衛(wèi)生微生物實(shí)驗(yàn)2

實(shí)驗(yàn)二致病微生物檢測(cè)

一、食品中病原菌的檢測(cè)

★食品中病原菌可造成兩種危害：一是食品本身的變質(zhì)；二是引起食源性疾病，危害食用者健康?！锍Ｒ?jiàn)的引起食物中毒的病原菌有：沙門菌、副溶血性弧菌、葡萄球菌、大腸埃希菌以及肉毒桿菌等等。★通過(guò)本次實(shí)驗(yàn)主要掌握葡萄球菌的檢測(cè)方法。▲食品中葡萄球菌檢測(cè)★葡萄球菌屬（Staphylococcus）包括多種葡萄球菌，革蘭染色陽(yáng)性。金黃色葡萄球菌可產(chǎn)生腸毒素，引起葡萄球菌食物中毒。此類中毒在我國(guó)較多見(jiàn)，僅次于沙門菌和副溶血性弧菌食物中毒。引起中毒的常見(jiàn)食物是乳及乳制品、蛋及蛋制品、各類熟肉制品，其次為含有乳制品的冷凍食品及含淀粉較高的米飯和糕點(diǎn)等。

▲食品中葡萄球菌檢測(cè)1.標(biāo)本采集及運(yùn)送（1）所采樣品應(yīng)具有代表性。（2）采樣必須用滅菌器具，嚴(yán)格執(zhí)行無(wú)菌操作（3）樣品可分為大、中、小樣三類。（4）根據(jù)食品的種類不同用不同的采樣方法。（5）樣品采集后應(yīng)立即送檢，一般不應(yīng)超過(guò)3h?！称分衅咸亚蚓鷻z測(cè)2.材料和試劑（1）樣品：可疑污染食物（米粉）（2）培養(yǎng)基：肉湯增菌液、普通平板、羊血平板、S-OF葡萄糖（3）試劑：3％H2O2

▲食品中葡萄球菌檢測(cè)3.檢驗(yàn)方法（1）增菌培養(yǎng)：將標(biāo)本25g加入裝有225ml緩沖蛋白胨水的500ml廣口瓶中。制成1：10稀釋液于36℃±1℃培養(yǎng)4小時(shí)，移取10ml接種于肉湯增菌液內(nèi)，于35℃培養(yǎng)24h。（2）稀釋：吸取0.5ml稀釋菌液注入4.5ml滅菌水試管中，混勻成1：100稀釋液。按此法依次稀釋成1：1000、1：10000稀釋液備用。

▲食品中葡萄球菌檢測(cè)

（3）分離：加適量菌液于平板表面，然后用滅菌的L型玻璃棒反復(fù)涂布幾次，使菌液均勻分布在平板表面，35℃孵育18～24h。（4）菌落觀察：在普通平板上形成2～3mm，光滑、完整、稍隆起、半透明，金黃色色素或橙色的圓形菌落；在羊血平板上金黃色葡萄球菌菌落周圍有透明溶血環(huán)?！称分衅咸亚蚓鷻z測(cè)（5）生化反應(yīng)1）觸酶試驗(yàn)2）葡萄球菌氧化發(fā)酵試驗(yàn)（S-OF）（6）血清學(xué)試驗(yàn)（凝固酶試管法）（7）結(jié)果報(bào)告：綜合上述檢驗(yàn)結(jié)果，對(duì)食品中葡萄球菌作出菌種判斷，并報(bào)告結(jié)果。二、空氣中溶血性鏈球菌的檢測(cè)

★空氣中缺乏維持細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖所必需的營(yíng)養(yǎng)物，加上日光的影響，故空氣中的細(xì)菌數(shù)很少。主要來(lái)源于人群及動(dòng)物的活動(dòng)及土壤中的細(xì)菌?！餀z查空氣中的病原菌較困難，故以經(jīng)常存在于口腔和鼻腔中的鏈球菌作為空氣衛(wèi)生的指標(biāo)?！锔鶕?jù)空氣中溶血性鏈球菌多少以及空氣中菌落總數(shù)的測(cè)定來(lái)判斷空氣的衛(wèi)生狀況。▲空氣中溶血性鏈球菌的檢測(cè)★目前國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的方法為固體撞擊法和自然沉降法。

㈠固體撞擊法檢測(cè)空氣中溶血性鏈球菌利用抽氣裝置使懸浮于空氣中的微生物粒子進(jìn)入裂隙并噴射到高速旋轉(zhuǎn)的培養(yǎng)皿上，被采樣介質(zhì)吸附后，取出進(jìn)行培養(yǎng)、分析。采樣后平皿經(jīng)37℃、48h培養(yǎng)，計(jì)數(shù)。

▲空氣中溶血性鏈球菌的檢測(cè)

㈡自然沉降法檢測(cè)空氣中溶血性鏈球菌檢驗(yàn)方法和步驟：

⑴室內(nèi)空氣采樣，＜30m2的設(shè)3個(gè)取樣點(diǎn)，＞30m2設(shè)5個(gè)取樣點(diǎn)，離地1.5m，在東西南北中各放置平板一塊，同一時(shí)間揭開(kāi)，分別暴露放置15min、30min、60min后，蓋上皿蓋。

▲空氣中溶血性鏈球菌的檢測(cè)⑵平皿倒置，放置37℃、24h培養(yǎng)觀察結(jié)果⑶鏈激酶實(shí)驗(yàn)⑷桿菌肽敏感實(shí)驗(yàn)⑸結(jié)果判斷：鏡檢革蘭陽(yáng)性鏈狀排列球菌，血平板上呈現(xiàn)溶血圈，鏈激酶和桿菌肽實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性可報(bào)告?！諝庵腥苎枣溓蚓臋z測(cè)★注意