響動物手術成敗的因素很多，如動物的選擇、動物的健康狀況、麻醉、手術熟練程度、術后動物的護理等，其中術后護理至關重要。動物由于受到麻醉及手術的影響，使原來平衡的機體、機能狀態(tài)發(fā)生一系列的變化，機體的一些功能可能受到不同程度的影響。因此，為確保動物手術達到預期的目的，應對手術動物施以良好的術后護理，并對術后動物發(fā)生的各種情況作及時處理。動物實驗技術課件159(一)

術后動物的特點1．體溫下降：麻醉和手術都可使動物體溫有不同程度的降低。麻醉時間越長，下降越明顯。2．疼痛：動物蘇醒夠常見的問題是疼痛。動物因疼痛會出現(xiàn)行動異常、嘶叫、飲食異常、心率加快、循環(huán)衰竭等。動物實驗技術課件1603．

食欲下降或喪失：大部分手術后的動物因疼痛而食欲下降，有的動物因手術使采食功能喪失，如口腔內(nèi)手術。4.術部易感染：術后動物飼養(yǎng)在環(huán)境衛(wèi)生惡劣的室內(nèi)，極易引起術部感染。動物實驗技術課件161

(二）術后動物對環(huán)境的要求

術后動物對的飼養(yǎng)環(huán)境溫暖、清潔、安靜、光線柔和。

1、環(huán)境溫暖：麻醉和手術的動物體溫都有不同程度的下降，而低體溫休克是動物實驗后死亡的一個重要的原因，因此手術后動物飼養(yǎng)室溫宜高些，以25℃-30℃為佳。輔以清潔、柔軟的鋪墊物，也是手術后動物保溫的較好辦法。動物實驗技術課件162

2、環(huán)境衛(wèi)生：手術后動物飼養(yǎng)室的環(huán)境衛(wèi)生應達到或超過手術前動物對環(huán)境衛(wèi)生的要求標準。環(huán)境衛(wèi)生差，易引起動物手術部位的感染、化膿，甚至死亡。普通動物環(huán)境要求無塵粒、無蚊蠅，對環(huán)境常消毒，經(jīng)常更換動物的鋪墊物。動物室的通風設備運轉(zhuǎn)良好，室內(nèi)氨濃度不宜過高。

動物實驗技術課件1633、線柔和、無噪音：手術后動物室的光線宜暗淡些，切忌強光照明，若要觀察動物可借助手電筒或局部光源。術后觀察動物時，動作宜輕，嚴禁大聲喧嘩或出現(xiàn)尖銳的撞擊聲。動物實驗技術課件164

(三)術后動物的其它護理措施

術后未蘇醒的動物：1保持呼吸道的暢通，2、鎮(zhèn)痛3、獨籠飼養(yǎng)動物實驗技術課件165第七節(jié)實驗動物的處死方法C57小鼠動物實驗技術課件166處死實驗動物應遵循動物安樂死的基本原則。

安樂死是從人道主義和動物保護角度，在不影響實驗結(jié)果的同時，盡快使動物無痛苦死去的方法。動物實驗技術課件167

實驗動物處死方法很多，常用的安樂死方法有：1.頸椎脫臼法2.空氣栓塞法3.急性放血法4.斷頭法藥物法等動物實驗技術課件1681．頸椎脫臼法頸椎脫臼法常用于小鼠、大鼠，也用于沙鼠、豚鼠、兔。2．空氣栓塞法主要用于大動物的處死3.急性放血法常用于小鼠、大鼠、豚鼠、兔、貓、犬等。四.斷頭法主要適用于小鼠、大鼠等小動物。動物實驗技術