乙肝表面抗原及乙肝兩對(duì)半檢測(cè)

乙肝表面抗原及乙肝兩對(duì)半檢測(cè)第一頁(yè)，共三十六頁(yè)，2022年，8月28日主要內(nèi)容檢測(cè)方法及原理膠體金免疫層析法

酶免疫技術(shù)免疫定量分析法結(jié)果判斷及臨床意義注意事項(xiàng)第二頁(yè)，共三十六頁(yè)，2022年，8月28日檢測(cè)的方法及原理第三頁(yè)，共三十六頁(yè)，2022年，8月28日檢測(cè)方法及原理膠體金免疫層析法Part1膠體金免疫層析法

將特異性的抗原或抗體以條帶狀固定在膜上，膠體金標(biāo)記試劑（抗體或單克隆抗體）吸附在結(jié)合墊上，當(dāng)待檢樣本加到試紙條一端的樣本墊上后，通過(guò)毛細(xì)作用向前移動(dòng)，溶解結(jié)合墊上的膠體金標(biāo)記試劑后相互反應(yīng)，再移動(dòng)至固定的抗原或抗體的區(qū)域時(shí)待檢物與金標(biāo)試劑的結(jié)合物又與之發(fā)生特異性結(jié)合而被截留，聚集在檢測(cè)帶上，可通過(guò)肉眼觀察到顯色結(jié)果。第四頁(yè)，共三十六頁(yè)，2022年，8月28日檢測(cè)方法及原理膠體金免疫層析法Part2酶免疫技術(shù)

以酶標(biāo)記的抗體（或抗原）作為主要試劑，將抗原抗體的特異性和酶高效催化反應(yīng)的專(zhuān)一性相結(jié)合的一種免疫檢測(cè)技術(shù)。酶結(jié)合物既保留抗體（或抗原）的免疫學(xué)活性，又保留酶對(duì)底物的催化活性。特點(diǎn)：靈敏度高、特異性強(qiáng)、準(zhǔn)確性好、試劑穩(wěn)定、方法簡(jiǎn)便易行第五頁(yè)，共三十六頁(yè)，2022年，8月28日檢測(cè)方法及原理Part2兩對(duì)半ELISA檢測(cè)原理

ELISA是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的高效催化作用相結(jié)合起來(lái)的一種敏感性很高的試驗(yàn)技術(shù)。由于抗原、抗體的反應(yīng)在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進(jìn)行，每加入一種試劑孵育后，可通過(guò)洗滌除去多余的游離反應(yīng)物，從而保證試驗(yàn)結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性。在實(shí)際應(yīng)用中，通過(guò)不同的設(shè)計(jì)，具體的方法步驟可有多種。即:用于檢測(cè)抗體的間接法、用于檢測(cè)抗原的雙抗體夾心法以及用于檢測(cè)小分子抗原或半抗原的抗原競(jìng)爭(zhēng)法等等。比較常用的是ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法。第六頁(yè)，共三十六頁(yè)，2022年，8月28日檢測(cè)方法及原理Part2兩對(duì)半ELISA檢測(cè)原理

1

HBsAg：雙抗體夾心法——正比

單克隆HBsAb－HBsAg－多克隆HBsAb－HRP

2

HBsAb：雙抗原夾心法

——正比

HBsAg－HBsAb－HBsAg－HRP第七頁(yè)，共三十六頁(yè)，2022年，8月28日檢測(cè)原理Part2兩對(duì)半ELISA檢測(cè)原理3HBeAg：雙抗體夾心法

——正比

單克隆HBeAb－HBeAg－多克隆HBeAb－HRP4HBeAb：競(jìng)爭(zhēng)抑制法

——反比

多克隆HBeAb－HBeAg－HBeAb－HRP/HBeAb（標(biāo)本）5HBcAb：競(jìng)爭(zhēng)抑制法

——反比

HBcAg－HBcAb－HRP/HBcAb（標(biāo)本）第八頁(yè)，共三十六頁(yè)，2022年，8月28日檢測(cè)方法及原理Part3免疫定量分析方法

近年來(lái)，隨著抗病毒藥物的不斷問(wèn)世，以及抗病毒藥物療效與乙肝病毒及其血清標(biāo)志物水平之間關(guān)系的相關(guān)研究不斷深入，單純HBsAg定性檢測(cè)在療效的監(jiān)測(cè)，特別是根據(jù)其早期變化對(duì)遠(yuǎn)期療效進(jìn)行預(yù)測(cè)方面，顯得越來(lái)越難以滿足要求。而且，很多學(xué)者對(duì)一些新藥上市注冊(cè)臨床試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，HBsAg的定量檢測(cè)在抗病毒治療療效的監(jiān)測(cè)方面確有非常重要的意義。因此，HBsAg的定量檢測(cè)就顯得十分重要。第九頁(yè)，共三十六頁(yè)，2022年，8月28日檢測(cè)方法及原理Part3免疫定量分析方法

要想完成HBsAg定量檢測(cè)，必須滿足以下條件：①采用自動(dòng)分析系統(tǒng)，②有可溯源的標(biāo)準(zhǔn)品，③測(cè)定結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)品之間有線性關(guān)系。第十頁(yè)，共三十六頁(yè)，2022年，8月28日檢測(cè)方法及原理Part3免疫定量分析方法

化學(xué)發(fā)光技術(shù)是近二十年來(lái)發(fā)展非常迅速的非放射性免疫分析技術(shù)。

化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定（ChemiluminesentImmunoassay，CLIA）是免疫測(cè)定技術(shù)繼酶免技術(shù)（EIA）、放免技術(shù)（RIA）、熒光免疫技術(shù)（FIA）之后發(fā)展的一項(xiàng)新興測(cè)定技術(shù)。由于這種測(cè)定具備很高的特異性和很小的干擾，因此，如同RIA、FIA等一樣利用免疫反應(yīng)的特異性和化學(xué)發(fā)光本身的信號(hào)特異性形成了目前所說(shuō)的化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定（CLIA）技術(shù)。第十一頁(yè)，共三十六頁(yè)，2022年，8月28日檢測(cè)方法及原理Part3免疫定量分析方法

原理：化學(xué)發(fā)光免疫分析儀是通過(guò)檢測(cè)患者血清從而對(duì)人體進(jìn)行免疫分析的醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)儀器。將定量的患者血清和辣根過(guò)氧化物（HRP）加入到固相包被有抗體的白色不透明微孔板中，血清中的待測(cè)分子與辣根過(guò)氧化物酶的結(jié)合物和固相載體上的抗體特異性結(jié)合。分離洗滌未反應(yīng)的游離成分。然后，加入魯米諾Luminol發(fā)光底液，利用化學(xué)反應(yīng)釋放的自由能激發(fā)中間體，從基態(tài)回到激發(fā)態(tài)，能量以光子的形式釋放。此時(shí)，將微孔板置入分析儀內(nèi)，通過(guò)儀器內(nèi)部的三維傳動(dòng)系統(tǒng)，依次由光子計(jì)數(shù)器讀出各孔的光子數(shù)。樣品中的待測(cè)分子濃度根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品建立的數(shù)學(xué)模型進(jìn)行定量分析。最后，打印數(shù)據(jù)報(bào)告，以輔助臨床診斷。第十二頁(yè)，共三十六頁(yè)，2022年，8月28日方法步驟

實(shí)驗(yàn)步驟備注：因各廠家生產(chǎn)試劑操作方法不同，故參見(jiàn)試劑盒說(shuō)明書(shū)第十三頁(yè)，共三十六頁(yè)，2022年，8月28日結(jié)果判斷及臨床意義一、結(jié)果判斷第十四頁(yè)，共三十六頁(yè)，2022年，8月28日結(jié)果判斷Part1膠體金免疫層析法結(jié)果判斷

以艾康生物檢測(cè)試劑盒為例：陽(yáng)性（+）：兩條紅色條帶出現(xiàn)，一條位于測(cè)試區(qū)（T）內(nèi)，另一條位于質(zhì)控區(qū)（C）。陽(yáng)性結(jié)果表明：標(biāo)本中含有待測(cè)物質(zhì)。陰性（-）：僅質(zhì)控區(qū)（C）出現(xiàn)一條紅色條帶，在測(cè)試區(qū)（T）內(nèi)無(wú)紅色條帶出現(xiàn)。陰性結(jié)果表明：標(biāo)本中檢測(cè)不出待測(cè)物質(zhì)。無(wú)效：質(zhì)控區(qū)（C）未出現(xiàn)紅色條帶，表明不正確的操作過(guò)程或試紙條已變質(zhì)損壞。在任何情況下，應(yīng)重新測(cè)試。如果問(wèn)題仍然存在，應(yīng)立即停止使用此批號(hào)產(chǎn)品，并與當(dāng)?shù)毓?yīng)商聯(lián)系。注意：測(cè)試區(qū)（T）內(nèi)的紅色條帶可顯現(xiàn)出顏色深淺的現(xiàn)象。但是，在規(guī)定的觀察時(shí)間內(nèi)，不論該色帶顏色深淺，即使只有非常弱的色帶也應(yīng)判為陽(yáng)性結(jié)果。第十五頁(yè)，共三十六頁(yè)，2022年，8月28日結(jié)果判斷Part1膠體金免疫層析法結(jié)果判斷陽(yáng)性（+）：僅質(zhì)控區(qū)（C）出現(xiàn)一條紅色條帶，在測(cè)試區(qū)（T）內(nèi)無(wú)紅色條帶出現(xiàn)。陽(yáng)性結(jié)果表明：標(biāo)本中含有待測(cè)抗體。弱陽(yáng)性（+）：質(zhì)控區(qū)（C）出現(xiàn)一條紅色條帶，在測(cè)試區(qū)（T）內(nèi)有非常弱的紅色條帶出現(xiàn)。弱陽(yáng)性結(jié)果表明：標(biāo)本中含有少量待測(cè)抗體。陰性（-）：兩條紅色條帶出現(xiàn)，一條位于測(cè)試區(qū)（T）內(nèi)，另一條位于質(zhì)控區(qū)（C）。陰性結(jié)果表明：標(biāo)本中檢測(cè)不出待測(cè)抗體。無(wú)效：質(zhì)控區(qū)（C）未出現(xiàn)紅色條帶，表明不正確的操作過(guò)程或試紙條已變質(zhì)損壞。在任何情況下，應(yīng)重新測(cè)試。如果問(wèn)題仍然存在，應(yīng)立即停止使用此批號(hào)產(chǎn)品，并與當(dāng)?shù)毓?yīng)商聯(lián)系。第十六頁(yè)，共三十六頁(yè)，2022年，8月28日結(jié)果判斷Part2酶免疫技術(shù)

以上海科華試劑盒為例：1HBsAg：COV=陰性對(duì)照平均OD值+0.1樣本OD值/COV值≥1.0為陽(yáng)性樣本OD值/COV值＜1.0為陰性2HBsAb、HBeAg：COV=陰性對(duì)照平均OD值×2.1（OD＜0.05按0.05計(jì)算）當(dāng)樣本OD值≥COV值為陽(yáng)性當(dāng)樣本OD值＜COV值為陰性第十七頁(yè)，共三十六頁(yè)，2022年，8月28日結(jié)果判斷Part2酶免疫技術(shù)

3

HBeAb：COV＝（陰性對(duì)照平均OD值＋陽(yáng)性對(duì)照平均OD值）×0.5

標(biāo)本OD值≥COV為陰性，＜COV為陽(yáng)性4HBcAb：原倍血清COV＝陰性對(duì)照平均OD值×0.31:30稀釋血清COV＝陰性對(duì)照平均OD值×0.5

標(biāo)本OD值≥COV為陰性，＜COV為陽(yáng)性第十八頁(yè)，共三十六頁(yè)，2022年，8月28日二、臨床意義第十九頁(yè)，共三十六頁(yè)，2022年，8月28日臨床意義

第二十頁(yè)，共三十六頁(yè)，2022年，8月28日臨床意義

第二十一頁(yè)，共三十六頁(yè)，2022年，8月28日臨床意義

HBsAg的定量檢測(cè)是目前監(jiān)測(cè)和預(yù)測(cè)抗乙肝病毒治療后應(yīng)答的新工具，結(jié)合HBVDNA及乙肝病毒e抗原（HBeAg）的陰轉(zhuǎn)和血清轉(zhuǎn)換，我們能更準(zhǔn)確地預(yù)測(cè)患者的近期和遠(yuǎn)期抗病毒治療的療效。因此，該檢測(cè)已在臨床上得以廣泛開(kāi)展，特別是被用于判定抗病毒治療療效，以及根據(jù)早期下降的速度和幅度來(lái)預(yù)測(cè)遠(yuǎn)期療效及決定療程上。第二十二頁(yè)，共三十六頁(yè)，2022年，8月28日臨床意義

聚乙二醇干擾素（PegIFN）α-2a治療乙肝患者的研究結(jié)果顯示，治療12周時(shí)HBsAg定量<1500IU/ml的患者（約占治療人群的32%），治療結(jié)束停藥1年時(shí)HBeAg血清轉(zhuǎn)換率可高達(dá)51%（66/129例），治療12周時(shí)HBsAg定量處于1500~20000IU/ml的患者（約占治療人群的52%），停藥1年時(shí)的HBeAg血清轉(zhuǎn)換率也能達(dá)到32%（53/166例），與之相反，如果治療12周后患者的HBsAg定量仍>20000IU/ml（約占治療人群的16%）,則治療結(jié)束停藥1年時(shí)的HBeAg血清轉(zhuǎn)換率僅為19%（8/43例）。

第二十三頁(yè)，共三十六頁(yè)，2022年，8月28日臨床意義

此外，研究還發(fā)現(xiàn)，患者治療后HBsAg下降速度和幅度還與其長(zhǎng)期清除率有關(guān)。在治療24周HBsAg<1500IU/ml且同時(shí)出現(xiàn)HBeAg血清轉(zhuǎn)換的患者中，有20%可獲得HBsAg清除。因此，HBsAg定量可以用于指導(dǎo)治療。而且，治療結(jié)束時(shí)HBsAg水平越低，停藥后隨訪的HBsAg清除率越高。第二十四頁(yè)，共三十六頁(yè)，2022年，8月28日臨床意義

布魯內(nèi)托（Brunetto）研究顯示，無(wú)論是HBeAg（+）還是HBeAg（-）的慢性乙肝患者，在接受干擾素治療48周后，若其HBsAg定量<10IU/ml（占12%，23/194例），則停藥隨訪3年的HBsAg消失率可達(dá)52%（12/23例）；與之相反，如果HBsAg定量結(jié)果>10IU/ml（占88%，171/194例），隨訪3年，僅有2%（4/174例）的患者出現(xiàn)HBsAg消失。同樣，治療48周時(shí)HBsAg下降>2log的患者，隨訪3年，HBsAg消失率高達(dá)42%；下降<2log患者中，僅有3%的HBsAg消失。因此，在治療結(jié)束時(shí)，對(duì)于那些HBVDNA陰轉(zhuǎn)并出現(xiàn)HBeAg血清轉(zhuǎn)換的患者，如果HBsAg水平下降不明顯，可考慮延長(zhǎng)療程，以進(jìn)一步提高HBeAg血清轉(zhuǎn)換率和HBsAg清除率。第二十五頁(yè)，共三十六頁(yè)，2022年，8月28日臨床意義檢測(cè)模式分析Part4檢測(cè)結(jié)果模式分析HBsAgHBsAbHBeAgHBeAbHBcAbPreS1AgPreS1Ab簡(jiǎn)要意義乙肝表面抗原乙肝表面抗體乙肝E抗原乙肝E抗體乙肝核心抗體乙肝前S1抗原乙肝前S1抗體HBsAg陽(yáng)性提示乙肝攜帶；HBeAg、pre-S1Ag、陽(yáng)性提示病毒復(fù)制,傳染性強(qiáng)；HBsAb、HBeAb陽(yáng)性提示機(jī)體具備免疫力，趨于恢復(fù)，pre-S1Ab陽(yáng)性提示肝細(xì)胞有阻斷乙肝病毒感染的功能。-------沒(méi)有乙肝病毒感染，不具備免疫力。-+-----接種疫苗，乙肝恢復(fù)，具備免疫力。------+急性乙肝恢復(fù)或接種進(jìn)口疫苗，具備免疫力。-+----+接種疫苗或少量乙肝病毒感染后恢復(fù)，免疫力強(qiáng)。+------表面抗原攜帶；急性乙肝病毒感染潛伏期后期。+-+--+-急性乙肝早期，病毒復(fù)制，有傳染性。+-+-++-急慢性乙肝，病毒復(fù)制，有傳染性（即大三陽(yáng)）。+-+-+-+急慢性乙肝，恢復(fù)期或治療有效，有傳染性。+---+--急慢性乙肝，傳染性弱或沒(méi)有傳染性。第二十六頁(yè)，共三十六頁(yè)，2022年，8月28日臨床意義HBsAgHBsAbHBeAgHBeAbHBcAbPreS1AgPreS1Ab簡(jiǎn)要意義乙肝表面抗原乙肝表面抗體乙肝E抗原乙肝E抗體乙肝核心抗體乙肝前S1抗原乙肝前S1抗體HBsAg陽(yáng)性提示乙肝攜帶；HBeAg、pre-S1Ag、陽(yáng)性提示病毒復(fù)制,傳染性強(qiáng)；HBsAb、HBeAb陽(yáng)性提示機(jī)體具備免疫力，趨于恢復(fù)，pre-S1Ab陽(yáng)性提示肝細(xì)胞有阻斷乙肝病毒感染的功能。+---++-急慢性乙肝，病毒復(fù)制有傳染性，乙肝E抗原變異。+--++--急慢性乙肝，沒(méi)有傳染性或傳染性弱（即小三陽(yáng)）。+--++-+急慢性乙肝或乙肝治療后恢復(fù)期，傳染性弱。+--+++-急慢性乙肝，病毒復(fù)制有傳染性，乙肝E抗原變異。----+--乙肝核心抗隱性攜帶，有乙肝既往有感染史。---++--急性乙肝恢復(fù)期或既往有感染史。-+-++-+乙肝恢復(fù)期或急性乙肝既往有輕度乙肝病毒感染史。+--+---慢乙肝病毒感染攜帶，傳染性弱或沒(méi)有傳染性。+-++++-急性乙肝趨于恢復(fù)，乙肝攜帶，病毒復(fù)制有傳染性。-----+-提示乙肝病毒早期感染，有傳染性，建意檢測(cè)HBV-DNA。第二十七頁(yè)，共三十六頁(yè)，2022年，8月28日臨床意義

一、何謂PreS1Ag？

PreS1Ag是乙型肝炎病毒基因組前S1區(qū)編碼的前蛋白，具有很強(qiáng)的免疫原性，是病毒表面抗原(HBsAg)的組成成分。它只存在于具有傳染性的完整的乙肝病毒顆粒上，是黏附和侵襲人體肝細(xì)胞的主要因子。

第二十八頁(yè)，共三十六頁(yè)，2022年，8月28日臨床意義

二、檢測(cè)PreS1Ag的意義

1.PreS1Ag的檢測(cè)能夠彌補(bǔ)乙肝五項(xiàng)檢測(cè)的不足

①PreS1Ag出現(xiàn)在急性乙肝感染的最早期，在轉(zhuǎn)氨酶升高前，即可查出，是早期診斷乙肝病毒感染的標(biāo)志。

②急性乙肝PreS1Ag轉(zhuǎn)陰越早，預(yù)后越好，提示病毒清除和病情好轉(zhuǎn)。反之，PreS1Ag持續(xù)陽(yáng)性，則提示將發(fā)展成慢性肝炎。

③抗HBe(＋)慢性乙肝約占慢肝的30%—50%，檢測(cè)PreS1Ag(＋)，提示病毒在機(jī)體內(nèi)繼續(xù)復(fù)制，具有傳染性，患者容易演變?yōu)楦斡不蚋伟?。加查PreS1Ag，彌補(bǔ)了因HBeAg的缺失造成的診治困難。

④在乙肝無(wú)癥狀攜帶者中，有一定比例HBeAb(＋)者，如果PreS1Ag(＋)可反映出病毒并沒(méi)有被清除，在體內(nèi)復(fù)制仍然活躍，肝臟存在潛在的病理?yè)p傷。

⑤抗病毒治療，檢測(cè)PreS1Ag可作為治療前的患者篩查(適應(yīng)癥)和治療后的療效判斷。

第二十九頁(yè)，共三十六頁(yè)，2022年，8月28日臨床意義

2.PreS1Ag檢測(cè)能夠加強(qiáng)HBV—DNA檢測(cè)的作用

①因病毒基因變異的影響，個(gè)別病毒變異株感染的患者HBV—DNA檢測(cè)為陰性，PreS1Ag的檢測(cè)可以防止漏檢，并提示可能存在病毒變異?ài)E象。

②PreS1Ag是免疫測(cè)定技術(shù)，具有快速、直接、簡(jiǎn)便的特點(diǎn)。PreS1Ag的檢測(cè)與HBV—DNA檢測(cè)在乙肝的診斷方面相互補(bǔ)充和加強(qiáng)，就像HBV—DNA不能替代乙肝五項(xiàng)的檢測(cè)一樣，同樣HBV—DNA不能替代PreS1Ag的檢測(cè)。第三十頁(yè)，共三十六頁(yè)，2022年，8月28日臨床意義

三、何謂PreS1Ab？

是HBV的中和抗體，能阻止HBV侵入肝細(xì)胞，抗-PreS1Ab在急性期和恢復(fù)早期出現(xiàn)，預(yù)示病毒正在或已被清除，疾病預(yù)后良好。乙型肝炎病毒前S1抗體可作為急性乙型肝炎臨床預(yù)后早期診斷的血清學(xué)指標(biāo)。第三十一頁(yè)，共三十六頁(yè)，2022年，8月28日臨床意義

四、PreS1Ab意義：

1．前S1抗體是急性HBV感染最早期出現(xiàn)的抗體比HBsAb和抗HBcIgM出現(xiàn)早，起到了臨床預(yù)后早期診斷的作用。前S1抗體出現(xiàn)提示預(yù)后良好。前S1抗體參與病毒的清除，前S1抗原/抗體的反轉(zhuǎn)預(yù)示疾病將進(jìn)入恢復(fù)期，急性乙型肝炎患者前S1抗原陰轉(zhuǎn)越早，前S1抗體陽(yáng)轉(zhuǎn)越早預(yù)后越好。

2．對(duì)慢性乙型肝炎患者長(zhǎng)期動(dòng)態(tài)、隨訪出現(xiàn)血清前S1抗體陽(yáng)性者，HBVDNA陰轉(zhuǎn)率顯著增高或HBVDNA含量顯著下降，預(yù)示疾病恢復(fù)良好。

3．乙型肝炎病毒前S1抗體可作為臨床抗病毒療效疾病預(yù)后的血清學(xué)指標(biāo)。

4．總之，乙型肝炎患者前S1抗體出現(xiàn)與否，與病程的進(jìn)展以及預(yù)后有較密切的關(guān)聯(lián)。前S1抗體的檢測(cè)對(duì)乙肝的診斷及治療有較為重要的臨床意義。第三十二頁(yè)，共三十六頁(yè)，2022年，8月28日三、注意事項(xiàng)第三十三頁(yè)，共三十六頁(yè)，2022年，8月28日注意事項(xiàng)

1標(biāo)本采集與處理的影響標(biāo)本收集后應(yīng)盡快分離出血清或血漿以避免溶血。檢測(cè)時(shí)應(yīng)盡量使用新鮮的標(biāo)本。標(biāo)本若不能及時(shí)送檢，可在2℃-8℃冷藏3天。長(zhǎng)期保存需冷凍于-20℃，忌反復(fù)凍融。標(biāo)本嚴(yán)重溶血及混有紅細(xì)胞的血清易沉淀或附著在聚乙烯孔內(nèi)不易洗凈，殘留在孔內(nèi)的血紅蛋白具有過(guò)氧化物酶樣的活性，催化底物顯色造成假陽(yáng)性。標(biāo)本凝固不全，正常血液采集后1/2-2h