免疫學(xué)技術(shù)第九講

免疫學(xué)技術(shù)第九講第一頁(yè)，共三十三頁(yè)，2022年，8月28日免疫學(xué)技術(shù)：利用抗原、抗體特異性反應(yīng)的原理建立的各種檢測(cè)與分析技術(shù)，以及建立在這些技術(shù)之上的各種制備方法。一般將涉及到抗原、抗體、免疫細(xì)胞、細(xì)胞因子等相關(guān)技術(shù)都稱(chēng)為免疫技術(shù)。第二頁(yè)，共三十三頁(yè)，2022年，8月28日分類(lèi)1、免疫血清學(xué)技術(shù)2、細(xì)胞免疫技術(shù)3、免疫制備技術(shù)4、分子免疫學(xué)技術(shù)第三頁(yè)，共三十三頁(yè)，2022年，8月28日免疫學(xué)技術(shù)的應(yīng)用1、疾病診斷。2、生物活性物質(zhì)的超微定量。3、物種鑒定（血清型、亞型分析等）。4、微生物檢測(cè)。5、開(kāi)發(fā)研制免疫增強(qiáng)藥物、飼料添加劑、疫苗等。6、分子生物學(xué)領(lǐng)域。第四頁(yè)，共三十三頁(yè)，2022年，8月28日主要內(nèi)容一免疫血清學(xué)技術(shù)二主要血清學(xué)技術(shù)三細(xì)胞免疫技術(shù)四主要細(xì)胞免疫技術(shù)專(zhuān)題一：免疫血清學(xué)技術(shù)第五頁(yè)，共三十三頁(yè)，2022年，8月28日一、免疫血清學(xué)技術(shù)1、血清學(xué)技術(shù)：簡(jiǎn)單地說(shuō)指體外的抗原與抗體反應(yīng)，由于抗體多來(lái)自于血清故稱(chēng)血清學(xué)。2、分類(lèi)：（1）凝聚性反應(yīng)：凝集反應(yīng)；沉淀反應(yīng)（2）標(biāo)記抗體技術(shù)：熒光抗體，本酶標(biāo)抗體，放射性標(biāo)記抗體（3）補(bǔ)體參與的反應(yīng)：補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)；（4）中和反應(yīng)：病毒中和試驗(yàn)（5）免疫轉(zhuǎn)?。篧estenBlotting第六頁(yè)，共三十三頁(yè)，2022年，8月28日一、免疫血清學(xué)技術(shù)3、特點(diǎn)：（1）特異性和交叉性如豬瘟病毒抗體只能與豬瘟病毒結(jié)合，說(shuō)明具有特異性；牛痘病毒來(lái)預(yù)防人的天花和豬瘟疫苗預(yù)防牛的病毒性腹瀉病的例子說(shuō)明具有交叉性。第七頁(yè)，共三十三頁(yè)，2022年，8月28日一、免疫血清學(xué)技術(shù)3、特點(diǎn)：（2）最適比和帶現(xiàn)象帶現(xiàn)象指因抗原或抗體過(guò)多而出現(xiàn)的抑制可見(jiàn)反應(yīng)的現(xiàn)象，抗體過(guò)多易出現(xiàn)前帶反應(yīng)；抗原過(guò)多易出現(xiàn)后帶現(xiàn)象。第八頁(yè)，共三十三頁(yè)，2022年，8月28日一、免疫血清學(xué)技術(shù)3、特點(diǎn)：（3）反應(yīng)的兩階段性第一階段為抗原與抗體的特異性結(jié)合，反應(yīng)快，幾秒鐘至幾分鐘；第二階段為抗原與抗體的可見(jiàn)現(xiàn)象階段。第九頁(yè)，共三十三頁(yè)，2022年，8月28日一、免疫血清學(xué)技術(shù)3、特點(diǎn)：（4）反應(yīng)的可逆性抗原與抗以弱的非共價(jià)鍵結(jié)合，受物理化學(xué)熱力學(xué)法則制約。在0-40度內(nèi)，PH4-9范圍易結(jié)合；如果溫度超過(guò)60度或PH降至3度以下，抗原抗體復(fù)合物又可重新解離。第十頁(yè)，共三十三頁(yè)，2022年，8月28日一、免疫血清學(xué)技術(shù)3、特點(diǎn)：（5）反應(yīng)的敏感性可用于定性，還可以檢測(cè)極微量的抗原或抗體，其靈敏度大超過(guò)了常規(guī)的化學(xué)方法。第十一頁(yè)，共三十三頁(yè)，2022年，8月28日一、免疫血清學(xué)技術(shù)4、影響血清學(xué)反應(yīng)的因素電解質(zhì)：一般用NaCl作稀釋液；標(biāo)記抗體常用PBS磷酸鹽緩沖溶液。溫度：一般較高溫度可增加抗原與抗接觸的機(jī)會(huì)，超過(guò)60度易解離。酸堿度：PH6-8較合適。第十二頁(yè)，共三十三頁(yè)，2022年，8月28日二、主要血清學(xué)技術(shù)（一）凝集反應(yīng)1、概念：顆粒性抗原（如細(xì)菌、紅細(xì)胞）與相應(yīng)抗體，在電解質(zhì)存在下，發(fā)生凝集的反應(yīng)。2、分類(lèi)：直接凝集反應(yīng)、間接凝集反應(yīng)、反向間接凝集反應(yīng)、協(xié)同凝集反應(yīng)等。3、用途：如血型鑒定、牛布病檢測(cè)、雞白痢診斷等。第十三頁(yè)，共三十三頁(yè)，2022年，8月28日第十四頁(yè)，共三十三頁(yè)，2022年，8月28日二、主要血清學(xué)技術(shù)（二）沉淀反應(yīng)1、概念：可溶性抗原（細(xì)菌外毒素、內(nèi)毒素，菌體、裂解液、血清、組織浸出液）與相應(yīng)抗體，在電解質(zhì)存在下，發(fā)生凝集的反應(yīng)。2、分類(lèi)：?jiǎn)蜗颦傊瑪U(kuò)散、雙向瓊脂擴(kuò)散、對(duì)流免疫電泳、火箭電泳等。3、用途：如炭疽、小鵝瘟診斷等。第十五頁(yè)，共三十三頁(yè)，2022年，8月28日AscoliAgAb對(duì)流免疫電泳第十六頁(yè)，共三十三頁(yè)，2022年，8月28日第十七頁(yè)，共三十三頁(yè)，2022年，8月28日二、主要血清學(xué)技術(shù)（三）免疫標(biāo)記技術(shù)1、概述：抗原與抗體能特異性結(jié)合，但抗體抗原分子小，含量低時(shí)，形成的復(fù)合物是不可見(jiàn)的。如果將超微量的物質(zhì)標(biāo)記（熒光素、酶、放射性同位素）就可檢測(cè)出微量的抗原與抗體復(fù)合物，其特異性與敏感性遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)常規(guī)血清學(xué)方法，被廣泛用于病原微生物鑒定，傳染病診斷及基因表達(dá)產(chǎn)物分析等。第十八頁(yè)，共三十三頁(yè)，2022年，8月28日二、主要血清學(xué)技術(shù)（三）免疫標(biāo)記技術(shù)2、分類(lèi)：（1）免疫熒光技術(shù)（2）免疫酶技術(shù)（3）放射免疫測(cè)定法（4）免疫印跡法（5）免疫金標(biāo)技術(shù)（6）免疫PCR第十九頁(yè)，共三十三頁(yè)，2022年，8月28日第二十頁(yè)，共三十三頁(yè)，2022年，8月28日小鼠脾臟免疫熒光圖像第二十一頁(yè)，共三十三頁(yè)，2022年，8月28日免疫酶技術(shù)第二十二頁(yè)，共三十三頁(yè)，2022年，8月28日3、免疫酶技術(shù)（1）原理：通過(guò)化學(xué)方法將酶與抗體或抗抗體結(jié)合，形成酶標(biāo)記物，這些酶標(biāo)記物仍保持免疫學(xué)活性和酶的活性，然后將它與相應(yīng)的抗體或抗原起反應(yīng)，形成酶標(biāo)記的抗原-抗體復(fù)合物，結(jié)合在免疫復(fù)合物上的酶在遇到相應(yīng)的底物時(shí)，而顯色。第二十三頁(yè)，共三十三頁(yè)，2022年，8月28日3、免疫酶技術(shù)（2）分類(lèi)：免疫酶組化法免疫酶測(cè)定法酶標(biāo)記抗體法抗酶抗體法液相測(cè)定法固相測(cè)定法間接法雙抗體夾心法競(jìng)爭(zhēng)法免疫酶技術(shù)第二十四頁(yè)，共三十三頁(yè)，2022年，8月28日3、免疫酶技術(shù)（3）特點(diǎn)：靈敏度高，檢測(cè)能力可達(dá)毫微克水平。應(yīng)用范圍廣，既能測(cè)抗體又能檢測(cè)抗原，既能定性又能定量、定位及抗原分析。標(biāo)本可長(zhǎng)期保存。酶標(biāo)記物有效時(shí)間較長(zhǎng)，一般低溫保存可達(dá)一年以上。不需要特殊設(shè)備。第二十五頁(yè)，共三十三頁(yè)，2022年，8月28日（4）操作過(guò)程：第二十六頁(yè)，共三十三頁(yè)，2022年，8月28日二、主要血清學(xué)技術(shù)（四）補(bǔ)體結(jié)合技術(shù)第二十七頁(yè)，共三十三頁(yè)，2022年，8月28日專(zhuān)題二：細(xì)胞免疫技術(shù)1、概述：細(xì)胞免疫檢測(cè)主要包括T細(xì)胞及亞群的計(jì)數(shù)、T細(xì)胞活性測(cè)定、各種淋巴因子的檢測(cè)、K細(xì)胞、NK細(xì)胞活性試驗(yàn)，以及皮膚過(guò)敏試驗(yàn)等。2、用途：（1）測(cè)定疾病個(gè)體的細(xì)胞免疫狀態(tài)及水平；（2）篩選免疫增強(qiáng)劑或免疫抑制藥物；（3）測(cè)定淋巴因子活性等第二十八頁(yè)，共三十三頁(yè)，2022年，8月28日細(xì)胞免疫技術(shù)3、分類(lèi)：E花環(huán)試驗(yàn)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)白細(xì)胞移動(dòng)抑制試驗(yàn)白細(xì)胞介素測(cè)定酸性α醋酸萘酯酶測(cè)定第二十九頁(yè)，共三十三頁(yè)，2022年，8月28日主要細(xì)胞免疫技術(shù)（一）E玫瑰花環(huán)試驗(yàn)1、原理：人、豬、牛、羊等的T細(xì)胞膜上的CD2是綿羊紅細(xì)胞受體，馬、豬的T細(xì)胞膜上的CD2是豚鼠紅細(xì)胞的受體。2、用途：區(qū)分T淋巴細(xì)胞第三十頁(yè)，共三十三頁(yè)，2022年，8月28日主要細(xì)胞免疫技術(shù)（二）淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)1、原理：PHA+T細(xì)胞（有PHA受體）轉(zhuǎn)化大的淋巴母細(xì)胞

顯微鏡觀察計(jì)算轉(zhuǎn)化率轉(zhuǎn)化率=(過(guò)渡型細(xì)胞+母細(xì)胞)/200個(gè)淋巴細(xì)胞×100%2、用途：淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)，監(jiān)測(cè)免疫機(jī)能3、特點(diǎn)：簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確性差形態(tài)學(xué)法第三十一頁(yè)，共三十三頁(yè)，2022年，8月28日第三十二頁(yè)，共三十三頁(yè)，2022年，8月28日3H胸腺嘧啶核苷（3H-T）摻入法原理：試驗(yàn)管對(duì)照管

PHA+T細(xì)胞+3H-TdRPHA+T細(xì)胞轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)化淋巴母細(xì)胞淋巴母