光學檢測技術張靜

光學檢測技術張靜第一頁，共七十二頁，2022年，8月28日第一節(jié)旋光檢測技術利用旋光計測量出旋光物質（光學活性物質）對偏振光旋轉角度的方向（左旋或右旋）和大小，從而進行定性與定量分析的技術，稱為旋光檢測技術。旋光物質對偏振光的旋轉方向和角度大小是該物質的固有特性。偏振光旋轉的方向和角度稱為旋光度。左旋（－），右旋（＋）。物質的旋光度主要取決于物質本身的結構，此外與入射光的波長及溫度有關，對溶液而言，還與溶液性質、溶液濃度和溶液厚度有密切關系。第二頁，共七十二頁，2022年，8月28日

旋光法：應用旋光儀測量旋光性物質的旋光度以確定其含量的分析方法。

旋光度和比旋光度是旋光性物質的主要物理性質。通過旋光度和比旋光度的測定，可以檢查光學活性化合物的純度，也可以定量分析有關化合物溶液的濃度。第三頁，共七十二頁，2022年，8月28日光是一種電磁波，即光波的振動方向與其前進方向互相垂直。自然光有無數個與光的前進方向互相垂直的光波振動面。若光線前進的方向指向我們，則與之互相垂直的光波振動平面可表示為如圖（a），圖中箭頭表示光波振動的方向。若使自然光通過尼科爾棱鏡，由于振動面與尼科爾棱鏡的光軸平行的光波才能通過尼科爾棱鏡，所以通過尼科爾棱鏡的光，只有一個與光的前進方向互相垂直的光波振動面，如圖（b）。這種僅在一個平面上振動的光叫偏振光。

自然光與偏振光第四頁，共七十二頁，2022年，8月28日通常用以下兩種方法產生偏振光：尼科爾棱鏡或偏振片。尼科爾棱鏡一塊方解石的菱形六面體末端的表面磨光，使鏡角等于68°，將之對角切成兩半，把切面磨成光學平面后，再用加拿大樹膠粘起來，便成為一個尼科爾棱鏡。其中非常光線MP由方解石到加拿大樹膠是由光疏介質到光密介質，必將發(fā)生折射通過加拿大樹膠，由棱鏡的另一端面射出，從而產生了平面偏振光。偏振光的產生尼科爾棱鏡示意圖第五頁，共七十二頁，2022年，8月28日偏振片

利用偏振片也能產生偏振光。它是利用某些雙折射晶體（如電氣石）的二色性，即可選擇性吸收尋常光線，而讓非常光線通過的特性，把自然光變成偏振光。

第六頁，共七十二頁，2022年，8月28日分子結構中有不對稱碳原子，能把偏振光的偏振面旋轉一定角度的物質稱為光學活性物質。許多食品成分都具有光學活性，如單糖、低聚糖、淀粉以及大多數的氨基酸和羥酸等。其中能把偏振光的振動平面向右旋轉的，稱為“具有右旋性”，以（十）號表示；反之．稱為“具有左旋性”，以（一）號表示。旋光性、旋光性物質第七頁，共七十二頁，2022年，8月28日旋光度偏振光通過光學活性物質的溶液時，其振動平面所旋轉的角度叫做該物質溶液的旋光度，以α表示。旋光度的大小與光源的波長、溫度、旋光性物質的種類、溶液的濃度及液層的厚度有關。對于特定的光學活性物質，在光源波長和溫度一定的情況下，其旋光度α與溶液的濃度c和液層的厚度L成正比。即：α＝KcL第八頁，共七十二頁，2022年，8月28日比旋光度

當旋光性物質的濃度為100g/100ml，液層厚度為ldm（分米）時所測得的旋光度稱為比旋光度，以表示。由上式可知：＝K×1×1＝K

即：＝式中：[α]－－比旋光度，度；

t－－溫度，

λ－－光源波長，nm；

α－－旋光度，度；

L－－液層厚度或旋光管長度，dm；

c－－溶液濃度，g／ml。第九頁，共七十二頁，2022年，8月28日

比旋光度與光的波長及測定溫度有關。通常規(guī)定用鈉光D線（波長

589.3nm）在20℃時測定，在此條件下，比旋光度用表示因在一定條件下比旋光度是已知的，L為一定，故測得了旋光度就可計算出旋光質溶液中的濃度c。第十頁，共七十二頁，2022年，8月28日變旋作用定義具有光學活性的還原糖類（如葡萄糖，果糖，乳糖、麥芽糖等），在溶解之后，其旋光度起初迅速變化，然后漸漸變得較緩慢，最后達到恒定值，這種現象稱為變旋作用。

第十一頁，共七十二頁，2022年，8月28日這是由于有的糖存在兩種異構體，即α型和β型，它們的比旋光度不同。這兩種環(huán)型結構及中間的開鏈結構在構成一個平衡體系過程中，即顯示出變旋光作用。變旋現象

因此，在用旋光法測定蜂蜜，商品葡萄糖等含有還原糖的樣品時，樣品配成溶液后，宜放置過夜再測定。若需立即測定，可將中性溶液（pH=7）加熱至沸，或加幾滴氨水后再稀釋定容；若溶液已經稀釋定容，則可加入碳酸鈉干粉至石蕊試紙剛顯堿性。在堿性溶液中，變旋光作用迅速，很快達到平衡。但微堿性溶液不宜放置過久，溫度也不可太高，以免破壞樣品。第十二頁，共七十二頁，2022年，8月28日旋光儀WXG型半蔭旋光儀檢糖計WZB自動旋光儀第十三頁，共七十二頁，2022年，8月28日WGX型半蔭旋光儀結構和原理

起偏棱鏡一般用尼科爾（Nicol)棱鏡，以獲得偏振光。旋光管盛裝待測液的玻璃管。檢偏棱鏡仍用尼科爾（Nicol)棱鏡，用以檢測從旋光管射出的偏振光振動平面與原來相比較的角度（可由刻度盤上的數值讀出）。第十四頁，共七十二頁，2022年，8月28日第十五頁，共七十二頁，2022年，8月28日檢糖計

檢糖計專用于糖類的測定。故刻度數值直接表示為蔗糖的百分含量（W/V），其測定原理與旋光計相同。在結構上有以下特點檢糖計的基本光學元件第十六頁，共七十二頁，2022年，8月28日自動旋光儀當檢測池中放進存有被測溶液的試管后，由于溶液具有旋光性，使平面偏振光旋轉了一個角度，零度視場便發(fā)生了變化，轉動檢偏鏡一定角度，能再次出現亮度一致的視場。這個轉角就是溶液的旋光度，測得溶液的旋光度后，就可以求出物質的比旋度。根據比旋度的大小，就能確定該物質的純度和含量了。第十七頁，共七十二頁，2022年，8月28日旋光法測定味精濃度樣品溶液配制精確稱取味精樣品10.00g，加40～50mL蒸餾水溶解，攪拌加入分析純鹽酸16mL，使味精全部溶解。冷卻至室溫，蒸餾水定容至100mL。旋光儀調零預熱10min，放進濾光片。取16mL分析純鹽酸蒸餾水定容至100mL。裝滿旋光管，調整零點。樣品液測定樣品洗滌旋光管三次，裝滿旋光管，放進樣品室，測定旋光度，記錄溫度。第十八頁，共七十二頁，2022年，8月28日物質被輻射能照射后，分子內部獲得外源能量，基態(tài)分子能級的電子躍遷到較高能級，轉變成激發(fā)態(tài)分子能級，使分子處在高能域不穩(wěn)定狀態(tài)，因此，它必須釋放多余的能量，變成穩(wěn)定狀態(tài)的分子。分子發(fā)光：由激發(fā)態(tài)能級回到基態(tài)能級的過程中以光的形式釋放多余的能量，并發(fā)射出比原波長更長的光譜。熒光分光光度法：檢測分子發(fā)射光譜的分析方法。第二節(jié)熒光檢測技術第十九頁，共七十二頁，2022年，8月28日一、特點專一性強靈敏度高：測定同樣濃度物質的含量，通常比吸收光譜靈敏度高2～4個數量級左右。選擇性強：既可分析發(fā)射光譜，也可分析激發(fā)光譜，偏振光譜。發(fā)光方式多：物理發(fā)光，化學發(fā)光，生物發(fā)光。可分析參數多：可分析熒光光譜，熒光強度，熒光效率，熒光壽命等多種物理參數。

第二十頁，共七十二頁，2022年，8月28日二、方法原理熒光現象：是一種發(fā)光現象，當一種波長的光照射在某一熒光物質時，該物質被激發(fā),若能在極短的時間內發(fā)射出較激發(fā)波長更長波長的光,在激發(fā)態(tài)停留的時間大約10-8~10-4s.發(fā)射的光譜稱為熒光光譜.磷光光譜:

若這種光在激發(fā)態(tài)停留較長的時間,即在激發(fā)態(tài)停留的時間大約是10-4~10s,系統內發(fā)射出比熒光波長更長波長的光.發(fā)射的光譜稱為磷光光譜.第二十一頁，共七十二頁，2022年，8月28日熒光產生機理（1）分子能級：最低第一級電子激發(fā)態(tài)振動能級是產生熒光的基礎。分子吸收能量后，電子躍遷到哪一個能級并不重要，重要的是吸收了能量的分子經過內轉移以后，將能量降到最低第一級電子激發(fā)態(tài)振動能級后，能否以光子的形式釋放能量，如能就會發(fā)射熒光，否則不會。第二十二頁，共七十二頁，2022年，8月28日（2）耗能方式:產生熒光:分子內在因素和外在條件決定.在同一能級中分子間的相互碰撞消耗能量;無輻射衰減轉給周圍分子變成振動能消耗;輻射熒光----以光子的形式釋放能量;光分解消耗分子內部的能量(光分解以產生熱的方式，使物質結構發(fā)生變化，發(fā)光基團的發(fā)光能量減弱或喪失).第二十三頁，共七十二頁，2022年，8月28日（3）能量的傳遞途徑:

處于較高能級的激發(fā)態(tài)電子回到基態(tài)途徑第二十四頁，共七十二頁，2022年，8月28日當兩個電子能級非?？拷灾缕湔駝幽芗壈l(fā)生重疊時，電子由高能級以無輻射躍遷方式轉移給低能級不同多重態(tài)間的無輻射躍遷，如S1→T1。有時通過熱激發(fā)，就有可能發(fā)生T1→S1，然后產生延遲熒光被激發(fā)分子與溶劑分子或其他溶質分子的相互作用把多余的能量轉移給周圍分子，使熒光或磷光發(fā)射的強度減弱或消失。也稱熒光熄滅或猝滅激發(fā)態(tài)分子把多余的振動能量以熱的形式轉給周圍分子，而自身從Sn的較高振動能級層降低到該電子能級的最低振動能級層上處于第一激發(fā)單重態(tài)最低振動能級的電子回到基態(tài)振動能級時，在短時間內發(fā)射一個光子返回到基態(tài)分子的系間竄躍躍遷后，就會發(fā)生快速的振動弛豫到達第三激發(fā)單重態(tài)最低振動能級上，以光子的形式躍遷回到基態(tài)第二十五頁，共七十二頁，2022年，8月28日（4）分子熒光的類型:

根據熒光物質所需的激發(fā)光源不同和吸能后發(fā)射熒光光譜的差異,分為:物理發(fā)光(物理/光致熒光）：熒光分子吸收了光能(如以X射線，紫外光，激光等為光源的輻射能等)而產生的熒光;化學發(fā)光:通過分子與分子之間的化學反應所產生的化學能，在化學反應過程中釋放能量而發(fā)射熒光;生物發(fā)光:通過生物體內的熒光酶與熒光物質相互作用，在生物化學反應過程中所釋放出來的光能.

第二十六頁，共七十二頁，2022年，8月28日2.激發(fā)光譜和發(fā)射光譜任何熒光化合物的分子在吸收能量和釋放能量的過程中，都存在著激發(fā)光譜和發(fā)射光譜。激發(fā)光譜：熒光分子首先要從外界得到相應的能量，才能具備發(fā)光的基本條件,才有可能發(fā)射熒光。在選擇最佳激發(fā)波長時，可通過測量分子的激發(fā)光譜來確定。第二十七頁，共七十二頁，2022年，8月28日發(fā)射光譜：分子發(fā)射熒光的特征波長比吸收的特征波長長。發(fā)射光譜的形狀與激發(fā)光譜極為相似,且呈鏡像對稱關系。第二十八頁，共七十二頁，2022年，8月28日3.熒光量子產率與分子結構（1）熒光分子產生熒光的條件：熒光分子必須具有與所照射的輻射頻率相適應的結構，能吸收激發(fā)光提供的輻射能；分子吸收了與本身特征頻率相同能量后，必須具有產生一定的熒光量子的能力。產生熒光量子的強弱可用熒光量子產率（也稱熒光效率或量子效率）來表示：第二十九頁，共七十二頁，2022年，8月28日（2）分子結構與熒光的關系：共軛效應：含有π-π*電子躍遷能級化合物的熒光最強。絕大多數能發(fā)射熒光的化合物，都是芳香族或雜環(huán)類化合物或者在它們的分子中含有芳香族或雜環(huán)類基團。苯類化合物的對苯基化、間苯基化及乙烯化作用能夠增強苯分子的熒光強度。第三十頁，共七十二頁，2022年，8月28日分子的剛性平面結構：能產生較強熒光。這種結構可以減少分子的振動，分子與溶劑或其他溶質分子相互之間的作用降低了，這樣更有利于熒光的發(fā)射（如芴和聯二苯的熒光效率分別為1.0和0.2；熒光素有很強的熒光，而酚酞沒有熒光）。第三十一頁，共七十二頁，2022年，8月28日取代效應：給電子基團（如-OH，-OR，-NH2，

-CN，-NR等）能使熒光增強，得電子基團（如-COOH，-C=O，-NO2，-NO及鹵素離子等）能使熒光減弱第三十二頁，共七十二頁，2022年，8月28日三、儀器的結構與原理1.熒光分光光度法定量分析基本原理

溶液的熒光強度和該溶液吸收光能的程度以及溶液中熒光物質的熒光量子效率有關。第三十三頁，共七十二頁，2022年，8月28日2.熒光分光光度計的結構激發(fā)光源,激發(fā)單色器,樣品池,發(fā)射單色器,檢測器及顯示系統激發(fā)光源：要求能發(fā)出強度較大，連續(xù)穩(wěn)定的光源。

理論上,發(fā)射熒光的強度取決于激發(fā)光源的強度.實際應用中選擇光源的強度不能太強也不能太弱。要根據熒光物質的性質選擇合適光源:對光敏感或發(fā)射熒光較強的物質選用較弱光源,反之可選較強光源.第三十四頁，共七十二頁，2022年，8月28日測量熒光強度儀器：濾光片熒光分光光度計和結構復雜的精密熒光分光光度計。主要部件：激發(fā)光源:

前者常用汞燈,后者常用氙燈(250~700nm).濾光片和單色器：前者采用兩個濾光片(激發(fā)濾光片/熒光濾光片)；后者采用光柵作單色器。樣品池：低熒光的玻璃或石英制成，形狀以散射光較少的方形為宜。檢測器：阻擋層光電池(500~600nm最靈敏)，缺點：易疲勞，靈敏度低；光電倍增管檢測器：靈敏度高，使用簡單，特別適用于強度微弱光的測量。第三十五頁，共七十二頁，2022年，8月28日四、實驗技術（影響熒光分析的因素）

溶液的pH的影響：在溶液中，絕大多數熒光物質都是以離子狀態(tài)形式存在的，發(fā)射熒光的最佳條件是解離的熒光分子。

溫度的影響:

溫度升高，熒光物質產生的熒光效率和熒光強度都會下降，反之。溶劑的影響：熒光物質的熒光波峰位置和熒光強度與溶劑的介電常數有關。不同溶劑對各種熒光物質發(fā)生熒光的影響程度是不同的，某些溶劑可使熒光物質形成配合物，某些溶劑可改變熒光物質的解離狀態(tài)。第三十六頁，共七十二頁，2022年，8月28日激發(fā)光源的影響：光分解:熒光化合物被強激發(fā)光照射會發(fā)生分解，引起熒光強度迅速下降。所以，熒光分光光度計通常在激發(fā)光單色器后裝配有光閘，在測定時才打開光閘讓激發(fā)光照射樣品池。器皿污染的影響：器皿內壁含極少量熒光物質，會使測定結果造成偏差，最好用30%硝酸清洗。內濾效應的影響：在樣品溶液中存在著雜質或測試樣品池濃度太大引起熒光變弱的現象。自吸收：樣品濃度大，熒光分子吸收光能和發(fā)射熒光的同時有部分重疊，而引起可檢測的熒光強度變弱。雜質吸收：樣品溶液中存在能吸收激發(fā)光或發(fā)射光能量的雜質，使檢測到的光強度變弱。

第三十七頁，共七十二頁，2022年，8月28日稀樣品溶液的影響:氧化作用：熒光物質的稀溶液不如濃度高的溶液穩(wěn)定，易發(fā)生氧化作用(腎上腺素，1μg/mL，100μg/mL)

光分解：稀溶液相對于高濃度溶液更易發(fā)生光分解，尤其對光較敏感的物質。

表面吸附：某些非待測的熒光物質吸附在比色皿內壁表面上，在分析過程中這些熒光物質發(fā)射相應的熒光，干擾測定。對稀溶液影響大。另外，表面吸附對不同溶劑吸附程度不同，有機溶劑表面吸附更明顯。第三十八頁，共七十二頁，2022年，8月28日五、熒光檢測技術的應用根據發(fā)光機理，能吸收能量后以光子的形式釋放能量的化合物都屬熒光物質。發(fā)光方式分：自熒光物質(分子中含熒光發(fā)光基團或化學鍵)外源熒光物質(要與某些熒光物質或熒光燃料以共價鍵或離子鍵的形式結合)

第三十九頁，共七十二頁，2022年，8月28日分析方法:1、定量分析方法：（1）標準曲線法（2）外標法（直接比較法）：在一定濃度范圍內，選擇一個合適的標準樣品濃度，將其在熒光分光光度計上測得的值與在同樣條件下的未知樣品的值進行比較，得出未知樣品的濃度。未知樣品濃度（mg/mL）=(A1/A2)c

式中，A1為未知樣品的熒光發(fā)光值，A2為標準樣品的熒光發(fā)光值，c為標準樣品濃度。2、定性分析：根據熒光發(fā)射的波長和出現的峰位，確定物質結構的某些特征.

第四十頁，共七十二頁，2022年，8月28日第三節(jié)分光光度檢測技術a、目視比色法用眼睛比較溶液顏色的深淺以確定物質濃度的方法稱為目視比色法。特點：設備簡單、操作簡便；無需單色光；準確度不高。b、分光光度計基于被測物質的分子對光具有選擇性吸收的特性而建立起來的分析方法。包括：第四十一頁，共七十二頁，2022年，8月28日分光光度檢測技術

（Chaptertwospectrophotography)

定義:

分光光度檢測技術是利用物質所特有的吸收光譜來鑒別物質或測定其含量的分析檢測技術。

特點:靈敏、精確、快速和簡便，在復雜組分系統中，不需要分離，即能檢測出其中所含的極少量物質。

應用:

生物化學研究中廣泛使用的方法之一，廣泛用于糖，蛋白質，核酸，酶等的快速定量檢測。第四十二頁，共七十二頁，2022年，8月28日分光光度檢測的分類分光光度檢測的分類紅外分光光度檢測:可見光分光光度檢測:

紫外分光光度檢測:測定波長范圍為大于760nm的紅外光區(qū)

測定波長范圍為400~760nm的可見光區(qū)測定波長范圍為200～400nm的紫外光區(qū)

第四十三頁，共七十二頁，2022年，8月28日一、分光光度計工作原理第四十四頁，共七十二頁，2022年，8月28日（一）分光光度檢測的光譜范圍

包括波長范圍為400~760nm的可見光區(qū)和波長范圍為200～400nm的紫外光區(qū)。不同的光源都有其特有的發(fā)射光譜，因此可采用不同的發(fā)光體作為儀器的光源。

鎢燈的發(fā)射光譜：鎢燈光源所發(fā)出的400～760nm波長的光譜，光通過三棱鏡折射后，可得到由紅、橙、黃、綠、藍、靛、紫組成的連續(xù)色譜；該色譜可作為可見光分光光度計的光源。

氫燈的發(fā)射光譜：氫燈能發(fā)出185～400nm波長的光譜，可作為紫外光分光度計的光源。第四十五頁，共七十二頁，2022年，8月28日（二）物質的吸收光譜

如果在光源和棱鏡之間放上某種物質的溶液，此時在屏上所顯示的光譜已不再是光源的光譜，它出現了幾條暗線，即光源發(fā)射光譜中某些波長的光因溶液吸收而消失，這種被溶液吸收后的光譜稱為該溶液的吸收光譜。

不同物質的吸收光譜是不同的。因此根據溶液的吸收光譜，可以鑒別溶液中所含的物質。

第四十六頁，共七十二頁，2022年，8月28日用不同波長的單色光照射，測定吸光度，如果以波長為橫坐標，吸光度為縱坐標即可得一條曲線稱為吸收曲線（~A曲線）。吸收曲線清楚地描述了物質對光的吸收情況。max=510nm第四十七頁，共七十二頁，2022年，8月28日

（1）不同物質吸收曲線的形狀和吸收波長不同。MnO4-531吸收曲線第四十八頁，共七十二頁，2022年，8月28日（2）同一物質對不同波長光的吸光度不同；同一物質不同濃度，其吸收曲線形狀相似。

吸收曲線是特征的，可以提供物質的結構信息，作為物質定性分析的依據之一；吸收曲線是定量分析中選擇入射光波長的重要依據。第四十九頁，共七十二頁，2022年，8月28日

當光線通過某種物質的溶液時，透過的光的強度減弱。因為有一部分光在溶液的表面反射或分散，一部分光被組成此溶液的物質所吸收，只有一部分光可透過溶液。入射光=反射光

＋

分散光

＋

吸收光

＋

透過光

如果我們用蒸餾水(或組成此溶液的溶劑)作為“空白”去校正反射、分散等因素造成的入射光的損失，則：入射光=吸收光

十

透過光

第五十頁，共七十二頁，2022年，8月28日(三）分光光度計常用術語C:測試溶液的濃度I:透過光的強度I0

:空白校正后入射光的強度T:透光率（

I/I0）A

:光吸收（OD）L

:比色杯光程第五十一頁，共七十二頁，2022年，8月28日吸光度A：物質對光的吸收程度。定義：A＝lg（I0/It)A越大，表示對光的吸收越大，透過光越弱。（四）依據原理：朗伯-比爾定律（Lambert–Beer）第五十二頁，共七十二頁，2022年，8月28日

1760年朗伯(Lambert)闡明了光的吸收程度和吸收層厚度的關系：A∝b

1852年比耳(Beer)又提出了光的吸收程度和吸收物濃度之間也具有類似的關系：A∝c

二者的結合稱為朗伯—比耳定律，A∝bc第五十三頁，共七十二頁，2022年，8月28日朗伯—比耳定律數學表達式：

A＝lg（I0/It)=εbc

式中：A，吸光度，無量剛；b，液層厚度(光程長度)，cm；c，溶液的濃度，mol·L-1；ε(epsilon)稱為摩爾吸光系數，L·mol-１·cm-1，僅與入射光波長、溶液的性質及溫度有關，與濃度無關。上式表明：當一束單色光通過溶液時，其吸光度與溶液濃度和寬度的乘積成正比。第五十四頁，共七十二頁，2022年，8月28日T、A、c間的關系：

A

＝lg（I0/It)=-lgT=εbc

透光度(透光率)T

：透過光和入射光強度之比，即T=It

/I0×100%T越大，表示對光的吸收越小。第五十五頁，共七十二頁，2022年，8月28日朗伯-比爾定律的適用條件單色光

應選用max處或肩峰處測定.稀溶液

濃度增大，分子之間作用增強.吸光質點形式不變

離解、絡合、締合會破壞線性關系,應控制條件(酸度、濃度、介質等).第五十六頁，共七十二頁，2022年，8月28日吸光度具有加和性：

在多組分體系中，吸光度具有加和性，即：

A（總）＝A1+A2+…+An

=ε1bc+ε2bc+…+εnbc

第五十七頁，共七十二頁，2022年，8月28日(五）

分光光度計的基本結構

無論哪一類分光光度計都包括5個基本部件：光源、單色器、吸收池、檢測器和測量儀表。分光光度計各部件的次序如圖所示:

第五十八頁，共七十二頁，2022年，8月28日分光光度計的基本部件

光源:

分光光度計上常用的光源有兩種：鎢絲燈或氫燈，在可見光區(qū)、近紫外光區(qū)和近紅外光區(qū)常用鎢絲燈作為光源；在紫外光區(qū)多使用氫燈。

單色器：把混合光波分解為單—波長光的裝置。在分光光度計中多用棱鏡或光柵作為色散元件。

吸收池：（比色杯、比色皿、比色池）一般由玻璃、石英或熔凝石英制成，用來盛被測的溶液。在低于350nm的紫外光區(qū)工作時，必須采用石英池或熔凝石英池。

第五十九頁，共七十二頁，2022年，8月28日吸收池（比色皿）必須與光束方向垂直。此外，每套比色皿的質料、厚度應完全相同，以免產生誤差。比色皿上的指紋、油污或壁上的沉積物都會顯著地影響其透光性，因此在使用前務必徹底清洗。第六十頁，共七十二頁，2022年，8月28日

檢測器：常用光電池、光電管和光電倍增管三種。

測量儀表：一般常用的紫外光和可見光分光光度計有3種測量裝置，即電流表、記錄器和數字示值讀數單元?，F代的儀器常附有自動記錄器，可自動掃描出吸收曲線。

第六十一頁，共七十二頁，2022年，8月28日（六）使用分光光度法測定樣品溶液濃度的計算方法標準曲線法（常用）標準管法標準系數法回歸分析法第六十二頁，共七十二頁，2022年，8月28日其方法和步驟是：1）配制一組濃度不同的標準溶液(c1

、c2

……)；2）在一定波長下，分別測定其吸光度(A1、A2……)。3）以A為縱坐標，濃度c為橫坐標，繪制曲線，得到一條通過原點的直線，稱為標準曲線（A-c曲線）。4）用完全相同的方法和步驟測定待測溶液的吸光度Ax，從標準曲線上找出對應的濃度cx值（Ax

cx

）。標準曲線法第六十三頁，共七十二頁，2022年，8月28日Axcx空白標準溶液待測溶液BlankStandardSampleSamplec1c2c3c4cxc0標準曲線第六十四頁，共七十二頁，2022年，8月28日注意：用比色法測定待測樣品時