急性毒性實驗內(nèi)容

急性毒性試驗方法1整理ppt一、急性毒性

急性毒性指人或動物一次或24h之內(nèi)多次接觸外源化學(xué)物后，在短期內(nèi)所發(fā)生的毒性效應(yīng)，包括致死效應(yīng)。2整理ppt一次：指瞬間給實驗動物染毒，如經(jīng)口、經(jīng)靜脈注射染毒。24h之內(nèi)多次：指外源化學(xué)物毒性過低，需給予動物較大劑量。3整理ppt急性毒性效應(yīng)出現(xiàn)的快慢和毒性反應(yīng)的強度與外源化學(xué)物的性質(zhì)和染毒劑量的大小有關(guān)。如：丙烯腈，過氧化二碳酸二環(huán)己酯4整理ppt急性毒性試驗?zāi)康牧私馔庠椿瘜W(xué)物急性毒性的強度，求出LD50了解外源化學(xué)物毒作用的性質(zhì)、毒效應(yīng)的特征及可能的靶器官，初步評價外源化學(xué)物的危險性。探求外源化學(xué)物的劑量-反應(yīng)（效應(yīng)）關(guān)系，為亞慢性毒性、蓄積毒性和慢性毒性及特殊毒性試驗染毒劑量的設(shè)計和觀察指標的選擇提供參考。初步了解動物致死的原因，為研究毒作用的機制提供線索，進而為制定中毒急救治療措施提供依據(jù)。5整理ppt由急性毒性試驗可得到兩類毒性參數(shù)上限參數(shù)是以死亡為終點的毒性，包括絕對致死量、半數(shù)致死量、最小致死量、最大耐受量等；下限參數(shù)是以非致死性急性毒作用為終點的毒性，包括急性閾劑量和無作用劑量等。6整理ppt用小動物試驗可求出外源化學(xué)物對一種或幾種實驗動物的急性LD50或LC50;用大動物試驗可求出近似致死劑量（approximatelethaldose,ALD）;根據(jù)LD50（LC50）值可進行急性毒性分級，以初步評價外源化學(xué)物對機體急性毒性大小和急性毒作用的強度。7整理ppt急性毒性試驗項目急性半數(shù)致死量測定半數(shù)耐受限量測定7d喂養(yǎng)試驗其他：近似致死量試驗、固定劑量法、急性毒性分級法、階梯法、金字塔法、限量試驗、急性系統(tǒng)毒性試驗等。

8整理ppt急性毒性試驗設(shè)計實驗動物選擇品種品系個體性別年齡體重生理病理狀況對外源化學(xué)物毒性反應(yīng)與人近似；易于飼養(yǎng)管理，方便實驗操作；易于獲得，品系純化，價格低廉。原則9整理ppt實驗動物的年齡與體重的關(guān)系

動物大鼠小鼠豚鼠兔犬貓成年年齡（周）3223~43~43~4體重（克）150152501.5kg7~15kg1kg壽命（年）2~32~36~84~915~2010~1210整理ppt急性毒性試驗的動物體重大鼠120～150ｇ小鼠18～22ｇ豚鼠200～250ｇ家兔2～2.5kg犬10～15kg（成年）變異范圍不得超過所用動物平均體重的10％。11整理ppt急性毒性試驗的動物要求動物數(shù)量：小動物4～6組，每組至少10只；犬等大動物每組6只。性別：雌雄各半，也有例外，如，致畸試驗的劑量準備，只作雌性動物L(fēng)D50。年齡：剛成年，未曾受孕、交配12整理ppt實驗動物的標記染色法耳緣孔口法烙印法掛牌法13整理ppt染色法用不同顏色的染料涂擦于動物不同部位來表示不同號碼，適用于大鼠、小鼠和豚鼠。常用染料：3％～5％苦味酸酒精飽和液，呈黃色；甲基紫酒精飽和液，呈紫色；0.5％中性紅或品紅溶液，呈紅色等。14整理ppt實驗動物的標記方法一：按右前肢、右肋、右后肢、頸部、背中、尾根、左前肢、左肋、左后肢，順序編號為1～9號，不染色為10號。在動物相同部位涂染另一種顏色染料表示十位，兩種顏色可編1～99號。方法二：以頭部為1號，順時針方向依次從右耳、右前肢、右后肢、頸部、背中、尾根、左耳、左前肢、左后肢染色，分別為2～10號。615整理ppt16整理ppt染色法優(yōu)點：簡單方便，不痛苦，無損傷。缺點：時間較長時，染色劑易褪色；標記容易模糊不清。17整理ppt耳緣孔口法：

在耳緣先用針穿孔和用剪刀剪口，再用酒精墨汁涂抹，使黑色滲入孔口，傷口愈合后不易脫落，這種標號亦可標號１～９９。適用于大、小鼠。18整理ppt烙印法：將鑄鐵號碼加熱后，在動物體表部位燒烙，以破壞毛囊，留下印記。適用于大動物。掛牌法：用金屬或塑料制成號牌，固定在動物的耳部或系于其頸部。適用于較大動物。19整理ppt實驗動物分組目的：減少個體差異對實驗結(jié)果的影響；原則：按統(tǒng)計學(xué)原則隨機分組，使非處理因素最大限度地保持一致，提高每組實驗動物間的均衡性。常用方法：完全隨機和隨機區(qū)組20整理ppt完全隨機設(shè)計將實驗動物編號，從隨機數(shù)字表上任意橫行或縱行的任意數(shù)字開始，順序取下數(shù)字，標于每個動物號下，然后用計劃組數(shù)去除隨機數(shù)字，所得余數(shù)即為所屬組別。如將２０只動物分為４組，從隨機數(shù)字表的第１１行開始，順序?。玻皞€數(shù)字，用４除的余數(shù)即為組別。21整理ppt

20只動物的完全隨機分配

22整理ppt完全隨機分配后各組所屬動物號

23整理ppt20只動物完全隨機分配的結(jié)果24整理ppt

20只動物的完全隨機分配動物編號1234567891011121314151617181920隨即數(shù)字5483805390755378934772095466954468676786除4后余數(shù)23012312130122300332所屬組別二三四一二三一二一三四一二二三四四三三二25整理ppt完全隨機分配后各組所屬動物號

組別動物編號一47912二158132014三2610151819四311161726整理ppt20只動物完全隨機分配的結(jié)果組別動物編號一4791219

二1581314

三26101518

四31116172027整理ppt隨機區(qū)組設(shè)計將動物稱重，按體重順序依次排列編號，分成若干個區(qū)組，每一區(qū)組的動物體重相近，每一區(qū)組的動物數(shù)即為組數(shù)。再從隨機數(shù)字表上任意抄下隨機數(shù)字，依次標在每個動物的編號下，如欲將動物分為４組，則將每一區(qū)組動物編號下的隨機數(shù)字，按順序分別用４、３、２、１除之，根據(jù)余數(shù)大小將動物分入各組。28整理ppt原則是余數(shù)即為所屬組別，余數(shù)0屬最后一組。當(dāng)同一區(qū)組中有相同余數(shù)時，非0余數(shù)按順序分配至未分配動物的首位組，而0余數(shù)則按順序分配至未分配動物的末尾組。如下表第一區(qū)組中，第一個余數(shù)是0，將1號大鼠分到第4組；第2個余數(shù)為1，2號大鼠分到第1組；第3個余數(shù)仍為1，未分配動物的第2組居首位，故將3號大鼠分到第2組；余下4號大鼠則分到第3組。優(yōu)點：各組的動物數(shù)目相等，動物平均體重相近，可以減少實驗誤差；動物數(shù)目較多時比完全隨機法快。29整理ppt20只小鼠按隨機區(qū)組設(shè)計分組表

30整理ppt隨機分配到各組的動物31整理ppt

劑量選擇及分組劑量選擇廣泛查閱文獻資料，估計毒性中值預(yù)試，求出待測化學(xué)物0%~100%或

10%~90%的大致致死劑量范圍設(shè)計正式試驗的劑量和分組

32整理ppt劑量分組i＝lgLD100-lgLD0/n-1或i＝lgLD90-lgLD10/n-1n：設(shè)計的劑量組數(shù)i：組距，相鄰兩個劑量組對數(shù)劑量之差33整理ppt受試物的配制溶劑的選擇配制方法等容量稀釋等濃度稀釋34整理ppt受試物的配制等容量稀釋：要求不同劑量組實驗動物單位體重所給受試物的體積相同時，就將受試物配成不同濃度。等比稀釋法（1：k）等濃度稀釋：將受試化學(xué)物配成一種濃度，不同劑量組實驗動物單位體重所給受試化學(xué)物的體積不同。35整理ppt試驗期限及觀察指標觀察期限為7~14d求LD50時，目前國內(nèi)外一般要求計算實驗動物接觸外源化學(xué)物后14d內(nèi)的總死亡數(shù)對于速發(fā)性死亡的化學(xué)物也可只計算24h的死亡數(shù)，如久效磷24h與14d的LD50沒有差別36整理ppt觀察指標中毒癥狀：確定靶器官①行動：不安定、多動、發(fā)聲；②神經(jīng)系統(tǒng)反應(yīng)：舉尾、振顫、痙攣、運動失調(diào)、姿態(tài)異常；③自主神經(jīng)系統(tǒng)反應(yīng)：眼球突出、流涎、流淚、排尿、下瀉、豎毛、皮膚變色、呼吸。體重：隔日測量死亡和死亡時間病理學(xué)檢查及其他指標

37整理pptLD50的計算LD50測定是以動物死活為指標的質(zhì)反應(yīng)，當(dāng)死亡呈正態(tài)分配時，一般具有以下特點：劑量對數(shù)值與動物死亡頻數(shù)之間為正態(tài)分布曲線關(guān)系；劑量對數(shù)值與死亡率之間為正“S”型曲線；從實驗數(shù)據(jù)可計算LD50以外的其它信息。38整理ppt對數(shù)劑量劑量曲線：中間高、兩側(cè)低，右側(cè)延長較遠正態(tài)曲線中點中點39整理ppt計算LD50的常用方法:概率單位法Bliss法改良寇氏（K?rber）法等40整理pptLD50的計算公式41整理ppt校正公式42整理pptLD50的標準誤43整理pptLD50的95%可信限LD50的95%可信限=log-1(logLD50±1.96×Sx50)44整理ppt

i—組距，即相鄰兩組劑量對數(shù)劑量之差Xm—最大劑量對數(shù)P—各劑量組死亡率(死亡率均用小數(shù)表示)Pm—最高死亡率q—各劑量組存活率，q=1-pPn—最低死亡率∑p—各劑量組死亡率之和n—各組動物數(shù)Sx50—logLD50的標準誤45整理ppt寇氏原法：要求最小劑量的反應(yīng)率（P）為0％，最大劑量反應(yīng)率（P）為100％，結(jié)果才精確。改良寇氏法只要求在最小劑量時P≤0.2，最大劑量p≥0.8即可。還要求每個劑量組的組間距呈等比或劑量對數(shù)等差，每個劑量組動物數(shù)相等，中間劑量接近于LD50。46整理ppt

九靈胃康在小鼠的經(jīng)口急性毒性試驗結(jié)果

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LD50=log-1[0.8859-0.11(2.8-0.5)]=log-10.6329=4.29（g/kg）Sx50=0.0307

logLD50及其95%可信限=0.6329±1.96×0.0307=0.6329±0.0602小鼠的經(jīng)口LD50為4.29g/kg，其95%可信范圍為3.74~4.93g/kg48整理ppt

急性毒性評價外源化學(xué)物相對毒性分級標準

49整理ppt急性毒性分級（WHO）50整理ppt魚類急性毒性分級51整理pptLD50的局限性消耗動物量大獲得的信息有限動物死亡和觀察的癥狀不足以反應(yīng)生理學(xué)、血液學(xué)和其它化驗檢查所提供的毒性信息有許多因素影響LD50值的測定，實際上測得的LD50是近似值

52整理pptLD50所表達的是50%動物存活與50%動物死亡的點劑量，是一個質(zhì)的現(xiàn)象，而在實際工作中，往往發(fā)現(xiàn)有些外源化學(xué)物用同一物種、同一品系的實驗動物、用相同染毒條件所得到的LD50值相同或相似，但其毒作用帶或致死劑量范圍卻有明顯的不同，表明化學(xué)物的實際毒性存在差異。53整理ppt急性毒性試驗不等于LD50測定可用少量動物測定ALD，