03酶-本科課件必修課-生物化學(xué)

酶

Enzyme生化教研室－楊國棟第三章酶第一節(jié)酶的概念第二節(jié)酶的分類與命名第三節(jié)酶的組成與結(jié)構(gòu)第四節(jié)酶的作用機(jī)理第五節(jié)影響酶促反應(yīng)速度的因素第六節(jié)變構(gòu)酶、同工酶、誘導(dǎo)酶第七節(jié)酶的活力測定及分離提取第一節(jié)酶的概念一、酶的定義

二、酶的作用特點(diǎn)

三、酶的分布四、酶的專一性一、酶是生物催化劑（一）酶的定義

酶是由活細(xì)胞產(chǎn)生的，在細(xì)胞內(nèi)、外均有催化作用的蛋白質(zhì)（核酸）。（二）酶的化學(xué)本質(zhì)－蛋白質(zhì)（核酸）

1926年，Sumner從刀豆中提取脲酶，得到結(jié)晶，證明是蛋白質(zhì)。

后來，先后獲得胃蛋白酶，胰蛋白酶的結(jié)晶,1969年人工合成牛胰核糖核酸酶。

1981年，發(fā)現(xiàn)26srRNA具有自我拼接的催化活性，將具有催化功能的核酸命名為“ribozyme”二、酶的作用特點(diǎn)(一）、與一般催化劑的相同點(diǎn)1．反應(yīng)前后，質(zhì)與量不變，用量少2．縮短到達(dá)平衡的時(shí)間，不改變平衡點(diǎn)3．只能催化本來能進(jìn)行的反應(yīng)，即熱力學(xué)上允許的反應(yīng)。4．降低反應(yīng)活化能（二）與一般催化劑的不同點(diǎn)1、高效：酶促反應(yīng)的速度比非酶促反應(yīng)高108～1020倍，比一般催化劑高106～1013倍。2、高度專一：酶對底物有嚴(yán)格的選擇性。3、易失活，要求溫和條件：絕大多數(shù)酶是蛋白質(zhì)，凡能使蛋白質(zhì)變性的因素都能使酶喪失活性。4、活性可受到調(diào)節(jié)、控制：通過多種機(jī)制和形式對酶活性進(jìn)行調(diào)節(jié)和控制，使代謝活動有條不紊地進(jìn)行。5、常需輔助因子。三、酶的分布酶分布在所有的組織和細(xì)胞中，相對隔離，各自發(fā)揮作用。酶在生活細(xì)胞中產(chǎn)生，大部分酶在細(xì)胞內(nèi)起催化作用，稱為胞內(nèi)酶。有些酶被分泌到細(xì)胞外發(fā)揮作用，這類酶稱為胞外酶。

四、酶的專一性

酶對底物和催化的反應(yīng)有嚴(yán)格的選擇性。一種酶僅能作用于一種底物或結(jié)構(gòu)上相似的一類物質(zhì)，促其發(fā)生一定的化學(xué)反應(yīng)。

專一性結(jié)構(gòu)專一立體（異構(gòu)）專一絕對專一相對專一鍵專一基團(tuán)專一旋光異構(gòu)專一順反異構(gòu)專一1、絕對專一：一種酶只作用于一種底物。如脲酶2、相對專一：一種酶能夠作用于結(jié)構(gòu)上類似的一系列化合物。

（1）鍵專一：只要求合適的化學(xué)鍵，對鍵兩端的基團(tuán)并無嚴(yán)格要求。（2）基團(tuán)專一：不但要求一定的化學(xué)鍵，還要求鍵一端的基團(tuán)3、立體異構(gòu)專一性（1）旋光異構(gòu)專一性：底物具有旋光異構(gòu)體（D型、L型）時(shí)，酶只能作用于其中的一種（2）順反異構(gòu)專一性（幾何異構(gòu)專一性）第二節(jié)酶的分類與命名一、酶的分類二、酶的命名一、酶的分類根據(jù)反應(yīng)性質(zhì)分為六大類：1、氧化還原酶類：催化氧化還原反應(yīng)，涉及H和電子的轉(zhuǎn)移。如脫氫酶類。AH2+BA+BH22、轉(zhuǎn)移酶類：催化分子間功能基團(tuán)的轉(zhuǎn)移。如轉(zhuǎn)氨酶類。

AR+BA+BR3．水解酶類：催化水解反應(yīng)。如蛋白酶、淀粉酶等。

AB+H2OAOH+BH4．裂合酶類：催化底物上移去基團(tuán)而形成雙鍵的反應(yīng)或其逆反應(yīng)的酶。如醛縮酶脫氨酶脫羧酶

A-BA=B+X-YXY5．異構(gòu)酶類：催化同分異構(gòu)體的相互轉(zhuǎn)變。如磷酸丙糖異構(gòu)酶AB6、合成酶：與ATP分解相偶聯(lián)，并由二種物質(zhì)合成一種物質(zhì)。如天冬酰胺合成酶丙酮酸羧化酶

A+B+ATPAB+ADP+Pi在每一大類酶中，又根據(jù)底物中被作用的基團(tuán)或鍵的特點(diǎn)分為若干亞類，然后再把屬于某一亞類、亞亞類的酶按順序排好，這樣把已知的酶分門別類地排成一個(gè)表，叫做酶表。類亞類亞亞類序號

EC（1，1，1，27）——乳酸脫氫酶國際酶學(xué)委員會類亞類亞亞類序號氧一還酶類氧化基因氫受體順序號27-CHOHNAD+二、酶的命名1．系統(tǒng)命名要求確切表明底物的化學(xué)本質(zhì)及酶的催化性質(zhì)。命名原則：底物名稱（底物1：底物2）反應(yīng)性質(zhì)酶

如：乳酸＋NAD+丙酮酸＋NADH＋H+

乳酸：NAD+

氧化還原酶。系統(tǒng)名一般很長，使用不方便，一般敘述用慣用名。乳酸脫氫酶2．慣用名常依據(jù)酶所作用的底物和反應(yīng)類型命名。原則：（1）根據(jù)作用底物：如淀粉酶、蔗糖酶、蛋白酶等。（2）根據(jù)反應(yīng)性質(zhì)：如水解酶、脫氫酶、轉(zhuǎn)氨酶等。（3）二者結(jié)合：如乳酸脫氫酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶等。（4）再加上酶的來源、特性：如木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、酸性磷酸酯酶、堿性磷酸酯酶等。酶的英文名稱后綴一般為“-ase”，如proteinase第三節(jié)酶的組成與結(jié)構(gòu)一、酶的組成

二、幾個(gè)重要的輔助因子三、酶的結(jié)構(gòu)四、酶的活性中心一、酶的組成單純蛋白酶類

在已發(fā)現(xiàn)的酶中，象脲酶、蛋白酶、淀粉酶、核糖核酸酶等一般水解酶都屬于簡單蛋白質(zhì)。這些酶只是由氨基酸組成，此外不含其他成分，其活性僅僅決定于它的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)。結(jié)合蛋白酶類

全酶＝酶蛋白＋輔因子

酶蛋白和輔因子單獨(dú)存在時(shí)均無催化活性。如轉(zhuǎn)氨酶，碳酸酐酶輔因子：輔酶、輔基、金屬離子

輔酶：與酶蛋白結(jié)合較松，可透析除去輔基：與酶蛋白結(jié)合較緊，不能透析除去

金屬離子：與酶的結(jié)合，有的松，有的緊。輔酶、輔基往往是由維生素參與形成的小分子有機(jī)物。

維生素（vitamin）溶解性：脂溶性維生素水溶性維生素維生素是維持機(jī)體生命活動不可缺少的一類小分子化合物，它既不是生物體構(gòu)成成分，也不是能量物質(zhì)，之所以對生命活動如此重要，是因?yàn)榫S生素是輔酶或輔基的組成成分，參與體內(nèi)代謝過程。

脂溶性維生素：種類化學(xué)本質(zhì)功能存在維生素A不飽和一元醇（視黃醇）缺乏得

干眼病

夜盲癥動物性食物維生素D類固醇衍生物與Ca、P代謝有關(guān)與肝、奶、蛋黃維生素E生育酚生育有關(guān)，抗氧化植物中維生素K萘醌衍生物凝血維生素，促進(jìn)血液凝固動、植物水溶性維生素：種類別名輔酶存在缺乏病作用B1硫胺素TPP谷物種子腳氣病脫CO2B2核黃素FAD、FMN小麥、青菜、蛋黃肝臟口角炎傳遞HB3泛酸（遍多酸）HSCOA自然界中廣泛未發(fā)現(xiàn)典型缺乏病傳遞乙?；鵅5（Vpp）尼克酸(煙酸)尼克酸胺(煙酰胺)NAD、NADP肉類、谷物、花生癩皮疲傳遞2H（-H，H+）B6吡哆素磷酸吡哆醛(胺)動、植體分布廣泛皮炎傳遞-NH2B7（VH）生物素羧化E的輔酶動、植體分布廣泛未發(fā)現(xiàn)典型缺乏病傳遞CO2B11葉酸四氫葉酸THFA青菜、肝臟惡性貧血傳遞—碳單位B12氰鈷胺素輔酶B12植物、魚、肉、蛋惡性貧血轉(zhuǎn)移—H，—RVc抗壞血酸氧化還原新鮮果、蔬壞血病氧化還原硫辛酸?；d體肝、酵母未發(fā)現(xiàn)典型缺乏病傳遞—H和乙?；?、幾個(gè)重要的輔助因子（一）輔酶、輔基1．TPP：焦磷酸硫胺素（含VB1）羧化酶的輔酶，與α—酮酸氧化脫羧有關(guān)。2．NAD、NADP（含VB5）多種酶的輔酶，在代謝中遞氫。輔酶Ⅰ：煙酰胺腺嘌呤二核苷酸輔酶Ⅱ：煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸3．FMNFAD（含VB2）是多種氧化還原酶的輔基,遞氫。

FMN：黃素單核苷酸；FAD：黃素腺嘌呤二核苷酸。4．CoASH（泛酰巰基乙胺腺苷二磷酸，輔酶A,VB3）作用：?；d體。5．磷酸吡哆醛（胺）（VB6）

轉(zhuǎn)氨和脫羧過程中的輔酶，在AA代謝中非常重要。6．硫辛酸是丙酮酸脫氫酶和酮戊二酸脫氫酶的輔基遞氫遞?；?、GSH

遞氫8、鐵卟啉（血紅素）遞電子（二）、金屬離子1、活性中心的組成成分。如多酚氧化酶中的Cu2、在E與S之間起作用，使E具有活性構(gòu)象。如羧肽酶Zn3、穩(wěn)定結(jié)構(gòu)

三、酶的結(jié)構(gòu)（一）酶蛋白與蛋白質(zhì)相同，都有一定的空間結(jié)構(gòu)。（二）根據(jù)酶蛋白結(jié)構(gòu)上的特點(diǎn)，E分為：1、單體酶：一條多肽鏈組成的酶。2、寡聚酶：多個(gè)亞基組成的酶。3、多酶復(fù)合體：功能相關(guān)的幾個(gè)酶嵌合成的聚合體，更有利于一系列反應(yīng)的進(jìn)行。4、多酶體系：有機(jī)體內(nèi)，催化某一代謝途徑總是由許多酶組成連續(xù)的體系，這一代謝途徑中的所有酶，通過許多連續(xù)的中間代謝物，形成不可分割的龐大酶系——多酶體系。5、核酶：少數(shù)RNA具有自我拼接加工的催化活性。四、酶的活性中心（一）含義酶分子中直接與底物結(jié)合，并和酶催化作用直接相關(guān)的部位?；蛎阜肿又信c底物結(jié)合部位和催化部位所形成的微區(qū)。

E分子活性中心結(jié)合部位（1—幾個(gè)aa）催化部位（1—3個(gè)aa）維持活性中心的必需基團(tuán)其它部分（非必需部分）必需基團(tuán)：酶分子中有些基團(tuán)若經(jīng)化學(xué)修飾則活性喪失，這些基團(tuán)稱為必需基團(tuán)，包括活性中心基團(tuán)及維持活性中心的基團(tuán)。酶的必需基團(tuán)按其功能分為三種：有專門結(jié)合底物的基團(tuán)，叫做結(jié)合基團(tuán)。有專門催化底物的基團(tuán)叫做催化基團(tuán)。我們把結(jié)合基團(tuán)和催化基團(tuán)又叫做活性中心內(nèi)的必需基團(tuán)。還有專門維持酶活性中心的空間構(gòu)象的基團(tuán)，我們把這種基團(tuán)叫做活性中心外的必需基團(tuán)。酶必需基團(tuán)示意圖一些酶活性中心的基團(tuán)羧肽酶A的活性中心TheactivesiteoftheenzymedeterminedbyX-rayEScomlexeshavebeendirectlyobservedbyelectronmicroscopyandX-raycrystallography（二）活性中心的形成酶蛋白多肽鏈經(jīng)過盤繞折疊形成特定的空間結(jié)構(gòu)，使有關(guān)的AA形成微區(qū)?；钚灾行囊话銥榈徒殡妳^(qū)（非極性環(huán)境、或疏水區(qū)）。（三）酶原激活1．酶原：某些酶（特別是與消化作用有關(guān)的酶）初合成時(shí)沒有活性，這些沒有活性的酶的前體稱為酶原。2、酶原激活：酶原變成酶的過程（切去幾個(gè)AA的肽段）。例胰凝乳蛋白酶P80-813、酶原激活的實(shí)質(zhì)：酶活性中心的形成或暴露過程。第四節(jié)酶的作用機(jī)理一、催化作用的本質(zhì)——降低活化能。二、E與S的結(jié)合三、加快反應(yīng)速度的因素（酶高效催化的原理）四、酶作用機(jī)理實(shí)例——胰凝乳蛋白酶一、催化作用的本質(zhì)——降低活化能。（一）活化能概念在反應(yīng)體系中，任何反應(yīng)分子都有進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)的可能，但只有能量達(dá)到或超過某一限度（能閾）的活化分子，才能在碰撞中起化學(xué)反應(yīng)。能閾——活化能：活化分子處于活化態(tài)，活化態(tài)與常態(tài)的能量差。提高活化分子數(shù)量①對反應(yīng)體系加熱，照射②降低活化能（二）中間產(chǎn)物學(xué)說能1酶與底物（substrate）通過形成中間產(chǎn)物使反應(yīng)沿低活化能的途徑進(jìn)行。。ES二、E與S的結(jié)合1、鎖鑰學(xué)說：

酶和底物的結(jié)合狀如鑰匙與鎖的關(guān)系。S的結(jié)構(gòu)與酶活性中心結(jié)構(gòu)完全吻合，二者靠近緊密結(jié)合，形成中間絡(luò)合物可解釋絕對專一性；·不好解釋相對專一性2．誘導(dǎo)契合學(xué)說：

E活性中心結(jié)構(gòu)與S結(jié)構(gòu)不一定完全吻合。E構(gòu)象受S誘導(dǎo)而變構(gòu)——二者結(jié)合。反應(yīng)后，E構(gòu)象復(fù)原。酶專一性的“鎖鑰學(xué)說”

酶專一性的“誘導(dǎo)契合學(xué)說”三、酶高效催化的機(jī)理（一）鄰近和定向效應(yīng)（二）張力和變形（三）酸堿催化（四）共價(jià)催化（親核親電催化）（五）微環(huán)境的影響（一）鄰近和定向效應(yīng)鄰近：S與E活性中心的鄰近，對于雙分子反應(yīng)來說也包含酶活性中心上兩S之間鄰近。酶活性中心區(qū)域內(nèi)底物濃度高比外界高上萬倍），定向：除靠近外，反應(yīng)基團(tuán)彼此嚴(yán)格“定向”（正確的立體化學(xué)排列）為分子軌道交叉提供有利條件。酶AB鄰近效應(yīng)和定向效應(yīng)（二）張力和變形E與S誘導(dǎo)契合過程中，E受S誘導(dǎo)而變構(gòu)，同時(shí)變化的E分子使S分子中的敏感鍵產(chǎn)生“張力”或“變形”，使敏感鍵易于斷裂。+-+-穩(wěn)定的底物通過電荷等相互作用，底物張力變形激活形成過渡態(tài)張力效應(yīng)（strain）

-

-++(三）酸堿催化在反應(yīng)中通過瞬時(shí)的向反應(yīng)物提供質(zhì)子或從反應(yīng)物接受質(zhì)子以穩(wěn)定過渡態(tài)，從而加快反應(yīng)速度。廣義[酸]：質(zhì)子的供體[堿]：質(zhì)子的受體（四）共價(jià)催化（親核親電催化）親核劑：孤對電子的供體親電劑：孤對電子的受體

E與S形成共價(jià)中間產(chǎn)物，加快反應(yīng)。催化劑通過與底物形成反應(yīng)活性很高的共價(jià)過渡產(chǎn)物，使反應(yīng)活化能降低，從而提高反應(yīng)速度的過程，稱為共價(jià)催化。酶中參與共價(jià)催化的基團(tuán)主要包括His的咪唑基，Cys

的硫基，Asp的羧基，Ser的羥基等。某些輔酶，如焦磷酸硫胺素和磷酸吡哆醛等也可以參與共價(jià)催化作用。（五）微環(huán)境的影響E活性中心為低介電區(qū)（非極性的），S的敏感鍵易與E的催化基團(tuán)形成很大的反應(yīng)力，加快反應(yīng)速度。

“疏水口袋”疏水口袋肽鏈底物四、酶作用機(jī)理實(shí)例——胰凝乳蛋白酶（一）E的特點(diǎn)1、酶原由245個(gè)AA殘基組成，分子量25000。2、酶的底物結(jié)合部位為一非極性疏水口袋。整個(gè)分子由三條多肽鏈通過五個(gè)二硫鍵相連，結(jié)構(gòu)中α—螺旋少，部分為反平行β—折疊。3、專一性：水解羧基端具有芳香族AA的肽鍵。

N——aa1——aa2——C↓

芳香族AA:Trp、Tyr、Phe、4、活性中心

Asp102His57Ser195（二）作用機(jī)理1、酶的活性中心：通過電荷轉(zhuǎn)移，使Ser有更強(qiáng)的親核力。2、反應(yīng)的過程：（1）形成?；?，放出產(chǎn)物P1

（2）脫酰（水解）形成產(chǎn)物P2His57102AspSer195A.酶分子中的電荷中繼網(wǎng)B.加上底物后，從Ser轉(zhuǎn)移一個(gè)質(zhì)子給His，帶正電荷的咪唑基通過帶負(fù)電荷的Asp靜電相互作用被穩(wěn)定Ser195102AspHis57底物1、通過電荷轉(zhuǎn)移，使Ser有更強(qiáng)的親核力。2、反應(yīng)的過程（1）形成?；?，放出產(chǎn)物P1（2）脫酰（水解）形成產(chǎn)物P22、反應(yīng)的過程第五節(jié)影響酶反應(yīng)速度的因素

一、酶促反應(yīng)速度的測量二、酶濃度對υ的影響三、底物濃度的影響四、PH對υ的影響五、溫度對υ的影響六、激活劑對υ的影響七、抑制劑對υ的影響一、酶促反應(yīng)速度的測量酶促反應(yīng)速度可表示為： ①單位時(shí)間內(nèi)底物的消耗量②單位時(shí)間內(nèi)產(chǎn)物的生成量

斜率=[P]/t=V（初速度）[P]t二、酶濃度對υ的影響反應(yīng)條件固定且[S]>>[E]下

υ=K[E]V[E]三、底物濃度的影響（一）[S]對υ的影響

PH、T、[E]固定1、基礎(chǔ)：中間產(chǎn)物學(xué)說2、前提（1）[S]>>[E]（2）產(chǎn)物濃度P0（初速度）（3）反應(yīng)達(dá)到動態(tài)平衡（ES的生成=ES的消失）。（4）S與E形成中間產(chǎn)物，且整個(gè)反應(yīng)速度取決于ES→P+E（二）米氏方程

3、米氏方程的推導(dǎo)令：將（4）代入（3），則：[ES]生成速度：，[ES]分解速度：即：則：(1)經(jīng)整理得：由于酶促反應(yīng)速度由[ES]決定，即，所以(2)將（2）代入（1）得：(3)當(dāng)酶反應(yīng)體系處于恒態(tài)時(shí)：當(dāng)[Et]=[ES]時(shí)，(4)所以

單分子酶促反應(yīng)的米氏方程及Km米氏方程:米氏常數(shù):4、反映①[S]很小[S]<<Km

則v＝（Vmax/Km）[S]一級反應(yīng)②[S]很大[S]>>Km

則V=Vmax

零級反應(yīng)③[S]接近Km

混級反應(yīng)（三）Km的意義（1）當(dāng)v=1/2Vmax時(shí)，Km=[S]Km值的物理意義：Km值是反應(yīng)速度為最大速度一半時(shí)的底物濃度。單位是濃度單位。（2）是酶在一定條件下的特征物理常數(shù)，通過測定Km的數(shù)值，可鑒別酶。（3）可近似表示酶和底物親合力，Km愈小，E對S的親合力愈大，Km愈大，E對S的親合力愈小。（4）在已知Km的情況下，應(yīng)用米氏方程可計(jì)算任意[s]時(shí)的v，或任何v下的[s]。練習(xí)題：已知某酶的Km值為0.05mol.L-1，要使此酶所催化的反應(yīng)速度達(dá)到最大反應(yīng)速度的80％時(shí)底物的濃度應(yīng)為多少？（四）Km值的測定雙倒數(shù)作圖法

過酸過堿導(dǎo)致酶蛋白變性影響底物分子解離狀態(tài)影響酶分子解離狀態(tài)影響酶的活性中心構(gòu)象pH最適pHv四、PH對υ的影響（1）一般酶最適PH4－8（2）植物5－6.5動物6.5－8（3）最適PH與等電點(diǎn)不一定一致。五、溫度與酶反應(yīng)速度的關(guān)系在達(dá)到最適溫度以前，反應(yīng)速度隨溫度升高而加快酶是蛋白質(zhì)，其變性速度亦隨溫度上升而加快v溫度最適溫度：反應(yīng)速度最大時(shí)的溫度。（1）動物體內(nèi)最適T一般30-40℃，植物40-50℃，有少數(shù)酶能耐較高的溫度，如某些細(xì)菌中分離的DNA聚合酶，最適溫度可達(dá)70℃，細(xì)菌淀粉酶在93℃下活力最大。（2）最適T，不是酶的特征常數(shù)，它與酶作用時(shí)間的長短、底物種類以及PH有關(guān)。（3）Q10溫度系數(shù)：T每增加10℃，υ增加的倍數(shù)。大多數(shù)酶的Q10=1-2。六、激活劑對υ的影響激活劑（activator）

：提高E活力的物質(zhì)，活性：無→有，小→大。1、無機(jī)離子陰離子Cl-、Br-

陽離子H+、金屬離子（Zn2+、Cu2+、K+、Na+…）2、中等大小的有機(jī)分子：GSH、Cys、Vc、巰基乙醇、EDTA（乙二胺四乙酸）等。3、蛋白質(zhì)物質(zhì)

酶原蛋白酶酶七、抑制劑（inhibitor）對υ的影響（一）抑制作用的概念1、失活作用：凡使酶蛋白變性而引起酶活力喪失的作用。2、抑制作用：使酶活力下降，但并不引起酶蛋白變性的作用。（此作用使一部分酶的必需基團(tuán)或輔助因子失活（活力變?。?。3、抑制類型（1）不可逆抑制：I與E共價(jià)結(jié)合，是一不可逆反應(yīng)，二者結(jié)合后，不能透析除去抑制劑而恢復(fù)酶活力。（2）可逆抑制：I與E非共價(jià)結(jié)合，為可逆反應(yīng)，透析能除去抑制劑使酶恢復(fù)活力。①競爭性抑制：②非競爭性抑制：③反競爭性抑制（二）不可逆抑制劑I與E共價(jià)結(jié)合，是不可逆反應(yīng)，不能透析除去。常見不可逆抑制劑：烷化劑、酰化劑、氧化劑、有機(jī)磷、有機(jī)汞、氰化物、氮化物、重金屬。碘乙酸、碘乙酰胺、對氯汞苯甲酸對巰基酶的不可逆抑制。

E-SH+ICH2COOH→E-S-CH2COOH+HI有機(jī)磷化物(三)可逆抑制劑I與E非共價(jià)結(jié)合，可透析除去。競爭性抑制劑－－I與S結(jié)構(gòu)相似競爭與E的結(jié)合部位結(jié)合。非競爭性抑制劑－－I與S結(jié)合在酶的不同部位。反競爭性抑制劑——E必須先與S結(jié)合，然后才與I結(jié)合+IEIESP+EE+S

實(shí)例：磺胺藥物的藥用機(jī)理H2N--SO2NH2對氨基苯磺酰胺H2N--COOH對氨基苯甲酸對氨基苯甲酸谷氨酸蝶呤葉酸1、競爭性抑制劑2、非競爭性抑制作用+IEI+SESIESP+EE+S+I實(shí)例：重金屬離子（Cu2+、Hg2+、Ag+、Pb2+）

金屬絡(luò)合劑（EDTA、F-、CN-、N3-）[]3、反競爭性抑制作用ESIESP+EE+S+I競爭性非競爭性抑制作用機(jī)理示意圖競爭性抑制作用非競爭性抑制作用底物與酶專一性結(jié)合

競爭性抑制非競爭性抑制

/(1+[I]/ki)[]有I無I競爭性抑制劑特點(diǎn)：①Km值增大②最大反應(yīng)速度不變：V=Vmax③提高底物濃度可解除抑制作用④曲線圖：有I比無I曲線下移，但最高點(diǎn)相同。雙倒數(shù)曲線圖：有I比無I斜率增大，在縱軸交點(diǎn)相同。非競爭性抑制劑特點(diǎn)：①Km值不變②Vmax速度變?、厶岣叩孜餄舛?，不能消除抑制作用④曲線圖：有I比無I下移，最高點(diǎn)也下移雙倒數(shù)曲線圖：有I斜率增大，在橫軸交點(diǎn)相同。第六節(jié)變構(gòu)酶、同工酶和誘導(dǎo)酶

一、變構(gòu)酶二、同工酶三、誘導(dǎo)酶一、變構(gòu)酶變構(gòu)酶是構(gòu)象可以改變的酶，構(gòu)象改變的同時(shí)活性亦改變。是一類重要的調(diào)節(jié)酶。變構(gòu)酶與變構(gòu)劑（效應(yīng)物）結(jié)合——非共價(jià)鍵、有專一性。正變構(gòu)劑－－變構(gòu)激活劑：使酶活性增強(qiáng)。變構(gòu)劑負(fù)變構(gòu)劑－－變構(gòu)抑制劑：使酶活性降。變構(gòu)酶的特點(diǎn)：

1、一般由兩個(gè)或以上的亞基組成（寡聚酶），除有活性部位外，還有與調(diào)節(jié)物結(jié)合的調(diào)節(jié)部位（變構(gòu)部位）。2、具有變構(gòu)效應(yīng)：當(dāng)?shù)孜锘蛐?yīng)物和酶分子上的相應(yīng)部位結(jié)合后，會引起E分子構(gòu)象的改變，從而影響E的催化活性。3、不符合米氏曲線，多數(shù)為S型。4、變構(gòu)酶分子中一個(gè)活性部位能影響同一分子的另一個(gè)活性部位。二、同工酶催化同一反應(yīng)，但組成、結(jié)構(gòu)、性質(zhì)有所不同的一組酶?；蚰艽呋嗤瘜W(xué)反應(yīng)的數(shù)種不同分子形式的E。

如乳酸脫氫酶有5種同工酶。三、誘導(dǎo)酶一般情況下不存在或含量很小，但在誘導(dǎo)過程中含量明顯增加的一類酶。能誘導(dǎo)酶合成的化合物稱誘導(dǎo)劑。如硝酸還原酶NO3-

光第七節(jié)酶的活力測定及分離提純一、酶活力的測定二、酶的分離提取一、酶活力的測定（一）活力（性）的表示方法１、活力——v

測定酶活力就是測定酶促反應(yīng)速度。反應(yīng)速度：單位時(shí)間內(nèi)產(chǎn)物的生成量。 單位時(shí)間內(nèi)底物的消耗量。2、酶的活力單位（U）：一定條件下單位時(shí)間內(nèi)催化一定量的底物起反應(yīng)所需的酶量。U——1分鐘內(nèi)催化1μmol底物起反應(yīng)的酶量。Kat——1秒鐘內(nèi)轉(zhuǎn)化1mol底物的酶量。

1Kat=6×1